左归丸与右归丸对EAE大鼠淋巴细胞亚群和NK细胞的影响

目的:通过观察左归丸与右归丸对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型(EAE)的影响,了解两者作用机制的异同。方法:应用髓鞘碱性蛋白与完全福氏佐剂按体积比1 1制成抗原并于Lewis大鼠双后足垫下注射,建立EAE模型。通过流式细胞仪技术观察淋巴细胞亚群及NK细胞水平。结果:造模后第15天,左归丸组CD4+细胞显著升高(P<0.05);模型组CD4+/CD8+比值高于正常组(P=0.052)。造模后第27天,模型组CD4+/CD8+比值明显升高(P<0.05);左归丸组CD4+/CD8+比值明显降低(P<0.05);左归丸组和右归丸组NK细胞明显升高(P<0.05)。结论:EAE大鼠CD4+/CD8+比值升高,这在EAE发病中发挥重要作用。滋阴补肾法可上调急性期CD4+细胞水平,下调缓解期CD4+/CD8+比值来治疗EAE。左归丸与右归丸可下调急性期NK细胞水平,上调缓解期NK细胞水平治疗EAE。     

左归丸和右归丸对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠髓鞘及轴突再生的影响

目的研究左归丸和右归丸对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠神经髓鞘和轴突再生的影响.方法应用髓鞘碱性蛋白(MBP)与完全福氏佐剂(CFA)按11(体积比)制成抗原,给动物两后足皮下注射MBP抗原免疫,建立大鼠EAE模型.以醋酸泼尼松作对照,利用髓鞘染色及免疫组织化学染色观察各组大鼠造模后14,28 d大脑和脊髓髓鞘和轴突损伤及再生的变化.结果左归丸成右归丸干预后大鼠髓鞘脱失程度均较模型组明显减轻,MBP及神经丝蛋白(NF200)表达显著高于模型组(P＜0.05或0.01).结论左归丸和右归丸能够修复EAE大鼠神经髓鞘和轴突的损伤,可能是其促进神经康复的分子机制之一.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统不同部位病理变化比较

目的:探索实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统不同部位间的病理变化,为疾病机制探索及治疗研究提供实验取材依据。方法:采用PLP139-151和百日咳毒素诱导SJL小鼠建立EAE模型,至发病高峰期分别取小鼠的大脑、小脑、脑干、颈髓、胸髓、腰髓进行HE染色及LFB髓鞘染色观察,比较各部位组织病理变化和髓鞘脱失情况。结果:脑干和大脑的病理变化显著,具有明显的血管袖套样炎性细胞浸润,小脑病理变化较小。三段脊髓均呈现出明显的病理变化,并以颈段和腰段最显著,出现明显的炎性细胞浸润和神经元细胞空泡状坏死。结论:在评判SJL小鼠EAE模型的病理特征时,脑干、大脑、颈髓和腰髓是最具特征的病变部位。     

左归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠IL-23/IL-17炎性轴的影响

目的:探讨左归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE) IL-23/IL-17炎性轴的影响.方法:建立髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)诱导C57BL/6小鼠EAE模型,随机分为模型组、泼尼松组、左归丸组,并设正常对照组.观察小鼠的发病情况、神经功能评分及体质量变化,HE染色观察CNS病理损伤程度,实时荧光定量PCR法检测小鼠脑组织IL-23 p19、IL-17 mRNA表达.结果:与正常对照组比较,模型组脑组织IL-23 p19、IL-17mRNA表达显著升高.左归丸及泼尼松组小鼠脑组织IL-23 p19、IL-17 mRNA表达比模型组低(P＜0.05,P＜0.01).结论:左归丸能够抑制IL-23/IL-17炎性轴而起到抗炎作用.     

二黄胶囊对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠中枢神经系统细胞因子和淋巴细胞亚群免疫组化表达的影响

目的: 观察大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE)模型脑、脊髓组织转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)免疫组化和T淋巴细胞亚群的表达,比较二黄方两种剂型(汤剂、胶囊剂)作用差异。 方法: 用髓鞘碱性蛋白(Myelin Basic Protein,MBP)免疫Lewis大鼠诱导EAE模型,随机分为正常组、模型组、泼尼松组、二黄汤组及二黄胶囊组,分别于免疫后15 d(急性期发病)和免疫后27 d(缓解期)随机选取各组大鼠,取脑和脊髓组织切片进行IFN-γ,TGF-β,MMP-9,CD4⁺,CD8⁺,CD3⁺,CD19⁺免疫组化染色。 结果: 与模型组比,二黄汤(免疫后27 d)和二黄胶囊(免疫后15 d和27 d)显著提高脑组织TGF-β表达;二黄汤和胶囊均能显著降低免疫后15 d,27 d脑和脊髓组织IFN-γ,MMP-9表达。二黄汤、二黄胶囊组免疫后15 d,27 d脑和脊髓组织IFN-γ、免疫后15 d脑和脊髓组织MMP-9表达降低作用强于泼尼松组。与模型组比,二黄汤组免疫后15 d、27 d 脑组织CD4⁺表达显著降低、CD8⁺表达显著升高,CD4⁺/CD8⁺显著降低,免疫后15 d CD19⁺表达降低;二黄胶囊组除免疫后15 d脑组织CD8⁺与模型组无显著差异外,其他均同二黄汤组。与模型组比,二黄汤组免疫后15 d、27 d脊髓组织CD4⁺表达显著降低、CD8⁺表达显著升高,CD4⁺/CD8⁺显著降低,二黄胶囊组免疫后15 d,脊髓组织CD4⁺表达显著降低、CD8⁺表达显著升高,CD4⁺/CD8⁺显著降低,27 d CD4⁺表达显著降低、CD4⁺/CD8⁺显著降低。二黄汤和二黄胶囊组间比较无显著差异。 结论: 二黄汤、二黄胶囊可上调EAE大鼠中枢神经系统TGF-β表达,作用同泼尼松。两者均可显著降低脑和脊髓组织IFN-γ、MMP-9表达,作用优于泼尼松。二黄汤、胶囊均可降低CD4⁺表达、升高CD8⁺表达,改善CD4⁺/CD8⁺比值。二黄方对上述指标的影响,可能是其减轻EAE神经损伤,改善患者临床症状的部分机理所在。     

右归丸对实验性自身免疫性脑脊柱炎小鼠IL-23/IL-17炎性轴的影响

目的:探讨右归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)IL-23/IL-17炎性轴的影响。方法:建立髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)诱导C57BL/6小鼠EAE模型,随机分为模型组、泼尼松组,右归丸组,并设正常对照组。观察小鼠的发病情况、神经功能评分及体重变化,HE染色观察CNS病理损伤程度,实时荧光定量PCR法检测小鼠脑组织IL-23 p19、IL-17 mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型组脑组织IL-23 p19、IL-17mRNA表达显著升高,泼尼松及右归丸组小鼠脑组织IL-23 p19、IL-17的mRNA表达比模型组低(P<0.01)。结论:右归丸能够抑制IL-23/IL-17炎性轴而起到抗炎治疗作用。     

独活治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的免疫学机制研究

目的 探究中药独活对多发性硬化(MS)模型小鼠的治疗作用及机理.方法 雌性C57BL/6小鼠,按文献方法制备实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型.将造模小鼠随机分为正常,模型,独活低、中、高剂量,阳性对照药黄芩苷及醋酸泼尼松等7组.各组每日灌胃相应的药物,40天后分别进行EAE神经功能评分、淋巴细胞增殖能力检测、淋巴细胞分泌细胞因子含量测定.结果 高剂量独活(36 mg/kg)能明显缓解EAE神经功能受损症状,使临床评分显著降低;能显著抑制淋巴细胞增殖;能使脾淋巴细胞分泌的IFN-γ浓度下降、IL-13浓度升高,上述结果与EAE模型组比较均差异显著(P＜0.05,P＜0.01).结论 独活能明显减轻EAE神经功能受损症状;显著抑制EAE小鼠脾淋巴细胞的增殖;下调Th1细胞因子IFN-γ、上调Th2细胞因子IL-13,恢复Th1/Th2的平衡,从而有效缓解MS/EAE.     

苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠CCL2,CCR2mRNA表达的影响

目的:观察目前国际上公认的人类多发性硬化(MS)的理想动物模型-实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型脊髓中单核细胞趋化蛋白2(CCL2),单核细胞趋化蛋白受体2(CCR2)mRNA表达,探讨苦参素对EAE大鼠的保护作用,为临床应用提供依据。方法:将50只雌性Wistar大鼠随机分5组,分别为正常组,模型组,苦参素低、高剂量组(150,250 mg·kg~(-1)),地塞米松组(1 mg·kg~(-1)),每组10只,自免疫当天起连续给药16 d,同期正常组、模型组ip等量生理盐水,观察记录大鼠的临床症状,并检查组织病理学变化,采用RT-PCR法检测脊髓中CCL2,CCR2 mRNA的表达。结果:与模型组比较,苦参素有效延迟EAE大鼠的发病时间,明显降低临床神经功能学评分(P0.01),改善EAE大鼠中枢神经系统炎症浸润(P0.01)和髓鞘脱失(P0.01)程度,下调脊髓中CCL2,CCR2 mRNA的表达(P0.01,P0.01)。结论:苦参素对EAE大鼠有防治作用,其作用机制可能与下调大鼠脊髓中CCL2,CCR2 mRNA的表达有关。     

六味地黄和金匮肾气丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠淋巴细胞亚群和NK细胞的影响

目的:观察六味地黄丸和金匮肾气丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠淋巴细胞亚群和自然杀伤(NK)细胞的影响。方法:皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白_35-55(MOG_35-55)与完全弗氏佐剂(CFA)混合的抗原,辅以腹腔注射百日咳毒素(PTX),建立EAE模型。每天记录各组小鼠体重及神经功能评分;造模后第12,25及40天,用流式细胞仪检测小鼠外周血淋巴细胞亚群及NK细胞;取各组小鼠脑和脊髓,进行病理观察。结果:模型组小鼠造模后第9天开始陆续发病,第22天达到高峰,神经功能评分为4.0分,体重明显降低,淋巴细胞亚群中CD8⁺明显降低,CD4⁺/CD8⁺比值明显升高,NK细胞水平明显降低。各治疗组小鼠的神经功能评分均比模型组降低,病程缩短,CD8⁺,CD4⁺/CD8⁺比值及NK细胞水平基本调节至正常。病理观察发现模型组小鼠大脑和脊髓病变表现为小静脉周围炎性细胞浸润形成袖套样改变及神经核固缩。激素组、六味地黄丸组和金匮肾气丸组均有不同程度减轻,病灶区域的炎性浸润细胞数较少,袖套样改变少见。结论:六味地黄丸和金匮肾气丸均有防治EAE的作用。其作用机制可能与调节细胞免疫系统有关。六味地黄丸在改善EAE小鼠体重、神经评分及调节细胞免疫等方面要优于醋酸泼尼松和金匮肾气丸。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎Wistar大鼠模型建立

目的:用豚鼠脑脊髓匀浆(GPSCH)和百日咳杆菌诱导Wistar大鼠,建立实验性自身免疫性/过敏性/变态反应性脑脊髓炎(experi mental autoi mmune/allergic encephalomyelitis,EAE)模型。方法:将大鼠随机分为实验组A,阳性对照组B,阳性对照组C,正常对照组D。观察免疫后20天内各组动物EAE的发生率及临床神经功能评分。免疫后第20天处死全部动物,取脑、脊髓组织标本,在光镜下作病灶计数后相加,进行显著性检验。结果:A组动物从第12天起出现EAE症状,在随后的5~6天内发病数急速增加、严重程度加重,甚至死亡,组织学检查出现典型的急性EAE病理表现;B组动物从免疫后第15天起出现EAE症状,在随后的2~3天内发病数及严重程度轻度增加,但症状在免疫后第16天开始恢复。A组发病率、临床神经功能评分和病理改变都较B组明显,P<0.05。C、D组没有出现EAE症状。结论:本研究用豚鼠脑脊髓匀浆和百日咳杆菌免疫Wistar大鼠,诱导EAE模型的方法是稳定有效的,且可重复性高。     

探索进展型EAE 小鼠中枢神经系统不同部位的组织病理学和小胶质细胞的动态变化

目的 建立进展型实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型,观察中枢神经系统（central nervous system,CNS）不同部位在病变不同阶段的组织病理学变化以及M1型、M2型小胶质细胞的动态变化。方法 以C57BL/6为实验小鼠,建立EAE模型,于不同发病时期对CNS各部位进行切片;髓鞘染色（luxol fast blue,LFB）检测髓鞘脱失、苏木素-伊红（hematoxylin-eosin, HE）染色检测炎细胞浸润;免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）检测M1型、M2型小胶质细胞的动态变化;Real-Time PCR检测腰髓段中iNOS,TNF-α,Arg-1以及IL-4的mRNA水平。结果 LFB和HE染色结果显示EAE 小鼠CNS各部位均于发病点出现髓鞘脱失和炎细胞浸润,且随疾病进展逐渐加重。IHC结果显示,M1型小胶质细胞浸润随疾病进展不断增加;M2型浸润先增加后减少。Real-Time PCR结果显示,iNOS,TNF-α的mRNA水平随疾病进展逐渐增加;Arg-1,IL-4的mRNA的表达水平为先增加后降低。结论 在进展型EAE小鼠的病理变化中,CNS各部位髓鞘脱失程度和炎细胞浸润随疾病进展变得更加严重,且以腰髓段的病理变化最为严重。随着疾病进展,M1型小胶质细胞数量逐渐增加,M2型的浸润先增加后减少。     

EAE小鼠中枢神经系统中CD11b mRNA的变化及益肾达络饮对其的影响

目的：观察实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）小鼠不同发病时期脑和脊髓组织中CD11b mRNA的表达变化,明确益肾达络饮的干预机制。方法：采用MOG_35-55抗原免疫C57BL/6小鼠诱导EAE模型,随机选取分为正常组,佐剂组、模型组、醋酸泼尼松3.9 mg·kg^-1组、益肾达络饮20 g·kg^-1组,在造模后第7天开始灌胃给药,直到相应时间点进行取材。采用实时荧光定量PCR测定免疫后7 d（发病前期）、14 d（发病初期）、24 d（发病急性期）、40 d（慢性持续期）4个不同时间点EAE小鼠脑和脊髓组织中CD11b mRNA表达的变化。结果：与正常组比较,在免疫后14,24,40d,模型组EAE小鼠大脑中CD11b mRNA表达分别升高至2.39±1.09,3.20±1.14,1.58±0.36（P<0.05）。与模型组比较,在免疫后40 d激素组和益肾达络饮组EAE小鼠大脑中CD11b mRNA的表达水平明显降低（P<0.05）;与正常组比较,激素组、益肾达络饮组在免疫后40 d CD11b mRNA在EAE小鼠大脑中表达水平无显著改变;在免疫后14 d激素组EAE小鼠脊髓中CD11b mRNA的表达水平明显降低。结论：单核细胞是实验性自身免疫性脑脊髓炎的潜在调节细胞;中药复方益肾达络饮干预EAE的作用机制与中枢神经系统单核细胞黏附分子CD11b的调节密切相关。     

淫羊藿黄酮对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型病理特征的干预

 目的 建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）大鼠模型,观察其组织病理特征。并进一步研究中药有效成分淫羊藿黄酮（epimedium flavone,EF）对该模型病理特征的干预作用。方法 采用豚鼠全脊髓匀浆制备抗原免疫Lewis大鼠建立EAE动物模型,每天监测动物体重和行为学变化;应用HE染色观察脑和脊髓炎性浸润、血管袖套形成等变化;Luxol Fast Blue（LFB）染色观察脊髓脱髓鞘变化;电子显微镜观察脊髓髓鞘超微结构;并考察EF对上述指标的干预作用。结果 ①随着病程进展,EAE模型组大鼠体重明显下降;从第8天起出现行为学异常,神经功能损伤评分逐渐增高,于第12天达峰值。病理形态学检查显示,EAE模型组大鼠脑组织血管周围和脑实质有大量炎性细胞浸润;脊髓腰膨大脊膜出现炎性水肿,并有炎症细胞浸润;脊髓血管周围有大量炎性细胞密集环绕,呈“袖套样”改变;脊髓髓鞘大面积脱失,且髓鞘板层松散。②EF灌胃给药能显著增加EAE模型大鼠体重,延迟发病进程,缓解发病症状。③EF能减轻EAE模型大鼠脊髓腰膨大和脑实质炎性浸润和髓鞘脱失的病理变化。结论 EF能显著降低EAE大鼠行为学评分,改善EAE大鼠大脑和脊髓的炎性脱髓鞘变化,减轻神经细胞结构损伤,从而改善其临床症状。     

干预实验性自身免疫性脑脊髓膜炎的天然产物及其作用机制

实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE)模型是研究人类多发性硬化(multiplesclerosis,MS)的经典动物模型,研究发现诸多天然产物具有干预EAE的作用。对近10年报道的具有干预EAE活性的生物碱类、黄酮类、萜类、多酚类等天然产物及其作用机制进行综述,为MS等神经自身免疫性疾病临床研究和治疗提供参考。     

针刺对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠磷酸化P38丝裂原活化蛋白酶的影响＊

目的 观察针刺对自身免疫性脑脊髓炎小鼠（EAE）的疗效及其对脑干磷酸化丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）的影响，探究针刺对EAE小鼠的治疗作用和机制，为临床治疗MS提供新的思路方法。方法 将40只C57BL/6小鼠随机分成4组。空白组小鼠不作处理，其余组采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）制备的完全抗原将小鼠诱导成EAE模型。造模后第14天开始，空白组及模型组每日固定，并用生理盐水灌胃。激素组每日与醋酸泼尼松灌胃。针刺组小鼠针刺“大椎”、双侧“肾俞”“足三里”。记录小鼠体重和神经功能评分。免疫第28天后对脑组织进行取材，用LFB染色观察病理变化，检测脑组织中p-p38MAPK免疫组化表达及p-p38MAPK的WB表达。结果 与空白组相比，其余各组小鼠体重降低（P < 0.05），神经功能评分升高（P < 0.05），LFB染色脱髓鞘程度升高，p-p38MAPK免疫组化及WB检测均升高（P < 0.05）。与模型组相比，针刺组及激素组体重升高（P < 0.05），神经功能评分降低（P < 0.05），LFB染色脱髓鞘程度降低，p-p38MAPK免疫组化及WB检测均降低（P < 0.05）。与激素组相比，针刺组体重降低（P < 0.05），神经功能评分升高（P < 0.05），p-p38MAPK免疫组化及WB检测升高，但差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 针刺可能是通过降低EAE小鼠p-p38MAPK表达，降低EAE小鼠炎症反应，减轻神经损伤从而发挥治疗作用。     

The mechanism of sesame oil in ameliorating experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a Th1 cell‐mediated autoimmune disease of the CNS that serves as an animal model for multiple sclerosis (MS). The study investigated the effectiveness of treatment with sesame oil on the development of EAE. EAE was induced in 8 week old C57BL/6 mice with an emulsion of MOG35‐55. Therapy with sesame oil (4 mL/kg/day as oral gavage) was started on day 3 before the immunization. IFN‐gamma and IL‐10 production from cultured spleen supernatants were determined by the ELISA method. The results showed that daily oral gavage of sesame oil significantly reduced the clinical symptoms of EAE in C57BL/6 mice. In addition, sesame oil‐treated mice displayed a significantly delayed disease onset. Mononuclear cells isolated from spleen of sesame oil‐treated mice showed a significant decrease in the production of IFN‐gamma compared with control mice (p = 0.001). IL‐10 production was also enhanced in splenic mononuclear cells in sesame oil‐treated mice. The ratio of IFN‐gamma to IL‐10 in sesame oil‐treated EAE mice was significantly less than in non‐treated EAE mice (p = 0.01). This report indicates that sesame oil therapy protected mice from developing EAE by reducing IFN‐gamma secretion. Thus, sesame oil treatment may be effective in MS patients by immunomodulating the Th1 immune response. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

雷公藤内酯醇对Wistar大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的治疗作用

目的：探讨雷公藤内酯醇对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）的治疗作用。方法：模型组采用豚鼠髓鞘蛋白和福氏完全佐刺及左旋咪唑诱发大鼠EAE；治疗组在模型组的基础上予以不同剂量雷公藤内酯醇。观察各组的发病情况；HE染色观察病理变化；Loyez氏髓鞘染色法观察髓鞘改变。结果：低剂量组EAE临床症状较模型组轻；高刺量组未出现临床症状；脑和脊髓炎症细胞浸润明显减少。结论：雷公藤内酯醇对EAE有治疗作用并与剂量相关。     

雷公藤内酯醇对Wistar大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的治疗作用

目的:探讨雷公藤内酯醇对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用。方法:模型组采用豚鼠髓鞘蛋白和福氏完全佐剂及左旋咪唑诱发大鼠EAE;治疗组在模型组的基础上予以不同剂量雷公藤内酯醇。观察各组的发病情况;HE染色观察病理变化;Loyez氏髓鞘染色法观察髓鞘改变。结果:低剂量组EAE临床症状较模型组轻;高剂量组未出现临床症状;脑和脊髓炎症细胞浸润明显减少。结论:雷公藤内酯醇对EAE有治疗作用并与剂量相关。