喜树胚轴细胞悬浮培养的优化和喜树碱的积累

目的优化喜树胚轴细胞悬浮培养体系生产喜树碱。方法将由喜树种子下胚轴诱导的愈伤组织进行悬浮培养,研究了基本培养基、激素和培养条件对培养物生长的影响,测定了培养细胞生长和喜树碱积累的动态变化。结果悬浮培养细胞在M S培养基中细胞生长良好,细胞分散性和喜树碱积累优于在其他培养基中。最佳激素组合为2,4-D 0.2 m g/L NAA 0.5 m g/L 6-BA 0.5 m g/L,细胞继代周期以12 d左右为宜,悬浮细胞适合在22~26℃,120 r/m in下生长。悬浮培养细胞在第4~20天为对数生长期,细胞倍增时间为t(d)=3.92-d 1,细胞干重至第20天达到最大,为27.44 g/L。在细胞对数生长期内,喜树碱积累与细胞生长呈线形正相关性,第20天喜树碱质量分数达到最大值9.319×10-5,喜树碱产量为2.56 m g/L。结论M S基本培养基适合喜树胚轴细胞悬浮培养,细胞生长前20天内,培养体系中喜树碱积累与细胞生长呈正线形相关性。     

野葛藤茎及叶总黄酮的含量测定

野葛Pueraria lobata(Willd．)Ohwi的根为常用中药葛根。葛根含有多种异黄酮类化合物，主要有葛根素(puerarin)、大豆苷(daidzin)及大豆苷元(daidzein)。现代药理研究证实，葛根总黄酮及葛根素具有显著的扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、降低血压及血管阻力等多种生理作用。对于野葛藤茎及叶的化学成分的研究少见报道，对于藤茎及叶总黄酮的含量测定未见报道。本实验用紫外分光光度法测定了野     

葛根素对实验肝损伤及其继发损伤的药理研究进展

葛根素是从豆科植物野葛干燥根中提取的异黄酮类化合物。葛根素应用于各种肝损伤及肝损伤继发损伤的实验研究结果较为明确。在缺血再灌注肝损伤中,葛根素可从细胞凋亡、细胞因子、细胞膜完整性等多个机制进行干预,减轻肝损伤。此外,葛根素可从不同机制对于由酒精性肝损伤以及肝损伤所致心、脑等组织器官损伤发挥保护作用,为葛根素的临床应用提供了可靠的理论依据。     

药用植物细胞悬浮培养产生次生代谢产物的研究进展

<正>自20世纪50年代至今,植物细胞培养技术取得了重大的发展。目前被研究的植物有1 000多种,获得天然活性产物达500多种[1]。细胞悬浮培养是植物细胞培养技术的应用和发展,中国已建立了人参、西洋参、紫草等药用植物细胞悬浮培养体系,有效成分含量已达到或超过原植株[2]。1影响次生代谢产物积累的培养条件1.1愈伤组织及其接种量生长力旺盛、表面颗粒突起、质地疏松、淡黄色的胚性愈伤组织是建立细     

葛根素注射液的临床应用

葛根素 (Puerarin)是从豆科植物野葛Puerarinlobata(Willd)。Ohwi干燥根中提取的异黄酮类化合物 ,其主要成分为 8 D吡喃葡萄糖 4 ,7 二羟基异黄酮[1] 。近年来 ,随着临床研究的不断深入 ,许多新的作用和用途正被人们所发现和认识 ,并逐渐拓宽了它的临床应用。本文将就其临床研究的主要结果作简要介绍。1　心脑血管疾病1 1　心绞痛　对 117例冠心病患者 ,应用葛根素 5 0 0mg静脉滴注 ,每日 1次 ,10d为 1疗程。结果表明 ,经治疗后 ,总有效率为 93 16 %。其中有心绞痛症状者 82例 ,治疗后 78例有效 ,总有效率为 95 12 %。葛根素还能较好地…     

水杨酸对白桦悬浮细胞中齐墩果酸积累及防御酶活性的影响

目的 研究水杨酸（SA）对白桦悬浮细胞生长、齐墩果酸积累及防御酶活性的影响。方法 在白桦悬浮培养第7、10、13、15天,分别添加不同质量浓度（10、25、50、100、250 mg/L）的SA,进行细胞生长、齐墩果酸量及抗逆酶活性分析。结果 添加低质量浓度SA（10～25 mg/L）对细胞活力和生长量影响不大,高质量浓度的SA（100～250 mg/L）处理可显著抑制细胞活力和生长,但可促进齐墩果酸的积累,在第7天添加250 mg/L SA后齐墩果酸量最高,达1.71 mg/g（干质量）,是对照的3.1倍;而第7天添加50 mg/L SA后齐墩果酸的产量为0.473 mg,比对照提高了42.04%。悬浮培养第7天添加50 mg/L SA,过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）两种酶活性分别在0～24 h和0～48 h比对照显著提高,而PAL活性在SA处理12 h后始终高于对照。结论 适宜浓度的SA可刺激白桦细胞防御酶活性提高,并促进白桦悬浮细胞中齐墩果酸的积累。     

葛根素的药理作用与临床应用近况

葛根素是豆科植物野葛干燥根中的主要有效成分，其分子式为4，7-二羟基-8-β-D葡萄糖异黄酮。葛根素有扩张冠状动脉和脑血管作用，具有降血糖、血脂、抗氧化、改善血液流变学特性而广泛用于临床高血压、冠心病、急性脑梗死、糖尿病等病症的治疗。现对葛根素的药理作用和临床应用近况进行综述。     

东北红豆杉细胞两液相培养生产紫杉醇的研究

反应-分离耦合技术是红豆杉细胞培养生产紫杉醇的关键技术。作者采用两液相培养技术，深入研究有机溶剂的种类、浓度、加入时间和相毒性对红豆杉细胞悬浮培养细胞生长和产生的影响。结果表明油酸和邻苯二甲酸二丁酯适合作此体系两液相培养的有机溶剂，合适的浓度为8％，加入时间为第7日～10日，与对照组相比，两液相培养的紫杉醇产量提高4倍。     

早孕期人绒毛组织的体外培养及绒毛膜促性腺激素分泌的动态观察

建立人孕６～８周绒毛组织块直接体外贴壁静止培养方法，对培养的绒毛滋养层细胞进行形态观察，并对绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）分泌的动态进行观察。结果表明：培养第２天滋养层细胞开始向外生长，第５天最旺盛，细胞生长可维持１０天左右。ＨＣＧ于培养第５天达高峰，第７天开始下降，第１３天降至可测水平以下。这种培养方法的建立不仅为抗早孕药物筛选提供一个离体模型，而且有助于滋养层细胞功能的研究。     

秦艽细胞悬浮培养研究(Ⅰ)

目的 建立秦艽细胞悬浮培养体系。方法 通过小细胞团法优选细胞系并考察不同培养基、细胞种龄、初始pH值、培养温度、摇床转速对秦艽悬浮细胞生长及龙胆苦苷积累的影响。结果 适于秦艽细胞悬浮培养条件为：MS培养基为基本培养基,用15 d种龄的细胞接种,初始pH7、25 ℃,110 r/min,摇瓶培养。结论 通过摇瓶培养建立了良好的秦艽细胞悬浮培养体系。不同培养基对细胞生长及龙胆苦苷积累的显著影响提示某些无机离子有重要的调控作用。     

复方葛根注射液对血液流变学及血小板聚集功能的影响

目的观察复方葛根注射液对大鼠血小板聚集功能及兔血液流变学的影响.方法 SD大鼠50只,随机分为正常组、试药组(20、40、80 mg/kg)及阳性药(川芎嗪40 mg/kg)组,测定给药3 d后血小板聚集率;家兔30只,随机分为正常组、试药组(10、20、40 mg/kg)及阳性药(川芎嗪20 mg/kg)组,测定给药3 d后血液流变学指标.结果复方葛根注射液能显著抑制血小板的聚集率;显著降低全血黏度、血浆黏度、红细胞压积及纤维蛋白原.结论复方葛根注射液对血液流变学有改善作用.     

Production of asiaticoside from centella (Centella asiatica L. Urban) cells in bioreactor

Objective

To investigate the effects of some culture conditions on production of asiaticoside from centella (Centella asiatica L. Urban) cells cultured in 5-L bioreactor.

Methods

The centell cell suspension culture was conducted in 5-L bioreactor to investigate the growth and asiaticoside accumulation under various conditions. Asiaticoside content was determined by HPLC analysis.

Results

The results showed that the cell growth and asiaticoside accumulation peaked after 24 d of culture at an agitation speed of 150 r/min and aeration rate of 2.5 L/min. The cell biomass reached a maximum value of 302.45 g fresh weight (31.45 g dry weight) and growth index of 3.03 with inoculum size of 100 g. However, asiaticoside content was the highest (60.08 mg/g dry weight) when culture was initiated with an inoculum size of 50 g.

Conclusions

The present study found the suitable conditions for growth of centella cells and their asiaticoside production in bioreactor.     

野葛中活性成分的动态研究

为确定葛根的最佳采收期提供依据;采用ＨＰＬＣ和ＵＶ法测定不同采收期葛根的异黄酮类成分含量,用逐步回归分析了气候因子对活性成分积累的影响。总黄酮及葛根系等异黄酮成分含量以１月最高,１０月１１月次之,日照时数和降水量与活性成分的积累有相关性。     

渝东北山区野葛中葛粉与总黄酮含量动态变化研究简

目的 通过对渝东北山区野葛中葛粉和总黄酮含量测定,总结其成分在1年中随季节的变化规律,从而确定每年最佳采收时间.方法 2011年6月～2012年5月每月定期采集渝东北山区产野葛样本,切成2～3 mm薄片,自然干燥.通过文献调研,方法稳定性考察确定采用组织捣碎水沉淀法测定野葛葛粉含量;采用UV紫外分光光度法,以葛根素为对照品,在波长250 nm处测定样品溶液吸收度,计算出野葛总黄酮含量,从而得到渝东北山区产野葛在1年里葛粉和总黄酮含量随季节的变化规律.结果 经实验测定,渝东北山区野葛葛粉和总黄酮含量全年变化趋势基本一致,变化规律为葛粉含量在8.9％～25.3％之间,从11月～次年2月最高,3、8、9、10月其次,4～7月最低;总黄酮含量在2.13％～11.6％之间,11月～次年3月高于9％,8～10月约6％,4～7月较低在2％左右.结论 渝东北山区野葛最佳采集时间在11月～次年3月.     

真菌诱导子对白鲜细胞产生白鲜碱能力的影响

目的：研究提高白鲜悬浮细胞产生白鲜碱能力的方法。方法：将7种真菌诱导子溶液各1mL分别在白鲜悬浮细胞培养的早、中、末期（第4d、第8d、第12d）加入,共培养至第15d,测定产生的白鲜碱的含量。结果：7种真菌诱导子均能提高白鲜悬浮细胞中白鲜碱的含量,在细胞培养的3个不同时期加入真菌诱导子,以末期加入促进白鲜碱产生的效果最显著,中期加入效果次之,早期加入效果最差。结论：加入真菌诱导子能有效地提高白鲜碱的产量,且与加入时间有关。     

非洲紫罗兰原生质体的制备及不同组分培养基对细胞增殖的影响

目的 探讨非洲紫罗兰（Saintpaulia ionantha）原生质体的制备方法,并比较不同组分培养基对原生质体再生及增殖的影响。方法 以非洲紫罗兰愈伤组织制备悬浮细胞,以细胞生长曲线确定最佳培养时间,并将纤维素酶（cellulase R-10）和果胶酶（pectolyase Y-23）按2︰1（质量比）混合分别酶解悬浮细胞18、20、24 h,比较原生质体得率和细胞活力以确定最佳酶解时间。分别以原生质体基础培养基提取愈伤组织提取物、根尖提取物及培养土浸出物配制培养基培养原生质体16 d,观察原生质体细胞壁再生并比较细胞增殖率。结果 悬浮细胞培养8天细胞增殖率最大,细胞活力93.8%; 4%（质量分数）纤维素酶和2%（质量分数）果胶酶混合酶解21 h原生质体得率达到峰值,细胞活力为75.2%,延长至24 h后得率与21 h相比,差异无统计学意义,但细胞活力降至69.5%。以不同组分培养基培养原生质体,最早于第6 d在愈伤组织提取物培养基中观察到再生细胞壁及细胞分裂;第16天,愈伤组织和根尖提取物培养基细胞增殖率显著高于原生质体基础培养基和培养土浸出物培养基,并以愈伤组织为佳,而培养土浸出物无促进作用。结论 以非洲紫罗兰愈伤组织悬浮细胞培养8 d并以4%纤维素酶和2%果胶酶混合酶解21 h能获得较多高活力的原生质体;愈伤组织提取物培养基能有效促进原生质体再生及细胞增殖。     

新生大鼠Ⅰ型肺泡上皮细胞原代培养方法的改进

【摘要】 目的 改进体外SD大鼠Ⅰ型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial typeⅠ,ATⅠ)的原代培养方法,用更为简单的培养方法获得较高纯度的ATⅠ。方法 选用新生1d的SD大鼠,消毒后待新生大鼠呼吸停止后断头取肺,采用胶原酶Ⅰ和DNaseⅠ消化分离法获取原代细胞,将细胞接种在Ⅰ型鼠尾胶原蛋白包被过的细胞板中,利用差速贴壁法纯化AT Ⅰ,同时细胞培养48 h后进行换液,倒置显微镜下观察细胞的生长状态,用细胞水通道蛋白5（AQP5）、肺表面活性物质相关蛋白（SPC）、植物凝集素（BSI）、波形蛋白（Vimentin）4种肺细胞的特异性表达产物鉴定细胞。结果 接种2 d时,细胞开始贴壁生长。4～6 d时细胞开始增殖,呈现梭形、立方形、多角形等多种形态。8 d时细胞增殖能力达到最大,细胞活力为（87±8）%,细胞纯度为（87±5）%。结论 对组织取材、分离和培养进行改进可获得产量高、生长状态好、纯度高的ATⅠ。     

氮、磷和钾肥对灯盏花生长和有效成分积累的影响

目的 探讨 N、P 和 K 肥在植物生物量和黄酮类次生代谢产物积累中的影响作用,揭示药用植物生物量积累与次生代谢有效成分积累的关系,为建立合理的施用技术提供理论基础。方法 以尿素、磷酸和氯化钾3种N、P 和 K 肥按正交设计组成3因素3水平的9个处理组合。用盆栽法比较灯盏花开花植株的生物量、总咖啡酸酯和灯盏乙素的量。结果 生物量适宜高 N、P 和 K 施肥量组合,有效成分量则偏向低施肥量组合。3肥素中,N 作用最强,对生物量积累具有显著的促进作用,对有效成分积累有显著的抑制作用,对有效成分产量的作用不显著。P 对有效成分量的作用高于 K,但对生物量的影响低于 K。K 对有效成分产量的作用最大。结论 N、P 和 K 施肥提高灯盏花药材生物产量时将会导致黄酮等次生代谢有效成分量下降,但可提高其产量。     

光强和光质对灯盏花生长与总黄酮量影响的研究

目的光强和光质对灯盏花生长与总黄酮量的影响。方法用遮阳网形成的不同光强以及不同颜色塑料膜下形成的不同光质的光照条件生境下,种植灯盏花试管苗至开花,取样测定生物量和黄酮的量。结果全光照和遮光20%生境中的植物生物量和黄酮的量明显高于遮光50%生境的植株;与无色塑料膜相比,黄、红、紫和蓝色塑料膜下平均植株的生物量均下降;无色和有色塑料膜下,蓝色膜下植株的黄酮量最高,而无色塑料膜下植株的黄酮产量最高。结论光强和光质影响灯盏花生长与总黄酮量,灯盏花在全阳光照射下植株有最高的生物量积累和黄酮产量。     

车轴草属植物异黄酮分析和比较研究

目的形成吉林省红、白车轴草异黄酮成分提取、分离、纯化方法,进行车轴草属植物异黄酮有效成分对比分析和研究。方法用乙醇提取车轴草属植物异黄酮有效成分,采用溶剂纯化法精制异黄酮,采用紫外分光光度法进行总异黄酮含量测定及提取工艺优化研究。结果车轴草属植物含有刺芒柄花素、鹰嘴豆芽素、染料木素及大豆苷元等,其中刺芒柄花素在车轴草属植物各部位含量丰富均衡,色谱分析结果稳定,可作为吉林省野生车轴草异黄酮成分分析标准品。结论吉林省野生红车轴草药用植物中所含异黄酮种类丰富,白车轴草中含有染料木素、刺芒柄花素等异黄酮成分,研究结果有望为我省长白山地区野生车轴草药用植物资源开发利用提供指导。