电场对人视网膜色素上皮细胞移行的影响

目的 观察外源性直流电场对人视网膜色素上皮（hRPE）细胞移行行为的影响，揭示电场在RPE细胞损伤修复中的生理作用及临床意义。 方法 培养的hRPE细胞依培养液成分不同分为改良Eagle培养液(DMEM)组、DMEM+10%新生小牛血清(FBS)组,两组中未暴露于电场的细胞设为对照。将细胞分别暴露于强度为0、4、6 、8 V/cm的电场中，显微摄像系统连续记录2 h中每隔15 min细胞移行的变化图像，测量细胞移行距离及细胞移行方向与场线间夹角。图像分析系统处理结果。 结果 DMEM组中细胞对电场的反应较弱，电压加至6 V/cm时可观察到细胞向阴极方向的移动趋势(不同电场强度中2 h里所有单个细胞总体的位移方向指标之间，即平均cosine Ф相比,P＜0.05）。DMEM+10%FBS组中电场对细胞的作用加强，4 V/cm时细胞出现长轴垂直于场线的排列方式，并向电场阴极运动，该现象随电场强度的增加而更为明显（不同电场强度之间及不同培养液之间平均cosine Ф相比，P＜0.05）。当电极方向转换后，细胞的定向移行方向随阴极方向而改变。 结论 外加电场可诱导hRPE细胞的电场阴极方向的定向移行,此作用受血清影响并与电场强度成正相关。在视网膜损伤后的早期修复过程中，内源性的电场可能是诱导hRPE细胞移行的始动因素之一。 （中华眼底病杂志，2006，22：404-407）     

电场对人视网膜色素上皮细胞生物学活性的影响

目的:观察电场作用对培养人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelial,hRPE)细胞活力及分裂过程的影响。方法:hRPE细胞置于强度为8V/cm的直流电场中暴露3h,停止电场作用后继续培养12h;未受电场作用的hRPE细胞作为对照组。显微摄像系统记录各时间点细胞图像,观察细胞形态变化;细胞行台盼蓝拒染活细胞计数及核仁嗜银蛋白(AgNORs)染色,图像分析染色结果;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:暴露于电场中的hRPE细胞伸长,垂直于场线方向排列,停止暴露后细胞恢复正常形态及分布;各时间点实验组与对照组细胞的台盼蓝拒染率差异无统计学意义(P>0.05);电场暴露前、暴露3h及停止暴露并继续培养12h后hRPE细胞核内AgNORs颗粒数分别为:6.2,6.5,7.3,与正常对照组细胞比较均无显著差异(P>0.05);流式细胞仪检测结果显示各组均未见明显细胞凋亡。结论:短时间电场作用对hRPE细胞的正常细胞活力及分裂无明显影响,提示该条件下的电场作用可能应用于促进RPE细胞修复的研究。     

外加直流电场对人晶状体上皮细胞移行和增殖活力的影响

目的:观察外加直流电场对人晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)移行和增殖活力的影响.方法:将培养的人晶状体上皮细胞系HLE-B3细胞暴露于电场强度为100、200、400 mV/mm的直流电场中,未受电场暴露的细胞作为正常对照组.倒置显微镜观察并记录电场暴露前及暴露后的细胞图像,并计数细胞数目;流式细胞仪检测电场暴露前及暴露24 h后的细胞凋亡率和细胞周期.结果:强度为400 mV/mm的电场暴露3 h后,HLE-B3细胞呈现朝向电场阴极一侧的定向移行.电场持续暴露后,HLE-B3细胞数逐渐减少,在电场作用6h和12h时分别较正常对照组减少12.6%和18.6%,差异均具有统计学意义(P<0.05).100、200、400 mV/mm电场暴露24 h后,HLE-B3细胞凋亡率分别为(9.2±1.9)%、(23.9±2.6)%、(54±2.5)%,与正常对照组相比明显增加(P<0.05);细胞周期检测结果显示,HLE-B3细胞进入G2/M期的比例随电场强度增加逐渐上升,其中200 mV/mm和400mV/mm电场中G2/M期细胞比例分别为(13.8±2.2)%和(15.6±2.5)%,与正常对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05).结论:外加直流电场可诱导HLE-B3细胞的定向移行,随电场作用时间的延长和电场强度增加,细胞生长受到抑制,同时伴随细胞凋亡增加和细胞周期G2/M期阻滞.     

维拉帕米诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡及细胞内钙变化

目的:探讨钙通道拮抗剂—维拉帕米(verapamil,Ver)对体外培养的人视网膜色素上皮(humanretinalpigmentepithelium,hRPE)细胞凋亡诱导作用及凋亡过程中细胞内钙浓度[Ca2 ]i的变化。方法:应用80mg/L的Ver作用体外培养hRPE细胞12,24及48h,采用吖叮橙(AO)荧光染色法、透射电镜、流式细胞术观察hRPE细胞凋亡;Fluo-3/AM负载技术,观察凋亡过程中细胞[Ca2 ]i的变化。结果:一定浓度Ver可诱导hRPE细胞凋亡,荧光显微镜及电镜观察hRPE细胞具有早期凋亡特征:核荧光呈黄绿色,电镜下核染色质浓染、边集。流式细胞术显示,Ver作用后的hRPE细胞凋亡百分率增加(F=12.3415,P<0.05)。Ver作用的hRPE细胞内钙浓度([Ca2 ]i)呈下降趋势(F=23.607,P<0.01)。结论Ver能诱导体外培养的hRPE细胞凋亡,细胞内[Ca2 ]i浓度的变化可能是诱导hRPE凋亡的机制之一。     

电场对人视网膜色素上皮细胞增生的影响

目的观察一定条件下电场对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epitheli-um,hRPE)细胞增生的影响及相关机制。方法hRPE细胞置于电场强度为6V.cm-1的电场中连续作用12h。观察未受电场作用的正常对照组及电场作用12h的实验组细胞,显微摄像系统记录不同时间点细胞图像并计数细胞数,检测细胞密度和细胞的生长速度,观测指标包括:细胞密度,以每平方厘米细胞数表示;细胞生长速度,计算公式为:(Ni-N0)/N0×100%(Ni为12h细胞数;N0为0h细胞数);采用流式细胞仪测定细胞周期,计算细胞增生指数:(NS+NG2/M)/N(NS为S期细胞数;NG2/M为G2/M期细胞数;N为细胞总数);Western blotting检测细胞cyclinE蛋白的表达。结果对照组hRPE细胞在12h的观察期间内细胞密度缓慢上升,到12h时细胞密度由95×103cm-2增至130×103cm-2;而实验组在6V.cm-1电场作用下hRPE细胞数量逐渐上升,12h后细胞密度上升至150×103cm-2。实验组hRPE细胞生长速度为50.02%,较对照组(36.84%)明显升高(P<0.05);...     

结合磁珠hRPE细胞受附加磁场作用后MCP-1和IL-8的表达

目的:观察磁场对结合磁珠培养的人视网膜色素上皮细胞(hRPE)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白细胞介素-8(IL-8)的表达,以模拟在原发性视网膜脱离形成早期,hRPE受到机械牵拉力后的一些细胞因子分泌的改变。方法:将培养的hRPE与黏附有胶原包被磁珠的培养hRPE分别置于一个附加磁场下,分别暴露一定时间后,用反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定hRPE,黏附包被胶原磁珠的hRPE,及其在细胞松弛素D处理后,各时间点MCP-1和IL-8的表达。结果:只受磁场作用,未结合磁珠的hRPE表达的MCP-1及IL-8mRNA水平较低,不随暴露于磁场时间的延长而增加;在磁场作用下,结合磁珠的hRPE表达MCP-1及IL-8的有两个峰值,一是在暴露后0.5h内开始升高,分别达到3.30±0.12和1.88±0.08(P=0.009),另一是在4h左右时再次升高。细胞松弛素D预处理后,两种因子的表达均下降,分别为2.36±0.27和1.64±0.08。结论:hRPE细胞结合磁珠模拟的机械牵拉模型,可诱导细胞表达MCP-1和IL-8增加。这种作用可能是细胞骨架被部分破坏,短时间地抑制了细胞表达。我们的结果提示这两种炎性细胞趋化因子可能参与了视网膜脱离起始阶段的炎症反应过程。     

剪切力对视网膜色素上皮细胞syndecan-1,血管细胞黏附分子-1,E-选择素蛋白表达和肌动蛋白的影响

目的:研究剪切力对视网膜色素上皮(RPE)细胞synde-can-1,血管细胞黏附分子(VCAM)-1和E-选择素(se-lectin)表达和细胞骨架的影响。方法:体外培养人RPE细胞,应用2dyns/cm2大小的剪切力干预0,0.25,0.5,0.75,1,1.5,3h后,用免疫荧光染色法观察RPE细胞syndecan-1,VCAM-1和E-selectin表达和肌动蛋白的变化。结果:静态下的RPE细胞呈多角形和不规则形。2dyns/cm2剪切力作用0.75h后,细胞间隙加大,部分细胞形状变圆、变小;作用后1.5h,细胞极性改至与剪切力作用方向一致。静态条件下,肌动蛋白呈黄绿色丝状分布于中央细胞内,排列松散不规则且微丝较细;剪切力作用3h后,肌动蛋白增多增粗,且沿切力方向排列于中央和远周边细胞。剪切力作用后,RPE细胞syndecan-1的表达在0.5h时最弱,1h时最强;VCAM-1的表达在0.5h时最弱,1.5h时最强;E-selectin的表达在0.75h时最低,3h时最高。结论:剪切力可引起RPE细胞syndecan-1,VCAM-1和E-selectin及细胞骨架蛋白发生变化,它们之间的相互协作对RPE细胞的形态、黏附和力学信号转导起重要作用。     

基质金属蛋白酶在体外视网膜色素上皮细胞损伤模型中的表达

目的:建立体外RPE细胞损伤模型,观察损伤诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞移行以及MMP-2和MMP-9的表达。方法:在近铺满期视网膜色素上皮(retinal pigment epitheli-um,RPE)细胞培养板上,采用角膜移植用的环钻和棉签法做圆形细胞刮伤区,SABC免疫组织化学方法检测RPE细胞受创后48hMMP-2和MMP-9的表达;并应用此损伤模型,计数进入缺损区的细胞数,观察地塞米松(Dex)对RPE细胞移行和对MMP-2及MMP-9表达的影响。结果:RPE细胞受创后损伤边缘的RPE细胞逐渐向缺损区移行;免疫组化结果显示,损伤后48h损伤边缘移行的RPE细胞呈MMP-2的阳性表达,MMP-9呈强阳性表达。Dex处理组中损伤诱导的RPE细胞移行明显减少,MMP-2和MMP-9的表达也明显减弱。结论:MMPs在RPE细胞移行修复中有重要意义,Dex可以通过抑制MMP-2和MMP-9的表达而减少RPE细胞移行。     

siRNA抑制缺氧人视网膜色素上皮细胞ILK的表达及对HIF-1α的影响

目的:探讨干扰RNA(siRNA)沉默缺氧培养下人的视网膜色素上皮细胞(hRPE)中整合素连接激酶(ILK)的表达及其对缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法:CoCl2建立hRPE细胞的化学缺氧模型,Western blot和RT-PCR方法半定量检测不同缺氧时间(0,6,12,24,48h)hRPE细胞中ILK、HIF-1α蛋白及其mRNA的表达;阳离子脂质体转染ILK的干扰片段抑制缺氧24h hRPE细胞中ILK的表达,同上方法检测转染后缺氧24h hRPE细胞中ILK的表达及其对HIF-1α表达的影响。结果:ILK表达于正常及缺氧培养的hRPE细胞中。随着hRPE细胞缺氧时间的延长,在蛋白和mRNA水平ILK、HIF-1α都呈现逐渐增加的表达趋势。siRNA抑制ILK在缺氧24h hRPE细胞中的表达,同时显著抑制了HIF-1α的表达,较阴性对照组、单纯脂质体组有显著差异(P<0.01)。结论:ILK可以通过HIF途径应答RPE细胞的缺氧反应。     

培养人视网膜色素上皮细胞在PVR患者视网膜下液作用下c-fos和c-jun的表达

目的 观察培养的人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium，hRPE)在不同程度增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)患者视网膜下液(subretinal fluid，SRF)作用下细胞增生与c—fos和c—jun的表达。方法 不同程度PVR患者SRF作用于培养的hRPE细胞后利用细胞计数和MTT比色实验观察SRF对培养hRPE细胞的作用，同时采用SP法在不同时间点作兔抗人c—fos多抗和兔抗人c—jun多抗的免疫组织化学染色。结果 PVR患者SRF作用组与对照组相比可明显促进培养hRPE细胞的增殖，同时实验组hRPE细胞c—fos和c—jun均表达增高，视网膜下液作用lh后，Fos蛋白抗体染色阳性，细胞核呈明显棕黄色染色；3h表达达高峰，持续约12h；视网膜下液作用lh后，Jun蛋白抗体染色阳性，细胞核呈明显棕黄色染色；6h表达达高峰，持续约48h，对照组hRPE细胞(未经SRF作用仅加入等量PBS)Fos蛋白抗体和Jun蛋白抗体染色均为阴性。结论 PVR患者SRF中含有能诱导c—fos和c—jun等“立早基因”转录的细胞外生长或分化因子；c—fos和c—jun的表达是SRF促进RPE细胞的增殖过程中一个非常重要的早期分子事件。     

Strabisme Alternant - Etude clinique - traitement

The author defines motor and sensory alternation: the term alternation should not be used in isolation, it should always be accompanied by the name of the parameter concerned. Sensory alternation is always found together with motor alternation but the reverse is not true.The examining criteria for a diagnosis of sensory alternation are given, sensory alternation must not be confused with alternating inhibition. Working from clinical observations of cases of motor alternating strabismus, the author selects 2 types of binocular sensory relations which allow one to differentiate between:- cases of primary alternating strabismus- cases of secondary alternating strabismusThese forms will develop in different ways; in both cases a cure is possible providing that the right treatment is prescribed and once prescribed carefully followed, etc. It is always a case of serious forms of strabismus whose developmental period is spread over several years.According to the authors, the frequency of cases of true primary strabismus is from 1–3%, the frequency of cases of secondary alternating strabismus varies according to the type of therapy practised on cases of monocular strabismus with amblyopia. These latter will become cases of alternating strabismus under the influence of certain types of therapy carried out over several years (penalization, rocking, alternated occlusion, etc...).Experimental data on kittens confirm clinical data; kittens placed in abnormal environments during the sensitive period will show modification in the distribution of cortical cells and the absence of binocular cells (either because the excitation of the two eyes was not simultaneous, or not identical: artificial strabismus, occlusion, opaque glasses). This disturbances become irreversible after a certain period of exposure (a function of age, length of exposure, etc...).It is thus necessary to bear in mind: 1) the iatrogenic risks of certain orthoptic treatments, 2) the necessity for a binocular form of treatment as soon as possible, as once a certain stage is passed, cortical plasticity diminishes and the elaboration of normal binocular relations becomes impossible.

---

     

Effects of Adenosine Agonists on Intraocular Pressure and Aqueous Humor Dynamics in Cynomolgus Monkeys

The effects of single or multiple topical doses of the relatively selective A₁adenosine receptor agonists (R)-phenylisopropyladenosine (R-PIA) and N⁶-cyclohexyladenosine (CHA) on intraocular pressure (IOP), aqueous humor flow (AHF) and outflow facility were investigated in ocular normotensive cynomolgus monkeys. IOP and AHF were determined, under ketamine anesthesia, by Goldmann applanation tonometry and fluorophotometry, respectively. Total outflow facility was determined by anterior chamber perfusion under pentobarbital anesthesia. A single unilateral topical application of R-PIA (20–250 μg) or CHA (20–500 μg) produced ocular hypertension (maximum rise=4.9 or 3.5 mmHg) within 30 min, followed by ocular hypotension (maximum fall=2.1 or 3.6 mmHg) from 2–6 hr. The relatively selective adenosine A₂antagonist 3,7-dimethyl-1-propargylxanthine (DMPX, 320 μg) inhibited the early hypertension, without influencing the hypotension. Neither 100 μg R-PIA nor 500 μg CHA clearly altered AHF. Total outflow facility was increased by 71% 3 hr after 100 μg R-PIA. In conclusion, the early ocular hypertension produced by topical adenosine agonists in cynomolgus monkeys is associated with the activation of adenosine A₂receptors, while the subsequent hypotension appears to be mediated by adenosine A₁receptors and results primarily from increased outflow facility.