TNF-α及sTNFRⅠ对子宫内膜异位症在位内膜基质细胞的作用

目的:探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α) 和可溶性肿瘤坏死因子受体(soluble TNFR I,sTNFR I)对体外培养的子宫内膜异位症(Endometriosis)患者在位内膜基质细胞的影响,为子宫内膜异位症的生物学治疗提供新思路.方法:对EMS患者的在位子宫内膜基质细胞进行体外培养.分别用不同浓度的TNF-α(0、0.1、1.0、10.0和100.0 ng/ml)或者同一浓度TNF-α(1 ng/ml)培养不同时间(4、8、12、24、48和72 h)或者TNF-α(1 ng/ml)和 sTNFR I(2 μg/ml)对基质细胞进行刺激并收集细胞上清液,利用双抗体夹心ELISA检测细胞培养上清液中IL-6、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinases,MMP-3)的水平.结果:TNF-α可促进体外培养的EMS子宫内膜基质细胞IL-6、MMP-3的分泌,而且IL-6、MMP-3浓度与TNF-α之间存在剂量、时间依赖关系(P<0.05),而sTNFR I具有抑制TNF-α的作用.结论:TNF-α在EMS的发病机制中发挥重要的作用,其对 EMS 患者子宫内膜基质细胞的促黏附、侵袭、增殖等作用可能是通过促进 IL-6、MMP-3 的分泌来完成的;sTNFR I有望用于EMS 生物学治疗.     

TNF-α及sTNFR I对子宫内膜异位症在位内膜基质细胞的作用

目的：探讨肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor，TNF—α）和可溶性肿瘤坏死因子受体（soluble TNFRI，sTNFRI）对体外培养的子宫内膜异位症（Endometriosis）患者在位内膜基质细胞的影响，为子宫内膜异位症的生物学治疗提供新思路。方法：对EMS患者的在位子宫内膜基质细胞进行体外培养，分别用不同浓度的TNF—α（0、0．1、1．0、10．0和100．0ng／m1）或者同-浓度TNF—α（1ng／ml）培养不同时间（4、8、12、24、48和72h）或者TNF—α（1ng／m1）和sTNFRI（2μg／m1）对基质细胞进行刺激并收集细胞上清液，利用双抗体夹心ELISA检测细胞培养上清液中IL-6、基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinases，MMP-3）的水平。结果：TNF-α可促进体外培养的EMS子宫内膜基质细胞IL-6、MMP-3的分泌，而且IL-6、MMP-3浓度与TNF—α之间存在剂量、时间依赖关系（P〈0．05），而sTNFRI具有抑制TNF—α的作用。结论：TNF—α在EMS的发病机制中发挥重要的作用，其对EMS患者子宫内膜基质细胞的促黏附、侵袭、增殖等作用可能是通过促进IL-6、MMP-3的分泌来完成的；sTNFRⅠ有望用于EMS生物学治疗。     

sIL-1RⅡ对IL-1α诱导子宫内膜异位症在位内膜基质细胞表达IL-8的影响

目的:探讨可溶性IL-1Ⅱ型受体(sIL-1RⅡ)对人白细胞介素1α(IL-1a)诱导子宫内膜异位症(EMs)在位内膜基质细胞(ESC)表达白细胞介素8(IL-8)的影响.方法:体外培养EMs在位内膜基质细胞,分别以含不同浓度IL-1α(0、0.1、1.0、10、100 ng/ml)的DMEM/F12培养基孵育24h,利用RT-PCR和ELISA法从转录和蛋白翻译水平分别检测IL-8的表达情况.选取能显著刺激IL-8升高的IL-1α浓度,作用于EMs在位内膜基质细胞不同时间,RT-PCR和ELISA法检测IL-8的表达情况.并检测1.0μg/ml的sIL-1RⅡ对不同浓度IL-1α诱导EMs在位内膜基质细胞表达IL-8的影响.结果:未刺激时,EMs在位内膜基质细胞能表达低水平IL-8,经IL-1α刺激后IL-8 mRNA及蛋白表达均升高,并呈剂量和时间依赖性,差异有统计学意义(P＜0.01).1.0μg/ml sIL-1RⅡ能拮抗低浓度IL-1α的刺激效应.结论:IL-1α能以时间剂量依赖方式刺激EMs在位内膜基质细胞表达IL-8,促进EMs的发生发展,sIL-1RⅡ能一定程度拮抗此作用,为EMs的生物治疗提供了理论基础.     

子宫内膜异位症异位内膜组织中TNF-α、MMP-2蛋白的表达

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在子宫内膜异位症(内异症)发病机制中的作用.方法:采用免疫组化法检测39例内异症患者的异位内膜组织(试验组)与40例正常子宫内膜组织(对照组)中TNF-α、MMP-2蛋白的表达.结果:TNF-α、MMP-2蛋白染色主要定位于腺体细胞的胞质,间质细胞弱着色.2者在试验组的阳性表达灰度值高于对照组(P＜0.05).结论:内异症患者异位内膜组织中TNF-α、MMP-2的过表达可能与内异症的发生发展有关.     

子宫内膜异位症患者血清中TNF-α和sFlt-1的变化及意义

目的 探讨可溶性血管内皮生长因子受体1（sFlt-1）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在子宫内膜异位症（简称内异症）患者血清中浓度的变化及其意义。方法应用酶联免疫吸附（ELISA）法检测46例内异症患者和24例对照组患者血清中sFlt-1和TNF-α的浓度。结果 内异症组和对照组血清中TNF-α的平均浓度分别为（6332±3325）pg／mL和（1483±742）pg／mL，两组比较差别有统计学意义（P〈0．05）。血清sFlt-1的浓度在I、Ⅱ型内异症组有显著增加，而TNF-α浓度在Ⅲ、Ⅳ型内异症患者中增加明显。结论 血清中sFlt-1浓度的增加表明sFlf-1也许在内异症发病早期起重要作用。     

TNF-α和MMP-3在子宫内膜异位症中的表达及其意义

目的 讨论肿瘤坏死因子α(TNF-α)和基质金属蛋白酶-3(MMP-3)在子宫内膜异位症(EMs)中的表达和发病的关系.方法 以EMs患者20例作研究组,分别取其术前清晨空腹静脉血3mL和在位与异位内膜,以子宫肌瘤患者20例的血清和内膜为对照组.内膜中的MMP-3采用免疫组化方法测定.血清中TNF-αd和MMP-3的含量采用ELISA法检测.结果 MMP-3、TNF-α在血清中的含量在实验组明显高于对照组(P＜0.01).MMP-3主要定位于子宫内膜组织的问质细胞.在异位内膜中,其阳性染色强度均较强,以(+)～(++)为主,呈棕黄色或棕褐色,明显强于正常子宫内膜(P…＜0.05),差异有统计学意义.MMP-3在正常子宫内膜组中增殖期的表达强于分泌期(P＜0.05).结论 MMP-3在EMs患者异位内膜和在位内膜中的高表达,促进了内膜的侵袭、浸润.TNF-α和MMP-3在EMs患者血清中的含量升高,在黏附的同时促进新生毛细血管的形成,加速了EMs的发生发展.     

TNF-α和TNF-β基因变异对子宫内膜异位症易感性的联合效应

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子-β(TNF-β)的基因变异对广东籍汉族妇女子宫内膜异位症(内异症)的遗传易感性的联合效应.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP技术)检测82例内异症患者(内异症组)和80例非内异症妇女(对照组)TNF-α基因启动子区域-308位点和TNF-β基因 252位点的等位基因型.结果 结果发现TNF-β 252 AA基因型的个体患内异症的风险是GG基因型的3.33倍(x2=6.562,P＜0.05).TNF-α-308位点基因型频率分布在两组间比较,差异无显著性(x2=0.640,P＞0.05).但TNF-α-308位点与TNF-β 252位点变异基因型之间有协同作用,TNF-α基因-308位点GA与TNF-β基因 252位点GG联合基因型OR值为2.445,TNF-α基因-308位点GA和TNF-β基因 252位点AA联合基因型OR值增高至10.99(P＜0.05).结论 TNF-βAA基因型可能是广东地区汉族妇女内异症的遗传易感因素之一,TNF-α基因-308位点基因多态性与TNF-β基因 252位点之间有协同作用,两位点突变同时存在能显著增加内异症的发病风险.     

动态检测子宫内膜异位症患者血清TNF-α的临床意义

目的研究子宫内膜异位症（EM）患者血清TNF-α的水平动态变化及其在EM疗效和预后评价中的意义。方法EM组患者80例,手术前、术后7d、术后3个月、6个月、12个月、18个月、24个月用ELISA法检测外周血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平,并与40例正常健康妇女（对照组）比较。结果EM组术前血清中TNF-α水平均明显高于对照组（P〈0.01）,且Ⅲ～Ⅳ期患者高于Ⅰ～Ⅱ期（P〈0.05）。术后1周血清中TNF-α水平下降,明显低于术前水平（P〈0.01）。EM组随访58例,未复发的52例治疗结束后血清TNF-α水平呈下降趋势,复发的6例治疗结束后血清TNF-α水平呈增高趋势。结论EM患者血清TNF-α水平与EM复发有关,EM患者血清TNF-α水平的动态检测有作为EM疗效评价、复发及预后的重要指标。     

子宫内膜异位症不孕患者血清IL-6、TNF-α变化

目的：探讨白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与子宫内膜异位症（EMs）不孕的关系.方法：对62例EMs不孕患者（EMs不孕组）、30例EMs患者（EMs组）及30例健康体检者（对照组）进行血清IL-6、TNF-α检测,并进行比较.结果：血清IL-6、TNF-α水平在EMs不孕组、EMs组及对照组呈降低趋势,EMs不孕组高于EMs组和对照组（P＜0.01）,EMs组高于对照组（P＜0.01）,EMs不孕组Ⅲ～Ⅳ期患者血清IL-6、TNF-α水平均高于Ⅰ～Ⅱ期患者（P＜0.01）,差异均有统计学意义;EMs不孕组血清IL-6与TNF-α水平呈正相关（r=0.928,P＜0.05）.结论：IL-6、TNF-α可能参与了EMs不孕的发生和发展,血清IL-6、TNF-α检测对于EMs不孕的诊断及病情判断具有重要意义.     

子宫内膜异位症患者血清IL-6、IL-8与TNF-α检测的意义

目的：探讨子宫内膜异位症患者手术前后血清IL-6、IL-8和TNF-α水平的变化及意义。方法：应用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定50例子宫内膜异位症患者手术前后血清IL-6、IL-8和TNF-α的水平,并与40名非子宫内膜异位症患者作比较。结果：手术前子宫内膜异位症患者血清中IL-6、IL-8和TNF-α水平均明显高于对照组（P〈0.01）,并且三者随临床分期的增加而增加,手术后则其水平逐渐下降,与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：IL-6、IL-8和TNF-α可能在子宫内膜异位症的发生发展中有一定的意义。检测子宫内膜异位症患者血清IL-6、IL-8和TNF-α对病情和预后判断均有重要的临床意义。     

递增浓度肿瘤坏死因子攻击下肺泡上皮细胞分泌IL-8水平变化

目的观察不同浓度肿瘤坏死因子攻击下肺泡上皮细胞(A549细胞)存活率和分泌IL-8水平变化。方法A549细胞分为对照组和实验组,分别采用不同浓度TNF-α攻击,培养24h后测定各组细胞存活率、上清IL-8水平。结果不同浓度TNF-α攻击均能明显抑制A549细胞生长,其中5000u·ml-1浓度组细胞存活率降为(90.1±1.1)%。TNF-α攻击浓度由100u·ml-1升至1000u·ml-1时,A549细胞分泌IL-8量由9.1±3.5pg·ml-1升至203.7±12.4pg·ml-1,TNF-α攻击浓度超过5000u·ml-1后IL-8分泌量开始下降。结论以100u·ml-1~1000u·ml-1之间浓度的TNF-α进行攻击,A549细胞IL-8分泌量与TNF-α浓度存在剂量-效应关系,反映了急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征状态下肺泡上皮细胞分泌炎性介质情况。     

子宫内膜异位症患者在位内膜细胞的异常生物学特性

目的:探讨子宫内膜异位症(EM)患者在位子宫内膜细胞在侵袭、新生血管形成、增殖、凋亡诸多方面是否有别于正常内膜细胞。方法:1.应用ELISA方法对离体培养的人EM在位内膜细胞及正常子宫内膜细胞的培养基中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的浓度进行测定。2.应用逆转录聚合酶链反应对离体培养的人EM在位内膜细胞及正常子宫内膜细胞VEGF、MMP-9、TIMP-1和Bax的mRNA表达进行观察。3.应用流式细胞技术对离体培养的人EM在位内膜细胞及正常子宫内膜细胞的增殖和凋亡状况进行观察。结果:EM体外培养的在位内膜细胞分泌的VEGF和MMP-3均显著高于对照组(P<0.01,P<0.05);TIMP-1显著低于对照组(P<0.01);VEGF mRNA、MMP-9 mRNA表达显著高于对照组(P<0.01,P<0.05);TIMP-1 mRNA和Bax mRNA的表达均低于对照组(均P<0.05);增殖指数显著高于对照组(P<0.05);凋亡指数显著低于对照组(P<0.05)。结论:EM在位内膜细胞在表达分泌VEGF、MMP-3、MMP-9、TIMP-1、Bax,PI、ApI等诸多方面均有别于正常对照内膜细胞,进一步支持了"在位内膜决定论"。     

可溶性白介素2受体与肿瘤坏死因子在胸腔积液中的表达

目的　了解结核和恶性胸水中可溶性白介素 2受体 (sIL 2R)与肿瘤坏死因子 (TNF)水平及其临床意义。方法　采用双抗体夹心ELISA法和放射免疫分析法 (RIA法 )检测 2 6例结核性、2 2例恶性胸腔积液中sIL 2R与TNF浓度。结果　结核性胸水中sIL 2R与TNF含量分别为 (1310 .4 0± 36 7.89)U ml,(1.79± 0 .5 8) μg L ;恶性胸水中sIL 2R与TNF含量分别为 (94 3.2 6± 2 17.74 )U ml,(1.2 9± 0 .5 1) μg L ;结核性胸水组sIL 2R与TNF浓度均明显高于恶性胸水组 ,两组间有显著性差异 (P <0 .0 0 1,P <0 .0 0 5 ) ;联合检测二者诊断结核性胸腔积液的敏感度、特异度、正确度分别为 10 0 %、96 %、98%。结论　检测胸水中sIL 2R与TNF含量有助于结核性和恶性胸腔积液的鉴别     

子宫内膜异位症患者血清TNF-α和TNF-β的测定

目的:了解子宫内膜异位症（简称内异症）患者血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子-β（TNF-β）的水平以及在腹腔镜保守性手术治疗前后的变化。方法:采用酶联免疫吸附法检测82例内异症患者（内异症组）和68例非内异症妇女（对照组）血清中TNF-α和TNF-β的含量及49例手术前后两者水平的变化。结果：内异症组血清TNF-α和TNF-β含量均显著高于对照组（Ｐ<0.01），且二者表达量随病情加重有上升趋势（Ｐ<0.05）。手术后Ⅲ～Ⅳ期患者血清中的TNF-α和Ⅰ～Ⅳ期患者血清TNF-β的含量随着内异灶的清除逐渐下降。结论:检测患者血清中TNF-α和TNF-β的含量，对术后随访、监测及手术效果的评价具有重要意义。     

白细胞介素6、肿瘤坏死因子对体外培养的血管内皮细胞的损伤作用

目的：研究白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF)对人脐静脉内皮细胞（HVEC）的损伤作用。方法：以原代培养的HVEC为模型,将IL-6、TNF及其抗体与HVEC共同孵育,观察内皮细胞（EC）形态变化和培养液中血管紧张素转化酶（ACE）和乳酸脱氢酶（LDH）水平。结果： TNF和IL-6可引起细胞间隙增大,甚至细胞脱落;并且随着TNF和IL-6浓度加大及作用时间延长,培养液中ACE和LDH水平升高。结论： IL-6和TNF对血管EC有损伤作用。     

人子宫内膜异位症异位及在位内膜间质细胞分离与培养

目的：建立子宫内膜异位症（EMs）异位、在位内膜间质细胞的体外细胞模型,实时观察间质细胞形态变化。方法胶原酶消化异位、在位内膜组织,二次筛网过滤结合低速离心法分离纯化间质细胞,应用免疫细胞化学染色进行细胞鉴定,并进行传代培养,观察细胞生长状况及细胞形态差异。结果培养成功率91．3％,间质细胞纯度达95％;异位间质细胞9代内、在位及对照组间质细胞11代内,细胞形态及活性并无明显改变。结论子宫内膜间质细胞可为子宫内膜异位症研究提供较好的细胞模型。     

人在位和异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的原代培养

目的:探讨在位和异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞分离培养方法,为研究子宫内膜异位症的发病机制提供体外细胞模型.方法:通过消化、过滤、沉降等方法,分离培养正常对照子宫内膜以及子宫内膜异位症在位、异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞,模拟人体内雌激素水平研究促进细胞生长的方法,光学显微镜观察离体细胞形态.结果:正常对照子宫内膜细胞分离培养成功率达91.7%(11/12),子宫内膜异位症在位子宫内膜细胞成功率为93.8%(15/16),子宫内膜异位症异位子宫内膜细胞成功率为75.0%(12/16).间质细胞传代2次后,生长缓慢,经雌激素作用后,生长明显改善;腺上皮细胞不能传代,经雌激素作用后,生长改善不明显.结论:体外分离培养的人子宫内膜细胞比子宫内膜异位动物模型更接近于人体的特点,在位和异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞分离培养可作为研究子宫内膜异位症的体外细胞模型之一.     

食道癌患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体1测定及临床意义

目的 探讨食管癌患者的异常免疫状态下血清sTNFR1检测的临床意义。材料和方法 用双单抗夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测40例食管癌患者和30例正常人血清sTNFR1水平。结果 食管癌病人血清sTNFR1浓度[（129.45±42.54）U/ml]显著高于正常人[（51.64±26.67 U/ml）,P<0.05],且其升高程度与病变食管长度、病情轻重及有无恶液质有关。结论 sTNFR1的检测对食道癌的早期诊断和预后具有实用价值。