骨髓基质成骨细胞—生物活性陶瓷复合培养及其体外成骨的观察

目的：观察骨髓来源的成骨细胞(Marrow stromal osteoblasts，MSO)与生物活性陶瓷(Bioactive Glass Ceramic，BGC)复合培养后，细胞生长状况及其体外成骨能力。方法：将新西兰仔兔MSO与BGC体外复合培养，观察细胞形态、细胞活性、碱性磷酸酶(Alkaline plaosphatase，ALP)活性及基质钙化情况。结果：实验组在培养7、14天后，BGC表面和孔隙内有成骨细胞生长；ALP阳性细胞数多于对照组；培养21天后，可看到钙化结节，对照组没有钙化结节产生。结论：体外培养的骨髓基质成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞；BC)C可用作组织工程骨的细胞外基质材料。     

成人骨髓基质细胞培养

为研究成人骨髓基质细胞的体外培养及其成肌特性,将来自需取髂骨的９例患者的骨髓标本进行体外培养,传代细胞进行含１０＾－８ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１地塞米松的条件培养和不含地塞米松的非条件培养。倒置显微镜每日观察细胞生长情况,计数传代细胞中骨样细胞转化率,检测碱性磷酸酶含量。９例标本骨髓基质细胞培养均获得成功,条件培养后有较高的成骨细胞转化率碱性磷酸酶活性。结果表明,成人骨髓基质细胞条件培养后,可做为临床所需     

羊胎素对体外骨髓基质细胞的增殖和向成骨细胞分化的影响

目的探讨羊胎素对体外培养的SD大鼠骨髓基质细胞(Marrow Stroma Cells,MSCs)的影响。方法用MTT法检测MSCs的增殖;PNPP偶氮法检测MSCs碱性磷酸酶(ALP)的活性;细胞ALP染色观察成骨细胞的形成。结果在含羊胎素原液的0.625%,1.25%,2.5%和5%时对体外培养的SD大鼠MSCs有明显的促进增殖的作用(P<0.01);在含羊胎素原液的2.5%及5% 成骨诱导剂时,ALP的活性明显高于诱导剂对照组(P<0.05),而在含羊胎素原液的2.5%和5%浓度组,ALP的活性明显高于空白对照组及诱导剂对照组(P<0.001);细胞ALP染色呈强阳性,加药组颜色明显深于对照组和诱导剂对照组。结论羊胎素对体外培养的SD大鼠MSCs的增殖和向成骨细胞分化具有明显的促进作用。     

兔BMSCs体外培养及诱导为成骨细胞的研究

骨髓间充质干细胞的特性表现为较强的增殖能力和向多种间充质细胞分化的潜能。成骨细胞是骨组织形成过程中的一种重要细胞,在骨缺损的修复过程中起关键作用,特别对构建用于修复骨缺损的组织工程化骨组织来说尤其重要,但成骨分化的调控机制和应用值得进一步研究。     

骨髓基质干细胞向成骨细胞诱导的研究进展

1概述 骨髓基质干细胞（BMSCs）,是骨髓基质中可在特定条件下分化为多胚层起源组织的非造血干细胞。大量实验证明BMSCs具有多向分化潜能,研究表明骨髓基质干细胞向成骨细胞的转化首先是转化为骨祖细胞,后最终分化为成骨细胞和骨细胞,即使在体外脱离诱导物培养条件下也能成骨。     

小鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及鉴定

目的：建立成年小鼠骨髓间充质干细胞（MSC）的分离和培养方法，并对其表面标志进行鉴定，为其应用提供实验依据。方法：应用体外细胞培养技术将小鼠MSC自股骨、胫骨中分离、纯化和培养，倒置显微镜观察其生长过程，流式细胞仪检测MSC表面抗体的表达。结果：使用全骨髓贴壁分离方法分离、扩增的MSC贴壁后形态较均一，生长良好，细胞表达CD29，CD44，但CD34和CD45表达阴性。结论：可以用全骨髓贴壁法从小鼠骨髓分离培养出MSC，在体外进行有效扩增，为以小鼠为模型研究MSC在组织工程、细胞移植、基因治疗等领域的运用提供实验基础。     

成年兔骨髓基质细胞之软骨细胞表型的诱导及体外长期培养时表型的维持

目的 探讨体外诱导成年兔骨髓基质细胞(MSCs)表达并长期保持软骨细胞表型的方法.方法 原代骨髓基质细胞传代后,以含rhTGF-β1、地塞米松、维生素C等的成软骨培养液诱导培养,以倒置相差显微镜观察细胞形态变化,通过甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化检测诱导的MSCs的软骨细胞表型.诱导的MSCs在体外长期持续或间断以含1ng/ml rhTGF-β1诱导液培养,以单纯DMEM培养为对照,观察细胞传5代后的表型变化.结果 原代培养的MSCs传代后,在成软骨诱导培养后,细胞逐渐由梭形变为多边形,诱导7d后即可表达Ⅱ型胶原,甲苯胺蓝染色阳性.具软骨细胞表型诱导后的MSCs在间断或持续以低浓度rhTGF-β1诱导下长期培养,仍可保持其软骨细胞表型,对照组则表现为成纤维样细胞.结论 成年兔骨髓基质细胞可在体外培养条件现下诱导成软骨细胞,低浓度的TGF-β1可维持诱导的骨髓基质细胞合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原.     

壮骨颗粒含药血清对兔骨髓基质干细胞体外增殖及分化影响

目的:研究壮骨颗粒含药血清对骨髓基质干细胞体外成骨活性的影响。方法:采用体外细胞培养技术,用壮骨颗粒对细胞进行体外诱导培养建立实验组,并设置空白血清对照组,进行MTT、免疫组织化学染色及ALP测定,观察壮骨颗粒对骨髓基质细胞的诱导作用。结果:在促细胞增殖方面,实验组作用最显著(P<0.01),在第3天开始增殖,第6天达到平台期,而对照组对数增殖期明显延长(P<0.01);在促细胞分化方面,常规形态学观察,壮骨颗粒组诱导的细胞在形态上类似于成骨细胞,免疫组化染色提示诱导细胞具有骨细胞表型。结论:壮骨颗粒可促进细胞增殖,并诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化。     

红曲提取物对体外培养成骨细胞的作用研究

目的：研究红曲不同提取物对体外培养大鼠成骨细胞（ROB）增殖、分化的影响。方法：采用新生大鼠颅骨分离培养ROB,MTT法测定细胞增殖,碱性磷酸酶（ALP）试剂盒法测定ALP活性,观察红曲提取物对ROB增殖、分化的作用,同时考察了MTT法和ALP试剂盒法中细胞数和吸收值之间的线性关系。结果：10^-2和10^-3mg/ml的水提物能刺激ROB的增殖（P〈0.05）,10^-3mg/ml的水提物还能提高ROB的ALP活性（P〈0.05）;10^-2和10^-3mg/ml的95%乙醇提取物对ROB的增殖与分化均有明显的促进作用（P〈0.05或P〈0.01）。结论：红曲水提物和95%乙醇提取物均能促进ROB骨形成过程中增殖、分化,95%乙醇提取物作用效果显著。     

右归饮含药血清对人骨髓基质干细胞诱导为成骨细胞的影响

目的：观察右归饮对体外人骨髓分化成骨细胞的影响。方法：将右归饮含药血清加入人骨髓基质干细胞诱导分化成骨细胞的培养体系,采用细胞形态学观察、MTT法及细胞内ALP含量检测反映其促进成骨的功能。结果：形态学观察及椰法表明,右归饮对成骨细胞的增殖起促进作用,钙结节染色及细胞内ALP含量测定表明右归饮对成骨细胞的活性有促进作用（P〈0．05）。结论：右归饮对人骨髓基质干细胞诱导分化的成骨细胞的成骨起促进作用。     

骨康方含药血清诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化的实验研究

目的:观察骨康方含药血清促进骨髓基质细胞(Marrow Stromal Cells,MSCs)体外向成骨细胞增殖、分化的作用。方法:采用不同浓度的骨康方含药血清联合诱导剂对大鼠MSCs定向诱导分化,观察MSCs诱导前后形态学变化;采用ELISA法检测MSCs骨钙素(Osteocalcin,OC);RT-PCR方法检测MSCsOCN mRNA和Cbfα1mRNA表达。结果:联合使用高、中浓度骨康方加诱导剂能显著提高MSCs增殖和骨钙素的含量,且使Cbfα1 mRNA的表达升高。结论:骨康方具有促进大鼠体外MSCs向成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高其Cbfα1 mRNA的表达有关。     

壮骨颗粒含药血清对兔骨髓基质干细胞体外增殖及分化的影响

研究壮骨颗粒含药血清对骨髓基质干细胞体外成骨活性的影响。方法:采用体外细胞培养技术,采用壮骨颗粒对细胞进行体外诱导培养,并设置空白血清对照组,进行MTT、免疫组织化学染色及ALP测定,观察壮骨颗粒对骨髓基质细胞的诱导作用。结果:在促细胞增殖方面:实验组作用显著(P<0.01),在第3d开始增殖,第6d达到平台期;而对照组对数增殖期明显延长(P<0.01);在促细胞分化方面:壮骨颗粒血清组在2d、3d、5dALP活性水平高于对照组(P<0.01)。常规形态学观察,壮骨颗粒组诱导的细胞在形态上类似于成骨细胞,免疫组化染色提示诱导细胞具有骨细胞表型。结论:壮骨颗粒组应用可促进细胞增殖,并诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化。     

四种中药对体外培养大鼠成骨细胞增殖分化功能的影响

目的:观察中药海螵蛸、骨碎补、三七、阿胶含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化功能的影响。方法:应用MTT法观察海螵蛸、骨碎补、三七、阿胶对体外培养成骨细胞增殖功能的影响,ELISA法观察海螵蛸、骨碎补、三七、阿胶对体外培养成骨细胞ALP含量的影响。结果:在成骨细胞的增殖方面,海螵蛸、三七含药血清对成骨细胞增殖有抑制作用,骨碎补、阿胶对成骨细胞增殖没有明显促进作用。在对成骨细胞内碱性磷酸酶(ALP)的作用方面,海螵蛸、骨碎补对体外培养大鼠成骨细胞内ALP的合成有抑制作用;三七没有明显作用;阿胶有明显的促进作用。结论:4种中药对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化功能的影响各不相同。海螵蛸对体外培养大鼠成骨细胞的增殖、分化功能有抑制作用;骨碎补对体外培养大鼠成骨细胞的增殖无明显作用,对其分化功能有抑制作用;三七对体外培养大鼠成骨细胞的增殖有抑制作用,对其分化功能作用不明显;阿胶对体外培养大鼠成骨细胞的增殖无促进作用,但能促进体外培养大鼠成骨细胞的分化功能。     

大暑骨髓间质干细胞的分离培养与中药诱导分化的研究

目的：研究掌握骨髓基质干细胞（MSCs）的分离培养和诱导：．口＼化的方法；方法：是将大鼠骨髓基质干细胞自股骨中分离，利用骨髓基质干细胞具有贴壁生长的培养特点，应用贴壁筛选法…进行分离培养和传代，并应用中药进行诱导分化；结论：该方法是简便安全有效的骨髓基质干细胞的分离、培养和诱导方法     

补肾方剂对成骨细胞体外培养干预的研究进展

<正>通过补肾中药对成骨细胞培养的干预,观察成骨细胞的生物学特征及检测相关的酶类的改变来评价中药或复方对成骨细胞的影响,进而为中药新药的开发有效方剂的筛选提供实验依据,已成为目前研究骨代谢基础与临床重要的中西医结合科研方法和手段。现将补肾方剂对成骨细胞体外培养的相关性研究做一综述。1补肾方剂对成骨细胞体外培养干预的研究现状通过补肾方剂对成骨细胞的干预培养,可从细胞分子生     

三七总甙对骨髓间质干细胞体外成骨潜能的影响

目的:种子细胞的来源是骨组织工程中的研究热点,探讨含三七总甙的条件培养基对骨髓间质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)体外成骨潜能的影响,为优化骨组织工程的种子细胞提供实验依据。方法:采用含三七总甙的条件培养基(A组)与常规条件培养基(B组)两种方法将兔骨髓间质干细胞进行体外培养后,对各组细胞进行形态学观察、组织学检测以及采用ALP与BGP检测试剂盒进行定量分析,以判断两种培养基对骨髓间质干细胞体外成骨能力的影响。结果:A组B组碱性磷酸酶(ALP)分泌量(U/L)分别为9.31±0.59,6.13±0.57;骨钙素(BGP)分泌量(μg/L)分别为27.13±1.51,16.62±1.69。结论:体外条件培养的MSCs具有一定的成骨能力,使用含有三七总甙的条件培养基可以大大提高其成骨能力。     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定

目的:探索体外分离培养及纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stromal cells,MSCs)的方法.方法:采用贴壁分离和消化控制相结合的方法,分离纯化3～4周龄大鼠MSCs,免疫细胞化学法鉴定其活性和表型.结果:原代培养的MSCs呈圆形、梭形、多角形等,24 h内即可见少量细胞体贴壁伸展,7～8 d左右可达90%融合,纯化后的MSCs呈均匀一致的长梭形,24h内细胞贴壁率99%,传代周期为7d左右.免疫细胞化学检测显示CD34表达阴性,CD44表达阳性.结论:贴壁分离和消化控制相结合能有效分离纯化成年大鼠MSCs,细胞纯度较高,细胞活力强,生物学性状稳定,是目前一种比较理想的分离纯化方法.     

骨髓基质干细胞研究进展

骨髓基质干细胞(BMSCs)又称为骨髓间充质干细胞(MSCs),已广泛应用于脑和脊髓损伤、骨损伤、软骨缺损与损伤、心肌细胞损伤等的修复、基因治疗和临床治疗的研究。文中从BMSCs的发现及应用研究现状、BMSCs的制备、培养及生物学特征、BMSCs向神经细胞分化的研究进展等方面对BMSCs的国内外研究进展进行综述。     

大鼠骨髓间质干细胞的分离培养与中药诱导分化的研究

目的：研究掌握骨髓基质干细胞（MSCs）的分离培养和诱导分化的方法；方法：是将大鼠骨髓基质干细胞自股骨中分离，利用骨髓基质干细胞具有贴壁生长的培养特点，应用贴壁筛选法进行分离培养和传代，并应用中药进行诱导分化；结论：该方法是简便安全有效的骨髓基质干细胞的分离、培养和诱导方法.     

兔骨髓间充质干细胞体外培养及生物学特性研究

目的:进一步研究兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分离和培养方法及其生物学特性,为利用MSCs作为种子细胞治疗多种疾病提供实验基础。方法:通过密度梯度离心、贴壁筛选法分离培养兔MSCs。测定其接种贴壁率,在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化,利用甲基噻唑基四唑(methyl thiazdyl tetrazolium,MTT)法测定MSCs生长曲线,并应用流式细胞术测定细胞表面标记物。结果:MSCs接种12h后贴壁率为95%以上,细胞倍增时间约为30.8h,平均传代时间约5～7d;培养的MSCs阳性表达CD29、CD44、CD105,阴性表达CD34。结论:在适宜的实验条件下,体外培养的MSCs能够稳定生存增殖并保持多向分化潜能,可作为组织工程的种子细胞。