半边旗提取物对HL—60细胞的细胞毒作用及对细胞周期的影响

目的：研究蕨类植物半边旗提取物对HL－60细胞的体外杀伤作用及对细胞周期的影响。方法：用噻唑蓝（MTT）法测定细胞成活率；用流式细胞术测定细胞周期时相分布。结果：半边旗乙醇总提取物PSE及纯化合物5F、6F及A对HL－60细胞有强烈的杀伤作用，具明显的时间和剂量效应；PSE、5F、6F及A作用HL－60细胞24h后，G0/G1期细胞比例明显下降，S期细胞比例明显升高，G2／M期轻度升高（5F作用组例外）。结论：半边旗提取物对HL－60细胞有强烈的杀伤作用，明显影响细胞周期时相分布。     

半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞周期的影响及体外增效作用

目的：研究半边旗抗肿瘤有效成分６Ｆ对ＨＬ－６０细胞周期的影响及对常用抗肿瘤药的体外增效作用。方法：应用流式细胞光度术（ＦＣＭ）测定细胞周期，应用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定药物对细胞的抑制率。结果：不同浓度６Ｆ作用６小时即可使ＨＬ－６０细胞Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期比例升高，Ｇ１期比例下降，并呈一定的剂量效应关系，当作用到２４小时后，Ｓ期比例进一步升高，但Ｇ２／Ｍ期比例稍有回落。低浓度６Ｆ分别与２－氯代脱氧腺苷（２－ＣＬｄＡｄｏ），顺铂（ＣＤＤＰ），长春新碱（ＶＣＲ），氟尿嘧啶（５ＦＵ）合用可增强它们对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用，ｑ值大于０．８５，与各药有相加或协同作用，６Ｆ对２－ＣｌｄＡｄｏ，ＣＤＤＰ，ＶＣＲ，５ＦＵ的增效倍数分别为１．５８，１．５３，１．５５，１．３８。结论：６Ｆ可明显阻断ＨＬ－６０细胞在Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期；６Ｆ可增强上述药物对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用。已知，２－ＣｌｄＡｄｏ阻断细胞在Ｓ期，ＣＤＤＰ和ＶＣＲ阻断Ｇ２／Ｍ期，５ＦＵ阻断Ｇ１期。鉴于所试药物对细胞周期的影响不同，提示６Ｆ的体外增效作用可能与此有关。     

半边旗提取物6F诱导HL—60细胞凋亡

目的：探讨蕨类植物半边旗提取物6F杀伤HL-60细胞的作用机制。方法：应用倒置显微镜观察细胞形态，DNA琼脂糖凝胶电泳，流式细胞光度术，DNA片段形成率等方法检测细胞凋亡。结果：58-231nmol/L6F作用HL-60细胞12-24h后，呈现典型的凋亡细胞的形态学改变，琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯状条带，流式细胞光度术结果显示有亚倍体（Sub-G1)峰，DNA片段率结果显示6F诱导HL-60细胞凋亡呈时间和剂量效应关系，6F达到29μmol/L时只需作3h即可直接使细胞坏死。结论：6F可诱导HL-60细胞凋亡，药物在一定的浓度范围内是其杀伤HL-60细胞的机制之一。     

半边旗提取物5F对非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长的抑制作用

 目的 研究半边旗提取物5F对非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长的抑制作用。 方法 MTT法检测5F对NCI-H460细胞的生长抑制作用;用PI-Hoechst荧光双染法和TUNEL法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测5F对 DNA含量的影响。 结果 5F抑制NCI-H460细胞的生长,其效果与5F的浓度和作用时间相关,24、48、72h的IC₅₀分别为：21.40、4.52、1.02μg/ml;荧光双染色法显示经5F作用后细胞出现变形,染色质浓缩,产生凋亡小体;细胞被阻滞在G₂/M期。 结论 5F在体外能有效地抑制NCI-H460细胞的生长,其作用可能是通过诱导其凋亡产生的。     

半边旗提取物6F诱导HL-60细胞凋亡

目的 :探讨蕨类植物半边旗提取物 6F杀伤HL 60细胞的作用机制。方法 :应用倒置显微镜观察细胞形态、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度术、DNA片段形成率等方法检测细胞凋亡。结果 :5 8～ 2 31nmol L 6F作用HL 60细胞 12～ 2 4h后 ,呈现典型的凋亡细胞的形态学改变 ,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯状条带 ,流式细胞光度术结果显示有亚倍体 (Sub G1)峰 ,DNA片段率结果显示 6F诱导HL 60细胞凋亡呈时间和剂量效应关系 ,6F达到 2 9μmol L时只需作用 3h即可直接使细胞坏死。 结论 :6F可诱导HL 60细胞凋亡 ,药物在一定的浓度范围内是其杀伤HL 60细胞的机制之一     

半边旗有效化合物对肺癌细胞DNA拓扑异构酶、TPK及c-myc基因的影响

目的：研究半边旗有效化合物６Ｆ和Ａ对肺癌细胞ＤＮＡ拓扑异构酶（ＴＯＰＯ）１和Ⅱ活性的影响：化合物Ａ对细胞胞浆和胞膜酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）活性及癌基因ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响。方法：通过电泳法测定化合物６Ｆ和Ａ对肺癌细胞ＤＮＡ拓扑异构酶（ＴＯＰＯ）Ⅰ、Ⅱ活性的影响：用液体闪烁计数法测定化合物Ａ对酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）活性的影响;流式细胞仪间接荧光检测法测定化合物Ａ对ｃ－ｍｙｃ基因蛋白表达的影响。     

土贝母皂苷对HL-60细胞周期作用的研究

目的：应用土贝母皂苷(下称皂苷)作用于人早幼粒白血病细胞(HL-60)．研究皂苷抗肿瘤作用的分子机制。方法：采用流式细胞术等方法分析细胞周期及凋亡：蛋白印迹免疫法检测细胞凋亡及周期相关基因bcl-2、cdc2和cyclinB1表达的变化。结果：15μmol/L皂苷作用24h可将HL-60细胞阻滞于G2/M期．进而诱导凋亡,流式细胞仪捡测肿瘤细胞出现典型的亚二倍体“凋亡小峰”。凋亡抑制基因bcl-2表达无明显变化．周期蛋白cyclinB1表达降低．而cdc2表达无明显改变。结论：皂苷导致HL-60细胞G2-M期阻滞，进而诱导凋亡；周期阻滞的分子机制与降低cyclinB1蛋白水平有关。而凋亡的诱导与bcl-2表达无关。     

土贝母皂苷对HL-60细胞周期作用的研究

目的:应用土贝母皂苷(下称皂苷)作用于人早幼粒白血病细胞(HL -60),研究皂苷抗肿瘤作用的分子机制。方法:采用流式细胞术等方法分析细胞周期及凋亡;蛋白印迹免疫法检测细胞凋亡及周期相关基因 bcl- 2、cdc2 和 cy clinB1表达的变化。结果:15μmol/L皂苷作用 24 h 可将 HL -60 细胞阻滞于G2/M期,进而诱导凋亡,流式细胞仪检测肿瘤细胞出现典型的亚二倍体“凋亡小峰”。凋亡抑制基因bcl 2表达无明显变化,周期蛋白 cyclinB1 表达降低,而cdc2表达无明显改变。结论:皂苷导致HL- 60细胞 G2/M期阻滞,进而诱导凋亡;周期阻滞的分子机制与降低 cy clinB1蛋白水平有关,而凋亡的诱导与bcl- 2表达无关。     

阿司匹林对胃癌细胞株SGC—7901的细胞毒作用

目的：探讨阿司芬林对胃癌细胞SGC－7901的细胞毒作用。方法：采用MTT法检测阿司匹林对胃癌细胞的抑制率,采用流式细胞仪测定细胞周期,采用琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡。结果：阿匹林对SGC－7901细胞株的抑制作用具有量效和时效依赖关系。可使SGC－7901细胞的S3期细胞比例和G2／M期细胞比例升高。G0／G1期细胞比例下降,并呈一定的剂量效应关系;未见典型的阶梯凋亡条带。结论：阿司匹林对SGC－7901细胞株有细胞毒作用,其细胞毒作用可能与阻止细胞周期有关。关系：未见典型的阶梯状凋亡条带。结论：阿司芬林对SGC－7901细胞株有细胞毒作用,其细胞毒作用可能与阻止细胞周期有关。     

hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞诱导凋亡作用及细胞周期的影响。方法:应用hTERT ASODN封闭HL-60细胞hTERT基因,RT-PCR方法检测目的基因的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分析,TUNEL方法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA梯带。结果:hTERT ASODN作用细胞72h后,hTERT基因表达明显受到抑制(P<0.01)。流式细胞仪检测显示:ASODN组细胞阻滞于G₀/G₁期,S、G₂/M期细胞减少(P<0.05);细胞增殖指数(PI)明显降低(P<0.05);检测出早期凋亡峰。Annexin V/PI检测及TUNEL检测均显示:ASODN组凋亡细胞阳性率明显高于SODN组(P<0.01)。琼脂糖凝胶电泳显示:ASODN组出现凋亡DNA梯带。结论:hTERT ASODN能够封闭目的基因表达,阻滞HL-60细胞于G₀/G₁期,并诱导细胞凋亡,对治疗白血病具有潜在应用价值。     

土贝母苷甲对人HL-60髓性白血病细胞周期与凋亡的影响

目的:研究土贝母苷甲(下称苷甲)对人髓性白血病细胞HL-60的细胞周期及凋亡的影响。方法:采用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测苷甲对HL-60细胞生长的影响;形态学方法(荧光显微镜和透射电镜)、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳观察和分析在苷甲作用下HL-60细胞形态、DNA含量的变化和DNA断裂的情况;蛋白印迹免疫法检测细胞凋亡及周期相关基因bcl-2、cyclinB1表达的变化。结果:苷甲显著抑制HL-60细胞的生长,其抑制效果与浓度及时间呈依赖关系。15μmol·L-1苷甲作用24小时可将HL-60细胞阻滞于G2/M期,进而诱导其凋亡,凋亡细胞具有典型的凋亡形态特征,琼脂糖凝胶电泳可见明显的梯状区带。bcl-2表达无明显变化,cyclinB1表达降低。结论:苷甲对细胞周期起阻滞作用,并诱导其凋亡,其作用机制可能与cyclinB1表达降低有关。     

Cell Cycle-Independent Down-Regulation of BCL-2 Protein Expression in Differentiating HL-60 Cells

To understand the relationship between bcl-2 protein expression and the cell cycle during the processes of differentiation, we examined bcl-2 protein levels expressed during cell cycle phases in differentiating HL-60 human leukemia cells by using a two-color flow cytometric method. In exponentially proliferating HL-60 cells bcl-2 protein was constitutively expressed throughout the cell cycle phases, but a small population of G0/G1 cells expressed decreased levels of protein as compared with other cell cycle phases. HL-60 cells can be induced to differentiate to granulocytic pathway by retinoic acid or dimethylsulfoxide, and to monocytic/macrophagic pathway by 1, 25 dihydroxyvitamin D3 or 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate. During treatment with any of these inducing agents, bcl-2 protein expression was time-dependently down-regulated after 24h. A two-color flow cytometric analysis revealed that this down-regulation occurred throughout cell cycle phases, indicating that bcl-2 protein expression was down-regulated in cell cycle-independent manner during induction of differentiation in HL-60 cells. To our knowledge, this is the first demonstration suggesting that the regulation of bcl-2 protein expression is not related to the cell cycle during induction of differentiation in HL-60 cells.     

姜黄素对人舌鳞癌Tca8113细胞周期的影响

目的探讨不同浓度姜黄素对人舌鳞癌Tca8113细胞周期分布的影响。方法将Tca8113细胞培养于含有不同浓度姜黄素(0、20、40μmol/L)的RPM I-1640培养基中进行培养至规定时间终止培养,流式细胞仪分析细胞周期变化。结果随着姜黄素浓度的升高与作用时间的增加,其对细胞抑制作用明显增强,细胞周期中G0/G1期细胞比例逐渐增加,由46.20%上升至64.80%,S期细胞比例由53.10%下降至31.40%,不同浓度、不同时间对细胞G0/G1期的阻滞作用比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素能明显改变Tca8113的细胞周期分布,有明显G0/G1期阻滞作用,并有量-效、时-效关系。     

长春新碱对鼻咽癌细胞增殖和周期的影响

[目的]探讨长春新碱(VCR)对鼻咽癌CNE鄄2Z细胞增殖和周期的影响。[方法]MTT法检测增殖抑制率和IC50,流式细胞术分析细胞周期。[结果]不同浓度的VCR分别处理细胞24h、48h、72h时,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增加,其IC50分别为(2.01±0.26)、(1.59±0.23)、(0.92±0.11)μg/ml,各IC50间的差异有非常显著性意义(P<0.01)。0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/mlVCR分别处理细胞6h、12h、24h时,G0/G1期细胞明显下降,G2/M期细胞明显升高,随时间的延长变化更明显(P<0.01)。[结论]VCR对CNE鄄2Z细胞具有增殖抑制作用,该抑制作用具有剂量和时间依赖性;阻滞细胞于G2/M期,此阻滞作用具有时间依赖性;一定剂量的VCR可能通过阻滞CNE鄄2Z于G2/M期而抑制其增殖。     

Effects of Methylseleninic Acid on the Proliferation and Cell Cycle in Human High Metastatic Large Cell Lung Cancer Cell Line L9981 and Its Molecular Mechanism

Background and Objective Lung cancer is the rst killer of human being in the whole world. Recently, although many treatment strategies have been developed, the anti-cancer effects have     

p53基因对人胚肺成纤维细胞周期影响的研究

背景与目的:研究野生型和179位残基突变型p53基因在HELF细胞周期调控中的作用.探讨p53基因的179位残基突变对细胞生长的影响.材料与方法:用野生型p53(pcDNA3-wtp53)和179位残基突变的突变型p53(pcDNA3-mtp53)转染HELF细胞,观察细胞生长情况,绘制细胞生长曲线;用流式细胞仪分析细胞周期;用RT-PCR和Western blotting方法检测p53基因转染后HELF细胞周期相关基因mRNA和蛋白的表达.结果:野生型p53表达的上调使HELF细胞周期阻滞于G1期,细胞体积减小,并下调cyclin D3、cyclin E、Cdk2和Cdk4的表达,同时上调p21的表达.而179位残基突变的突变型p53表达的上调则促进细胞周期从G1期到S期的转换,同时细胞体积增大,上调cyclin A和Cdk4的表达.结论:p53的179位残基突变对于HELF细胞cyclin A和Cdk4的表达有诱导作用,并可能借此促进细胞周期进程.     

Cell Cycle Assessment of Adoptive Transferred Lymphokine Activated Killer Cells

The use of lymphokine activated killer (LAK) cells for adoptivetransfer therapy has been reported from number of clinical trials.To our knowledge, however, there has been no report concerningthe cell cycle progression of LAK cells. Thus, for the presentstudy we have attempted to examine the LAK cell cycle eitherbefore or after transfer. In vitro and in vivo analyses of LAKcells labeled with bromodeoxyuridine (BrdU) were carried outusing two-parameter flow cytometries of their nuclear stainingusing fluorescein isothiocyanate(FITC)- conjugated anti-BrdUantibody and propidium iodide (PI). The in vitro growth of BrdU-positivecells showed the cells to divide once in the S phase, continueto the G₂-M phase and return to the G₀-G₁ phase with a similarpattern after 48 or 72 h culture. They formed a definite subpopulationand were of phenotypes, thy-1.2 (+), Lyt-1.1 ( – ), Lyt-2.1(+), L3T4 ( – ) and AGM1 (+). The percentage of BrdU-positivecells decreased significantly (P< 0.05) when treated withcomplement plus anti-thy-1.2, anti-Lyt-2.1 or anti-AGM1 anti-bodies, demonstrating BrdU-labeled LAK cells to have the samephenotype as control LAK cells. As in vitro, the in vito cellcycle of LAK cells 48 and 72 h after transfer had a similarpattern, and the LAK cells also continued on to the S phaseafter the first division. The in vivo growth of the LAK cellstreated with interleukin-2 (IL-2) was promoted 24 and 48 h aftertransfer. In conclusion, the present study showed LAK cellsto be capable of dividing following transfer and to keep theirown phenotypic characteristics; also, that treatment with IL-2may promote their division. Adoptive transfer therapy seemsto be a viable therapeutic method.