梁金菇多糖对K562细胞的促凋亡作用研究

目的研究LJPS的抗肿瘤作用及机制。方法：采用MTT法观察LJPS对K562细胞的增殖抑制．用普通光镜．荧光显微镜、电镜、FCM、DNA电泳等技术检测细胞凋亡．用RT--PCR检测bcl-2mRNA的表碉结果：LJPS对K562细胞有明显抑制增殖并诱导细胞凋亡的作用．DNA电泳出现片段化梯形带．F(、Ⅵ检测示细胞阻滞于G1期．出现凋亡峰．LJPS诱导K562细胞凋亡中下调bcl-2mRNA表达。结论LJPS对K562细胞的抑制增殖、促进凋亡的作用与其下调Bcl-2mRNA表达有关。     

芒果苷诱导白血病K562细胞凋亡机制的研究

目的研究芒果苷诱导慢粒白血病细胞系K562细胞凋亡的机制。方法采用RT-PCR检测芒果苷(25~200μmol/L)处理(24、48、72、96h)后K562细胞中bcl-2 mRNA、bax mRNA、survivin mRNA基因表达变化;采用Western blotting方法检测K562细胞BCR/ABL融合蛋白质P210水平。结果芒果苷作用K562细胞后,P210蛋白质水平下调,并呈时间及剂量依赖性,bax基因表达显著上调,bcl-2基因表达轻度下调,survivin mRNA基因表达下调。结论芒果苷诱导K562细胞凋亡的机制可能是通过下调BCR/ABL融合蛋白质P210、bcl-2和sur-vivin mRNA基因表达及上调bax基因表达来实现的。     

药根碱诱导白血病K562细胞凋亡的研究

 目的 研究药根碱对白血病K562细胞的生长抑制及凋亡作用,探讨药根碱诱导K562细胞凋亡的可能途径。方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测药根碱对K562细胞的生长抑制作用;吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染法、碘化丙啶(PI)染色法观察药根碱对K562细胞凋亡的诱导作用;利用活细胞高内涵成像系统检测细胞内线粒体膜电位以及氧自由基的变化。结果 药根碱可明显抑制K562细胞的生长(IC₅₀ = 90 μmol·L-1 )。AO/EB染色可明显看到凋亡细胞和死亡细胞。PI染色显示,药根碱使K562细胞周期阻滞在G₀/G₁期。活细胞高内涵成像系统检测结果显示,37、75、150 μmol·L-1 药根碱作用后,细胞内活性氧荧光强度由1 305.1±15.3上升为26 243.6±165.3、30 106.7±153.2、34 682.6±174.1,线粒体膜电位由1 025.3±20.1下降为484.6±10.2、202.9±6.3、153.1±5.3。结论 药根碱能明显抑制白血病K562细胞生长,促进K562细胞凋亡,且其可通过增加细胞内活性氧、降低线粒体膜电位这一线粒体信号传导通路来诱导K562细胞凋亡。     

丹参酮Ⅱ_A对白血病K562细胞的体外诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮ⅡA对人急性白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法以不同浓度的丹参酮ⅡA(10~50μmol/L)作用于体外培养的K562细胞24、48、72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,并对50μmol/L的药物作用不同时间后亚G1期细胞进行检测。应用免疫印迹法(Western blotting)检测Caspase-3及其裂解底物多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)的表达水平,并对凋亡调节蛋白Fas、Bax、Bcl-2、Bak、Bid的表达水平进行检测。结果 20μmol/L以上的丹参酮ⅡA可显著抑制K562细胞的生长、诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系;FCM检测结果表明50μmol/L丹参酮ⅡA作用不同时间后,亚G1期细胞(凋亡细胞)逐渐增多。20μmol/L以上的丹参酮ⅡA作用48 h后Caspase-3逐渐被活化出现17 000的亚单位,Caspase-3的作用底物PARP被活化裂解出现89 000的亚单位片段,而且Caspase-3的激活以及PARP的裂解可被Caspase-3的特异性抑制剂z-DEVD-FMK所阻断,促凋亡蛋白Fas以及Bax的表达水平明显升高,而凋亡抑制蛋白Bcl-2及其他促凋亡蛋白Bak和Bid的表达水平则无明显变化。结论丹参酮ⅡA可以通过诱导白血病K562细胞凋亡而发挥体外抗白血病作用,上调促凋亡蛋白Fas和Bax的表达水平及激活Caspase-3可能是丹参酮ⅡA诱导白血病K562细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

冬凌草乙素对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及机制研究

目的:探讨冬凌草乙素(ponicidin,PON)对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法:以不同浓度的PON(10~50μmol.L-1)作用于体外培养的K562细胞24,48,72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,收集药物作用72h后的细胞Annexin V染色并通过流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞凋亡时的形态学变化。应用免疫印迹法(Western blot)检测caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP的表达水平,并对MAPKs(mitogen-acti-vated protein kinase)信号转导通路相关蛋白(p-P38,p-ERK和p-JNK)以及PI3K(磷脂酰肌醇-3-激酶)/AKT信号通路中的p-AKT,p-P85蛋白的表达水平进行检测。结果:30μmol.L-1以上的PON可显著抑制细胞的生长,并呈现出明显的量-效与时-效关系,FCM检测结果表明,不同浓度的药物作用72 h后,随药物浓度的增加细胞凋亡率逐渐升高,50μmol.L-1的PON作用不同时间后在瑞氏-姬姆萨染色下可见典型的核浓缩及核碎裂等细胞凋亡现象。Western blot检测结果表明,药物作用48 h后caspase-3被活化出现17 kD的亚单位,同时PARP被裂解出现89 kD的亚单位片段。Western blot检测结果进一步显示药物作用48 h后MAPKs信号途径中p-P38,p-ERK和p-JNK蛋白的表达水平无明显变化,而PI3K/AKT信号通路中的p-AKT,p-P85蛋白的表达水平则随着药物浓度增加而逐渐下降。结论:PON可以通过诱导白血病K562细胞调亡而发挥体外抗白血病作用。PON对K562细胞的诱导凋亡作用机制与caspse-3的活化以及降低PI3K/AKT信号通路中p-AKT及p-P85蛋白的表达水平有关,而与MAPKs信号通路中的相关调节蛋白无关;这些研究结果为进一步研究冬凌草素的抗白血病作用提供了有力的实验依据和技术平台。     

梁金菇多糖诱导K562细胞凋亡的研究

目的 :探讨梁金菇多糖对K562细胞凋亡的影响及其机制。方法 :应用集落形成实验观察梁金菇多糖对K562细胞增殖的影响 ,细胞形态学、DNA凝胶电泳等检测细胞凋亡 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT-PCR)检测凋亡相关基因FasmRNA的表达。结果 ;梁金菇多糖能明显抑制K562细胞的增殖 ,促进细胞凋亡 ,细胞凋亡率的增加呈剂量依赖性。Fas基因的表达与K562细胞凋亡呈正相关。结论 :梁金菇多糖具有抑制K562细胞增殖、诱导其凋亡的作用 ,Fas基因表达的上调可能是梁金菇多糖诱导细胞凋亡的机制之一。     

夏枯草注射液诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的探讨夏枯草注射液体外抗白血病作用,为临床应用夏枯草注射液治疗白血病提供实验依据。方法采用M TT法测定夏枯草注射液对K 562细胞的增殖抑制率,计算出IC50值;绘制夏枯草注射液(50、100 m g/mL)作用于K 562细胞的生长曲线。用倒置显微镜、姬姆萨染色法、M TT染色法光镜下观察细胞形态,台盼蓝拒染法、流式细胞仪P I染色观察夏枯草注射液对K 562细胞的促凋亡活性,用免疫细胞化学法检测夏枯草注射液对凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响,并用图文分析系统进行定量分析。结果夏枯草注射液对K 562细胞增殖具有明显的抑制作用,且在一定的剂量范围内抑制作用具有明显的剂量依赖性(r=0.985 0),IC50为0.113 m g/mL。夏枯草注射液(50 m g/mL)作用于K 562细胞后,倒置显微镜、姬姆萨染色、M TT染色光镜下观察,均可见典型的凋亡细胞的形态学特征。流式细胞仪检测结果显示,处理组细胞凋亡率[(37.15±1.46)%]明显高于对照组细胞凋亡率[(5.56±0.68)%](P<0.01)。夏枯草注射液(50 m g/mL)作用于K 562细胞48 h,bcl-2蛋白表达增强,而bax表达减弱,与对照组相比差异显著(P<0.01)。结论夏枯草注射液可明显抑制K 562细胞增殖,可望成为新的抗白血病药物,诱导K 562细胞凋亡可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

人参总皂苷诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的：研究人参总皂苷诱导白血病细胞凋亡及其机制，为进一步开发人参总皂苷提供实验依据。方法：采用细胞体外培养，图像分析技术、流式细胞术、形态学观察与免疫细胞化学等方法，研究人参总皂苷诱导K562细胞凋亡。结果：人参总皂苷对K562细胞有增殖抑制作用，并可诱导K562细胞凋亡明显增加，同时K562细胞癌基因产物C－MYC，BCL－2表达明显降低。结论：人参总皂苷能诱导K562细胞凋亡，其机制可能与调控癌基因产物的表达有关。     

吉九里香碱诱导K562细胞凋亡的研究

目的探讨吉九里香碱(girinimbine)通过诱导细胞凋亡而发挥其抑制肿瘤细胞增殖的作用。方法采用MTT法检测吉九里香碱对K562细胞增殖的抑制作用;采用荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;库尔特全自动颗粒粒度仪分析药物引起K562细胞体积大小分布的变化;琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯形条带及流式细胞术检测细胞凋亡时凋亡峰的变化。结果MTT结果显示不同浓度的吉九里香碱处理K562细胞不同时间均能抑制细胞的增殖,抑制率依赖于吉九里香碱的浓度和作用时间;50μmol/L吉九里香碱处理K562细胞24h时,细胞出现凋亡典型的形态学特征;50μmol/L吉九里香碱分别处理K562细胞6、12、24h及不同浓度吉九里香碱处理K562细胞24h时,能够使细胞产生明显的DNA梯形条带和体积大小变化,呈一定的量效和时效关系,并且细胞凋亡的亚G1峰随作用时间的延长而增加,分别为(15.93±3.79)%(6h)、(32.87±4.89)%(12h)、(41.30±1.91)%(24h)。结论吉九里香碱可能通过诱导K562细胞凋亡而发挥其抗K562细胞增殖的作用。     

当归多糖诱导K562白血病细胞凋亡的实验研究

目的从细胞凋亡的角度探讨当归多糖(APS)抑制白血病细胞增殖的机制。方法体外培养白血病细胞株K562,培养时添加25 mg/L、250 mg/L、2 500 mg/L当归多糖,分别于第2,4,6天,取细胞用台盘蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术分析细胞周期分布;免疫组织化学检测bcl-2抗凋亡基因的表达。结果细胞生长曲线显示25~2 500 mg/L的当归多糖对白血病细胞株K562有显著抑制作用,且呈剂量效应关系。流式细胞术结果显示250 mg/L作用后S,G2+M期K562细胞数减少,G0/G1期细胞增多。APS诱导细胞后bcl-2明显降低(P<0.05)。结论APS对白血病细胞株K562细胞的增殖具有显著抑制作用,APS通过阻止K562细胞进入S期而抑制其DNA合成,bcl-2表达降低可能是APS诱导白血病细胞凋亡重要途径之一。     

中医药诱导细胞凋亡治疗恶性肿瘤研究概况及思考

药物诱导恶性肿瘤细胞凋亡是近年肿瘤研究领域的一个重大进展 ,中药砷剂治疗白血病 (主要是急性早幼粒细胞白血病 )取得成功为这方面提供了范例和突破口。本文概述了近年中医药诱导凋亡治疗恶性肿瘤的研究概况 ,并提出一些如关于肿瘤辨证论治等方面问题的思考、启发。     

杭州中医养生旅游发展分析

既能完全体现中国传统文化特色,又能充分彰显人与自然和谐相融的中医养生旅游,不但是面临困境的我国中医药产业发展的新途径,也是旅游需求多元化发展的必然产物.因此,立足于对中医养生旅游发展的背景分析,本文以著名旅游城市杭州为例,对杭州发展中医养生旅游的优势进行深入剖析,指出其发展过程中暴露的诸多问题,着重针对杭州中医养生旅游的未来发展提出了本文的建议.     

PESV干预K562细胞PI3K/Akt 信号通路凋亡调控的研究

[目的]探讨PESV对K562细胞PI3K/Akt信号蛋白及凋亡调控因子Bcl-2和Bad表达的影响。[方法]将体外培养K562细胞,经PESV处理不同时间后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化,实时荧光定量RT-PCR检测Bcl-2、Bad mRNA水平变化。[结果]与对照组相比,PESV处理后K562细胞凋亡率显著增加,PI3K及p-Akt表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2 mRNA表达降低,促凋亡基因Bad mRNA表达增加。[结论]PESV可能通过降低PI3K、Akt信号蛋白表达,调节Bcl-2和Bad表达,抑制K562细胞增殖,促进其凋亡。     

中药用量探微

“中医的不传之秘,在于药物的用量上。”中药的用量一直是学习中医颇难掌握的一个方面,本文从与中药用量密切相关的一些方面就这个问题做了一些初步的探讨,供研究参考。     

中医药治疗有机磷农药中毒研究综述

有机农磷药中毒是急诊科常见的中毒性疾病,发病急、变化快、重度中毒死亡率高。及时而正确的治疗可以提高患者的治愈率,降低死亡率。目前有机磷农药中毒在采用西医治疗的同时,辅以中医药治疗,取得了良好疗效及宝贵经验。     

胚胎干细胞基础研究进展及中医药对干细胞的认识和展望

干细胞研究是目前生命科学领域研究的热点之一,同为干细胞的胚胎干细胞(ESC)研究显示了广阔的应用前景。主要从分化角度综述ES细胞用于人类疾病治疗的基础研究,中医药学对干细胞及ES细胞的基本认识,有关干细胞的中医药研究进展以及目前存在的一些问题。认为应在分化研究的基础上从先后天之本入手,探索中医药对ES细胞增殖的影响。