血清IV,VI型胶原检测在肝纤维化诊断中的价值

目的：测定不同肝病患者及四氯化碳处理的大鼠血清７Ｓ胶原和ＶＩ型胶原含量并研究其含量增高的临床价值，方法：以自行提取的人胎盘ＩＶ型胶原７Ｓ片段（７Ｓ胶原，７Ｓ－Ｃ）与ＶＩ型胶原片段（ＶＩ－Ｃ）制备兔抗血清，建立放射免疫分析法（ＲＩＡ），检测了４０例健康成人，１６８例多种肝病及部分非肝病患者及５２只四氯化碳诱发肝纤维化的大鼠血清７Ｓ－Ｃ及ＶＩ－Ｃ含量，结果：慢性活动性肝炎，肝硬化与肝细胞癌患者血清含量     

层粘连蛋白γ2链基因在纤维化大鼠肝组织中的原位表达

目的：了解层粘连蛋白γ２链基因（Ｌｎγ２）是否在正常大鼠肝组织中表达及其在肝纤维化过程中的作用。方法：以皮下注射四氯化碳（ＣＣｌ４）诱发大鼠肝纤维化模型，采用地高辛原位杂交技术对Ｌｎγ２ｍＲＮＡ在肝组织中表达进行检测，并与Ⅳ型前胶原α１链（α１（ＩＶ）基因表达进行比较，结果：正常大鼠肝组织无Ｌｎγ２ｍＲＮＡ表达，纤维化早期肝组织即有Ｌｎγ２ｍＲＮＡ的异常表达，其表达细胞肝内分布与α１（ＩＶ）相似，     

肝组织纤维化分期的纤维定量分析与血清肝纤维化标志物关系的研究

目的研究肝组织纤维化分期的纤维定量分析与血清肝纤维化标志物的关系。方法对７７例慢性肝病患者网状、胶原及弹力纤维面积进行真彩图像定量并分析其与血清肝纤维化标志物的相关关系。结累随慢性肝病分期从Ｓ０到Ｓ４,肝组织三种纤维均逐步升高,尤其胶原纤维最明显,Ｓ３与Ｓ２组比、Ｓ２与Ｓ１组及Ｓ１与Ｓ０组比,差异均有显著性;血清肝纤维化标志物与胶原纤维面积相关系数依次为透明质酸（ＮＡ）０．７０７７５＞ＩＶ型胶原（ＣＩＶ）０５９４０２＞层粘连蛋白（ＬＮ）０．５２５９３＞Ⅲ型前胶原（ｈＰＣⅢ）０．５２１９８。结论血清肝纤维化标志物对辅助诊断肝纤维化有肯定的价值。     

Ⅳ型胶原与慢性肝病

Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)是基底膜的主要胶原成份。Ⅳ-C分子绝大多数是由两条α_1(Ⅳ)链与一条α_2(Ⅳ)链构成的异三聚体结构,每个Ⅳ-C分子可分成四个组成部分,即两个三螺旋区(7S区或称次三螺旋区与主三螺旋区)及两个非胶原区(NC1与NC2)。在血清中主要存在形式为7S段、NC1段与主三螺旋区三种。用免疫学方法测定这三种片段均可较好地反映肝细胞损伤及肝纤维化程度,对肝病及早期肝纤维化诊断与活动程度估价均是很有价值的新指标。     

实验性纤维化肝内胶原生成细胞的研究

目的 探讨大鼠肝纤维化胶原生成细胞的来源。方法 利用免疫组织化学及原位分子杂交技术，对不同阶段（２０周）ＣＣｌ４诱导ＳＤ大鼠纤维肝内匀朱生成细胞Ｉ，Ⅲ，Ⅳ型前胶原ｍＲＮＡ及其相应胶原蛋白的表达状况进行观察。结果 实验早期（２－６周），于中央静脉周围坏死区或其附近聚集的结蛋白（ｄｅｓｍｉｎ，Ｄｍ）和α－平滑肌肌动蛋白（α－ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ，α－ＳＭＡ）阳性的Ｉｔｏ细胞及肌成纤维细胞     

丙型肝炎病毒多肽C1,C2,N1·N2合成及其应用

根据丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核苷酸和氨基酸序列合成了ＨＣＶ结构区核心部位Ｃ１、Ｃ２和非结构区Ｎ１·Ｎ２三个多肽。建立了一个敏感和特异的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测抗－ＨＣＶ，与美国抗－ＨＣＶ第２代试剂盒比较，符合率为９７．７％。检测临床标本１０２５份，抗－ＨＣＶ阳性率在慢性非甲非乙型肝炎（ＮＡＮＢＨ）４３．９％，血透患者３４．４％，肝硬化２５．０％，急性ＮＡＮＢＨ１７．４％，肝癌１６．７％，助     

血清Ⅳ、Ⅵ型胶原检测在肝纤维化诊断中的价值

目的：测定不同肝病思考及四氯化碳处理的大鼠血清７Ｓ胶原和Ⅵ型胶原含量并研究其含量增高的临床价值。方法：以自行提取的人胎盘Ⅵ型胶原７Ｓ片段（７Ｓ胶原，７Ｓ－Ｃ）与Ⅵ型胶原片段（Ⅵ－Ｃ）制备兔抗血清，建立放射免疫分析法（ＲＩＡ），检测了４０例健康成人、１６８例多种肝病及部分非肝病患者及５２只四氯化碳诱发肝纤维化的大鼠血清７Ｓ－Ｃ及Ⅵ－Ｃ含量。结果：慢性活动性肝炎、肝硬化与肝细胞癌患者血清含量均显著高于正常对照（Ｐ＜０．０１）；慢性迁延性肝炎和某些非肝病患者也有增高（Ｐ＜０．０５）；血清７Ｓ－Ｃ含量与血清层粘连蛋白及透明质酸含量有良好的相关性（ｒ分别为０．６９５与０．８３４，Ｐ＜０．０５）。血清７Ｓ－Ｃ与Ⅵ－Ｃ含量相关不显著（ｒ＝０．５６０，Ｐ＞０．０５）。在肝纤维化造模大鼠的肝细胞变性坏死期，这两种胶原血清含量即开始显著增高，并与肝纤维化程度呈正相关。结论：血清７Ｓ－Ｃ及Ⅵ－Ｃ测定对肝纤维化的诊断有重要价值，血清Ⅳ－Ｃ，Ⅵ－Ｃ与其它结缔组织代谢或生化指标联合检测将有助于肝纤维化的诊断。     

维生素E硒对肝星状细胞中金属蛋白酶1组织抑制剂mRNA表达的影响

目的：研究维生素Ｅ（Ｖｉｔ Ｅ）和不同剂量硒（Ｓｅ）对肝纤维化大鼠肝星状细胞（ＨＳＣ中金属蛋白酶组织抑制剂（ＴＬＭＰ－１）ｍＲＮＡ表达的影响，从分子水平揭示ＶｉｔＥ和Ｓｅ对肝纤维化的治疗作用及其机制。方法：用４０％ＣＣＬ４制备大鼠肝纤维化模型，并在饲料中补充ＶｉｔＥ和不同剂量的Ｓｅ进行营养干预。应用ＨＥ常规染色和Ｍａｓｓｏｎ三色胶原染色对肝组织切片行组织病理学检查；应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－Ｐ     

血清层粘连蛋白、透明质酸及Ⅳ型胶原与肝纤维化组织学分级及意义

通过对１５２例各型肝病患者血清层粘连蛋白（ＬＮ）、透明质酸（ＨＡ）与ＩＶ型胶原（ＩＶ－Ｃ）的放免检测,探讨其对肝纤维化的诊断价值,并与其中１０８例肝活检病理诊断分级进行相关性分析、另设正常对照（我院健康工作人员）５０名。血清ＩＶ－Ｃ、ＨＡ及ＬＮ试剂盒由上海海军医学研究所提供。肝活检标本,连续石蜡切片,ＨＥ染色、网状纤维及弹力纤维染色。纤维化程度分５期（Ｓ０～Ｓ４）：Ｓ０为无纤维化;８１为汇管区扩大,纤维化;Ｓ２汇管区周围纤维化,纤维隔离形成,小叶结构保留;Ｓ３纤维隔伴小叶结构紊乱,无肝硬化;Ｓ４…     

苯那普利对心肌反应性纤维化影响的实验研究

在二肾一夹肾血管性高血压（２Ｋ１Ｃ－ＲＨＴ）大鼠模型中，观察转换酶抑制剂苯那普利在反应性纤维化阶段对左室质量、心肌胶原形态和生化的影响。结果显示，在反应性纤维化时，收缩压（ＳＢＰ）、左室重（ＬＶ）和左室重与体重比值（ＬＶ／ＢＷ）升高；心肌胶原在血管周围异常堆积，同时胶原容积分数（ＣＶＦ）、血管周围胶原面积（ＰＶＣＡ）和胶原浓度（Ｃｏｌ）增高，而Ⅰ、Ⅲ型胶原比值（Ⅰ／Ⅲ）下降。经苯那普利８周（７．５ｍｇｋｇ－１／ｄ）治疗后，ＳＢＰ、ＬＶ和ＬＶ／ＢＷ降低，异常堆积的胶原消失，ＣＶＦ、ＰＶＣＡ、Ｃｏｌ和Ⅰ／Ⅲ回复到对照水平。提示苯那普利除了有效降压和消退左室肥厚外，还能逆转反应性纤维化，发挥心肌修复作用。     

干扰素α抗肝纤维化的实验研究

我们研究ＩＦＮα对肝纤维化ＥＣＭ、ＴＧＦβ及肝脏病理的影响，探讨ＩＦＮα抗肝纤维化的作用机理。 一、材料与方法 １．动物模型的建立：ＳＤ大鼠６３只，体重２００ｇ左右，随机分为正常对照组（ａ组）、模型对照组（ｂ组）、干扰素治疗组（ｃ组），各２１只。其中ｂ组及ｃ组采用皮下注射４０％ＣＣｌ４（用精制橄榄油配制）３ｍｌ／ｋｇ，每３日１次，首剂加倍，共１２周，诱导肝纤维化［１］。ａ组注射等剂量的精制橄榄油，ｃ组隔日１次皮下注射ＩＦＮα（沈阳三生药业有限公司提供）５万单位。ａ、ｂ、ｃ三组分别于早期（３周），中…     

HCV和HIV-1合并感染标本中HCV基因分型

目的了解丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）和人类免疫缺陷病毒Ｉ型（ＨＩＶ－１）混合感染标本中ＨＣＶ基因型情况。方法采用了根据ＨＣＶ５′端非转译区基因组所设计的反相探针杂交测定方法（ＩＮＮＯＬｉＰＡ，ＨＣＶⅡ），对来自六个地区的１７份抗－ＨＣＶ和抗－ＨＩＶ－１双阳性标本进行ＨＣＶ基因型分型研究。结果在１７份标本中，７份（４１．１８％）为Ｉ（１ｂ）型病毒，５份（２９．４１％）为Ⅱ（２ａ／２ｃ）型病毒，５份（２９．４１％）为Ｉ型（１ｂ）和Ⅱ（２ａ／２ｃ）混合型病毒。结论发现ＨＣＶ与ＨＩＶ－１合并感染标本中存在Ｉ（１ｂ）型、Ⅱ（２ａ／２ｃ）型以及Ｉ（１ｂ）型与Ⅱ（２ａ／２ｃ）型混合型ＨＣＶ。值得注意的是对α－干扰素治疗不敏感并且较易趋于导致严重的慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌的Ⅱ型ＨＣＶ感染的比率占７０．５８％（１２／１７）。     

慢性重型肝炎患者外周血单个核细胞内干扰素和白细胞介素的表达及意义

目的探讨慢性重型肝炎（ＣＳＨ）病人外用血单个核细胞（ＰＢＭＣ）内干扰素－γ（ＩＦＮ－γ）及白细胞介素－４（ＩＬ－４）的表达及其临床意义。方法常规分离ＰＢＭＣ,在ＰＭＡ、Ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ、Ｍｏｎｅｎｓｉｎ的刺激下,采用流式细胞术（ＦＡＣＳ）,对１７例ＣＳＨ患者及１９例正常健康者ＣＤ４＋Ｔ细胞内ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４的表达进行分析,并应用荧光定量聚合酶链反应检测ＨＢＶ ＤＮＡ含量。结果 ＣＤ４＋Ｔｈ１、 Ｔｈ２细胞在ＣＳＨ组分别为７．２％—２６．３％（平均１５％）和０、ｌ％—１０．９％（平均２．０％）,正常对照组则分别为２．２％—１１．９％（平均５．９％）和０．４％—３．９％（平均２．２％）;ＣＤ４＋Ｔｈ１细胞百分数两组间差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）。荧光定量ＰＣＲ结果表明ＣＳＨ组中１３例ＨＢＶ　ＤＮＡ阳性,其ＨＢＶ ＤＮＡ的含量与ＩＦＮ－γ表达细胞百分数呈负相关。结论 Ｔｈ１细胞与肝脏的炎症活动明显相关,ＩＦＮ－γ的表达对ＨＢＶ复制可能具有一定的影响。     

干扰素对小鼠α2(Ⅰ)型胶原基因启动子活性的影响

目的讨论干扰素的抗胶原蛋白合成作用的机制．方法以含小鼠胶原α２（Ⅰ）基因上游０４ｋｂ，０８ｋｂ，２０ｋｂ启动片段为研究靶序列，应用ＣＡＴ作报告基因，结合基因转染技术讨论ＩＦＮα，ＩＦＮγ对胶原基因的启动抑制活性．结果ＩＦＮα，ＩＦＮγ单独应用对小鼠胶原α２（Ⅰ）基因上游不同长短启动序列转录活性无阻断作用，但ＩＦＮα，ＩＦＮγ与ＴＮＦα联合应用则具有较强的抑制活性．结论ＩＦＮα，ＩＦＮγ的抗纤维化活性与其对小鼠α２（Ⅰ）胶原－２ｋｂ～＋５４ｂｐ启动活性的作用无直接相关，但ＩＦＮα，ＩＦＮγ可协助ＴＮＦα的抑制活性．     

肝纤维化病理学分级分期及与非创伤性诊断检测关系的初步研究

目的 初步探讨肝纤维化病理学分级分期及与非创伤性诊断检测关系。方法 按我国１９９５年慢性肝炎分级分期标准对２００例慢性肝病患者的肝活检组织进行病理学分级分期,同时检测血清生化指标、病毒标志、免疫指标。作Ｂ超、ＣＴ和（或）核磁共振（ＭＲ）检查。并与病理学分级分期进行比较。结果 肝组织的炎症活动度与肝纤维化的分期呈明显的正相关,即随着炎症活动度增加,其肝纤维化程度加重;ＡＳＴ、ＧＧＴ、白蛋白、白／球蛋白比、ＡＬＰ、ＡＦＰ、透明质酸、Ⅲ型前胶原肽、７Ｓ－Ⅳ胶原、组织金属蛋白酶抑制物－１（ＴＩＭＰ－１）、α２－巨球蛋白、自然杀伤细胞（ＮＫ）及Ｂ超、ＣＴ和（或）ＭＲ某些检测指标与炎症活动度有关。ＧＧＴ、白蛋白、白／球、ＡＫＰ、ＡＦＰ、透明质酸、７Ｓ－Ⅳ胶原、α２－巨球蛋白、ＴＧＦβ１、ＴＩＭＰ－１、Ｂ超、ＣＴ和（或）ＭＲ     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体N P30对血吸虫病肝纤维化的调节作用

为研究日本血吸虫单克隆抗独特型抗体 Ｎ Ｐ３０ 对血吸虫病肝纤维化的影响，将４５ 只 Ｉ Ｃ Ｒ 小鼠随机分为两组，实验组腹腔注射 Ｎ Ｐ３０，对照组腹腔注射 Ｓ Ｐ２／０ 腹水。尾蚴攻击感染后第４、８、１２、１６、２０、２４ 周分别处死小鼠取肝， Ｖ Ｇ 组化染色和Ⅰ、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白（ Ｆ Ｎ）免疫组化染色，应用 Ｎ Ｙ Ｄ１０００ 型计算机图像分析系统对肝纤维化程度进行定量测定。实验结果表明， Ｖ Ｇ 染色显示实验组肝组织胶原的平均光密度值、卵均面积和总面积明显小于对照组。免疫组化显示实验组Ⅰ、Ⅲ型胶原及 Ｆ Ｎ 含量比对照组低。本文提示 Ｎ Ｐ３０ 对血吸虫病肝纤维化有明显的抑制作用，是一很有希望的血吸虫病抗病疫苗候选分子。     

丙型肝炎病毒E1，E2/NS1，NS5蛋白基因在大肠杆菌内的表达及其产物的初步应用

目的在体外表达及纯化ＨＣＶ不同功能区的病毒蛋白，用于研究ＨＣＶ各功能区抗体的临床意义。方法将ＨＣＶＥ１，Ｅ２／ＮＳ１，ＮＳ５区的部分基因片段克隆到表达质粒ＰＭＡＬ－ＣＲＩ中ＭＢＰ编码基因的下游，在大肠杆菌中进行表达。结果表达的融合蛋白ＭＢＰ－Ｅ１，ＭＢＰ－Ｅ２／ＮＳ１，ＭＢＰ－ＮＳ５的分子量分别为５７０００、６５０００、６２０００，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析表明这些融合蛋白具有ＨＣＶ的抗原活性。将这三种融合蛋白纯化后作为抗原检测了丙型肝炎患者血清９５份，其中抗－ＨＣＶＥ１阳性率为１０．５％，抗－ＨＣＶＥ２／ＮＳ１为６３．２％，抗－ＨＣＶＮＳ５为５３．７％。结论本实验表达的ＨＣＶ融合蛋白在ＨＣＶ感染的血清学诊断中具有一定的价值。     

66例慢性非甲非乙型肝炎患者的丙型肝炎病毒感染研究

以ＨＣＶ－Ｔ３序列为引物，结合ＲＴ－ＰＣＲ和寡聚核甘酸探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，检测６６例慢性非甲非乙型肝炎（ＮＡＮＢＨ）患者的血浆ＨＣＶ－ＲＮＡ，阳性４２例（６３．６％）。同样病例以相当于ＨＣＶＣ区基因编码和ＮＳ３区编码的人工合成肽抗原检测抗ＨＣＶ，阳性４９例（７４．２％）。这６６例慢性ＮＡＮＢＨ病例，抗ＨＣＶ和ＨＣＶ－ＲＮＡ双阳性者３８例（５７．６％）；抗ＨＣＶ阴性而ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性者４例（６．１％）；抗ＨＣＶ阳性而ＨＣＶ－ＲＮＡ阴性者１１例（１６．７％）。其中诊断为散发型ＮＡＮＢＨ者３５例，检出ＨＣＶ－ＲＮＡ者１７例（４８．６％），为输血后ＮＡＮＢＨ者３１例，检出ＨＣＶ－ＲＮＡ者２５例（８０．７％）。     

狂犬病疫联合干扰素的应用研究

目的 研究ＩＦＮ＋２－２－１程序和２－２－１程序应用的可行性,探讨ＩＦＮ的免疫调节作用。方法 ＩＦＮ＋２－２－１程序;于０、７、１４天分别注射５．０、５．０、２．５ＩＵ ＰＨＫＣＶ,于０天同时加注２０万ＩＵα－ＩＦＮ;２－２－１程序;于０、７、１４天分别注射５．０、５．０、２．５ＩＵＰＨＫＣＶ;对照：应用ＷＨＯ推荐的常规程序。结果 ①３种程序免疫后的ＧＭＴ;７天时分别为１．７１、１．５７、１．２１     

两种剂量重组干扰素-α2a治疗慢性丙型肝炎随机对照研究

目的比较两种剂量的重组干扰素－α２ａ（ｒＩＦＮ－α２ａ）对慢性丙型肝炎的疗效。方法６８例经血清学和肝组织学证实的慢性丙型肝炎病人，随机分成两组，其中６３例完成全疗程，５例中途退出。Ａ组３０例，用ｒＩＦＮ－α２ａ注射，６００万单位每周３次，１２周，继之为３００万单位每周３次，１２周。Ｂ组３３例，ＩＦＮ－α２ａ３００万单位每周３次，共２４周。结果治疗结束时，Ａ组的ＡＬＴ复常率为６０．０％，丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的阴转率为５３．３％。Ｂ组的ＡＬＴ复常率和ＨＣＶＲＮＡ阴转率分别为７２．７％和６１．３％。停药６个月后，Ａ组的ＡＬＴ复常率和ＨＣＶＲＮＡ阴转率分别为５６．７％和６３．３％；Ｂ组分别为６９．７％和５４．８％。６例病人在治疗过程中出现干扰素中和抗体，４例显效，２例无效。ｒＩＦＮ－α２ａ的不良反应与文献报告相同，但绝大多数病人能耐受。本组中，１例因疗程中病情加重，１例白细胞明显降低，１例持续发热而中止治疗。结论两种剂量的疗效差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。ＨＣＶ基因型和疗效关系不大，肝组织学病变较轻者疗效较好。