神经肽FF的抗吗啡作用

将牛脑匀浆用水和生理盐水２次提取后经柱层析纯化，分离神经肽ＦＦ。采用神经肽ＦＦ和吗啡合用的方法作跳台。结果：试验神经肽ＦＦ能阻止小鼠对吗啡的成作用，其抑制成瘾率达８０％。单独使用神经肽ＦＦ还可增加小鼠体重０．５ｇ／ｄ以上。提示：牛神经肽ＦＦ可用于抑制吗啡类毒品成产瘾和治疗吸毒戒断综合征。     

神经肽FF的抗吗啡作用

将牛脑匀浆用水和生理盐水2次提取后经柱层析纯化，分离出神经肽FF。采用神经肽FF和吗啡合用的方法作跳台。结果：试验神经肽FF能阻止小鼠对吗啡的成瘾作用，其抑制成瘾率达80％。单独使用神经肽FF还可增加小鼠体重0．5g／d以上。提示：牛神经肽FF可用于抑制吗啡类毒品成瘾和治疗吸毒戒断综合症。     

大鼠脊髓背角内吗啡肽2的表达与骨癌痛的相关性

目的 观察骨癌痛大鼠脊髓背角内吗啡肽2(EM2)的表达变化及其与痛行为的相关性。方法 30只SD大鼠随机分为骨癌痛(BCP)组、假手术(sham)组和空白对照组,每组各10只。BCP组在大鼠胫骨上端骨髓腔内注入Walker256癌细胞造模,sham组在胫骨相同部位注射等量生理盐水,空白对照组未经任何处理。每组在造模前和造模后3、5、7、10、14、17、21 d先进行痛觉行为检测,然后利用高效液相色谱法和免疫组化染色检测脊髓EM2的表达变化。在BCP大鼠痛觉阈值最低的时间点进行行为药理学检测,即经脊髓鞘内注入不同剂量的吗啡、EM2或μ型阿片受体拮抗剂β-FNA,然后记录痛觉阈值的变化。结果 与sham组和空白对照组对比,BCP组在造模后5天痛觉阈值显著降低,14天时痛觉阈值达到最低点(P＜0.05),BCP组脊髓背角EM2表达量和染色密度显著减少(P＜0.05),EM2的表达减少与痛觉阈值的降低呈显著正相关(P＜0.001, r=0.963);BCP组鞘内给予吗啡和EM2均能剂量依赖地镇痛,但EM2镇痛作用比吗啡强,而鞘内给予β-FNA易化疼痛。结论 脊髓背角EM2的表达下调导致了BCP大鼠痛敏状态的形成,从全新的角度诠释BCP形成的病理生理机制,为BCP诊疗提供了新的理论依据。     

内吗啡肽对心血管系统作用的研究进展

阿片类物质的主要成分为吗啡,是μ阿片受体的选择性配体,具有镇痛、镇静、减轻心脏负担等重要功能,现已经广泛应用于临床麻醉、镇痛、心肌梗死和急性左心衰竭等的临床治疗,但其为外源性的阿片类物质,长时间使用或者用量过多会形成药物依赖性甚至造成死亡,因此生物体内的阿片类物质便成为众多科学家的研究热点。直到1997年,美国科学家ZADINA等[1]才发现了针对μ阿片受体的高选择性、高亲和力配体即“内源性的吗啡”,并将其命名为内吗啡肽( endomorphins,EMs),EMs的发现极大地推进了内源性阿片肽的研究。 EMs高度选择性地作用于μ阿片受体,在机体的镇痛、摄食行为、胃肠运动和炎症反应等方面发挥着重要的作用[2-3],EMs在心血管方面也发挥着重要的作用。本文主要就国内外对EMs在心血管方面的研究进行综述,为 EMs 在今后的药物研发及临床应用等方面提供线索。     

钙通道拮抗剂增强内吗啡肽镇痛效应的研究

目的：观察钙通道拮抗剂与内吗啡肽—1(endomorphin-1,EM—1)联合外周应用对大鼠的镇痛效应。方法：痛阈测定选用电刺激鼠尾—嘶叫法。脊髓蛛网膜下腔注射不同剂量的EM—1(12．5μg/kg,25μg/kg,50μg/kg)或维拉帕米(verapamil,50μg)加EM—1(12．5μg/kg,25μg/kg,50μg/kg)联合用药。注药15min后测定痛阈。结果：EM—1单独应用时,镇痛效应确切,在所试剂量范围内与剂量有关。维拉帕米与不同剂量EM—1联用,可显著增强EM—l的镇痛效应。预注受体阻断剂Cyprodime的试验表明：维拉帕米增强EM—1的镇痛作用与阿片受体有关。结论：钙通道拮抗剂可增强EM—1的镇痛作用。     

小鼠神经生长因子前导肽和人内吗啡肽-2融合基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

目的:制备并鉴定携带小鼠神经生长因子前导肽(PN)和人内吗啡肽-2(EM-2)融合基因的重组非增殖型腺病毒.方法:PN-EM-2目的基因经酶切插入pAxCAwt载体,构建PN-EM-2-pAxCAwt重组黏粒,脂质体转染293细胞获取重组腺病毒.PCR鉴定后扩增不含野生型病毒的阳性克隆并纯化,采用TCID50法测定病毒滴度;体外感染NIH3T3细胞观察转基因的表达,酶联免疫反应(EIA)法测定表达产物浓度.结果:融合基因序列正确,PCR可检测到401 bp的融合基因条带并排除野生病毒株,腺病毒Ad-PN-EM-2滴度为2.03×1010pfu/ml.NIH3T3细胞转染病毒后,细胞培养液内可检测到EM-2的表达,明显高于空转染及未转染细胞(P＜0.05),且随时间的延长,表达水平逐渐上升.结论:成功构建能够在非神经内分泌细胞内转基因表达成熟人EM-2的非增殖型腺病毒,为进一步将其应用于慢性疼痛的基因治疗奠定了基础.     

内吗啡肽1的依赖潜力及其对μ阿片受体的调节

目的:观察内吗啡肽1(EM-1)的耐受和依赖形成过程及其对脑组织μ阿片受体的调节,探讨EM-1的依赖性机制.方法:60只SD大鼠随机分为生理盐水组、EM-1急性处理组和EM-1慢性处理组.急性处理组大鼠侧脑室1次注射10 μg/kg EM-1,慢性处理组大鼠于每天8:00、15:00侧脑室注射EM-1,共9 d,剂量依次为10、15、20、25、30、35、40、45、50 μg/kg,并选第1、3、6、9天进行观察.EM-1的耐受性采用Dixon改良法求出,依赖性采用自然戒断和纳洛酮催促戒断法测定.μ阿片受体采用3H-DAMGO Scatchard分析法和RT-PCR半定量表达法测定.结果:(1)EM-1慢性处理组第3天就出现3.1倍和1.9倍的耐受,第9天高达28.4倍和8.5倍.慢性处理组第9天跳跃反应、体质量丢失和戒断评分均显著高于对照组;(2)EM-1慢性处理第9天时,大鼠纹状体、中脑、额叶皮质μ阿片受体的结合容量、mRNA表达均明显低于对照组和急性处理组,但亲和力没有发生明显变化.结论:EM-1具有耐受性和依赖性,EM-1慢性处理后μ阿片受体的结合容量和mRNA表达出现下调并与依赖发生有关.     

内吗啡肽在体内的分布和生理功能

内吗啡肽（endormorphin)是μ-阿片受体专一性配体,分为endomorphin-1(EM-1)和endomorphin-2(EM-2)两种,它们在体内有着广泛的分布,endomorphin-1多集中在臂旁核和孤束核,endomorphin-2多集中在脊髓,在急性疼痛,神经性疼痛,类症性疼痛,热痛觉过敏等方面均有很强的镇痛作用。并具有产生剂量依赖性全身动脉血压下降。抑制肠纵行肌蠕动收缩,增强食欲及抗焦虑效果等多种生理活性。     

静脉注射内吗啡肽对麻醉大鼠左心室功能的影响

目的:观察静脉注射内吗啡肽-1和2(EM-1、EM-2)对大鼠左心室功能的影响,并初步探讨其作用机理。方法:大鼠麻醉后,经右颈总动脉左心室插管测左心室功能(LVSP、HR、±dp/dt等)。颈外静脉注射给药。结果:与对照组比较,静脉注射EM-1、EM-2剂量依赖性地降低麻醉大鼠左心室功能。与EM-1/EM-2+NS组比较,除一氧化氮合成酶抑制剂L-NNA(25 mg/kg,i.v.)对EM-1降低心率的作用无明显影响外,预先给予纳洛酮(1 mg/kg,i.v.)或阿托品(50μg/kg,i.v.)或L-NNA(25 mg/kg,i.v.),或切断双侧迷走神经均显著减弱EM-1、EM-2降低心功能的作用(P<0.05或P<0.01)。结论:静脉注射EM-1、EM-2可引起麻醉大鼠左心室功能下降,此效应由阿片受体介导,有胆碱能M受体参加,有NO的参与,与迷走神经兴奋有关。     

内源性阿片样肽--内吗啡肽的研究进展

阿片肽的研究已有30年的历史.1997年,又发现了μ阿片受体的高选择性、高亲和性的内源性配体--内吗啡肽(EM),它通过与G蛋白偶联的μ阿片受体结合从而发挥许多生物学效应.本文就近年来EM的研究进展,特别是关于它在中枢神经系统内分布、受体结合特性、镇痛作用的特点及其机制,以及对心血管、呼吸、消化功能的调节等方面作一综述.     

孤啡肽对内吗啡肽-1抗伤害感受作用的影响

目的：观察孤啡肽对内吗啡肽-1在痛觉控制方面的影响。方法：采用侧脑室、鞘内同时注射孤啡肽和内吗啡肽-1，运用热辐射甩尾和醋酸扭体测痛，观察孤啡肽对内吗啡肽-1抗伤害感受效应的影响。结果：侧脑室注射孤啡肽可拮抗内吗啡肽-1的抗伤害感受效应，而鞘内注射孤啡肽可增强内吗啡肽-1的抗伤害感受效应。结论：孤啡肽在脊髓上和脊髓水平均可影响内阿片肽的抗伤害感受效应，但作用机制可能不同。     

内吗啡肽-1后处理的心肌保护作用及其对Erk1/2信号通路的影响

目的 探讨在大鼠心肌缺血再灌注过程中,内吗啡肽-1后处理的心肌保护作用对细胞外信号调节激酶1/2(Erk1/2)信号转导通路的影响.方法 构建在体大鼠心肌缺血再灌注模型,分假手术组、缺血再灌注组、内吗啡肽-1后处理组(EM50组)、PD98059后处理组(PD组)、内吗啡肽-1+PD98059后处理组(EM50+PD组).实时记录各组大鼠血流动力学指标,采集复灌结束后大鼠血清,检测超氧化物歧化酶、丙二醛、白介素-6、肿瘤坏死因子-α乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白等心肌酶学及生化指标,大鼠心肌组织HE病理染色,TTC双染色法测定心肌梗死面积,Western-blot检测各组心肌组织中P-Erk1/2及凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3的变化.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组心率和血压降低(P<0.05);与缺血再灌注组比较,EM50组心率和血压有所增高(P<0.05),血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白、丙二醛、白介素-6、肿瘤坏死因子-α活性或含量下降;超氧化物歧化酶活性增加(P<0.05);心肌梗死面积减少(P<0.05);P-Erk1/2表达增加(P<0.05);Cleaved Caspase-3表达降低(P<0.05).与EM50组比较,EM50+PD组心率和血压降低(P<0.05),血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白、丙二醛、白介素-6、肿瘤坏死因子-α活性或含量增加,超氧化物歧化酶活性降低(P<0.05);心肌梗死面积增加(P<0.05);P-Erk1/2表达降低(P<0.05);Cleaved Caspase-3表达增加.结论 内吗啡肽-1后处理可能通过改善心功能、抑制炎症反应、抑制氧化应激发挥保护作用;内吗啡肽-1改善大鼠心肌缺血再灌注损伤的过程中,存在Erk1/2信号通路的激活.     

神经肽Y与妊娠高血压综合征发病的关系

目的　探讨神经肽Y(NPY)与妊娠高血压综合征 (妊高征 )发病的关系。方法　采用放射免疫法测定 3 4例妊高征患者 (妊高征组 ,轻度 10例 ,中度 10例 ,重度 14例 )产前及产后的血浆NPY水平 ,以同期 2 0例正常孕妇(正常妊娠组 )和 10例正常非孕妇女 (正常非孕组 )为对照。结果　正常妊娠组产前血浆NPY水平 (82 .60±2 7.5 9)ng/ml稍低于正常非孕组 (85 .94± 2 8.12 )ng/ml,两组比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。妊高征组产前血浆NPY水平为 (148.79± 64 .3 2 )ng/ml,明显高于正常妊娠组和正常非孕组 (P均 <0 .0 1)。轻度妊高征组血浆NPY水平高于正常妊娠组和正常非孕组 ,但差异无显著性 (P均 >0 .0 5 ) ;轻、中、重度妊高征三组间血浆NPY水平差异显著 (P均 <0 .0 1)。产后 3天血浆NPY水平下降到非孕水平。结论　妊高征患者血浆NPY水平升高 ,在妊高征的发生、发展中有一定作用     

神经肽Y对抑郁症模型大鼠大脑皮质NE和5-HT表达的影响

目的探讨神经肽Y(NPY)对抑郁症模型大鼠大脑皮质去甲肾上腺素(NE)和5-羟色胺(5-HT)表达的影响。方法将30只SD大鼠随机分成3组:NPY干预组,生理盐水干预组和空白对照组;对NPY干预组和生理盐水干预组大鼠进行强迫游泳制模,模型成功后给予不同干预;干预24h后行为检测;之后快速处死,取脑固定,空白对照组不予任何处理,采用免疫组织化学方法检测大鼠大脑皮质NE和5-HT的表达。结果(1)NPY干预组和生理盐水干预组大脑皮质5-HT和NE的表达没有显著性差异(P>0.05),但二者均显著低于空白对照组表达(P<0.01);(2)NPY在干预后24h显示出抗抑郁样作用即大鼠强迫游泳不动时间开始缩短。结论NPY的抗抑郁样作用可能是通过调节大脑皮质NE和5-HT的表达而起作用的。     

Short reaction of C-peptide, glucagon-like peptide-1, ghrelin and endomorphin-1 for different style diet in type 2 diabetic patients

Background  Food composition and style is changing dramatically now, which causes inappropriate secretion of hormones from brain, gastrointestinal and endo-pancreas, may be related to unbalance of glucose in blood. The aim of this study was to explore the fast response of C-peptide, glucagon-like peptide-1 (GLP-1), ghrelin and endomorphin-1 (EM-1) to the eastern and western style meals in patients with type 2 diabetes mellitus.

Methods  The study enrolled 57 patients with type 2 diabetes (20 men and 37 women, mean age (67.05±8.26) years). Eastern style meal (meal A) and western style meal (meal B) were designed to produce the fullness effect. C-peptide, GLP-1, ghrelin and EM-1 were assessed before (0 hour) and after (2 hours) each diet.

Results  The delta (2h–0h) of C- peptide in meal A was significantly lower than that in meal B (P=0.0004). C-peptide, GLP-1, ghrelin and EM-1 were obviously higher before meal B than those before meal A (P <0.0001, <0.0001, =0.001, =0.0004 respectively). Blood glucose 2 hours and 3 hours after meal B were higher than those after meal A (P=0.0005, 0.0079 respectively). Correlations between GLP-1 and ghrelin were strongly positive before both meals and 2 hours after both meals and also in relation to the delta of meal A and meal B (r_A0h=0.7836, r_B0h=0.9368, r_A2h=0.7615, r_B2h=0.9409, r _A(2h–0h)=0.7531, r_B(2h–0h)=0.9980, respectively, P <0.0001).

Conclusion  Western style meal (high fat and protein food) could make more response of C-peptide than eastern style meal, and could stimulate more gut hormones (GLP-1, ghrelin) and brain peptide (EM-1) at the first phase of digestion.

     

神经肽Y对大鼠心肌细胞胞浆钙及钙瞬变的影响

目的观察神经肽Y（neuropeptideY，NPY）对静息状态下心肌细胞胞浆钙含量及兴奋-收缩耦联过程中心肌细胞钙瞬变的影响。方法用NPY（100nmol／L）刺激Sprague—Dawley乳鼠心肌细胞24h，用荧光染料Fluo 4-AM负载胞浆钙，记录静息状态下心肌细胞胞浆钙浓度，并用场刺激诱发胞浆钙瞬变。所有钙影像均由LeicaSP2激光共聚焦显微镜记录。结果NPY组心肌细胞胞浆钙含量明显高于对照组（P〈0.05）；场刺激诱导下NPY组心肌细胞胞浆钙瞬变幅度明显高于对照组（P〈0.01），NPY组钙瞬变恢复时间明显缩短（P〈0．01），钙瞬变上升时阍则无显著差别。结论长时间的NPY刺激可显著影响兴奋-收缩耦联过程中钙的动态活动，并导致胞浆内钙含量增加。     

神经肽Y经Ca2+/CaM依赖的钙调神经磷酸酶途径诱导心肌细胞肥大

目的 观察神经肽Y(NPY)诱导心肌细胞肥大效应,及Ca2+/CaM依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)途径在其中起的作用.方法 用NPY(10、100nmol)刺激心肌细胞,用环胞索A(CsA)特异性抑制CaN活性.测定心肌细胞蛋白合成速率(3H-Leu掺入量)、CaN-蛋白表达、c-jun mRNA表达、CaN酶活性、细胞内游离钙含量.结果 (1)在100nmol NPY作用下,心肌细胞3H-Leu掺入量及c-jun mRNA表达量均较对照组显著增高(P<0.05,P<0.001).NPY+CsA组和对照组相比无显著差别.(2)在100 nmol NPY作用下,NPY组心肌细胞内CaN酶比活力、CaN-α表达、胞浆及核内钙含量较对照组显著增高(P<0.05,P<0.05,P<0.001,P<0.001).结论 NPY可刺激心肌细胞肥大,CaN信号途径在其中起重要作用.     

2 型糖尿病合并不同分级高血压患者血清瘦素和 神经肽Y 的变化及影响因素分析

目的 探讨血清中瘦素和神经肽Y 水平在2 型糖尿病合并不同分级高血压患者中的改变及临床意 义。方法 选取197 例2 型糖尿病患者作为研究对象,分为单纯2 型糖尿病组（DS 组）45 例、2 型糖尿病合 并不同分级高血压组（DH 组）152 例。DH 组包括2 型糖尿病合并高血压1 级（DH1 组）47 例,2 型糖尿病 合并高血压2 级（DH2 组）51 例,2 型糖尿病合并高血压3 级（DH3 组）54 例。另选取40 例健康者作为对 照组（NS 组）。应用酶联免疫吸附试验测定血清瘦素和神经肽Y 水平。多元线性回归法分析两者与各影响因 素的相关性。结果 DS 组瘦素和神经肽Y 水平较NS 组均升高,且随血压分级增加,DH1、DH2、DH3 组瘦 素和神经肽Y 水平均高于DS 组,均以DH3 组最高,差异有统计学意义（P <0.05）。瘦素和神经肽Y 均与收 缩压、空腹血糖呈正相关,进一步Logistic 回归分析提示收缩压和空腹血糖均是瘦素和神经肽Y 水平的影响 因素。结论 在2 型糖尿病合并高血压发生时,血清瘦素和神经肽Y 水平均升高,且随着血压分级的增加升高 明显,表明两者可能共同对2 型糖尿病合并高血压的发生有一定的影响。     

神经肽Y在杏仁中央核内对禁食大鼠摄食的调节方式

目的：观察神经肽Y（NPY）在杏仁中央核（CeA）内对禁食大鼠摄食的调节方式,并探讨其可能的作用机制。方法：选择雄性SD大鼠34只,将其中10只大鼠随机分为正常摄食组与禁食24 h组,每组5只,取大鼠脑组织,应用免疫组织化学方法检测大鼠CeA内NPY及其Y1受体的表达;剩余24只大鼠行CeA内套管植入术,术后12只大鼠随机分为2组,1组CeA内注射NPY,另1组CeA内注射生理盐水(对照1组),1、2及4 h后分别观察大鼠摄食量;另12只术后大鼠随机分为2组,1组CeA内注射Y1受体阻断剂,另1组CeA内注射生理盐水(对照2组),1、2 及4 h后分别观察大鼠摄食量。结果：与正常摄食组比较,禁食24 h组大鼠CeA内NPY表达显著增多（P<0.05）,其Y1受体表达显著减少（P<0.05）;与对照1组比较,大鼠CeA内注射NPY后1 h内摄食量明显增加（P<0.05）;与对照2组比较,大鼠CeA内注射NPY的Y1受体阻断剂后1 h内摄食量明显减少（P<0.05）。结论：NPY在 CeA内对禁食大鼠的摄食具有促进作用,其机制可能是通过Y1受体调节。