ANGPT1、ANGPT2、VEGF在急性髓系白血病小鼠模型中的表达研究

目的：通过构建急性髓系白血病（AML）小鼠模型,从mRNA水平研究促血管生成素（ANGPT ）1、ANGPT2、血管内皮生长因子（VEGF）的表达水平与急性髓系白血病的关系。方法 NOD／SCID小鼠腹腔接种HL‐60细胞,建立AML小鼠模型,称模型组,未经处理的NOD／SCID小鼠作对照组。用病理组织学及流式细胞学方法鉴定小鼠模型是否成功。实时荧光定量PCR （RQ‐PCR）技术检测ANGPT2、ANGPT1及VEGF mRNA在AML小鼠肿瘤组织中的表达水平。应用Spearman相关分析法分析ANGPT2 mRNA表达水平与小鼠生存期的关系。结果成功构建 AML 小鼠模型。RQ‐PCR结果显示模型组肿瘤组织的ANGPT2、VEGF mRNA的表达水平较正常对照组显著增高,差异有统计学意义（P＜0．05）,而 ANGPT1 mRNA的表达水平两组差异无统计学意义（P＞0．05）。ANGPT2 mRNA表达水平与AML小鼠生存期呈负相关。结论 ANGPT2 mRNA在AML小鼠中高表达且与AML小鼠生存期呈负相关,ANGPT2表达与AML病情进展及预后相关。     

多发性骨髓瘤细胞系中ANGPT1/2基因的表达

目的 检测ANGPT1/2基因在多发性骨髓瘤细胞系中的表达.方法 应用实时荧光定量(RQ)-PCR方法检测两种多发性骨髓瘤细胞株U266和P3X63Ag653 (653)中ANGPT1/2的表达.结果 以人脐静脉内皮细胞为对照,ANGPT1在U266和653中的表达升高,与人脐静脉内皮细胞相比差异无统计学意义.ANGPT2在U266中表达降低,与人脐静脉内皮细胞相比差异无统计学意义;而ANGPT2在653中明显高表达,与人脐静脉内皮细胞相比差异有统计学意义.结论 应用RQ-PCR检测ANGPT1/2在2株多发性骨髓瘤细胞系中表达,为下一步在体内外研究ANGPT-TIE在多发性骨髓瘤中的作用机制奠定基础.     

ANGPT2/TIE2信号通路与急性髓细胞白血病关系的研究进展

促血管生成素(ANGPT)是近年来发现的唯一含有受体激动剂和受体抑制剂的血管生长因子家族。ANGPT/Ⅰ型酪氨酸激酶受体(TIE)系统包括两种Ⅰ型酪氨酸激酶受体TIE1和TIE2及4种配体ANGPT1、ANGPT2、ANGPT3、ANGPT4,TIE2是4种配体的共同受体,其中ANGPT2/TIE2在急性髓细胞白血病(AML)的发病机制中发挥着重要作用,ANGPT2参与白血病患者骨髓新生血管的生成以及白血病细胞的增生、侵袭和转移,与AML的预后呈负相关。通过对ANGPT2/TIE2信号转导通路与AML关系的研究,可以阐明信号通路在AML中的发生机制,从而为靶向ANGPT2治疗提供依据。     

环氧化酶-2和血管内皮生长因子在急性白血病中的表达及意义

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在急性白血病细胞中的表达及其意义.方法 将58例入选患者按免疫分型分为:急性白血病组(AL)、急性髓细胞性白血病组(AML)、急性淋巴细胞性白血病组(ALL)和缓解组,选取25例患者作为对照组,应用免疫组化法检测COX-2和VEGF在急性白血病细胞中的表达.结果 (1)在急性白血病细胞中COX-2、VEGF的表达与对照组及缓解组差异有统计学意义(P<0.05).缓解组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);(2)COX-2和VEGF在急性白血病细胞中的表达呈正相关(r=0.726,P<0.05).结论 COX-2、VEGF在急性白血病细胞中均为高表达,COX-2与VEGF的表达可能有协同作用,共同促进肿瘤血管生成,在白血病的发生、发展过程中可能发挥重要作用.     

急性髓系白血病患者早期血清CCN1蛋白检测及临床价值

目的：研究CCN1蛋白在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者早期血清中的表达水平及其与临床特征的相关性,探讨CCN1在早期急性髓系白血病中的诊断价值。方法：收集96例急性髓系白血病早期患者和159名同年龄段、性别匹配的健康对照者血清样本,采用ELISA检测血清中的CCN1蛋白水平,通过ROC曲线评估其作为诊断标志物的价值;比较CCN1表达水平与临床特征的相关性;分析不同AML分型分组中的血清CCN1表达是否具有差异。结果：AML早期患者血清中的CCN1表达水平明显低于健康对照组（P=0.000）,ROC曲线下面积为0.823,最佳cut-off值是101.22 pg/mL,灵敏度为0.823,特异度为0.667。CCN1表达水平与临床特征无相关性。AML不同分型与对照组均有统计学差异（P=0.000）,但AML各型之间的CCN1差异无统计学意义（P>0.05）。结论：CCN1蛋白在急性髓系白血病早期患者和正常人血清中表达差异显著,因此CCN1在急性髓系白血病早期诊断中可能有诊断价值。     

BAG-1蛋白在急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞中的表达

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞中BAG-1蛋白的表达及意义。方法:用免疫细胞化学SP染色法分别检测初治AML患者(76例)、急性髓系白血病完全缓解(AML-CR)患者(49例)、急性髓系白血病难治复发(RRAML)患者(17例)及正常对照者(15例)的骨髓单个核细胞中BAG-1蛋白的表达。结果:四组BAG-1蛋白阳性表达率差异有统计学意义(字2=47.857,P0.001);初治AML组和RRAML组中BAG-1蛋白阳性表达率均高于AML-CR组和正常对照组(P0.001);AML各分型患者的BAG-1蛋白阳性表达率差异无统计学意义(字2=1.920,P0.05);初治AML患者骨髓单个核细胞中BAG-1蛋白阳性表达率与白细胞计数及髓外浸润有关(字2=9.248,13.689,P0.01)。结论:BAG-1可能参与了急性髓系白血病的发生发展。     

流式细胞术在急性混合细胞白血病中的应用

急性白血病是一组造血干细胞的克隆性疾病,根据FAB分型分为急性髓细胞白血病和急性淋巴细胞白血病.近年来,随着单克隆抗体重组DNA技术,细胞遗传和分子生物学的理论和技术的迅速发展,流式细胞仪等检测技术的应用,又进一步分为伴淋系抗原表达的急性髓细胞白血病（Ly＋AML）,伴髓系抗原表达的急性淋巴细胞白血病（My＋ALL）和急性杂合细胞白血病（HAL）.     

急性白血病细胞端粒结合蛋白2表达的研究

目的研究人类白血病细胞株及原代白血病细胞中人端粒结合蛋白2(TRF2)的表达.方法应用实时定量RT-PCR,检测白血病细胞株及原代白血病细胞中TRF2 mRNA的表达,应用Western Blot,检测TRF2蛋白的表达.结果T淋巴系白血病细胞株的TRF2表达显著高于骨髓单个核细胞和髓系白血病细胞株.在原代白血病细胞中,M0和M1亚型患者白血病细胞TRF2的表达高于其他各亚型急性髓系白血病(AML)患者.结论预后差的AML患者和T细胞恶性肿瘤细胞株高表达TRF2,提示TRF2高表达可能和白血病的预后有关.     

腺病毒介导人IL-2基因治疗的抗肿瘤作用及机理分析

目的　观察重组人白介素 2腺病毒 (advh IL- 2 )在小鼠肝癌 H2 2中的转染效率、表达时程、体内抗肿瘤作用及其免疫机理。方法　小鼠皮下接种肝癌 H2 2 ,将肿瘤生长至体积为 10 0～ 2 0 0 mm3的荷瘤小鼠随机分组 ,经肿瘤局部注射给药。用 X- gal染色法检测重组腺病毒载体 adv L ac Z的转染效率 ;用 RT- PCR检测人 IL- 2基因的持续表达时间 ;以 H2 2瘤体生长及荷瘤小鼠存活时间评价 advh IL - 2抗肿瘤作用 ;以 51 Cr 4小时释放法测定治疗小鼠脾细胞的 L AK与 CTL 杀伤活性 ,免疫荧光法分析肿瘤组织内 CD4 +与 CD8+ T细胞浸润情况。结果　肿瘤局部单次注射 1× 10 9pfu重组腺病毒 ,可在肿瘤组织中进行有效的转染及表达 ,人 IL- 2基因的表达时间长于 12 d。AdvhIL- 2的抗肿瘤作用具有剂量依赖性 ,与 PBS组比较 ,2× 10 9pfu advh IL- 2可非常明显地抑制 H2 2皮下瘤的生长、延长荷瘤小鼠的生存时间 (P<0 .0 1) ,同时明显增强脾细胞 L AK与 CTL杀伤活性 (P<0 .0 1) ,增加肿瘤组织内CD4 + 与 CD8+ T细胞的浸润。结论　 Advh IL - 2通过介导人 IL - 2基因在小鼠 H 2 2肿瘤组织中的持续表达 ,产生明显的体内抗肿瘤作用 ,其机理与激活荷瘤小鼠抗肿瘤免疫反应有关     

小鼠肺部肿瘤集聚髓源性抑制细胞实验研究

目的 观察髓源性抑制细胞(MDSCs)在荷瘤小鼠肺部组织的表达情况.方法 取12只C57BL/6小鼠随机分为实验组和对照组,每组6只.实验组:将体外培养的3LL细胞(0.3×106个)注射入小鼠尾静脉,成瘤后3周取小鼠肺组织,酶消化肺组织,制备肺组织单细胞悬液,采用流式细胞术检测MDSCs(GR1-FITC、CD11b-PE双染阳性)的表达量.对照组:在小鼠尾静脉注射PBS,其余步骤同实验组.结果 实验组小鼠肺部组织高表达免疫抑制细胞MDSCs(GR+CD11b+双阳性),表达量为(19.92±6.08)%;对照组MDSCs表达量为(7.06±2.67)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.001).结论 肺癌小鼠的肺组织高表达免疫抑制细胞MDSCs.     

鼠抗人hMIC-l单克隆抗体抑制裸鼠移植人胰腺癌体内研究

目的初步研究鼠抗人hMIC-l单克隆抗体对胰腺癌体内给药的抗肿瘤活性,为hMIC-l抗体应用于肿瘤治疗提供实验依据。方法 2种人胰腺癌细胞株PANC-1和SW1990各腋窝皮下接种24只Balb/c裸鼠,共计48只皮下接种荷瘤裸鼠分别随机共分为8组,每组6只荷瘤鼠。模型对照组荷瘤裸鼠腹腔注射0.9%氯化钠注射液(10 mL/kg,NS,Biw,ip×8),阳性对照组荷瘤裸鼠腹腔注射键择(50 mg/kg,qw,ip×4),鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组分别荷瘤鼠尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体(10 mg/kg,Biw,ip×8)共4周或(2 mg/kg,Biw,ip×8)共4周。观察荷瘤裸鼠日常表现、肿瘤生长、实验后肿瘤组织切片HE染色后光镜下的组织形态学改变。结果荷瘤裸鼠尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组裸鼠(10 mg/kg,Biw,iv×8)肿瘤生长缓慢,瘤体明显小于模型对照组,并呈现量效关系。镜下观察鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组实验后肿瘤组织切片胰腺结构破坏,有大量淋巴细胞浸润,肿瘤细胞明显坏死,细胞溶解。结论尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体(10 mg/kg,Biw,iv×8)能有效抑制裸鼠移植人胰腺癌PANC-1肿瘤生长,使瘤组织坏死、结构破坏。     

急性白血病患者骨髓组织survivin表达的研究

目的 探讨急性白血病(AL)患者骨髓组织survivin基因表达及其与疗效的关系.方法 采用RT-PCR检测57例急性白血病患者治疗前后骨髓中survivin基因表达水平,并与正常对照组进行比较.结果 初发白血病患者survivin的表达高于正常对照(P＜0.05),survivin高表达的急性非淋巴细胞白血病缓解率低,急性淋巴细胞白血病的缓解率与survivin表达无关.结论 survivin在白血病中均高表达,survivin可作为判断急性白血病的疗效和预后指标.     

卵巢癌抗独特型单链抗体6B11scFv/hGM-CSF融合蛋白质的表达及活性测定

目的：为提高卵巢癌抗独特型抗体的免疫原性，构建表达６Ｂ１１ｓｃＦｖ／ｈＧＭＣＳＦ融合蛋白质，并对其活性进行测定。方法：用ＤＮＡ重组技术，将以前构建的６Ｂ１１ｓｃＦｖＬｉｎｋｅｒｈＧＭＣＳＦ融合基因克隆至ｐＥＴ１６（ａ＋）表达载体，表达可溶蛋白质。用ＥＬＩＳＡ分析技术和细胞增殖试验测定融合蛋白质的抗体和细胞因子活性。结果：融合蛋白质实现可溶表达，能与ＣＯＣ１６６９单抗和小鼠抗人ＧＭＣＳＦ单抗特异结合，并能刺激ＧＭＣＳＦ依赖株增殖。结论：融合蛋白质保留了２种蛋白质的活性，为进一步研究其功能和临床应用提供基础     

急性白血病患者JAK家族基因的表达及临床意义

目的 探讨不同时期急性白血病(AL)细胞中JAKs基因的表达情况及其临床意义.方法 将入选患者分为初治组、复发组、完全缓解组(CR组)和正常对照组(NC组),RT-PCR方法检测AL患者和正常对照者骨髓MNC中JAKI～3和TYK2mRNA的表达.结果 (1)AL患者JAK2、JAK3、TYK2 mRNA平均表达水平较CR组和NC组差异有统计学意义(P＜0.05).初治AL患者JAK1mRNA表达水平较NC组略增高,但差异无统计学(P＞0.05),复发AL患者JAK1 mRNA表达水平较NC组差异有统计学意义(P＜0.05);(2)TYK2阳性组的AL患者缓解率较TYK2阴性患者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 JAK家族基因在白血病患者的高表达可能在白血病的发生发展中起重要作用.急性髓性白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)在激活JAK/STAT信号传导通路的方式有所不同.     

β2微球蛋白水平在成人急性髓性白血病中的临床意义

目的测定血清中岛微球蛋白在急性髓性白血病（AML，acute myeloid leukemia）患者血清的表达水平，探讨其临床意义。方法以淋巴瘤（1ymphoma）、多发性骨髓瘤（MM，multiple myeloma）患者作为阳性对照组，以正常人群为阴性对照，采用RIA法检测不同病情（包括完全缓解、初治或复发）急性髓性白血病患者＆微球蛋白的表达水平并收集相关临床及实验室检查资料，分析岛微球蛋白水平与临床多项指标的关系。结果在急性髓性白血病患者中：初治／复发组的＆微球蛋白水平（2396．84±1442：86）μg／L较阴性对照组（934，55±571．69）μg／L及完全缓解组（1279．11±462．92）μg／L显著升高（P〈0．01），与阳性对照中的初治／复发患者（淋巴瘤2491．93±1156．49μg／L，多发性骨髓瘤（7012．69±5305．64）μg／L比较无统计学意义（P〉0．05），其值的高低与外周血淋巴细胞、粒细胞、幼稚细胞计数呈正相关（P〈0．05）。结论岛微球蛋白水平是反映急性髓性白血病肿瘤负荷的一个有效指标，对判断病情、预后，提示复发有一定作用。     

RNA干扰PNAS-2后U937细胞周期及相关蛋白表达的变化

目的研究RNA干扰抑制细胞凋亡相关蛋白(PNAS-2)基因表达后,急性单核细胞白血病细胞株U937细胞周期及其相关蛋白表达的变化。方法将已构建的靶向抑制PNAS-2的干扰组质粒和对照组质粒分别转染U937细胞。流式细胞仪分析两组细胞周期的变化;蛋白质芯片技术比较两组细胞周期相关蛋白表达水平的差异。结果流式细胞仪检测结果显示,干扰组细胞出现G2/M期阻滞,与对照组比较差异有统计学意义;蛋白质芯片结果分析发现,有29条细胞周期相关蛋白表达变化,其中上调25条(cyclinA、cyclinE及相关调节因子p53蛋白等),下调4条。CyclinB表达水平无显著改变。结论RNA干扰抑制PNAS-2表达后,U937细胞周期出现G2/M期阻滞,可能与细胞周期素A、p53蛋白表达上调,而细胞周期素B表达不变有关。     

单克隆抗体在形态学难以分型的急性白血病分型中的应用

目的：探讨单克隆抗体在形态学难以分型的急性白血病分中的价值。方法采用ＡＰＡＡＰ法检测１４例形态学难以分型的急性白血病患者的免疫表型。结果：１４例患者均有某个系列特异性（或相关性）标志表达,免疫学分型为急性髓性白血病７例,急性淋巴细胞白血病４例,急性混合细胞白血病２刀性未分化白血病１例。结论：单克隆抗体有助于形态学难以分型的急性白血病的分型。     

LukS-PV通过C5aR诱导急性髓系白血病细胞THP-1凋亡的研究

目的 探讨金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素亚组分(LukS-PV)是否通过C5aR发挥其诱导急性髓系白血病细胞THP-1凋亡的作用.方法 将THP-1细胞株分为5组:未处理细胞为对照组,使用不同浓度的C5aR拮抗剂(0、50、100、150 nmol/L)预先作用于THP-1细胞后,再使用1μmol/L LukS-PV刺激细胞为处理组.24 h后通过Annexin V/PI染色法,线粒体膜电位法检测细胞凋亡,qRT-PCR法检测凋亡相关基因,Western blot法检测凋亡相关蛋白,酶标仪法检测Caspase-3活性.结果 经过不同浓度C5aR拮抗剂干预后,LukS-PV诱导THP-1细胞凋亡的比率逐渐下降,促凋亡基因Bax、Bak、Bim和促凋亡蛋白cleaved-Caspase-3、Bak、Bax的表达量也逐渐减低,抑凋亡基因Bcl-2、Bcl-w、Bcl-x和抑凋亡蛋白Bcl-2的表达量逐渐升高,Caspase-3活性逐渐降低.结论 LukS-PV可能通过结合C5aR从而激活下游线粒体通路,发挥其诱导人急性髓系白血病细胞THP-1凋亡的作用.     

新单抗ZCH-7-2D3与白血病细胞的反应性及其临床意义

目的：观察新抗人白细胞分化抗原ZCH-7-2D3单克隆抗体（单抗）与白血病细胞的反应性及其在白血病免疫学诊断分型中的意义。方法：采用CD45设门和多色流式细胞术，对经30余种标准单抗业已定型的100例白血病患者新鲜的骨髓细胞或外周血标本进行流式细胞术分析。结杲：2D3抗原在急性淋巴细胞性白血病（ALL）病例中的阳性率（10／31）明显低于急性髓细胞性白血病（AML）（39／55，P〈0．01）；2D3在3例B系／髓系混合型白血病病例中均有表达，而在6例慢性粒细胞性白血病（CML）中不表达，在慢性淋巴细胞性白血病（CLL）中阳性率（3／5）与B系ALL病例中的阳性率（9／28）差异无显著意义（P=0．2389）。2D3在ALL各免疫亚型中的表达差异无显著意义（P=0．5632）；在AML各亚型中除2例AML—M6患者不表达外，其余AML亚型间无统计学意义（P〉0．05）。结论：单抗2D3主要与AML细胞反应，但在识别白血病细胞分化阶段上未发现特殊性。