腺苷对脐静脉内皮细胞合成VEGF蛋白及表达VEGF mRNA的影响

目的:探讨腺苷对脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC)合成血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白及表达VEGF mRNA的影响.方法:实验分5组进行:组1为对照组,腺苷浓度0mol/L,组2～组5为实验组,腺苷浓度分别为10-4mol/L、10-6mol/L、10-8mol/L和10-10mol/L.用免疫组织细胞化学法检测VEGF蛋白质合成,原位杂交检测VEGF mRNA表达.结果:对照组和实验组均有VEGF蛋白在胞浆中表达,呈浅黄至深棕黄色颗粒,对照组的VEGF染色阳性细胞少,染色程度轻;10-4molv、10-6mol/L浓度的腺苷作用48h后,阳性细胞明显增加,染色深,10-8mol/L、10-10mol/L浓度的腺苷对VEGF染色基本无影响.对照组与实验组均有VEGF mRNA表达,对照组原位杂交后染色阳性细胞百分率为(29.00±4.18)%.10-4mol/L、10-6mol/L腺苷作用48h后,染色阳性百分率分别上升为(73.61±4.72)%和(68.42±2.28)%,与对照组比较有统计学意义(P＜0.05);10-8mol/L、10-10mol/L腺苷作用后染色阳性率分别为(34.04±5.92)%和(33.80±5.54)%,与对照组比较无统计学意义(P＞0.05).结论:腺苷有促进HUVEC合成和分泌VEGF蛋白的作用,并可上调VEGF mRNA的表达.     

血管内皮生长因子基因体外转染人脐静脉内皮细胞的实验研究

观察血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)基因转染对人脐静脉内皮细胞的生物学作用,探讨其在人工血管抗血栓形成中应用的可行性。将真核表达质粒pCD－hVEGF165体外转染人脐静脉内皮细胞。原位杂交、免疫组化及ELISA法检测VEGF基因的表达并描绘内皮细胞生长曲线。结果发现：VEGF基因转染能明显促进内皮细胞的分裂增殖。提示VEGF基因有可能作为增强人工血管抗血栓能力的有效候选基因。     

血管内皮生长因子基因体外转染人脐静脉内皮细胞的实验研究

观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因转染对人脐静脉内皮细胞的生物学作用,探讨其在人工血管抗血栓形成中应用的可行性.将真核表达质粒pCD-hVEGF165体外转染人脐静脉内皮细胞.原位杂交、免疫组化及ELISA法检测VEGF基因的表达并描绘内皮细胞生长曲线.结果发现VEGF基因转染能明显促进内皮细胞的分裂增殖.提示VEGF基因有可能作为增强人工血管抗血栓能力的有效候选基因.     

人脐静脉内皮细胞体外培养方法

目的探索人脐静脉内皮细胞体外培养方法和注意事项。方法采用0.1%I型胶原酶分离脐静脉内皮细胞,于RPMI-1640和20?S内培养,待细胞80%融合后,以0.25%胰蛋白酶和0.02?TA消化传代,并以倒置光显微镜观察内皮细胞生长情况,以免疫组化方法对内皮细胞进行鉴定。结果原代培养细胞在接种4 h后开始贴壁生长,5~7 d后融合成单层,倒置光显微镜下观察细胞呈鹅卵石状排列,有接触抑制现象,免疫组化显示细胞胞浆内Ⅷ因子相关抗原阳性。结论用胶原酶灌注消化脐静脉是获得内皮细胞的一种较可靠的方法,成活率较高,培养的多个环节均需关注。     

人脐静脉内皮细胞的体外培养

目的 建立能大量分离人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的体外培养方法,为血管内皮细胞的体外实验研究提供基础.方法 用0.25%胰蛋白酶消化法收集HUVECs,加入含20%优质胎牛血清的RPMI1640培养基在37℃、5%CO2孵箱中培养.结果 体外培养的HUVECs在24h完全贴壁,在4～5天融合成片,呈现单层铺路石样.流式细胞仪测定内皮细胞纯度为71.38%.结论 胰蛋白酶消化法可以获得大量HUVECs.     

VEGF对体外培养的人脐静脉内皮细胞Ets-1的诱导表达

目的：探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）对体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中转录因子Ets-1的诱导表达。 方法：原代培养获得HUVECs;应用细胞免疫化学染色技术及形态计量分析系统Image-Pro Plus（IPP）,检测VEGF对培养的内皮细胞Ets-1蛋白的诱导表达作用并对相关指标进行半定量分析。结果：VEGF（10 μg•L^-1）可诱导内皮细胞Ets-1蛋白的短时表达升高（P<0.01）,即随时间的延长,Ets-1表达也逐渐增强,在10 min时达高峰,30 min后Ets-1表达逐渐降低到无VEGF刺激的水平。 结论：VEGF可诱导人脐静脉内皮细胞中Ets-1蛋白的短时表达增加。     

VEGF诱导人脐静脉内皮细胞体外三维成型和对EphrinB2/EphB4表达的影响

目的观察不同浓度血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对原代培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)体外"小管样结构"(tubule-like structures,TLS)形成能力、表达EphrinB及其受体EphB4的影响.方法采用酶消化法分离、纯化人脐静脉内皮细胞并经形态学和免疫细胞化学鉴定.以不同浓度(0.1～50 ng/m1)的VEGF体外处理传代HUVECs,观测时相点设为刺激后24、48、72、96 h;采用Matrigel三维培养系统和免疫细胞化学染色方法分别观测VEGF处理后HUVECs体外血管形成能力以及EphrinB2/EphB4表达的变化,并对后者进行定量分析.结果 HUVECs有EphB4表达,但未检测到EphnnB2表达;不同浓度的VEGF刺激HUVECs在各观测时间点未见EphB4表达的显著性差异,亦未诱导出EphrinB2表达.VEGF能够诱导HUVECs在Matrigel形成小管样结构,并呈剂量依赖性.结论 VEGF能以剂量依赖方式诱导HUVECs在Matrigel形成TLS,但不能诱导HUVECs表达EphrinB2或EphB4.     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞中p38MAPK表达的影响

目的探讨辛伐他汀对p38信号通路在人脐静脉内皮细胞中表达的影响，以期阐明其在防治糖尿病大血管并发症中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，分别以糖尿病特有因素：高葡萄糖、高胰岛素、糖基化终末产物(AGE)和过氧化氢刺激人脐静脉内皮细胞，同时用辛伐他汀进行干预，用ELISA法检测不同刺激及干预因素条件对HUVEC中p38MAPK磷酸化蛋白表达的影响。结果高葡萄糖、高胰岛素、AGE和过氧化氢均可激活p38MAPK，使其磷酸化表达量增加，辛伐他汀可抑制p38MAPK磷酸化蛋白表达增加。结论辛伐他汀在预防糖尿病大血管并发症的作用机制中，可能与p38MAPK有关。     

VIP对体外培养人脐静脉内皮细胞释放ANP,ATⅡ和EDLS的影响

采用放射免疫法（ＲＩＡ）测定了体外原代培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）上清液，证实其中含有一定量的心钠素（ＡＮＰ）、血管紧张素Ⅱ（ＡＴⅡ）和内源性类洋地黄物质（ＥＤＬＳ），它们从ＨＵＶＥＣ释放到培养上清液中的量受血管活性肠肽（ＶＩＰ）的调节，即ＶＩＰ使培养上清液中具有舒张血管作用的ＡＮＰ含量增加，具有收缩血管作用的ＡＴⅡ和ＥＤＬＳ含量减少。结果说明ＨＵＶＥＣ能释放ＡＮＰ、ＡＴⅡ和ＥＤＬＳ等血管活性物质到胞外，ＶＩＰ具有调节其释放的作用，并对其意义进行了初步探讨。     

人脐静脉内皮细胞的培养

目的：培养的内皮细胞为基础和临床研究提供体外模型,并为进一步研究内皮细胞对造血的影响提供实验材料。方法：经胶原酶消化获得人脐静脉内皮细胞,用ＲＰＭＩ－１６４０加２０％的胎牛血清进行培养。结果：成簇状的内皮细胞最初形成于培养皿（或培养瓶）的底层,继而细胞迅速生长,融合成片,约７天细胞呈单层多角形镶嵌排列。透射电镜观察,原代培养细胞的胞质内含内皮细胞特有的细胞器（ＷＰＢｓ）。兔抗人Ⅷ因子相关抗原（ⅧＲ：Ａｇ）免疫组织化学染色实验证实,培养的内皮细胞含有ⅧＲ：Ａｇ。结论：本实验的各项结果从形态,免疫组化及透射电镜的观察均符合内皮细胞的特征,因此确信所培养的内皮细胞可提供作进一步深入的细胞生物学及对造血影响的研究。     

Expression of VEGF, b-FGF, and their receptors after injection of VEGF on ischemic heart muscle

To study the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and basic fibroblast growth factor (b-FGF) and their receptors after injection of external VEGF on ischenric heart muscle and to investigate the mechanism of therapeutic myocardial angiogenesis of VEGF. Methods: Standard experimental pigs underwent placement of a left circumflex artery ameroid occluder. Six weeks later, the animals in the experimental group were treated with VEGF (20 μg) by direct epicardial injection (n = 8) and other animals in the control grovp did not receive any treatment (n = 8).Four weeks after therapy, the animals were evaluated with regard to mRNA and protein expression of VEGF and b-FGF and their receptors by RT-PCR and Western blotting. Results: The mRNA expression of VEGF and b-FGF and their receptors by RT-PCR expressing as pereentage of density ratio to the GAPDH control was increased in experimental group versus control group. The protein expression of VEGF and b-FGF and their receptors by Western blot expressing as percentage of density ratio to the Commassie Blue control was increased in experimental group versus control Group. Conclusion: Exogenous VEGF can induce the expression of endogenous VEGF, b-FGF, and their receptors; b-FGF may play a role in the angiogenesis of VEGF.     

尼美舒利对舌鳞癌Tca8113细胞Survivin及VEGF表达的影响

目的 探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利(nimesulide,NIM)对人舌鳞癌Tca8113细胞生存素(Sur-vivin)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞,对照组加入0.4%二甲基亚砜(DMSO),试验组加入不同浓度的NIM(25,50,100,200 μmol/L)进行干预,作用24,48,72 h后,采用免疫细胞化学法检测舌鳞癌细胞内Survivin及VEGF蛋白表达变化.结果 不同浓度的NIM(浓度分别为25,50,100,200 μmol/L)处理Tca8113细胞24 h,48 h,72 h后,细胞内Survivin及VEGF蛋白表达均下降.在同浓度下,随着NIM干预时间的延长,Survivin及VEGF的表达较对照组下降更为明显(P＜0.05);在同一时间点,随着NIM浓度的增加,Survivin及VEGF表达较对照组亦均明显下降(P＜0.05).经方差分析,二者均呈浓度和时间依赖性.VEGF与Survivin高度相关,相关系数r=0.93(P＜0.01).结论 NIM对Tca8113细胞Survivin和VEGF表达的抑制可能是其具有抗肿瘤作用的机制之一.     

膀胱移行细胞癌组织中Mta-1与VEGF的表达及其相互关系

目的 探讨转移相关蛋白(metastasis associated protein-1,Mta-1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)在膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell carcinoma,BTCC)发生发展过程中的作用及其临床价值. 方法 免疫组化方法检测40例BTCC组织和10例正常膀胱组织中转移相关基因(Mta-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达;分析Mta-1与BTCC的分级、分期、侵袭转移及复发间的关系及Mta-1表达与VEGF表达的相关性. 结果 BTCC中Mta-1蛋白表达阳性率为70.0%(28/40),明显高于正常膀胱组织(0,P<0.05);Mta-1蛋白表达阳性率随BTCC临床分期及病理分级的升高而增加,肿瘤复发组高于初发组,肿瘤转移组高于无转移组(P<0.05).VEGF的表达在BTCC组明显高于正常对照组(P<0.05),BTCC组织中VEGF表达阳性率随肿瘤临床分期的升高及复发、转移的发生而升高.BTCC中VEGF蛋白表达与Mta-1蛋白表达呈正相关(rs=0.762,P<0.05). 结论 结果提示Mta-1和VEGF表达与肿瘤的转移及复发密切相关,可以为膀胱癌基因治疗和抗肿瘤血管形成治疗提供新靶点.     

鸦胆子油乳对胶质瘤U251细胞血管内皮生长因子表达水平的影响

目的:研究鸦胆子油乳对胶质瘤U251细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的抑制情况.方法:体外培养人脑胶质瘤U251细胞,设置对照组和3个药物组(鸦胆子油乳终质量浓度分别为5 g/L、25 g/L和1.25 g/L),利用酶联免疫吸附法测定培养细胞上清液中VEGF含量;应用免疫细胞化学法检测胶质瘤U251细胞中VEGF的变化.结果:酶联免疫吸附法测定培养细胞上清中VEGF含量显示,随着药物浓度的增加U251细胞分泌的VEGF均较对照组明显减少(P<0.01).免疫组织化学显示,随着鸦胆子油乳注射液作用剂量的增加,VEGF蛋白的表达逐渐减少.结论:鸦胆子油乳注射液能抑制胶质瘤细胞中VEGF的表达.     

RNA干扰对HeLa细胞VEGF表达和细胞增殖的影响

目的：探讨RNA干扰对HeLa细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达和细胞增殖的影响,为人宫颈癌的治疗提供理论依据。方法：构建针对VEGF165的RNA干涉质粒,稳定转染HeLa细胞,设HeLa组、对照组和干涉组,用RT-PCR方法检测稳定细胞株中VEGF mRNA的表达,Western blotting和ELISA方法检测VEGF165蛋白的表达,MTT及流式细胞术检测VEGF siRNA作用下的细胞增殖,Hoechst33342染色检测VEGF siRNA作用下细胞凋亡的变化。结果：成功建立了VEGF siRNA的稳定细胞株,与对照组比较,干涉组VEGF的mRNA 和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。 与对照组比较,稳定转染VEGF siRNA的细胞株在24 、48 和72 h的 细胞生长抑制率分别为12.8%±5.4%、17.4%±3.7%和27.2%±5.7%,细胞增殖明显受到抑制(P＜0.01)。与对照组比较,Hoechst33342染色显示VEGF siRNA对HeLa细胞的细胞凋亡率没有影响。结论：VEGF siRNA可以有效抑制HeLa细胞中VEGF mRNA和蛋白的表达,抑制细胞的增殖,提示VEGF在宫颈癌的发生、发展中具有重要作用,抑制VEGF的表达有望成为一种治疗宫颈癌的途径。     

血管内皮生长因子165b抑制肿瘤血管生成的研究进展

研究认为血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因差异剪接后能够产生促进血管生成的VEGFxxx和抑制血管生成的VEGFxxxb。在VEGFxxxb家族中,VEGF165b在功能上具有代表性地位,表现出明显的抑制VEGF165所介导的血管生成作用。由于VEGF165b具有机体自然产生、不具有免疫原性的优势,有望通过强制高表达、外源性给予重组蛋白或促进VEGF外显子8b选择性剪接抑制肿瘤血管生成,从而用于肿瘤的治疗。     

组织因子、血管内皮生长因子在乳腺癌表达的意义

目的探讨组织因子(tissuefactor,TF)、血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在乳腺癌的表达与肿瘤临床和病理的关系。方法用免疫组化方法(S-P法)检测41例乳腺癌手术切除组织中TF和VEGF表达。结果①在有淋巴结转移、远处器官转移组及组织病理低分化组中TF、VEGF、TF和VEGF共表达率明显高于对照组;②TF、VEGF阳性表达率在各年龄组无显著差异。结论TF、VEGF表达与乳腺癌侵袭、转移密切相关,是反映乳腺癌进展和转移潜能的生物学指标,是乳腺癌临床预后的重要指标。TF、VEGF的共表达也为解释TF的促血管生成作用提供了依据。     

siRNA抑制人前列腺癌PC-3细胞株VEGF的表达及细胞增殖

目的:研究小干扰RNA(siRNA)对PC-3人前列腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的抑制作用及抑制癌细胞增殖和诱导凋亡的作用。方法:体外合成特异性靶向人VEGF基因的siRNA，并转染到PC-3细胞中;RT-PCR和Western blotting检测siVEGF对VEGF基因和蛋白表达的抑制作用;MTT法检测siVEGF对癌细胞增殖抑制作用，流式细胞术检测siVEGF诱导细胞凋亡的作用。结果:转染siVEGF1和siVEGF2组VEGF mRNA 表达水平与空白对照组比较分别下调了60.32%和70.73%；VEGF蛋白表达水平与空白对照组比较明显受到抑制，最高抑制率达72％；转染阴性对照质粒组VEGF基因和蛋白表达水平都无明显改变。转染siVEGF1和siVEGF2的细胞增殖受到抑制，增殖抑制率分别为49.5%和55.3 %，细胞的凋亡率分别为33.9%和42.0%。结论:构建的siRNA VEGF能特异有效下调VEGF基因的表达,瞬时转染siRNA VEGF能有效抑制人前列腺癌细胞PC-3增殖并诱导其凋亡。