胰腺内皮细胞共培养对C3A细胞功能变化的影响

Objective To investigate the functional changes of C3A cells co-cultured with pancreatic endothelial cells. Methods C3A cells and pancreatic endothelial cells lwere cultivated directly and indirectly for 7 days by the density ratio of 10: 1. Meanwhile, the blank control was established.The growth and morphological characteristics of experimental groups were observed. The out leakage level of AST, ALT and the synthesis level of albumin and the diazepam metabolism level were determined by automatic biochemistry analyzer, radioimmunoassay and enzyme linked immunosorbent assay. Results Direct co-cultivation of C3A cells and pancreatic endothelial cells could reduce the out leakage of ALT and AST in the 5th and 7th d. The capacity of albumin synthesis could reach 12. 977μg/ml on the 7th d and the that of diazepam metabolism could also be improved. Indirect co-cultivation of C3A cells and pancreatic endothelial cells could significantly raise the albumin synthesis to 7. 380 μg/ml and 10. 773 μg/ml on the 5th and 7th d, respectively. Conclusion Co-cultivation of C3A cells and pancreatic endothelial cells can significantly improve the basic biological function of C3A cells.     

胰腺内皮细胞共培养对C3A细胞功能变化的影响

Objective To investigate the functional changes of C3A cells co-cultured with pancreatic endothelial cells. Methods C3A cells and pancreatic endothelial cells lwere cultivated directly and indirectly for 7 days by the density ratio of 10: 1. Meanwhile, the blank control was established.The growth and morphological characteristics of experimental groups were observed. The out leakage level of AST, ALT and the synthesis level of albumin and the diazepam metabolism level were determined by automatic biochemistry analyzer, radioimmunoassay and enzyme linked immunosorbent assay. Results Direct co-cultivation of C3A cells and pancreatic endothelial cells could reduce the out leakage of ALT and AST in the 5th and 7th d. The capacity of albumin synthesis could reach 12. 977μg/ml on the 7th d and the that of diazepam metabolism could also be improved. Indirect co-cultivation of C3A cells and pancreatic endothelial cells could significantly raise the albumin synthesis to 7. 380 μg/ml and 10. 773 μg/ml on the 5th and 7th d, respectively. Conclusion Co-cultivation of C3A cells and pancreatic endothelial cells can significantly improve the basic biological function of C3A cells.     

生长激素干预肝癌细胞及共培养脐静脉内皮细胞生长

目的 观察重组人生长激素(rhGH)对人肝癌细胞株SMMC-7721和Bel-7402,共培养脐静脉内皮细胞株ECV304增殖的影响.方法 ECV304及其与Bel-7402、SMMC-7721共培养三组分别行rhGH 50及250μg/L、贝伐单抗50 mg/L及其联合rhGH 250 μg/L的干预.Bel-7402和SMMC-7721分别接受两浓度rhGH干预.流式细胞术测细胞周期比.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)/酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定肝癌细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA/蛋白表达.结果 Bel-7402表达生长激素受体(GHR),SMMC-7721不表达GHR;两剂量rhGH干预后Bel-7402的PI指数(42.69.4±0.40和44.10±0.19)较空白组(39.40±0.48)明显升高,同环境ECV304的PI指数显著升高[(45.62±O.87)%和(47.64 ±1.28)%,呈浓度依赖(P<0.05);贝伐单抗干预后,Bel-7402共培养ECV304的PI指数显著下降[(42.69 ±1.05)%和(42.84±0.77)%,P<0.05).与对照组[mRNA/蛋白:(14.179±3.110)ns/L/0.171±0.064]比较,两rhGH浓度干预,Bel-7402表达VEGF mRNA/蛋白水平也显著增加[(125.499 4-2.680)和(131.312 4-2.560)ng/L/0.296 ±0.024和0.460 ±0.037,P<0.05];SMMC-7721各组均未出现类似情况.结论 rhGH明显促GHR阳性表达人肝癌细胞株Bel-7402增殖,促其过量分泌VEGF致共培养内皮细胞ECV304增殖.     

共培养雪旺细胞和血管内皮细胞的实验研究

目的 将雪旺细胞（SCs）和血管内皮细胞以不同比例体外共培养,在实验中找到培养最佳比例,为体内构建血管化组织工程神经提供实验基础。方法 从大鼠坐骨神经及胸主动脉分离、培养雪旺细胞和血管内皮细胞,设雪旺细胞单独培养为对照组A,以1∶1、1∶4、4∶1、8∶1、1∶8的比例联合共培养为B、C、D、E、F实验组。在共培养的第1、3、5和7天,对雪旺细胞计数,绘制其生长曲线,分析细胞共培养的实验结果。结果 在倒置显微镜下观察,每组SCs数量随着培养时间出现不同的变化,在共培养第1天,各实验组与对照组A细胞数量差异无统计学意义(P>0.05),从共培养的第3天至第7天,实验组B(1∶1)、C(1∶4)和F(1∶8)细胞计数与对照组A相比差异有统计学意义(P <0.05),实验组D(4∶1)、E(8∶1)与对照组A的差异无统计学意义(P>0.05),但与其他实验组B、C、F相比差异具有显著的统计学意义(P <0.05),实验组D与实验组E比较差异有统计学意义(P <0.05)。结论 通过本实验的步骤可获取原代雪旺细胞和血管内皮细胞,实验统计分析得出雪旺细胞和血管内皮细...     

体外与肝细胞共培养对结肠癌细胞移行和增殖的影响

目的探讨肝细胞对结肠癌细胞的移行、增殖能力的影响。方法在体外建立结肠癌细胞与肝细胞三维共培养模型，将结肠癌细胞系Colon-26细胞培养在共培养系统上层，肝细胞培养在下层。实验分为3组：（1）Colon-26细胞与小鼠的肝细胞共培养（肝细胞组）。（2）与成纤维细胞共培养（纤维细胞组）。（3）Colon-26细胞单独培养（对照组）。观察肝细胞对结肠癌细胞的移行、增殖的影响，以及共培养液内表皮细胞生长因子（EGF）、血管内皮生长因子（VEGF）浓度的变化。结果肝细胞组的Colon-26细胞移行能力分别比纤维细胞组和对照组增强（t1=6．296，P=0．000；t2=5．322，P=0．000），Colon-26细胞增殖能力在肝细胞组亦分别比另两组增强（t1=3．905，P=0．005；t2=3．719，P=0．006）。肝细胞组的共培养液中EGF浓度明显升高（z=3．077，P=0．002）。结论在体外能建立结肠癌细胞与肝细胞的三维共培养模型。体外肝细胞能通过分泌生长因子促进结肠癌细胞的移行和增殖。     

体外共培养体系中胆管癌细胞对内皮细胞的作用

目的 在体外共培养体系中研究胆管癌细胞对内皮细胞的作用.方法 建立胆管癌QBC939细胞与内皮细胞的体外共培养体系设为共培养组,同期单独培养的内皮细胞设为内皮细胞组,同样数量的内皮细胞和胆管癌细胞分别单独培养的上清液混合液设为混合组.对内皮细胞进行光镜及扫描电镜观察,并用免疫荧光法检测内皮细胞蛋白水解酶pp125焦点激酶(pp125FAK)、基质金属蛋白酶2和9(MMP-2、MMP-9)、人尿激酶型纤维蛋白溶解酶原激活物(uPA)表达的变化,明胶酶谱法测定内皮细胞MMP-2及MMP-9的活性.采用配对t检验分析其结果.结果 与内皮细胞组比较,共培养组内皮细胞之间的间隙增大.内皮细胞组ppl25FAK、MMP-2、MMP-9、uPA的平均荧光强度分别为394±51、455±82、377±48、422±55,而共培养组表达增强,分别为1096 ±128、931 ±72、815 ±76、801 ±56,两组比较差异有统计学意义(t=6.53,4.32,3.61,3.45,P<0.05).混合组MMP-2、MMP-9灰度扫描值分别为240.2±15.2和2.4±0.8.共培养组的MMP-2、MMP-9分别为687.4±43.6和150.9±13.2,两组比较差异有统计学意义(t=4.89,5.43,P<0.05).结论 共培养后的内皮细胞之间缝隙增大,蛋白水解酶表达增强,它可能参与降解内皮细胞外基质,促进了胆管癌的转移.     

内毒素诱导共培养中性粒细胞——血管内皮细胞活化的体外研究

目的　建立人外周血中性粒细胞与人脐静脉血管内皮细胞系ECV 30 4体外共培养模型 ,研究内毒素对共培养中性粒细胞 血管内皮细胞活化的作用。　方法　将ECV 30 4细胞接种培养 ,待细胞接近融合 ,加入 2× 10 6/ml即时分离纯化的人外周血中性粒细胞 ,按不同的分组加入不同浓度的内毒素 (lipopolysaccharide ,LPS) ,在倒置显微镜下观察细胞形态学的改变 ,于 4、8、12、2 4h测定细胞上清中TNFα及IL 6水平的变化。　结果　不同浓度的LPS刺激内皮细胞TNFα产生没有明显的变化 ,而 1μg/mlLPS刺激共培养中性粒细胞 -ECV 30 4 ,在 4h其TNFα水平明显上升 ,10 μg/mlLPS刺激共培养中性粒细胞 -ECV 30 4 ,其TNFα水平逐渐上升 ,8h后比较明显 (P <0 .0 5 ) ,12、2 4h仍维持较高水平 ;对于单纯内毒素刺激ECV 30 4细胞 ,随着LPS浓度的增加 ,IL 6生成明显增加。 1μg/mlLPS刺激ECV 30 4IL 6自 4h后即明显上升 ,8、12h一直维持在高水平 ,直到 2 4h才明显回落。对于共培养的中性粒细胞和血管内皮细胞 ,单纯共培养中性粒细胞 -ECV 30 4IL 6无明显变化 ,而较低浓度10 0ng/mlLPS刺激共培养中性粒细胞 -ECV 30 4IL 6与 1μg/mlLPS刺激ECV 30 4相当 ,2 4h仍维持在高水平。 1μg/ml及 10 μg/ml刺激共培养中性粒细胞 -ECV 30     

胰腺微循环与胰腺的功能和临床

胰腺是机体重要的器官 ,从功能上讲 ,它是机体唯一一个既是内分泌又是外分泌的实质器官 ;从临床上讲 ,胰腺内外分泌都引起危及人体健康的常见多发病 ,发病机理不清是这些疾病高发和临床疗效不理想的根本原因。胰腺内分泌部最常见的疾病是糖尿病 ,它的发病率呈逐年上升趋势 ,据世界卫生组织新近公布的资料表明 ,其病死率仅次于恶性肿瘤和心脑血管疾病居第三位。胰腺外分泌部最常见的疾病是急性胰腺炎 (ＡＰ)和胰腺癌 ,新近的资料显示 ,胰腺癌和急性坏死性胰腺炎的发病率逐年增高 ,其病死率居高不下 ,已成为当今医学的一大难题。然而 ,人们对…     

血管内皮生长因子基因在人胚胎胰岛干细胞中的表达

目的 构建含血管内皮生长因子(VEGF)基因的慢病毒载体,转染人胚胎来源的胰岛干细胞(hPSC),探讨VEGF在胰岛干细胞中的体外表达水平及其影响因素.方法 将VEGF基因克隆入慢病毒载体,利用293T细胞包装出病毒,按拷贝数分别为2、5、10转染胰岛干细胞,测定不同转染组VEGF的分泌水平.结果 含VEGF的病毒上清可以在体外培养条件下成功转染胰岛干细胞,经潮霉素筛选3 d后,对照组及拷贝数分别为2、5、10的转染组每1×106个细胞每小时VEGF的分泌量分别为(60.3±13.4)、(1622.0±302.0)、(2270.0±340.0)、(3090.0±465.0)ng/L.对照组与转染组间(P＜0.05)以及各转染组之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 含VEGF的慢病毒载体可以成功转染人胚胎来源的胰岛干细胞,使其持续高表达VEGF,通过改变转染拷贝数可在一定水平上控制VEGF的分泌水平.

Abstract：

Objective To transfect vascular endothelial growth factor (VEGF) gene into human pancreatic stem cells (hPSC) by lentiviral vectors. Methods VEGF gene was sub-cloned into the lentiviral transfer vectors which also encoded hygromycin gene. The recombinant lentiviral vectors were packaged by 293T cells through three plasmids transient co-transfection method using standard lipofectamine reagent.The viral titers were tested by transfecting 293T cells. hPSC were transducted under different multiplicity of infection (MOI). VEGF secretion level was tested by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Results Lentiviral vectors encoding VEGF and hygromycin resistance gene were constructed. Using lentiviral vectors encoding VEGF, we successfully transfected hPSC, and the transfected hPSC expressed VEGF continuously. On the day 3 after screening by hygromycin, the content of VEGF secreted by 1 × 106 cells per h was (60. 3 ± 13.4), ( 1622.0 ±302. 0), (2270. 0 ±340. 0), (3090. 0 ±465. 0) ng/L respectively when MOI was 0, 2, 5 and 10. The results indicated that VEGF expression was influenced by MOI ( P ＜ 0. 05 ).Conclusion Lentiviral vectors encoding VEGF and hygromycin resistance gene were constructed and could be used to transfect human pancreatic stem cells successfully.     

靶向血管内皮细胞治疗胰腺癌的实验研究

目的 运用肿瘤血管内皮细胞的单克隆抗体，研究靶向血管内皮细胞治疗胰腺癌的可行性。方法 建立裸小鼠人胰腺癌的动物模型，^131I标记抗胰腺癌血管内皮细胞单抗，抑瘤实验。结果 胰腺癌经单纯抗体治疗后，抑瘤率为68．50％，经^131I标记的单抗治疗后，抑瘤率为85．06％，并抑制了转移，降低了死亡率，病理检查证实，经单抗治疗后肿瘤区微血管内血栓形成，血管内皮细胞变性、坏死。血管周围大片肿瘤细胞坏死，瘤内血管密度明显降低。结论 抗肿瘤血管内皮细胞单克隆抗体在动物实验中对胰腺癌有明显的抑瘤作用，以此抗体为载体与核素相结合，可明显提高疗效。     

胰腺癌淋巴管生成与血管内皮生长因子C的关系

目的探讨人胰腺癌组织中血管内皮生长因子C（VEGF-C）和其受体3（VEGFR-3）的表达与胰腺癌微淋巴管密度（LVD）、区域淋巴结转移的关系。方法免疫组织化学SP法检测67例人胰腺癌组织VEGF-C的表达情况，VEGFR-3结合Ⅳ型胶原（collagen type Ⅳ）进行LVD计数并结合临床和病理资料进行分析。结果VEGF-C的表达和胰腺癌分化程度、区域淋巴结转移、远处转移均呈显著相关（P〈0．05），LVD与胰腺癌分化程度、区域淋巴结转移、VEGF-C的表达程度呈明显相关（P〈0．01）。VEGFR-3不仅在肿瘤淋巴管内皮细胞上表达还在部分肿瘤血管内皮细胞上表达。结论VEGF-C通过其受体VEGFR-3促进胰腺癌淋巴管生成、区域淋巴结转移。     

血管内皮生长因子在胰腺癌中的表达及其对预后的影响

目的:研究胰腺癌组织中血管内皮生长因子表达与微血管生成和血管侵犯之间的联系,以及其临床意义和对预后的影响。方法:应用免疫组化方法测定36例胰腺癌切除标本中血管内皮生长因子(VEGF,VEGF-C)的表达;通过CD34染色测定其微血管密度(MVD)。结合临床病理和随访资料分析MVD、VEGF、VEGF-C表达与病人预后之间的关系。结果:胰腺癌组织中的MVD为44.04±12.80,VEGF阳性组MVD(49.95±9.57)显著高于阴性组(30.6±18.24)。VEGF的阳性率为69.4%(25/36),发生胰外侵犯组的阳性率为83.3%(20/24),UICC临床分期Ⅲ～Ⅳ期组的阳性率为92.9%(13/14)。VEGF-C的阳性率为55.6%(20/36),淋巴转移组的VEGF-C阳性率为83.3%(10/12),UICC临床分期Ⅲ～Ⅳ组阳性率为85.7%(12/14)。Kaplan-Meier生存分析显示,VEGF、VEGF-C阳性组的预后较差(P<0.05)。结论:胰腺癌的MVD显著升高,VEGF在胰腺癌中的高表达可反映肿瘤微血管生成状况,与胰腺癌的胰外侵犯及UICC临床分期之间有显著意义,故可作为判断预后的依据;VEGF-C与淋巴转移和UICC临床分期相关,也是判断预后的依据。     

胰腺癌微血管壁通透性的形态学研究

目的 观察胰腺癌微血管壁的通透性相关结构,为胰腺癌药物治疗靶向性的提高提供参考.方法 选取我院切除的中分化胰腺癌10例,对肿瘤中心、边缘、瘤旁、正常/远隔胰腺4个部位进行透射电镜检测.结果 胰腺癌微血管数量和内皮窗孔数量明显少于正常胰腺组织(P<0.05),且内皮间隙和窗孔的内径并不超过正常胰腺组织.胰腺癌微血管内皮间隙内径中位数为12.8～13.2 nm,5～95百分位数为0～24.4 nm,内皮间隙存在局部扩张的现象,最宽处可以达到60.3～76.4 nm.胰腺癌微血管窗孔的内径在40.0nm左右.瘤旁组织破口较多,破口内径平均516.3 mm左右.结论 与正常胰腺组织比较,胰腺癌具有一定的微血管异质性,体现为血供较少和微血管壁通透性较低等特点.     

胰腺癌微血管壁通透性的形态学研究

目的 观察胰腺癌微血管壁的通透性相关结构,为胰腺癌药物治疗靶向性的提高提供参考.方法 选取我院切除的中分化胰腺癌10例,对肿瘤中心、边缘、瘤旁、正常/远隔胰腺4个部位进行透射电镜检测.结果 胰腺癌微血管数量和内皮窗孔数量明显少于正常胰腺组织(P<0.05),且内皮间隙和窗孔的内径并不超过正常胰腺组织.胰腺癌微血管内皮间隙内径中位数为12.8～13.2 nm,5～95百分位数为0～24.4 nm,内皮间隙存在局部扩张的现象,最宽处可以达到60.3～76.4 nm.胰腺癌微血管窗孔的内径在40.0nm左右.瘤旁组织破口较多,破口内径平均516.3 mm左右.结论 与正常胰腺组织比较,胰腺癌具有一定的微血管异质性,体现为血供较少和微血管壁通透性较低等特点.     

胰腺癌微血管壁通透性的形态学研究

目的 观察胰腺癌微血管壁的通透性相关结构,为胰腺癌药物治疗靶向性的提高提供参考.方法 选取我院切除的中分化胰腺癌10例,对肿瘤中心、边缘、瘤旁、正常/远隔胰腺4个部位进行透射电镜检测.结果 胰腺癌微血管数量和内皮窗孔数量明显少于正常胰腺组织(P<0.05),且内皮间隙和窗孔的内径并不超过正常胰腺组织.胰腺癌微血管内皮间隙内径中位数为12.8～13.2 nm,5～95百分位数为0～24.4 nm,内皮间隙存在局部扩张的现象,最宽处可以达到60.3～76.4 nm.胰腺癌微血管窗孔的内径在40.0nm左右.瘤旁组织破口较多,破口内径平均516.3 mm左右.结论 与正常胰腺组织比较,胰腺癌具有一定的微血管异质性,体现为血供较少和微血管壁通透性较低等特点.     

胰腺癌微血管壁通透性的形态学研究

目的 观察胰腺癌微血管壁的通透性相关结构,为胰腺癌药物治疗靶向性的提高提供参考.方法 选取我院切除的中分化胰腺癌10例,对肿瘤中心、边缘、瘤旁、正常/远隔胰腺4个部位进行透射电镜检测.结果 胰腺癌微血管数量和内皮窗孔数量明显少于正常胰腺组织(P<0.05),且内皮间隙和窗孔的内径并不超过正常胰腺组织.胰腺癌微血管内皮间隙内径中位数为12.8～13.2 nm,5～95百分位数为0～24.4 nm,内皮间隙存在局部扩张的现象,最宽处可以达到60.3～76.4 nm.胰腺癌微血管窗孔的内径在40.0nm左右.瘤旁组织破口较多,破口内径平均516.3 mm左右.结论 与正常胰腺组织比较,胰腺癌具有一定的微血管异质性,体现为血供较少和微血管壁通透性较低等特点.