自制枝莲清肝胶囊抑制乙型肝炎病毒活性的体外实验

目的观察枝莲清肝胶囊抑制乙型肝炎病毒（HBV）的活性。方法以HepG2.117细胞为模型,分为3组：空白对照组、枝莲清肝组（1000μg/ml）、拉米夫定组（5μg/ml）,用酶联免疫试验法（ELISA）检测细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg的变化,用荧光定量PCR法检测细胞培养上清液中HBV DNA的变化,以MTT比色法观察药物对细胞的毒性作用。结果细胞毒性实验显示,2个药物组与空白对照组比较,OD值差异无统计学意义（P〉0.05）,表明2种药物对HepG2.117细胞的生长无毒性作用。枝莲清肝组24h和72 h对HBsAg的抑制率分别达30.1%和36.3%,对HBeAg的抑制率分别达6.4%和26.7%;PCR检测显示枝莲清肝胶囊能降低HBV DNA水平。除72 h时对HBsAg的抑制率低于拉米夫定组外（P〈0.05）,2组其余指标比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论枝莲清肝胶囊在1mg/ml浓度下有抑制HBV DNA和HBsAg、HBeAg的作用。     

不同盐的左氧氟沙星体外抗乙型肝炎病毒的作用及机理的研究

目的：研究不同盐的左氧氟沙星抗外抗HBV的作用及其机理。方法：以HBsAg,HBeAg及细胞存活率为指标,评价药物体外抗HBV效果;检测HBV DNA、RNA的拷贝数,结合Southern杂交,推测其体外抗HBV的作用机理。结果：磺酸左氧氟沙星对HBsAg和HBeAg的ID50分别为63．1μg/ml及81．3μg/ml,CD50为182．0μg/ml,TI＞2;对细胞内,外HBV DNA及细胞内HBV RNA均有剂量依赖性抑制作用（P＜0．05）;Southern杂交显示,其对细胞内HBV DNA及复制中间体有抑制作用,对scDNA有部分抑制作用,结论：磺酸左氧氟沙星有抗HBV作用,作用位点在HBV DNA及scDNA水平。     

氧化苦参碱治疗慢性乙型肝炎疗效观察

目的 观察氧化苦参碱对慢性乙型肝炎的治疗效果。方法 80例慢性乙型肝炎患者随机分成两组，治疗组50例，予氧化苦参碱加常规护肝治疗，对照组30例，仅予常规护肝治疗。结果 治疗24周后，治疗组较对照组血清总胆红素、丙氨酸转氨酶、门冬氨酸转氨酶下降明显（P〈0．01）。治疗组HBeAg与HBV DNA阴转率明显高于对照组（P〈0．01）。结论 氧化苦参碱对慢性乙型肝炎的具有良好疗效。     

HBV前S1编码链锁核酸的设计及体外抗HBV效果观察

目的针对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)前S1 dsDNA同聚嘌呤区设计反基因寡核苷酸药物-锁核酸(locked nucleic acid,LNA),并在体外观察抑制HBV复制的效果。方法针对HBV前S1 dsDNA的3023～3037 nt、3094～3109 nt两个同聚嘌呤区,利用RNA structure软件分别设计并合成LNA,以阳离子脂质体为载体,将药物转染入HepG2.2.15细胞内,采用荧光定量PCR技术和化学发光免疫技术分别检测3 d、6 d和9 d细胞培养上清液中HBV DNA和HBsAg的含量;CCK8法检测锁核酸对HepG2.2.15细胞代谢的影响。结果 LNA对HepG2.2.15细胞的HBV DNA转录和HBsAg表达有显著的抑制作用,并且抑制效果随着时间进一步加强,在第9天的抑制率分别为45.37%和52.09%。两个同聚嘌呤组与空白对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.05),而封闭3023～3037nt同聚嘌呤区的LNA抑制作用较强,且最适序列长度为15～25 bp。CCK8实验显示LNA对HepG2.2.15细胞无任何明显的代谢影响。结论针对前S1 dsDNA同聚嘌呤区的反基因锁核酸分子在体外能够有效地抑制HBV的复制,以封闭3023～3037 nt靶位效果较强,且合适序列长度为15～25 bp。     

氧化苦参碱联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎疗效观察

目的　观察氧化苦参碱注射液联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎 (CHB)的临床疗效。方法　 3 1例HBVDNA及HBeAg阳性的CHB接受氧化苦参碱注射液联合拉米夫定治疗12个月 ,并与 3 5例仅接受拉米夫定治疗的患者进行对比。观察两组的谷丙转氨酶、HBVDNA、HBeAg的变化情况及不良反应。 结果　治疗 1个月治疗组与对照组的ALT复常率分别为 87.1% (2 7/ 3 1)和 85 .7% (3 0 / 3 5 ) ,治疗 4个月ALT均恢复正常。治疗结束时观察组HBVDNA转阴率 87.1% (2 7/ 3 1) ,与对照组 82 .9% (2 9/ 3 5 )无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,观察组HBeAg转阴率为 61.3 % (19/ 3 1) ,高于对照组 3 7.1% (13 / 3 5 ) (P <0 .0 5 )。治疗结束 1年后观察组HBVDNA和HBeAg有 5 6.5 % (13 / 2 3 )表现为持续阴性 ,明显较对照组 2 0 .0 % (5 / 2 5 )高(P <0 .0 5 )。治疗组HBVDNA和HBeAg转阴后的复发率也分别低于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　氧化苦参碱注射液与拉米夫定联用有协同作用 ,可有效降低复发率 ,提高疗效     

新型稀土杂多化合物对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

目的：研究稀土杂多化合物(PTW-6)体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的活性。方法：MTT法检测PTW-6对Hep G2 2.2.15细胞的毒性,乙型肝炎病毒e（s）抗原诊断试剂盒检测上清液中HBeAg、HBsAg的含量,Southern blotting 法检测PTW-6对细胞内HBV DNA复制的抑制作用。荧光定量PCR分析PTW-6对细胞内HBV mRNA和上清液中HBV DNA含量的影响。结果：PTW-6对2.2.15细胞的半数中毒浓度为1590.46 mg•L^-1, PTW-6各浓度实验组对HBeAg和HBsAg的抑制率均高于对照组（P<0.05）;随着PTW-6浓度的增高,PTW-6对2.2.15细胞内外HBV DNA的抑制率增加,PTW-6对2.2.15细胞外HBV DNA和细胞内HBV mRNA半数抑制浓度分别为51.1和63.6 mg•L^-1。结论：PTW-6体外毒性较低, 且对HBV复制有较好的抑制作用。     

乙肝疫苗联合乙肝免疫球蛋白阻断乙肝病毒母婴传播的临床效果

目的：探讨乙肝免疫球蛋白（HBIG）和乙肝疫苗联合阻断乙肝病毒（HBV）母婴传播的疗效。方法：选择2014年12月~2015年12月间246例HBsAg阳性孕妇为研究对象,根据随机数字表法分为观察组及对照组,均123例。对照组仅新生儿单独接种乙肝疫苗,观察组孕妇及新生儿均联合接种乙肝疫苗和HBIG。结果：对照组及观察组新生儿中出现宫内HBV感染率分别为22.76%和9.76%,一年后对照组及观察组新生儿中HBV感染率分别16.26%和1.63%,两组间差异均存在统计学意义。对照组及观察组新生儿出生时及一年后对应HBsAb阳性率分别为8.13%、76.42%和27.64%、94.31%,两组差异存在统计学意义。结论：孕妇及新生儿乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗联合应用能够有效降低HBsAg阳性情况患者所产新生儿HBV感染率,同时能使新生儿对应的HBsAb转阳率有效提高,最终使HBV的传播阻断率提高。     

精子洗涤对精液中HBV DNA含量的影响

目的：检查HBV感染者精液是否存在乙型肝炎病毒（HBV），探讨精子洗涤是否能去除其中的HBV DNA。方法：用实时荧光定量PCR（FQ-PCR）法检测57名血清HBsAg阳性患者精液中HBV DNA，采用Percoll非连续梯度离心及上游法分离其中21份精液，并对洗涤后标本进行HBV DNA检测。结果：62份精液标本中有15份HBV DNA阳性，阳性率为24.19%;21份用于洗涤的精液标本中有，有7份HBV DNA阳性，洗涤后仍有6份标本阳性。结论：部分HBV感染者精液具有传染性，精子洗涤不能完全去除精液中的乙肝病毒。将HBV感染者的精液用于人工授精或体外受精应慎重。     

氧化苦参碱治疗肝纤维化临床疗效观察

目的:观察氧化苦参碱对慢性肝炎患者抗肝纤维化的作用。方法:使用氧化苦参碱治疗60例慢性肝炎患者,前后进行血清肝纤维化标志物检测。结果:慢性肝炎中,中、重度患者经氧化苦参碱治疗,3月后血清标志物明显下降,有显著差异,P<0.01,而慢性肝炎轻度肝硬化患者无显著差异。结论:氧化苦参碱对慢性肝炎患者有明显的抗肝纤维化作用。     

乙型肝炎病毒x蛋白对细胞周期的影响

目的　研究乙型肝炎病毒ｘ（ Ｈ Ｂｘ） 蛋白对细胞周期影响,探讨 Ｈ Ｂｘ 蛋白致细胞周期紊乱的分子机理。方法　构建 Ｈ Ｂｘ 基因真核表达载体ｐ Ｃ Ｅ Ｐ４ Ｘ,电转染入 Ｈｅｐ Ｇ２ 细胞（ Ｘ 细胞） ,以ｐ Ｃ Ｅ Ｐ４空载体为对照（ Ｘ０ 细胞） ,潮霉素选择培养,克隆扩增转染细胞,经无血清培养同步化后,流式细胞仪检测细胞周期变化;细胞组化和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测增殖细胞核抗原（ Ｐ Ｃ Ｎ Ａ） 和ｐ２１ Ｃ Ｉ Ｐ１／ Ｗ Ａ Ｆ１ 表达变化。结果　流式细胞仪检测示对照 Ｘ０ 细胞７０ ％ 进入 Ｇ０ Ｇ１ 期,而转 Ｘ 细胞仅５６ ％ 进入 Ｇ０ Ｇ１ 期,与含血清培养的亲本细胞 Ｈｅｐ Ｇ２ 几乎相同。ｐ２１ Ｃ Ｉ Ｐ１／ Ｗ Ａ Ｆ１ Ｄ 表达在 Ｘ０ 细胞阳性率为（８６ ±８） ％ , Ｘ 细胞为（１６ ±６） ％ 。 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 表达在 Ｘ０ 细胞阳性率为（９ ±５） ％ , Ｘ 细胞为（８６ ±３） ％ 。结论　 Ｈ Ｂｘ 有推进细胞周期作用,并使细胞生长对血清依赖减少。 Ｈ Ｂｘ 可抑制细胞周期抑制蛋白ｐ２１ Ｃ Ｉ Ｐ１／ Ｗ Ａ Ｆ１ 表达,同时增强细胞 Ｄ Ｎ Ａ 合成。     

氧化苦参碱治疗乙型肝炎肝纤维化的临床研究

目的：探讨氧化苦参碱对乙型肝炎肝纤维化的临床疗效。方法：经肝穿活组织病理检查筛选98例乙型肝炎肝纤维化患者，用氧化苦参碱100ml ivdrip,6个月后观察其HBV DNA定量、血清透明质酸（HA）、层连蛋白（LN）、PCⅢ及肝组织纤维化变化，并与54例对照组进行比较。结果：治疗组HBV DNA阴转率高于对照组，其HA、LN、PCⅢ均较对照组明显降低，肝组织纤维化程度明显减轻。结论：氧化苦参碱具有抗纤维化的治疗效用。     

苦参素注射液治疗慢性乙型肝炎的疗效观察

目的　观察苦参素注射液治疗慢性乙型肝炎 (CHB) 6个月的临床疗效。　方法　 48例CHB患者 ,用苦参素注射液 6 0 0mg ,肌肉注射 ,1次 /天 ,共 6月 ;另选择 36例CHB患者 ,采用一般保肝降酶药治疗 6个月作为对照。　结果　两组在改善症状、体征和恢复肝功能方面效果明显 (P >0 .0 5 )。苦参素组HBeAg与HBVDNA在治疗 3个月和 6个月后 ,阴转率分别是 41.7%、39.6 %和 6 0 .4%、5 8.3% ,比对照组 16 .7%、13.9%和 2 2 .2 %、16 .7%明显增高 (P <0 .0 1)。治疗组 6个月时HBeAg与HBVDNA阴转率均较 3个月时高 (P <0 .0 5 )。治疗组HBeAg/抗 -HBe血清转换率达 5 8.6 %。除注射部位的疼痛、硬结外 ,未见其他不良反应。　结论　苦参素注射液治疗CHB有确切疗效 ,如剂量大 (6 0 0mg)、疗程长 (6个月 ) ,其治疗效果更令人满意。     

徐长卿水提物抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的初步探讨徐长卿水提物的抗乙型肝炎病毒(HBV)作用.方法通过徐长卿水提物作用于体外培养的2.2.15细胞株,观察其对2.2.15细胞株分泌HBsAg和HBeAg的影响,以初步评价其抗HBV作用. 结果徐长卿水提物作用于2.2.15细胞株12d后,对2.2.15细胞株的半数毒性浓度为62.65g/L,对HBsAg的半数抑制浓度小于0.78 g/L、对HBeAg的半数抑制浓度为10.13 g/L;对HBsAg治疗指数大于80.32,对HBeAg治疗指数为6.18.结论徐长卿水提物在体外细胞培养中对两抗原的分泌有较好的抑制作用.     

脱氧核酶抑制乙型肝炎病毒基因表达的实验研究

目的：探讨乙型肝炎病毒(HBV)s基因和c基因特异性的脱氧核酶(DNAzyme)对HBV表面抗原(HB—sAg)和e抗原(HBeAg)表达的抑制效应。方法：设计合成针对HBVs基因ORF A^157UG、e基因ORF A^1816UG的DNAzyme DrzBS、DrzBC,在2.2．15细胞上观察其对HBVs基因、c基因的表达抑制效应。结果：DrzBS、DrzBC作用于2．2．15细胞后,可显著抑制HBVs基因、c基因的表达,有效浓度为0．1—2．5μmol／L并呈剂量依赖性,最高抑制率分别为94．2％和91．8％;有效抑制持续时间可达72h,DrzBS、DrzBC在细胞内对HbeAg、HbeAg表达的抑制效率,明显高于作为对照的反义寡核苷酸AsBS、AsBC,有效浓度较后者低至少l0倍。其对2．2．15细胞的HBVDNA复制无明显影响,亦未见明显的细胞毒性作用。结论：在2．2．15HBV细胞模型系统,DrzBS、DrzBC能高效阻断HBVs基因、e基因的表达,是一种特异性的、高效的抗HBV基因治疗剂。     

乙型肝炎病毒蛋白对核酶剪切作用的影响

惭型肝炎病毒蛋白对核酶剪切作用的影响。方法 利用计算机辅助设计针对乙型肝炎病毒Ｃ基因的三个单一核酶构建Ｒｚ１核酶自剪切转录载体（ｐＧＥＭＲｚ１）,观察单一核酶（Ｒｚ１）对靶ＲＮＡ的切割作用及乙型肝炎病毒观察单一核酶（Ｒｚ１）对靶ＲＮＡ的切割作用及乙型肝炎病毒蛋白对核酶剪切作用的影响。结果 核酶自剪切转录载体体２上转录后,在顺式核酶发生自剪切后可将目的核酶正确地释放出来,计算机设计的单一核酶体外可剪     

Multiplication of hepatitis B virus in fulminant hepatitis B

The presence in serum of hepatitis B e antigen (HBeAg) and hepatitis B virus DNA, which are each regarded as reflecting multiplication of hepatitis B virus, were looked for one to five days after the onset of hepatic encephalopathy in 64 patients with fulminant hepatitis B. HBeAg and hepatitis B virus DNA were found in the serum of only 24 (37%) and six (9%) patients, respectively. Hepatitis B virus DNA was absent from the serum in all 13 patients positive for anti-HBs. These findings indicate that replication of hepatitis B virus stopped after the onset of hepatic encephalopathy in most of the patients and support the view that an enhanced immune response stops the replication. Agents that inhibit viral multiplication would probably not have any effect at this stage of the disease.     

阿德福韦酯联合苦参素胶囊对慢性乙型肝炎的治疗研究

目的:观察阿德福韦酯联合苦参素胶囊对慢性乙型肝炎(CHB)的疗效及对乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸( HBV DNA)的影响.方法:164例CHB患者随机分为治疗组和对照组,治疗组82例应用阿德福韦酯和苦参素胶囊,对照组82例单用阿德福韦酯,疗程均为12个月,每3个月分别检测肝功能、乙型肝炎病毒血清学标志物、HBV DNA.其中40例患者(每组20例)进行治疗前、后两次肝穿活检.结果:在治疗12个月时,治疗组和对照组的HBV DNA差异有显著性意义(P＜0.05),治疗组的HBV DNA表达量明显低于对照组,大部分患者肝组织病理有改善.结论:阿德福韦酯联合苦参素胶囊能在一定程度上提高治疗CHB的疗效.     

肝动脉化疗栓塞术对乙肝病毒再激活的影响及拉米夫定对乙肝病毒再激活的作用

目的探讨肝动脉化疗栓塞术（TACE）对乙肝病毒再激活患者的影响及拉米夫定对乙肝病毒再激活的预防作用。方法将66例行TACE术治疗的HBV相关肝癌病人按有无服用拉米夫定分为TACE治疗组33例（单纯组）和拉米夫定联合TACE治疗组33例（联合组）。对这些患者栓塞术前、术后的乙肝病毒定量进行分析,并观察拉米夫定对乙肝病毒再激活的作用。结果单纯TACE组中,乙肝病毒再激活率为36.4%,联合组中,HBV再激活率为15.2%。两组相比,有统计学意义（P〈0.05）。结论 TACE会导致HBV的再激活,出现肝炎活动。拉米夫定可预防TACE后的HBV再激活。HBeAg（＋）可作为提示HBV再激活的一个指标。     

苦生素治疗慢性乙型肝炎的疗效探讨

目的观察苦生素治疗慢性乙肝(CHB)的疗效。方法187例CHB患者随机分为治疗组87例和对照组100例,治疗组予苦生素注射液600m g,1次/d静滴,1个月后改为苦生素胶囊2粒,3次/d口服;对照组予常规护肝治疗,疗程均为3个月。结果治疗组HBVDNA、HB eA g阴转率分别为47.1和29.89%;对照组为8.0和2.0%,两组比较,差异有统计学意义(均P=0.000)。治疗组肝功能和肝纤维指标明显改善,无论与治疗前比较或与对照组治疗后比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论苦生素具有抗乙肝病毒及抗肝纤维化作用。