胎羊体外循环中雌孕激素的变化

目的：观察胎羊体外循环中妊娠激素的变化。方法：10只怀孕山羊随机分为对照组（n=4)和胎羊体外循环组（CPB组，n=6)。对照组仅暴露胎羊心脏，不建立胎羊体外循环；CPB组建立胎羊常温体外循环，转流1h，监测母羊和胎羊的心率，血压及血气值，运用放免技术检测转流前和转流1h母羊血雌二醇，孕酮含量，结果：实验中两组母羊心率，血压及血气值稳定，转流1h,CPB组母羊血雌二醇含量增加，孕酮含量下降，与对照组比较有显著性变化（P＜0．05），停止体外循环，CPB组胎羊出现低氧，高碳酸血症和酸中毒，血压下降，心率减慢（P＜0．05），对照组胎羊心率，血压及血气值无明显变化。结论：胎羊体外循环影响妊娠激素水平，可能对胎羊存活不利。     

胎羊体外循环中雌孕激素的变化

目的观察胎羊体外循环中妊娠激素的变化. 方法 10只怀孕山羊随机分为对照组(n=4)和胎羊体外循环组(CPB组,n=6).对照组仅暴露胎羊心脏,不建立胎羊体外循环;CPB组建立胎羊常温体外循环,转流1h.监测母羊和胎羊的心率、血压及血气值,运用放免技术检测转流前和转流1h母羊血雌二醇、孕酮含量.结果实验中两组母羊心率、血压及血气值稳定,转流1h CPB组母羊血雌二醇含量增加,孕酮含量下降,与对照组比较有显著性变化(P＜0.05).停止体外循环,CPB组胎羊出现低氧、高碳酸血症和酸中毒,血压下降,心率减慢(P＜0.05).对照组胎羊心率、血压及血气值无明显变化. 结论胎羊体外循环影响妊娠激素水平,可能对胎羊存活不利.     

胎羊体外循环中的应激反应

目的 研究胎羊体外循环中胎羊的应激反应。方法 6头孕羊运用人工氧合器和滚轴泵建立胎羊体外循环模型，转流30min，转流中胎羊血气值维持在生理水平。监测胎羊血压、心率、血气和乳酸值，测定转流前和转流30min胎羊儿茶酚胺、皮质醇和胰岛素水平；连续监测胎羊血糖和游离脂肪酸的变化；胎羊肝脏组织PAS染色。结果 转流中胎羊血压、心率、血气值与转流前无差别，但出现代谢性酸中毒；胎羊儿茶酚胺和皮质醇含量明显增高（P＜0．01），胰岛素含量无明显变化；血糖和游离脂肪酸在转流初期升高（P＜0．05），随着转流时间延长，血糖和游离脂肪酸含量下降，与转流前无差别；胎羊肝脏PAS染色显示肝脏糖原大量消耗。转流30min停循环，胎羊存活时间不超过1h。结论 胎羊体外循环中的应激反应对胎羊宫内存活不利。     

两种胎羊体外循环方式对胎盘功能影响的比较

目的比较两种胎羊体外循环方式对胎盘气体交换功能的影响。方法10头胎羊(妊娠120~140 d)随机分为胎盘组(n=5)和人工肺组(n=5)。胎盘组运用离心泵和胎盘建立体外循环;人工肺组运用离心泵和人工膜肺建立体外循环,转流中旷置胎盘。两组胎羊体外转流30 min。分别于转流前(T0),转流30 min(T1)、转流后1 h(T2)、转流后2 h(T3)记录胎羊平均动脉压、心率和血气值。结果实验过程中两组胎羊平均动脉压和心率之间的差异没有统计学意义。T1和T2期两组胎羊氧分压、二氧化碳分压以及氧饱和度均在生理范围内。T3期两组胎羊pH值、氧分压和氧饱和度下降、二氧化碳分压增高,与T0期差异有显著性(P<0.05),两组之间总体差异无显著性。两组胎羊碱剩余结果显示进行性偏酸,人工肺组在T2,T3期较胎盘组更加偏酸,两组之间总体差异无有显著性(P<0.05)。结论胎羊体外循环过程中胎盘作为氧合器,胎盘功能良好,但是体外循环对胎盘长期功能存在影响。旷置胎盘、使用人工氧合器并不能减轻体外循环对胎盘功能的影响。     

膜式氧合器在胎羊体外循环中的应用

目的 :研究膜式氧合器在胎羊体外循环中的应用。方法 :健康怀孕山羊 8头 ,用 dide-co90 1膜式氧合器和滚轴泵建立胎羊体外循环 ,常温 (37℃转流 6 0分钟 ,氧合器内充低氧 (8% O2 )混合气体。监测胎羊的血压、心率、血气、乳酸和胎盘血管阻力。结果 :转流过程中胎盘血管阻力显著增高 ,P<0 .0 1。胎羊 PO2 和 PCO2 维持在宫内生理水平 ,胎羊心跳有力 ,血压正常。但是胎羊 p H值缓慢下降。乳酸值明显增高 ,P<0 .0 1。停体外循环后胎羊出现高碳酸血症和酸中毒 ,氧分压下降。结论 :胎羊体外循环中膜式氧合器可以替代胎盘气体交换功能 ,但胎羊组织耗氧和供氧之间的平衡关系还需进一步研究     

胎羊体外循环中的麻醉管理

目的总结胎羊体外循环研究中的麻醉方法。方法5头孕羊（孕120～140d）氯胺酮基础麻醉,芬太尼和维库溴铵维持麻醉。气管插管,机械通气,补充容量和硫酸镁。维持孕羊平均动脉压（MAP）大于70mmHg。经子宫壁肌肉注射胎羊麻醉药物（芬太尼25～50μg/kg,维库溴铵0.1～0.2mg/kg）,建立胎羊腋动脉通路。胎羊肺动脉、右房分别插管,建立体外循环,转流30min,停机后观察2h。监测孕羊、胎羊MAP、心率（HR）和动脉血气。B超机监测胎羊脐动脉和孕羊子宫动脉的搏动指数（PI）。结果实验过程中胎羊MAP和HR没有显著变化。转流结束后胎羊脐动脉PI值明显增高,出现高碳酸血症和酸中毒（P〈0.05）。孕羊MAP和HR没有明显变化,血液氧合充分。子宫动脉PI值在转流期间低于转流前（P〈0.05）,转流结束后PI值与转流前没有显著差异。结论维持母体高循环动力状态,使用抑制宫缩药物,加强胎羊麻醉期间的监护,有利于胎羊体外循环的研究。     

体外循环中温度对小儿神经系统的影响

目的本研究探讨常温体外循环和浅低温体外循环对小儿脑代谢的影响。方法室间隔缺损病例随机分为两组，分别在常温（35℃以上）和浅低温（32℃）下手术纠治。在ECC前、ECC结束和术后20h检测S100蛋白浓度。用近红外线光普法（MRS）测量脑组织氧合血红蛋白（HbO2）、脱氧血色蛋白（HbD）及氧化型细胞色素aa3（CytOx）。结果两组S100蛋白都在转流结束时明显升高，术后回落，两组比较无显著差异（P〉0．05）。转流前期可见浅低温组HbO2高于常温组，升温后浅低温组HbO2显著下降，低于常温组（P〈0．05）。浅低温组CytOx在整个转流过程中低于常温组（P〈0．05）。结论常温转流对于简单心脏病手术是安全的，不会造成神经系统明显损害。     

常温体外循环对脑组织一氧化氮及其合酶的影响

目的探讨常温体外循环对脑组织损害及与一氧化氮（NO）的关系。方法将16只羊随机分为低温组及常温组（每组8只）,建立体外循环,心脏采用常、低温含血停搏液灌注,低温组血流降温至脑温26℃,常温组保持体温37℃,于转流前、转流100min及主动脉开放45min取脑皮质、心肌组织检测NO,一氧化氮合酶（NOS）和MDA。结果常、低温含血停搏液灌注对心肌有良好的保护作用。常温组的脑组织NO,MDA均明显升高。结论常温体外循环不能有效保护脑组织,温度是关键因素,而NO的升高是主要原因。     

胎羊体外循环通过microRNAs导致胎心功能失调

目的本文重点研究胎羊体外循环影响心肌microRNAs的表达情况,探索microRNAs导致胎羊体外循环(CPB)后胎心功能失调的可能机制。方法孕120~140 d母羊6只,其中两只孕羊有双胎,共孕8只胎羊,随机分为对照组(n=4)和胎羊CPB组(n=4)。对照组胎羊开胸,不建立CPB。CPB组建立胎羊心脏转流模型,转流30 min。分别于转流前和转流30min结束后测胎羊心率和血肌钙蛋白I(TnI)的变化,B超检测左、右心室Tei指数。取胎羊心尖部心肌组织,采用microRNA芯片和荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测两组心肌组织的microRNAs的表达水平。使用生物信息学方法预测microR-NAs的靶基因,并进行蛋白印迹实验(WB)验证。结果两组胎羊心率变化无统计学差异(P0.05)。CPB组胎羊左、右心室Tei指数、血TnI含量均显著大于对照组(P0.05)。两组的microRNAs表达谱显著不同,有19个microRNAs显著差异性表达,其中11个microRNAs(miR-125b*,-151,-127,-144*,-141,-199b,-224,-301a,-30e*,-374a和-424*)在组织中被上调,而8个microRNAs(miR-99a,-151*,-21,-223,-320,-129,let-7a和-7e)被下调。肌浆内质网Ca2+转运蛋白2(SERCA2)是miR-151的靶基因,并在CPB组的心肌组织中被明显下调。结论 MicroRNAs的差异性表达与胎羊体外循环后胎心功能失调密切相关,可能是通过miR-151/SERCA2通路来实现。     

常温和低温体外循环对甲状腺功能影响的试验研究

目的 观察犬低温和常温体外循环（CPB）中FT3，FT4，TSH的变化。方法 11只健康杂种犬随机分为低温组（H组，n=5，咽低温28℃）和常温组（N组，n=6，咽低温〉35．3℃），分别于体外循环前、体外循环30min、体外循环90min、体外循环停机后60min抽取静脉血，用放射免疫法测定FT3，FT4，TSH浓度。结果 FT3：H组维持在CPB前水平，N组则呈明显下降趋势：CPB 30min，CPB 90min低于CPB前（P〈0．05），且在CPB后60min，N组明显低于H组（P〈0．01）相应时点数值。FT4：两组皆略上升，组内、组间比较差异无显著性。TSH：两组呈上升趋势。仅CPB 90min时N组高于CPB前（P〈0．05）。结论 家犬温氧合血持续灌注、常温体外循环比冷晶体液间断灌注、低温体外循环导致更明显的低凡综合征，而FT4，TSH无明显变化。     

人巨细胞病毒AD169株引起小鼠脑部畸形的初步探讨

目的：探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)感染昆明小鼠的敏感性，建立HCMV致畸的动物模型。方法：昆明系小鼠40只，随机分为两组：对照组(8只)和接种病毒组(32只)，病毒感染途径为脑内注射。在接种病毒7，15，30，60d后不同时期分别以病理学方法观察动物脑部发育特点，以免疫组织化学方法检查病毒抗原，PCR方法检测动物脑组织中HCMV基因。结果：接种HCMV AD169株的小鼠脑组织在不同时期发生了病理改变和脑部发育畸形，用免疫组织化学方法和PCR方法在脑组织细胞内检获HCMV抗原和基因。结论：HCMV ADl69株可引起小鼠脑部发育畸形，这对研究HCMV感染致畸的机制提供了有价值的参考依据。     

人巨细胞病毒AD169株引起小鼠脑部畸形的初步探讨

目的 :探讨人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus ,HCMV)感染昆明小鼠的敏感性 ,建立HCMV致畸的动物模型。方法 :昆明系小鼠 4 0只 ,随机分为两组 :对照组 (8只 )和接种病毒组 (32只 ) ,病毒感染途径为脑内注射。在接种病毒 7,1 5 ,30 ,6 0d后不同时期分别以病理学方法观察动物脑部发育特点 ,以免疫组织化学方法检查病毒抗原 ,PCR方法检测动物脑组织中HCMV基因。结果 :接种HCMVAD1 69株的小鼠脑组织在不同时期发生了病理改变和脑部发育畸形 ,用免疫组织化学方法和PCR方法在脑组织细胞内检获HCMV抗原和基因。结论 :HCMVAD1 69株可引起小鼠脑部发育畸形 ,这对研究HCMV感染致畸的机制提供了有价值的参考依据     

H CM V 兔胚肺细胞体外感染模型的建立

为探讨人巨细胞病毒（ＨｕｍａｎＣｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＨＣＭＷ）ＡＤ１６９毒株体外感染兔胚肺细胞（ＲａｂｂｉｔＥｍｂｒｙｏＬｕｎｇｃｅｌ,ＲＥＬ）的敏感性,建立ＨＣＭＶＡＤ１６９毒株感染模型,将ＨＣＭＶＡＤ１６９毒株定量接种于ＲＥＬ,观察细胞病理变化;用单克隆抗体－免疫组化方法检测细胞内ＨＣＭＶ抗原;电镜检测细胞内病毒颗粒,用ＥＬＩＳＡ方法检测经ＲＥＬ增殖病毒培养物ＨＣＭＶ抗原滴度,用人胚肺细胞（ＨｕｍａｎＥｍｂｒｙｏＬｕｎｇｃｅｌ,ＨＥＬ）滴定病毒毒力变化。结果表明,接种病毒后,ＲＥＬ于４８ｈ出现细胞肿胀,胞浆内出现折光性颗粒,逐渐变圆、脱落,其病变特征与该病毒在ＨＥＬ增殖出现的病变一致;用免疫组化法在胞浆及其核内查到ＨＣＭＶ抗原;用透射电镜观察,在细胞核内查到大量病毒颗粒;用ＥＬＩＳＡ方法在ＲＥＬ病毒培养物中查到ＨＣＭＶ抗原,抗原滴度与ＨＥＬ增殖的病毒一致;与ＨＥＬ增殖物比较,经ＲＥＬ增殖的病毒培养物毒力降低１００ＴＣＩＤ５０。表明ＲＥＬ是ＨＣＭＶＡＤ１６９毒株的敏感宿主细胞。     

HCMV感染动物胃肠组织损伤实验研究

目的 探讨HCMV感染是否引起大鼠和家兔胃肠组织损伤。方法 将人巨细胞病毒(Human Cyto—megalovirus，HCMV)AD168毒株静脉接种大鼠和新西兰兔，大鼠90d、兔30d后，检查动物胃、肠组织的病理变化，用免疫组化方法和原位杂交方法检查组织中的病毒抗原和DNA片段。结果 接种病毒之部分动物出现食量减少、粘液性大便，胃粘膜组织可见淋巴细胞浸润，肠粘膜变性坏死，甚至有穿孔灶；在粘膜细胞中查到病毒抗原或DNA片段。结论 HCMV感染可以侵犯动物胃肠组织并引起该组织病理损伤。     

生物素标记组合探针杂交检测患儿尿液以诊断巨细胞病毒感染

利用 HCMV AD 169株的克隆 DNA 片段制成生物素标记的组合探针进行临床标本的 HCMV DNA 的杂交检测,此探针特异性强,不与其它类 DNA 发生非特异性杂交,可检出25pg 同源 DNA,100～500个 HCMV 感染细胞或2.57LgTCID50 HCMV 病毒悬液.杂交法结果与病毒分离结果符合率极高.初步用于临床尿标本检测得出,先天畸型,乳儿肝炎及激素治疗三组患儿中,HCMV 的排毒率分别为100%(3/3),61%(11/18)和75%(3/4).提示 HCMV 可能是临床部分患儿的重要致病源.同时表明杂交法对 HCMV 感染的检测是快速、特异及敏感的.     

Rapid detection of human cytomegalovirus DNA in urine samples by polymerase chain reaction in vitro gene amplification

In the detection of human cytomegalovirus (HCMV) DNA in the urine by polymerase chain reaction (PCR). We have designed and synthesized two pairs of oligonucleotide primers (patent pending) corresponding to the specific and conserved DNA sequences of HCMV AD 169 strain. The sequences of the primers were checked that they did not have cross reaction with either normal human genomic DNA or with other herpesviruses. As less as 1fg of HCMV DNA (equal to the amount of DNA from four HCMV virions) in urine can be detected by the method A total of 47 urine specimens from infants suspected of HCMV infection was examined by PCR and conventional virus isolation simultaneously 31 samples were positive in both PCR and virus isolation; 12 samples were negative in either; 4 samples were positive in PCR but negative in virus isolation. So the samples were further examined by serology and the data showed that there was HCMV-specific IgM in all the virus isolation negative sera examined. The result suggests that HCMV in the above samples is possibly underdetected by virus isolation. Therefore the method described in the paper is a specific, sensitive, rapid conventional and non radioisotopic one for detection of HCMV in urine samples.     

Recombinant Human IgG antibodies against Human Cytomegalovirus

Objective To study the passive immunization with human monoclonal antibodies as for prophylaxis of human cytomegalovirus （HCMV） infection. Methods Fab monoclonal antibodies to HCMV were recovered by repertoire cloning of mRNA from a HCMV infected individual. Antigen binding specificity, CDR sequence of VH and VL and neutralizing activity on HCMV AD169 stain were analyzed in vitro. The light and heavy chain Fd fragment genes of Fab antibodies were further cloned into a recombinant baculovirus expression vector pAC-K-Fc to express intact IgG. Secreted products were purified with affinity chromatography using protein G. Results SDS-PAGE and Western blot confirmed the expression of the intact IgG. Immuno-blotting and -precipitation were used to identify HCMV proteins. One Fab monoclonal antibody recognized a conformational HCMV protein. Conclusion IgG antibodies can neutralize the HCMV AD169 strain efficiently at a titer of 2.5 μg/mL and may prove valuable for passive immunoprophylaxis against HCMV infection in humans.     

Effect of Human Cytomegalovirus Infection on Nerve Growth Factor Expression in Human Glioma U251 Cells

Objective To explore the change of endogenic nerve growth factor （NGF） expression in human glioma cells infected with human cytomegalovirus （HCMV）. Methods U251 cells were cultured in RPMI 1640 culture medium and infected with HCMV AD 169 strain in vitro to establish a cell model of viral infection. Morphologic changes of U251 cells were observed under inverted microscope before and after infection with HCMV. Expression of NGF gene and protein of cells was detected by RT-PCR and Western blotting before and after infection with HCMV. Results The cytopathic effects of HCMV-infected cells appeared on day 5 after infection. However, differential NGF expression was evident on day 7. NGF expression was decreased significantly in U251 cells on day 7 after infection in comparison with control group （P〈0.05）. Conclusion HCMV can down-regulate endogenous NGF levels in human glioma cell line U251.     

人巨细胞病毒对细胞周期调控靶点-p53的影响

目的:了解HCMV对细胞周期调控靶点p53的影响。方法:建立体外HCMV感染HEL模型，用倒置显微镜观察不同时间下各组HEL的病变效应和用S—P免组化法检测p53蛋白的表达并以FQ—PCR法检测HEL细胞内HCMVDNA拷贝数。结果:(1)HCMV感染使HEL细胞发生病变，细胞内HCMVDNA拷贝数随时间的延长逐渐增加。(2)S—P免疫组化结果提示HCMV感染使HEL细胞p53蛋白的水平升高。结论:HCMV的感染改变了细胞内p53的水平，可能影响其在细胞周期中的正常功能，营造可能有利于病毒复制的环境。