esp1基因上调表达对肺腺癌细胞的生物学效应研究

目的:研究分离酶(seperase/estradiol-stimulatedprotein,esp1)在Spc-A-1细胞中对染色体分离的作用,为肿瘤的基因治疗探索新的治疗方法。方法:实验于2003-07/12在解放军第三军医大学分子遗传教研室完成。将含esp1基因的EGFP-N1质粒转染到Spc-A-1细胞,构建稳定的细胞系,检测其转染效率及对染色体分裂相的影响。结果:表达载体EGFP-N1-esp1转染成功,稳定细胞系构建成功,染色体异常分裂相由众数68条减为57条。结论:esp1的上调表达对于肿瘤的异常染色体分裂相有一定的抑制作用,对于肿瘤治疗有潜在的应用价值。     

黄芪对肺腺癌细胞生长抑制的实验研究

目的:研究分化诱导剂黄芪(Astragalus)在体外对人肺腺癌SPC-A-1细胞生长抑制的影响。方法:用不同浓度的黄芪分别处理肺腺癌SPC-A-1细胞后,镜下观察癌细胞的生长情况;测定软琼脂克隆形成率;MTT(噻唑蓝)法测定生长抑制率。结果:不同浓度黄芪处理后细胞的生长明显受到抑制,细胞生长抑制率随黄芪的浓度增加而增加。结论:黄芪对肺腺癌SPC-A-1细胞的生长有明显的抑制作用。     

肺腺鳞癌的生物学行为及临床预后

应用大切片研究30例肺腺鳞癌并与102例单纯肺腺癌和鳞癌比较。肺腺鳞癌既有腺癌又有鳞癌的某些生物学特征,因而较腺癌或鳞癌更具侵袭性。3例腺鳞癌在电镜下同一癌细胞中常有腺癌及鳞癌细胞的两种超微结构成分。本文肺腺鳞癌的1,3,5年生存率低于单纯的腺癌和鳞癌。腺鳞癌生存率可能与所含腺癌成分的分化程度有关。     

人端粒酶逆转录酶基因沉默对肺腺癌细胞侵袭、增殖、凋亡的影响

目的:探讨靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的小干扰RNA(siRNA)转染对肺腺癌细胞株A549生物学行为的影响。方法:构建靶向hTERT的siRNA表达质粒转染A549细胞,通过Western blot检测蛋白的表达水平,确定有效后,通过Transwell小室检测细胞体外侵袭能力,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定转染后肿瘤细胞的细胞周期和凋亡率。结果:成功构建靶向hTERT的siRNA表达质粒。实验组siRNA转染后的细胞侵袭能力较对照组减弱(P<0.01),生长抑制率明显高于阴性对照组(P<0.01),且表现出时间依赖性。流式细胞术测定显示,实验组siRNA转染48h后,肿瘤细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论:靶向hTERT的siRNA转染后可以显著降低A549细胞侵袭能力,抑制增殖,诱导细胞凋亡的发生。     

草分枝杆菌调节SPCA/Ⅰ人肺腺癌细胞生长周期的研究

目的探讨草分子杆菌对SPCA/Ⅰ人肺腺癌细胞系的抗增殖效应及调节细胞生长周期的作用。方法将SP-CA/Ⅰ人肺腺癌细胞株接种于细胞培养液(RPMI-1640)培养传代,分别加入不同浓度的草分子杆菌,作用36小后,分别以酶标仪检测细胞抑制率,倒置显微镜观察凋亡细胞形态变化,以cycletest plus DNA reagent kit标记,经FACSAria流式细胞仪检测细胞周期改变。结果①不同浓度的草分子杆菌体外对人肺腺癌细胞株SPCA/Ⅰ均有直接的抑制作用,其抑制率与所用药物浓度呈正相关。②倒置显微镜下可见细胞由原来贴壁生长而逐渐脱落、外形变圆、体积缩小、折光性增强,核染色质凝集,细胞裂解。③草分子杆菌体外能改变SPCA/Ⅰ人肺腺癌细胞株的细胞增殖周期,使细胞周期阻滞在G2~M期,细胞凋亡率明显增加。结论草分子杆菌能通过调节细胞增殖周期、诱导细胞凋亡,直接抑制人肺腺癌细胞株SPCA/Ⅰ增殖。     

肺腺癌并泛发型带状疱疹1例

患者 男性,66岁,因咳嗽伴胸痛20天入院。入院后经CT及病理组织学诊断为左上肺周围型肺腺癌Ⅱ期。全身状况按Karnobsky评分70分。     

LRIG2基因在膀胱癌中的表达及其对膀胱癌细胞株生物学行为的影响

目的了解LRIG2基因在膀胱肿瘤和正常膀胱组织中的表达及其与膀胱肿瘤分级、分期之间的关系。并将携带有LRIG2基因的重组质粒载体pCMV-LRIG2转染膀胱癌细胞株BIU-87,观察对其生物学行为的影响。方法利用半定量RT-PCR技术检测38例膀胱肿瘤组织和16例正常膀胱黏膜组织内LRIG2基因mRNA表达情况。用脂质体介导的基因转染技术,将携带有LRIG2基因的重组质粒载体pCMV-LRIG2转染至膀胱癌细胞株BIU-87,检测转染前后细胞生长力、侵袭力及黏附能力的改变。结果肿瘤组织内LRIG2mRNA的表达水平显著低于正常膀胱组织,且与肿瘤的分级、分期呈负相关。转染pCMV-LRIG2组细胞生长速度较未转染组和空载体转染组明显减慢,侵袭力显著低于未转染组和空载体转染组,而黏附能力显著高于未转染组和空载体转染组。结论 LRIG2有类似于抑癌基因的作用,通过对EFG-EGFR信号转导途径发挥负反馈抑制作用,从而抑制BIU-87细胞的生长、侵袭和转移。     

H2AFX基因在肺腺癌中的表达及对预后的影响

目的 探索H2A组蛋白家族成员X(H2A histone family, member X,H2AFX)基因在肺腺癌中的表达及对预后的影响。方法 通过挖掘肿瘤基因组图谱数据库,分析H2AFX基因在肺腺癌患者肿瘤组织（497例）和癌旁正常组织（54例）中的表达情况。根据H2AFX在肺腺癌样本中表达水平,将肺腺癌患者划分为高表达、低表达两组,使用logistic回归分析H2AFX与患者的临床病理特征关系。利用Kaplan-Meier法和对数秩检验分析H2AFX表达和肺腺癌患者预后的相关性,使用单因素和多因素Cox回归分析其预后价值。利用基因集富集分析方法分析H2AFX在肺腺癌发生发展中相关的基因通路。结果 H2AFX基因在肺腺癌组织中表达高于正常组织（P<0.001）,且与患者的年龄（P<0.001）、T分期（P=0.007）、N分期（P=0.010）相关,而与M分期、性别无关（P>0.05）。Kaplan-Meier法和对数秩检验分析显示,肺腺癌患者中,H2AFX基因高表达组患者生存率低于低表达组患者（P<0.001）;多因素Cox回归分析结果显示,H2AFX可以...     

血清肺癌标志物阳性表达率与肺癌分型及同侧纵隔淋巴结转移关系的分析研究

目的:探讨肺癌患者不同血清学肺癌标志物阳性表达率与肺癌病理分型及有无同侧纵隔淋巴结转移之间的关系。方法:对112例肺癌患者术前进行放免法测定血清细胞角质片段抗原21-1(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、促肾上腺皮质激素(ACTH)样物的浓度,施行肺癌根治术,术后病理切片诊断病理分型及有无同侧纵隔淋巴结转移,统计分析术前肺癌患者不同血清学肺癌标志物阳性表达率之间的差异与肺癌病理分型及有无同侧纵隔淋巴结转移的关系。结果:CYFRA21-1在非小细胞肺癌(NSCLC)组中阳性率高于小细胞肺癌(SCLC)组(P<0.01),在NSCLC组中病理学证明有同侧纵隔淋巴结转移(P-N2)比病理学未证明有同侧纵隔淋巴结转移(P-N0-1)的CYFRA21-1阳性表达率高(P<0.05);NSE在SCLC组中阳性率高于NSCLC(P<0.01),在SCLC组中P-N2比P-N0-1的NSE阳性表达率高(P<0.05);ACTH样物的阳性表达率在NSCLC和SCLC及P-N2和P-N0-1之间差异无显著性(P>0.05)。结论:CYFRA21-1阳性表达多提示病理分型为NSCLS,易发生同侧纵隔淋巴结转移,...     

低频超声对卵巢癌细胞的生物学效应

目的　研究低频超声对体外培养的人卵巢癌细胞的急、慢性生物学效应。方法　人卵巢癌细胞 3AO受不同剂量、频率为 0 .2 4MHz超声波辐照 ,根据剂量 -效应曲线确定两种不致细胞急性损伤的声波剂量 ,观察受此两种剂量超声处理后细胞的增殖能力和克隆形成力的变化。结果　 3 .92W /cm2 × 10s和 5 .12W /cm2 × 5s未致细胞急性死亡。受 3 .92W /cm2 × 10s、5 .12W /cm2 × 5s辐照和对照组细胞倍增时间分别为 45 .2h、3 4 .4h和 2 8.6h ,克隆形成率分别为 2 1.3 %、5 0 .3 %和 46.0 % ,受 3 .92W /cm2 × 10s辐照细胞增殖和克隆形成均受到抑制 (P值均 <0 .0 1)。结论　 3AO对超声的敏感性较高 ,超声的迟发效应更决定于辐照持续时间。     

食管癌细胞Vasohibin-1基因表达对癌细胞生物学特性的影响研究

目的探讨上调食管癌细胞Vasohibin-1(VASH-1)表达对癌细胞活力、凋亡率的影响及机制。方法将人食管癌EC9706细胞分为空白对照组、pc DNA3. 1组和pc DNA3. 1-VASH-1组。未转染的细胞为空白对照组,pc DNA3. 1组和pc DNA3. 1-VASH-1组转染pc DNA3. 1及pc DNA3. 1-VASH-1参照脂质体Lipofectamine TM2000试剂盒说明。转染48 h,通过Western blotting检测VASH-1、血管内皮因子A(VEGF-A)、ki67、Bax、丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)和磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率; CCK-8法检测转染0～96 h的细胞活力。结果 pc DNA3. 1-VASH-1组VASH-1表达明显高于空白对照组(P 0. 05)。与空白组对照组比较,pc DNA3.1-VASH-1组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,VEGF-A、ki67和p-AKT蛋白表达均明显降低,Bax蛋白表达明显升高(P 0. 05)。结论上调食管癌细胞VASH-1表达可抑制细胞活力和血管生成,诱导细胞凋亡,机制与下调PI3K/AKT信号通路有关。     

TTF-1在肺腺癌中的表达特点及意义

目的总结甲状腺转录因子-1(TTF-1)在一组肺腺癌中的表达特点,分析其表达是否与肿瘤来源及分化有关,以及在肺腺癌的表达是否具有特异性。方法应用HE和免疫组化方法对133例肺腺癌的组织芯片行TTF-1、CDX2、ER、PR、PSA、CD10、Tg染色并观察,同时对照10例癌旁肺组织、14例肺转移性腺癌和5例其他部位肺转移性腺癌的石蜡包埋切片的染色结果。结果正常肺组织TTF-1表达定位于终末呼吸单位,而肺腺癌TTF-1阳性表达率为85.7%。低分化腺癌组TTF-1阳性表达程度低于高分化腺癌组(P=0.002);周围型腺癌组的阳性率高于中心型组(P=0.029)。结论TTF-1对于肺腺癌是一个有用的标记物,TTF-1表达可能与肿瘤发生于外周气道或肺泡上皮细胞有关。     

TPT1基因转染对肝癌细胞系SMMC-7721生物学行为的影响

目的：观察TPT1转染对肝癌细胞系生物学行为的影响.方法：用QIAGEN超纯质粒抽提试剂盒抽提TPT1的真核表达质粒pEGFP-N3TPT1和pEGFP-N3,通过lipofectAMINE,在24 h内连续3次转染肝癌细胞系SMMC-7721,通过荧光显微镜、RT-PCR观察转染、表达效率,通过MTT实验、软琼脂克隆形成实验、细胞周期分析,研究TPT1转染对肝癌细胞系SMMC-7721生物学行为的影响.结果：用此重构体转染后,在荧光显微镜下,可见细胞发出明亮的绿色荧光,转染效率约在30%左右.RT-PCR分析显示,pEGFP-N3 TPT1转染的细胞,TPT1 mRNA水平升高0.78倍（P〈0.05）.与对照组相比,pEGFP-N3TPT1转染可明显增强肝癌细胞系的增殖能力和软琼脂克隆形成能力（P值均〈0.05）,使G2＋S/M期细胞数增多.结论：pEGFP-N3 TPT1可在肝系细胞内高效表达,TPT1可增强肝癌细胞系SMMC-7721的恶性表型.     

短发夹RNA靶向抑制环氧化酶-2基因表达对肺癌细胞A549增殖的影响

目的评价短发夹RNA（shorthairpinRNA，shRNA）靶向肺癌细胞A549环氧化酶-2（COX-2）基因表达的抑制作用，并观察对肺癌细胞A。生长和细胞周期的影响。方法将抑制COX-2基因的shRNADNA模板插入到真核表达载体pGenesil-1的U6启动子下游，构建靶向抑制COX-2基因的重组表达载体pshRNA-COX-2。将试验分为3组：未转染肺癌细胞A549组、阴性对照HK组和pshRNA-COX-2转染组。用脂质体Lipofectamine^TM 2000转染肺癌细胞A549逆转录（RT）-PCR和免疫印迹法（Wb）分别检测COX-2基因mRNA和蛋白表达情况，流式细胞术检测细胞周期，细胞计数检测细胞生长变化。结果与阴性对照组相比，pshRNA-COX-2重组表达载体抑制COX-2mRNA及蛋白表达的抑制率分别为72．2％和48．6％；G0-G1期细胞由63．7％上升为71．0％，S期细胞由26．5％下降为20．0％；细胞生长明显减慢。结论pshRNA-COX-2重组表达载体能显著抑制肺癌细胞COX-2表达，引起G0-G1期细胞增多，S期细胞减少，从而抑制肺癌细胞生长。     

肺腺癌miR-195的表达及靶基因筛选

目的 研究miR-195在肺腺癌中的表达差异,筛选miR-195靶基因,分析靶基因作用网络及其对患者生存预后的影响.方法 利用TCGA数据库,比较miR-195在肺腺癌癌组织与癌旁正常组织间的表达差异;采用实时荧光定量PCR检测miR-195在临床标本中的相对表达水平.设计miR-195的Hybrid PCR引物,扩增...     

NOR1基因真核表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的影响

目的NOR1基因真核表达载体pcDNA3．1（＋）的构建并了解其对肝癌细胞系HepG2生长的影响。方法将NOR；cDNA亚克隆至pcDNA3．1（＋）真核表达载体上，并把重组质粒pcDNA3．1（＋）／NOR，经脂质体转染至HepG2细胞中，运用MTT法、台盼蓝排斥等试验、流式细胞仪等分析NOR，基因对肝癌细胞HepG2生物学活性的影响。结果成功构建了NOR。基因真核表达体pcDNA3．1（＋）／NORl，经pcDNA3．1（＋）／NOR1转染后的HepG2细胞生长速度明显抑制（P〈0．05），且细胞从G0／G1期进入S期明显延缓。结论重组质粒pcDNA3．1（＋）／NOR1能在HepG2细胞内表达，且能影响HepG2细胞的生长。     

肺腺癌新增分类及研究新进展

腺癌已成为最常见的肺癌类型,肺腺癌无论在临床、影像、分子生物学及病理学方面都存在明显的异质性,过去的肺腺癌分类已无法适应目前的发展,迫切需要一种新的分类标准。2011年国际肺癌研究学会(IASLC)、美国胸科学会(ATS)、欧洲呼吸学会(ERS)联合多学科,结合近年肺腺癌各方面的最新进展,对肺腺癌做出了新的分类。新分类取消了细支气管肺泡癌(BAC)这一分类,新增了4个命名:原位腺癌(AIS)、微浸润腺癌(MIA)、鳞屑样生长为主的浸润性腺癌和浸润性黏液型腺癌。肺腺癌新分类凸现出组织学亚型与分子和临床特征的一些新的相关性,为临床诊疗及科学研究提出了新模式、新方向和新目标。     

苦参碱对肺腺癌A549细胞CC10 mRNA表达的影响

目的:观察苦参碱对肺腺癌A549细胞生长、凋亡及其对CC10mRNA表达的影响。方法:肺腺癌A549细胞进行培养传代,按苦参碱药物作用浓度由低向高分为A、B、C、D、E组及对照组,培养72h后,MTT实验检测苦参碱对肺癌细胞生长抑制作用;Hoechst33258染色法观察苦参碱对A549细胞凋亡形态的影响,AnnexinV-PI双标法检测苦参碱对A549细胞凋亡率的影响,RT-PCR检测CC10mRNA的表达。结果:不同浓度的苦参碱均具有抑制肺癌A549细胞生长及诱导凋亡作用,A、B、C、D、E组及对照组A549细胞的生长抑制率及凋亡率分别为24.7%、5.12%,33.1%、8.36%,44.3%、10.81%,61.7%、17.10%,74.2%、25.67%及6.2%、3.06%,各组差异具有显著性(P<0.05)。各实验组CC10mRNA阳性表达率分别为1.03±0.07、0.87±0.03、0.74±0.04、0.62±0.06、0.49±0.04。结论:苦参碱抑制肺腺癌A549细胞生长及诱导细胞凋亡的作用可能与其促进CC10mRNA表达上调有关。     

肺积1号方对la-795肺腺癌小鼠移植瘤MVD、VEGF表达的影响

目的:探讨肺积1号方对la-795肺腺癌小鼠移植瘤微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:将50只T739小鼠在其右前肢腋窝皮下接种0.2 ml/只,接种24 h后随机分为空白对照组(生理盐水灌胃)、肺积1号方小剂量组(7.5 mg/ml,灌服0.4 ml/只,1次/d)、肺积1号方大剂量组(15 mg/ml,灌服0.4 ml/只,1次/d)、DDP组(1 mg/kg,调整浓度至0.1 mg/ml)和肺积1号方小剂量+DDP组(中药灌服方法同肺积1号方小剂量组,DDP给药方法同DDP组),采用CD31和VEGF免疫组化染色方法观察肺积1号方对移植瘤MVD、VEGF表达的抑制作用.结果:各实验组MVD和VEGF表达与空白对照组比较均减低(P＜0.01);肺积1号方大剂量组和肺积1号方小剂量+DDP组与DDP组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:肺积1号方抑制la-795肺腺癌小鼠移植瘤MVD、VEGF的表达.     

PITX1基因在肺腺癌中的表达及临床预后意义

目的:探讨同源域转录因子1(paired like homeodomain 1,PITX1)基因在肺腺癌组织和正常组织中的表达水平及其与临床病理特征和预后之间的相关性。方法:综合利用肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)中的GSE130779和GSE85841数据集,分析PITX1基因在肺腺癌患者癌组织及癌旁组织中的表达水平,并利用实时荧光定量PCR法在40例肺腺癌患者组织中验证PITX1基因的表达水平。同时利用COX回归分析PITX1基因与肺腺癌患者的总生存期(overall survival,OS)和无复发生存期(recurrence-free survival,RFS)之间的相关性,进而分析其表达水平与肺腺癌患者临床病理特征之间的相关性。结果:基于TCGA和GEO数据库分析结果显示PITX1基因在肺腺癌组织中显著高表达(P<0.01),实时荧光定量PCR结果显示PITX1基因在肺腺癌组织的表达量显著高于癌旁正常组织(P<0.001),其相对表达量分别为1.064±0.077和0.641±0.044。COX回归分析显示PITX1基因的表达水平与肺腺癌患者的TNM分期、淋巴结转移状态和肿瘤大小显著相关(均P<0.05)。同时,上调PITX1的表达水平与肺腺癌患者的OS和RFS呈负相关。结论:PITX1基因在肺腺癌组织中显著高表达,且与肺腺癌患者的预后显著相关。