ALX4基因在肿瘤中的甲基化与表达

目的分析ALX4基因在肺正常组织、肺癌组织以及多种肿瘤细胞中的甲基化发生情况以及ALX4基因甲基化对其表达的影响.方法采用MSP方法检测正常组织和肺癌组织以及肿瘤细胞株中ALX4基因甲基化发生情况;使用去甲基化药物5-aza-dC处理肿瘤细胞后,采用RT-PCR法检测ALX4基因mRNA的表达水平.结果正常组织中的ALX4基因甲基化发生率为0%(0/10),肺癌组织中ALX4基因甲基化发生率为55%(11/20);不同组织来源的肿瘤细胞株甲基化分析显示,ALX4甲基化发生率为100%(8/8);发生甲基化的肿瘤细胞株中ALX4基因表达均缺失;去甲基化药物处理后ALX4基因mRNA表达均明显升高.结论 ALX4基因在肺癌及不同来源肿瘤细胞中均有高甲基发生,其甲基化抑制该基因的表达,提示ALX4基因甲基化可能在肺癌的发生过程中起到重要的作用.     

大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化的研究

目的:检测大肠癌患者肿瘤组织及其相应的癌旁组织中Runx3基因表达和启动子区域甲基化状态,探讨甲基转移酶抑制剂5-aza-dc对结肠癌细胞系中Runx3表达的作用。方法:将手术切除的37例大肠癌组织和对应癌旁组织提取RNA和基因组DNA,采用RT-PCR检测Runx3基因的表达,甲基化特异PCR方法(MSP)检测Runx3基因启动子区域甲基化状态,用5-aza-dC处理结肠癌细胞系后,RT-PCR方法检测Runx3基因的表达。结果:37例大肠癌和对应癌旁组织中Runx3基因表达阳性率分别为100%(37/37),2.7%(1/37)。癌组织中Runx3基因表达明显降低(P<0.01)。MSP检测发现11例(30%)大肠癌标本及1例(3%)癌旁正常组织中Runx3基因呈甲基化状态。癌组织中Runx3基因甲基化明显高于癌旁组织(P<0.05)。结肠癌细胞系HT29 5-aza-dC处理后Runx3基因表达水平增加。结论:Runx3基因启动子甲基化和Runx3基因表达在大肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著性差异,可能与结肠癌的发生发展有关。     

Hedgehog信号通路相关基因在大肠癌的表达及其临床意义

目的：研究Hedgehog信号通路相关基因SHH、SMO、GLI1在大肠癌中的表达及其临床意义。方法：用RT-PCR检测43例大肠癌切除标本的癌组织和距离癌10cm以上的癌旁组织的SHH、SMO、GLI1 mRNA表达的阳性率,并与20例非肠癌患者的正常大肠组织对照,分析其与大肠癌患者临床和病理各变量的相关性。结果：大肠癌组织SHH mRNA表达阳性率为27．9％,与癌旁组织的18．6％比较,差异无显著性（P〉0．05）,但显著高于正常组织的0％（P〈0．05）。大肠癌组织SMO、GLI1 mRNA表达阳性率分别为83．7％、34．9％,显著高于癌旁组织的58．1％、16．3％及正常组织的0％、0％（P〈0．05）。SHH、SMO、GLI1 mRNA表达阳性率之间并无相关性,阳性率与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤部位、肿瘤浸润深度、病理分型等变量均无相关性（P〉0．05）。结论：Hedgehog信号通路相关基因SHH、SMO、GLI1 mRNA在大肠癌组织中表达阳性率显著增高,其表达与临床和病理各变量不相关。     

PTPRO基因启动子甲基化在大肠癌中的表达及作用

目的 :研究大肠癌组织及癌旁正常组织PTPRO基因启动子甲基化状态及m RNA表达情况,并探讨其在大肠癌发生中的关系。方法 :应用甲基化特异性PCR(MSP)和RT-PCR分别检测30例大肠癌组织及癌旁正常组织中PTPRO基因启动子甲基化状态及m RNA表达状态。结果 :大肠癌组织中PTPRO基因启动子甲基化率高于癌旁正常组织,其甲基化样本中PTPRO基因m RNA表达明显受抑。结论 :PTPRO基因启动子甲基化在大肠癌发生中起着重要作用,可能与大肠癌的发生、发展及预后有关。     

HIF-1α、PTEN和P53在大肠癌中的表达和意义及其相关性的研究

目的 探讨HIF-1 α在大肠癌发生、发展中的作用以及抑癌基因PTEN、P53与HIF-1 α的相关性.方法 采用RT-PCR技术检测42例大肠癌组织标本和相应的癌旁正常黏膜组织中HIF-1αmRNA,PTENmRNA,P53mRNA的表达,并分析其相互关系.结果 HIF-1αmRNA在大肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织中的表达水平（t=12.47,P=0.00）;HIF-1αmRNA的表达水平与肿瘤部位（t=0.05,P=0.96）性别无关（t=-0.37,P=0.72）;而与Dukes分期呈正相关（t=6.43,P=0.00）;PTENmRNA,P53mRNA在大肠癌组织中的表达水平低于癌旁正常组织;HIF-1α和抑癌基因PTEN、P53之间表现出一定程度的负相关.结论 HIF-1α的过表达在大肠癌的发生发展及浸润转移过程中起着重要作用,大肠癌中抑癌基因PTEN、P53的缺失突变可致HIF-1 α表达水平增高.     

大肠癌组织MALmRNA、蛋白表达及其启动子甲基化状态研究

目的探讨MAL基因对大肠癌筛查及早期诊断的价值。方法选取10例正常大肠组织作为对照,应用RT-PCR、甲基化特异性PCR、Westernblot方法分别检测并比较大肠癌组织（40例）及相应癌旁组织（40例）中MALmRNA、蛋白的表达情况以及MAL基因启动子甲基化状态。结果大肠癌组织中MALmRNA、蛋白的表达阳性率（10.0%、20.0%）均低于其在癌旁组织（75.0%、85.0%）和正常大肠组织（100.0%、100.0%）中的表达阳性率（均P＜0.05）,而大肠癌组织中MAL基因启动子甲基化率（90.0%）均高于其在癌旁组织（40.0%）和正常大肠组织（0.0%）中的甲基化率（均P＜0.05）。结论大肠癌组织中MAL基因或可作为大肠癌筛查及早期诊断的高潜力分子标志物。     

BRCA1基因在散发性乳腺癌中的表达及异常甲基化

目的：通过检测乳腺癌易感基因1（BRCA1）基因在散发性乳腺癌中的表达情况及其启动子甲基化状态,探讨BRCA1基因与散发性乳腺癌的关系。方法应用实时荧光定量PCR的方法和免疫组织化学方法分别检测BRCA1 mRNA和蛋白在60例散发性乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织及30例乳腺良性病变组织中的表达情况;应用重亚硫酸盐测序PCR（BPS）联合TA克隆测序方法检测上述组织中BRCA1启动子CpG岛的甲基化状态,分析BRCA1基因表达和启动子甲基化相关性。结果BRCA1 mRNA和蛋白在散发性乳腺癌组织中的相对表达水平分别低于癌旁正常组织及乳腺良性病变组织,差异有统计学意义（P＜0．001）。乳腺癌组织中BRCA1蛋白的表达率为51．7％（31／60）,明显低于癌旁正常乳腺组织的71．7％（43／60）及乳腺良性病变组织的66．7％（20／30）,差异有统计学意义（P＜0．001）;散发性乳腺癌组织中BRCA1启动子甲基化率为31．7％（19／60）,癌旁正常乳腺组织及乳腺良性病变组织均未检测出甲基化,差异有统计学意义（P＝0．000）;BRCA1蛋白表达与其启动子甲基化呈负相关（r＝－0．345,P＝0．007）。结论乳腺癌易感基因BRCA1启动子区CpG岛甲基化导致BRCA1基因表达显著下调,可能参与散发性乳腺癌的发生、发展。     

C1usterin和Survivin在大肠癌中的表达及意义

目的研究调亡抑制蛋白Clusterin和Survivin在大肠癌组织和相应癌旁组织中的表达情况及意义。方法应用免疫组织化学法检测100例大肠癌癌组织和相应的癌旁正常组织的Clusterin和Survivin的表达情况，并进行相关的分析。结果Clusterin在大肠癌组织中其阳性率为67．O％，癌旁正常组织为18．O％，两者差异十分显著（p〈0．01）；Survivin在大肠癌组织中其阳性率为58％，癌旁正常组织为3％，两者差异十分显著（P〈0．01）；Clusterin和Survivin在大肠癌中的表达具有一定的相关性（r=0．225,P〈0．01）。结论Clusterin和Survivin在大肠癌组织中具有较高的表达率在大肠癌中的表达呈正相关性，表明可能是大肠癌的生存基因，这为大肠癌的基因治疗提供了新的途径。     

Survivin基因在大肠癌中的表达

目的探讨Survivin基因在大肠癌中的表达。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测20例大肠癌及其癌旁组织survivin mRNA表达情况。结果65％大肠癌组织表达survivin mRNA，而癌旁组织25％表达。Survivin基因表达与肿瘤大小、侵袭深度、淋巴结转移及分化程度无明显关系。结论Survivin基因在大肠癌发生发展中可能起作用，Survivin表达上调和端粒酶激活可能通过各自不同的信号途径在大肠癌变中发挥协同作用。     

PTCH1基因甲基化在胃癌发病中的作用

目的:探讨PTCH1基因甲基化在胃癌发生中的作用及去甲基化试剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)对胃癌的治疗作用。方法:选取10例胃癌组织及其癌旁正常组织和胃癌细胞株AGS,抽提组织和细胞的总RNA和基因组DNA。实时定量QRT-PCR检测PTCH1基因的mRNA表达,MSP(methylation specific PCR)分析PTCH1基因启动子区甲基化变化。用5-Aza-dC处理AGS细胞株,流式细胞术检测细胞周期和凋亡并观察PTCH1基因甲基化水平的改变。结果:胃癌组织、癌旁正常组织和胃癌细胞株AGS中PTCH1基因表达和启动子甲基化水平呈负相关,相关系数为-0.591（P=0.006）;5-Aza-dC的处理可引起胃癌细胞AGS细胞发生凋亡和G0/G1期阻滞,PTCH1基因发生去甲基化变化并表达增加。结论: PTCH1基因启动子区高甲基化是胃癌细胞PTCH1低表达主要原因之一,5-Aza-dC能逆转PTCH1基因甲基化状态,调控其表达,对胃癌具有一定的治疗作用。     

大肠癌FHIT和CHFR基因甲基化状态分析

目的:分析大肠癌组织中FHIT和CHFR基因启动子区甲基化水平及其临床意义。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)技术检测46例大肠癌及癌旁正常组织的FHIT和CHFR基因启动子区甲基化状态。结果:大肠癌组织的FHIT和CHFR基因甲基化率分别为54.35%、49.15%,高于癌旁组织13.04%、8.69%,组间差异均有统计学意义(P<0.05),FHIT和CHFR基因甲基化状态与分化程度、淋巴结转移有显著相关性(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤部位、Dukes分期无相关性(P>0.05)。结论:FHIT和CHFR基因启动子区的甲基化可能与大肠癌的发生、发展及预后相关。     

宫颈癌患者CHFR基因异常甲基化的检测

目的:探讨CHFR(checkpoint with FHA and ring finger)基因启动子异常甲基化在宫颈癌发生发展过程中的作用及其在宫颈癌早期诊断中的价值。方法:用甲基化特异性PCR方法检测42例宫颈癌组织、30例宫颈上皮内瘤样病变组织(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及20例正常宫颈组织中CHFR基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果:宫颈癌组织及CIN中CHFR基因异常甲基化检出率分别为33.3%(14/42)和6.7%(2/30),正常宫颈组织中未检出CHFR基因甲基化;三组间CHFR基因异常甲基化发生率之间比较差异具有统计学意义(χ2=10.69,P=0.005);CHFR基因甲基化发生率与年龄、病理分级、临床分期之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CHFR基因的异常甲基化参与了宫颈癌的发生和发展过程,其甲基化的检测对宫颈癌的早期诊断有一定的价值。     

大肠癌DAPK、FHIT基因启动子区的甲基化水平研究

目的:评价DAPK、FHIT基因启动子区甲基化状态在大肠癌发生发展中的作用和临床意义。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测23例大肠癌及相应癌旁正常组织的DAPK、FHIT基因启动子区甲基化状态。结果:大肠癌组织的DAPK、FHIT基因甲基化率分别为60.86%(14/23)、52.17%(12/23),高于癌旁正常组织的13.04%(3/23)、8.69%(2/23),组间差异均有统计学意义(P<0.05),DAPK、FHIT基因甲基化状态与分化程度、淋巴结转移有显著相关性(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤部位、Dukes分期无相关性(P>0.05)。结论:DAPK基因和FHIT基因启动子区的高甲基化可能与大肠癌的发生、发展、预后有关。     

乳腺癌p16基因甲基化及与蛋白表达的关系

目的:探讨散发性乳腺癌中p16基因异常甲基化状况及其与蛋白表达的关系,进而研究散发性乳腺癌中p16基因异常的表遗传学作用。方法:用甲基化特异PCR(MSP)和SP法研究68例乳腺癌组织及相应癌旁正常组织中p16基因启动子甲基化状况及蛋白表达情况。结果:p16基因在68例散发性乳腺癌组织中的甲基化率为29%,且其甲基化与肿瘤组织分型、患者居住地及淋巴结转移相关(P<0.05),而与肿瘤患者绝经与否及组织分级无关(P>0.05);P16蛋白在所有肿瘤标本中的表达下降率为51%,在相应癌旁组织中均呈阳性表达,二者有显著性差异(P<0.05),P16蛋白表达下降与肿瘤患者淋巴结转移及患者居住地明显相关(P<0.05),与患者绝经、组织分级和分型无关(P>0.05);在20例p16甲基化的癌组织标本中,P16蛋白表达下降率(95%),显著高于48例未发生甲基化的乳腺癌标本下降率(33%),两者有显著性差异(P<0.05),乳腺癌患者组织p16基因甲基化检出率与P16蛋白表达下降率具有良好的一致性(Kappa=0.506),而p16未发生甲基化的正常乳腺组织和乳腺良性病变组织其蛋白均呈阳性表达。结论:在散发性乳腺癌中p16启动子甲基化改变会明显降低P16蛋白表达,p16基因启动子甲基化是其蛋白表达下降的重要原因,这种机制更倾向于农村乳腺癌患者。     

乳腺癌雌激素受体α基因启动子甲基化与其蛋白表达的关系

目的：检测乳腺癌雌激素受体α（estrogen receptor α,ERα）基因启动子区CpG岛甲基化状态,探讨乳腺癌ERα启动子甲基化与其蛋白表达及临床病理的关系。方法：采用免疫组化EnVisionTM二步法检测20例正常乳腺组织、44例乳腺癌组织ERα基因的表达,同时运用甲基化特异性PCR（Methylation-Specific PCR,MSP）及测序法分别检测ERα基因启动子A区和B区CpG岛的甲基化状态。结果：32例ERα阳性乳腺癌组织中,ERα启动子A区、B区甲基化率分别为28.2%和18.8%。12例ERα阴性乳腺癌组织中,ERα启动子A区、B区甲基化率分别为66.7%和58.3%。ERα阳性乳腺癌组、ERα阴性乳腺癌组、乳腺癌组的ERα启动子A、B区甲基化率均较正常组显著增高（P〈0.05）;ERα阴性乳腺癌组的ERα启动子A、B区甲基化率较ERα阳性乳腺癌组均显著增高（P〈0.05）。乳腺癌组织ERα表达与启动子区甲基化之间呈显著负相关。结论：乳腺癌组织ERα基因表达沉默与其启动子A区、B区CpG岛甲基化相关,后者有可能成为乳腺癌预后不良的分子检测指标。     

Gli1和OPN在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨脑胶质瘤相关癌基因（glioma-associated oncogene 1,Gli1）和骨桥蛋白（osteopontin,OPN）在结直肠癌组织中的表达情况及临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测Gli1和OPN蛋白在76例结直肠癌组织,23例正常结直肠组织中的表达情况,分析Gli1和OPN与结直肠癌患者的临床病理因素之间的关系以及二者之间表达的相关性.结果 （1）Gli1在结直肠癌组织和正常结肠组织中表达的阳性率分别为43.4％ （33/76）和13.0％ （3/23）,两者差异具有统计学意义（P ＜0.05）;OPN在结直肠癌组织和正常结肠组织中表达的阳性率分别为51.3％ （39/76）和17.4％ （4/23）,差异有统计学意义（P＜0.05）.（2）Spearman等级相关分析提示,Gli1和OPN在结直肠癌组织间的表达呈正相关（r=0.312,P＜0.01）.结论 Gli1和OPN参与了结直肠癌的发生发展过程,二者之间可能起协同作用,联合检测Gli1和OPN对于评估结直肠癌的生物学特性和判断预后具有一定价值.     

MGMT基因甲基化状态在结直肠锯齿状病变中的表达及意义

目的观察锯齿状病变组织中MGMT基因甲基化状态和MGMT蛋白表达,探讨临床病理意义和在癌变通路中的作用,同时探讨MGMT基因在不同年龄层段甲基化状况。方法应用Taqman探针qPCR(MethyLight)方法检测北京军区总医院2007~2013年的225例锯齿状病变[包括96例增生性息肉(HP)、61例广基(无蒂)锯齿状腺瘤/息肉(SSA/P)和68例传统型锯齿状腺瘤(TSA)]、54例管状腺瘤(TA)、69例结直肠癌(CRC)和42例正常结直肠黏膜组织中MGMT基因CpG岛甲基化状态,并通过测序法验证扩增的目的片段甲基化状态,同时应用免疫组化方法检测其中116例锯齿状病变(包括52例HP、41例SSA/P、23例TSA)、20例TA、24例CRC和24例正常结直肠黏膜组织中MGMT蛋白的表达情况。结果 MGMT基因启动子甲基化状态和MGMT蛋白异常阳性程度在锯齿状病变和对照组中差异均有统计学意义(P<0.05),且两者之间呈负相关;MGMT基因启动子甲基化频率在不同年龄层段相关性比较中两者呈正相关,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论组织中MGMT基因甲基化可能诱导其蛋白表达下调的主要原因,在结直肠"增生性息肉-锯齿状腺瘤-癌"的锯齿状癌变通路中起重要作用。     

巢式甲基化特异性PCR检测p16基因的研究

目的检测p16基因启动子区异常甲基化发生情况,探讨p16基因异常甲基化作为结直肠癌临床辅助诊断分子生物学标志物的可能性.方法应用巢式甲基化特异性PCR技术(Nested-MSP)及甲基化特异性PCR(MSP),检测了结直肠癌患者肿瘤组织中p16基因的异常甲基化情况;比较MSP及Nested-MSP两方法的灵敏度.结果应用MSP方法,Dukes A、B期病人和Dukes C、D期病人p16启动子区甲基化率分别为23.8%和59.4%;应用巢式-MSP方法,甲基化率上升至52.4%和84.4%.结论巢式-MSP的灵敏度明显高于普通的MSP技术,分析患者DNA的p16基因异常甲基化有可能成为辅助结直肠癌诊断的有效方法之一.     

p16基因甲基化在非小细胞肺癌的表达研究

目的：探讨p16基因甲基化在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法：应用甲基化特异性PCR法（MS-PCR）检测45例非小细胞肺癌组织,21例肺良性疾病组织中p16基因甲基化的表达情况。结果：肺良性疾病中p16基因甲基化阳性率为14．3％,低于癌组织中的57．8％,差异有统计学意义（P=0．001）;p16基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性（P〈0．05）。结论：p16基因甲基化的表达情况与非小细胞肺癌的发生、发展有关。     

磷酸酶基因CpG岛甲基化状态及其在膀胱移行细胞癌中的表达

目的探讨磷酸酶基因（PTEN）CpG岛甲基化状态及其在膀胱移行细胞癌（BTCC）中的表达。方法应用甲基化特异性聚合酶链式反应检测32例BTCC和癌旁正常组织标本中PTEN基因启动子区甲基化状态,逆转录聚合酶链式反应和蛋白印迹法检测其mRNA和蛋白表达水平。结果PTEN基因在BTCC组织中甲基化率为65．6％,随着肿瘤分级、分期的增加,甲基化水平逐渐升高,而在正常膀胱组织中未发现甲基化。PTENmRNA和蛋白表达在正常组织和BTCC组织中分别为93．8％、62．5％和15．6％、6．3％,差异有统计学意义（P〈0．01）。在21例启动子异常甲基化的BTCC组织标本中,19例伴有PTEN基因表达缺失或下调,两者之间存在明显负相关（r=--0．564,P〈0．01）。结论PTEN基因启动子区异常甲基化可能导致该基因转录表达失活,使其mRNA和蛋白表达减少甚至缺失,是膀胱癌发生、发展的原因之一。