硼替佐米联合NK细胞对骨髓瘤细胞株KM-3作用的影响

目的:探讨硼替佐米联合自然杀伤(NK)细胞杀伤及诱导多发性骨髓瘤细胞株KM-3凋亡的作用.方法:WST-1法观察加入硼替佐米后,NK细胞对KM-3细胞杀伤作用的变化;Annexin-V、PI及CD45三重免疫荧光标记,流式细胞术检测Annexin-V+/PI凋亡细胞及线粒体跨膜电位的变化.结果:效靶比为5:1、10:1和20:1的NK细胞联合5 nmol/L硼替佐米处理后12、24和48 h,均显著杀伤KM-3细胞(P=0.003),杀伤率的升高呈时间依赖性(P=0.002),且显著高于NK细胞单独处理,P<0.01.效靶比为5:1、10:1和20:1的NK细胞联合5 nmol/L硼替佐米处理,Annexin-V+/PI-细胞比例均增加(P=0.003),呈时间依赖性(P=0.002),且高于NK细胞单独处理,P<0.01.效靶比为5:1、10:1和20:1的NK细胞联合5 nmol/L硼替佐米处理后6、12和24 h,KM-3细胞线粒体跨膜电位明显降低(P=0.025),呈时间依赖性(P=0.022),且低于NK细胞单独处理,P<0.05.结论:硼替佐米联合NK细胞具有更显著地杀伤并诱导KM-3细胞凋亡的作用,提示硼替佐米与NK细胞具有协同作用.     

cAMP信号通路与多发性骨髓瘤

多发性骨髓瘤（MM）细胞克隆性增殖涉及细胞内多个信号通路.环腺苷酸（cAMP）信号通路作为一种重要的细胞内信息传递系统,与包括骨髓瘤细胞在内的多种恶性淋巴细胞增殖和凋亡的失调相关.靶向调变cAMP信号通路可以诱导包括骨髓瘤细胞在内的多种恶性淋巴细胞增殖阻滞和凋亡,其机制涉及线粒体介导细胞凋亡和cAMP调控多种细胞内递质.对cAMP介导骨髓瘤细胞凋亡深入研究分析,将为临床治疗MM提供可能途径和潜在靶点.     

2-甲氧基雌二醇对多发性骨髓瘤患者骨髓细胞的影响

目的:探讨2-甲氧基雌二醇(2ME2)对多发性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞及造血前体细胞凋亡的影响。方法:采用DNA片断原位末端标记(TUNEL法)检测多发性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞及造血前体细胞凋亡。结果:14例多发性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞经1、4、16μmol/L2-甲氧基雌二醇作用48小时后,凋亡率分别为(10.5±1.2)%、(21.2±2.3)%、(36.8±3.6)%,呈现剂量依赖性。经统计学分析,各组之间及与空白对照组相比,差异显著(P<0.05)。骨髓中粒系、红系、淋巴系细胞出现凋亡较少,经统计学分析,各组之间及与空白对照组相比,无明显差异(P>0.05)。相同的2ME2浓度条件下,骨髓中粒系、红系、淋巴系细胞凋亡率与骨髓瘤细胞组凋亡率相比,差异显著(P<0.05)。结论:2-甲氧基雌二醇可选择性诱导骨髓瘤患者骨髓中骨髓瘤细胞凋亡,对骨髓瘤患者骨髓中粒系、红系、淋巴系细胞影响很小。     

狗舌草提取物对多发性骨髓瘤U266细胞株的作用

 目的　探讨狗舌草提取物对多发性骨髓瘤U266细胞株的细胞毒作用及其机制。方法　U266细胞株与狗舌草提取物共同培养,用CCK-8试剂检测细胞毒作用,用流式细胞术（FCM）对细胞周期及凋亡进行检测。结果　狗舌草提取物对U266细胞有细胞毒作用,半数抑制质量浓度约为3.2 μg／ml;狗舌草总提取物影响U266细胞周期,当药物质量浓度为1.25、2.5、5、10 mg／L时G0／G1期细胞减少[（34.12±0.49）%、（38.06±0.63）%、（27.46±0.61）%、（15.91±0.32）%],S期[（4.98±0.50）%、（4.01±0.22）%、（4.16±0.15）%、（5.04±0.12）%]、G2／M期[（50.05±1.12）%、（51.27±0.71）%、（51.84±0.73）%、（55.11±0.25）%]细胞增加;凋亡细胞增加;用Annexin V／PI染色FCM检测,均显示细胞凋亡与狗舌草提取物有剂量依赖关系。结论　狗舌草提取物对U266细胞有体外细胞毒作用,其作用机制部分是诱导细胞凋亡。     

As2O3对多发性骨髓瘤细胞的细胞毒作用的机制研究

背景与目的:多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是恶性浆细胞疾病,目前仍难以治愈;已有研究证明三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)在体外能够抑制骨髓瘤细胞增殖并诱导其凋亡.本研究拟探讨As2O3对多发性骨髓瘤细胞的可能作用机制.方法:采用MTr法检测As2O3对5株骨髓瘤细胞U266、SKO-007、LP-1、HS-Sultan和KM3的抑制作用,求出其IC50,同时研究维生素K3(vitamine K3,VK3)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)对As2O3的协同或拮抗作用;利用光学比色法测定不同浓度As2O3作用后的5株骨髓瘤细胞以及As2O3与VK3、NAC或外源性GSH共同作用后的U266细胞的GSH含量,对细胞GSH含量与IC50进行相关性分析.结果:As2O3对5株骨髓瘤细胞均有增殖抑制作用,但其敏感性不同,细胞内GSH含量与其IC50正相关(r=0.87,P＜0.05);氧化剂VK3与As2O3有明显协同作用,抗氧化剂NAC和GSH对As2O3具有拮抗作用.结论:As2O3可能是通过与细胞内的含巯基化合物结合,降低细胞内GSH含量,从而诱导骨髓瘤细胞凋亡.     

DC-CIK 治疗难治性多发性骨髓瘤的临床研究

目的探讨树突状细胞(DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗难治性多发性骨髓瘤的疗效和安全性。方法 41例难治性多发性骨髓瘤患者,根据患者意愿分为22例实验组和19例对照组。将实验组自体DC-CIK细胞进行体外扩增,再过继回输进行治疗。对照组患者接受维持治疗。对过继治疗前后患者的免疫指标以及临床疗效进行对比和观察。结果诱导后CD表面CD1a、CD83、CD86和HLA-DR分子阳性率均较诱导前显著提高,差异有统计学意义(P<0.01)。诱导后DC-CIK表面CD3、CD8和CD56阳性率均较CIK有显著提高,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗3个月后,实验组患者QOL、Ag-NOR和外周血IL-12等指标均较对照组有显著优化,差异有统计学意义(P<0.05)。3个月治疗后,实验组患者肾功能、24 h尿液轻链、血清M蛋白、β2-M、骨髓瘤细胞比例均相较对照组有显著改善,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DC-CIK过继治疗难治性MM具有较好的临床疗效,可帮助患者带瘤长期生存,获得较大受益。     

硼替佐米、三氧化二砷对多发性骨髓瘤细胞株KM_3细胞的抑制作用(英文)

Objective:The aim of our study was to investigate the effect of bortezomib in combination with arsenic trioxide(As2O3) on the proliferation and apoptosis in the human multiple myeloma cell line KM3.Methods:KM3 cells were cultured with different concentrations of bortezomib, As2O3 alone or in combination for different times.Cell proliferation was analyzed by MTT assay, and the IC50 was calculated.Cell morphology was observed under the light microscope(using Wright-Giemsa stain) and electric microscope.Agaros...     

骨髓瘤RPMI 8226细胞体外逃逸NK细胞免疫杀伤机制的初步研究

目的:探讨骨髓瘤细胞RPMI 8266逃逸NK细胞免疫杀伤的机制。方法:流式细胞仪检测K562和8266细胞表面MICA/B、ULBP1～3和HLA-Ⅰ类分子的表达。4hLDH释放法测定效靶比20∶1时阻断前后NK细胞对2种细胞杀伤活性变化。观察效靶比20∶1时NK细胞对药物处理后RPMI 8226细胞杀伤活性变化、RPMI 8226细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子的表达及NK细胞对RPMI 8266细胞的克隆形成率的影响。结果:K562细胞高表达MICA/B和ULBP 1～3分子;RPMI 8266细胞表达HLA-Ⅰ类分子,2株细胞NKG2D配体表达差异有统计学意义,P<0.001。单抗分别阻断MICA/B、ULBP 1～3分子后,效靶比为20∶1时NK细胞对K562细胞的杀伤活性明显降低,P值均<0.05;对RPMI 8266细胞的杀伤活性基本无变化,P值均>0.05。抗W6/32单抗封闭8266细胞表面HLA-Ⅰ类分子后,NK细胞对K562细胞的杀伤活性无上升(P=0.721),而对RPMI 8266细胞的杀伤活性上升,P=0.000。1/2IC50的三氧化二砷处理后RPMI8226细胞ULBP...     

来那度胺治疗多发性骨髓瘤的效果及对患者调节性T细胞和自然杀伤细胞水平的影响

目的探讨来那度胺联合硼替佐米、地塞米松(RVd)方案治疗新诊断的多发性骨髓瘤(NDMM)患者的临床效果及对调节性T细胞(Treg细胞)和自然杀伤(NK)细胞水平的影响。方法选择2019年9月至2022年5月蚌埠医学院第二附属医院收治的38例NDMM患者进行前瞻性研究, 依据随机数字表法分为对照组(18例)和观察组(20例)。对照组给予硼替佐米+表柔比星+地塞米松(VAd)方案治疗, 观察组给予RVd方案治疗, 比较两组疗效及安全性。采用流式细胞术检测两组治疗前后Treg细胞(CD4+ CD25+ FOXP3+)及NK细胞(CD3- CD56+ CD16+)水平, 并进行比较。结果 4个疗程治疗后, 观察组患者客观缓解率(ORR)为95.0%(19/20), 高于对照组的77.8%(14/18), 差异有统计学意义(P=0.016)。治疗前, 两组患者Treg细胞和NK细胞水平差异均无统计学意义(P值分别为0.381、0.650)。治疗后, 对照组患者Treg细胞水平由治疗前的(1.5±0.5)%提高至(4.7±1.3)%(P=0.008), 观察组患者Treg细胞水平由治疗前的(1.4...     

伏立诺他与左旋苯丙氨酸氮芥对人类多发性骨髓瘤细胞的协同作用

 目的　观察体外伏立诺他和左旋苯丙氨酸氮芥联合对人类多发性骨髓瘤细胞株U266、KM3的抗瘤作用。方法　应用MTT法分别测定伏立诺他和左旋苯丙氨酸氮芥不同浓度对骨髓瘤细胞株U266、KM3的抗瘤作用,计算两药的IC50值;应用MTT法测定固定一种药物浓度联合不同浓度另一药物时对U266、KM3的抑制作用,计算药物联合指数（CI）,判断药物相互作用。 结果　伏立诺他单药对U266细胞的IC50值介于5.0～7.5 μmol／L,对KM 3细胞的IC50值介于2.5～5.0 μmol／L;左旋苯丙氨酸氮芥单药杀伤U266细胞的IC50值介于40～60 μmol／L,杀伤KM3细胞的IC50值介于60～80 μmol／L。固定伏立诺他浓度（U266细胞中为1.25 μmol／L,KM 3细胞中浓度为1.0 μmol／L）,在U266细胞中左旋苯丙氨酸氮芥浓度为20、40、60、80 μmol／L时均CI＜0.9,表现为协同作用,在KM3细胞中左旋苯丙氨酸氮芥浓度为40、60、80、100 μmol／L时均CI＜0.9,表现为协同作用;固定左旋苯丙氨酸氮芥浓度（U266细胞中为10 μmol／L,KM3细胞中浓度为20 μmol／L）,在U266细胞中伏立诺他浓度为2.5、5.0、7.5 μmol／L时均CI＜0.9,表现为协同作用,在KM3细胞中伏立诺他浓度为1.0、2.5、5.0 μmol／L时均CI＜0.9,表现为协同作用;当伏立诺他浓度为7.5 μmol／L联合左旋苯丙氨酸氮芥20 μmol／L时呈现相加作用（CI＝0.93）。结论　体外伏立诺他单药对两种多发性骨髓瘤细胞株有明显的杀伤作用,与左旋苯丙氨酸氮芥有协同抗骨髓瘤细胞作用。     

多发性骨髓瘤细胞株PRIM8226侧群细胞分选及其生物学特性的研究

目的 检测和分选多发性骨髓瘤（MM）细胞株PRIM8226中的侧群细胞（SP细胞）并鉴定其生物学特性.方法 以Hoechst33342/碘化丙啶（PI）荧光染料双染,维拉帕米拮抗对照,应用流式细胞术荧光激活分选法检测并分选MM细胞株PRIM8226 SP细胞,并通过细胞生长曲线、细胞周期、免疫表型、集落形成实验、RT-PCR检测干细胞特异标志物mRNA表达量、裸鼠体内成瘤实验等对SP细胞的生物学特性进行初步探讨.结果 MM细胞株PRIM8226 SP细胞含量为（1.78±0.89）％,采用流式细胞术成功分选SP细胞.生长曲线显示：SP细胞分选初期生长较主群细胞（MP细胞）缓慢,进入稳定增长期后增殖能力与MP细胞差异无统计学意义（P＞0.05）.细胞周期分析显示：SP细胞与MP细胞相比,周期多处于Go/G1期[（44.34±3.09）％、（28.49±1.97）％,P＜0.05],较少的细胞处于S期[（38.83±3.69）％、（51.49±4.62）％,P＜ 0.05].在免疫表型研究中,观察到SP和MP细胞的CD138、CD38表达分别为（78.5±8.5）％、（82.0±4.0）％和（72.3±15.7）％、（84.3±11.9）％,差异均无统计学意义（均P＞0.05）.MM细胞株PRIM8226 SP细胞的单细胞克隆直径、克隆形成数、克隆形成率均高于MP细胞[0.280±0.016和0.118±0.019、1 722±127和358±14、（86.1±3.46）％和（17.9±1.88）％,P＜0.05].RT-PCR显示SP细胞干细胞标志性基因的表达高于MP细胞：c-myc[（29.90±3.73）％、（16.84±2.35）％]、KIF4[（29.97±2.89）％、（19.06±1.23）％]、SOX2[（40.00±4.58）％、（16.62±2.09）％]、OCT4[（32.96±1.56）％、（23.27±0.92）％]（均P＜0.05）.裸鼠体内成瘤实验显示SP细胞成瘤能力显著高于MP细胞（最低成瘤数量分别为5×103、5×105个）.结论 MM细胞株PRIM8226的SP细胞在静止期细胞比例、集落形成能力、干细胞标记c-myc、KIF4、SOX2、OCT4基因表达量、体内成瘤能力上与MP细胞差异均有统计学意义,而SP细胞和MP?     

硼替佐米对人类多发性骨髓瘤细胞系U266细胞抗凋亡蛋白HSP-90的影响

 目的　探讨硼替佐米对人类多发性骨髓瘤（MM）细胞系U266细胞抗凋亡蛋白HSP-90的影响。方法　采用RT-PCR技术研究经不同浓度的硼替佐米作用于U266细胞4 h后其内HSP-90 mRNA表达情况的变化。结果　随着硼替佐米浓度的增加,其MM细胞中HSP-90α的mRNA表达量逐渐增加。由低浓度组到高浓度组（0、50、100、150、200 nmol／L）所对应的HSP-90α的灰度值分别为0.343±0.017、0.505±0.039、0.640±0.029、0.760±0.059、0.963±0.054;两两组间比较差异有统计学意义（P＜0.05 ）。浓度由低到高组对应HSP-90β的灰度值分别为0.610±0.022、0.765±0.050、0.645±0.052、0.770±0.059、0.790±0.027,而HSP-90β的灰度值 0 nmol／L组与50、150、200 nmol／L组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。50、100 nmol／L浓度组对应的HSP-90β的灰度值不同（P＜0.05）。100 nmol／L组与150、200 nmol／L组对应的HSP-90β的灰度值差异有统计学意义（P＜0.05）。HSP-90β的mRNA表达量增加趋势不很明显,但总体差异仍具统计学意义（P＜0.05）。结论　硼替佐米可以上调HSP-90的分子水平的表达,并且以上调HSP-90α的表达为主。     

多发性骨髓瘤干细胞研究进展

肿瘤干细胞具有高度增殖与自我更新及多向分化的潜能,与肿瘤的复发和难以根治密切相关.在多发性骨髓瘤中亦存在这样一小部分骨髓瘤干细胞,积极探索其起源、免疫分型、信号转导机制、耐药性及其他生物学特性对多发性骨髓瘤的根治有重要意义.     

Clinical stage-depending decrease of NK cell activity in multiple myeloma patients

Natural killer cells, as an important subpopulation of cells of the innate immune system have an essential role in defense of the rise and spread of malignancy. These cells have a CD3-CD16 + CD56+ phenotype and they are functionally defined by their ability to lyses tumor cells. We here show that decrease of NK cell activity was significantly associated with advanced clinical stage, increased lactate dehydrogenase (LDH), percentage infiltration of bone marrow with plasma cells, and β-2 microglobulin. The patients with higher NK cell activity at presentation after receiving VAD protocol have better cumulative survival in comparison with those with low NK cell activity.     

硼替佐米联合毛喉素诱导硼替佐米耐药骨髓瘤细胞凋亡的实验研究

背景与目的：硼替佐米作为蛋白酶体抑制剂已成为新诊断和复发多发性骨髓瘤患者临床治疗的主要药物,但仍有部分患者对硼替佐米产生耐药而影响其长期生存。近年来研究发现,提高细胞内环腺苷酸浓度可以诱导骨髓瘤细胞凋亡并延缓其生长,成为骨髓瘤治疗新途径。该研究通过观察硼替佐米联合腺苷酸环化酶激动剂毛喉素(forskolin)对硼替佐米耐药骨髓瘤细胞的作用,探究克服骨髓瘤耐药的可能途径及其机制。方法：以硼替佐米耐药骨髓瘤细胞株H929-R和原代细胞为模型,通过观察细胞生长、形态、凋亡相关基因的改变来研究硼替佐米、毛喉素单独或联合处理对硼替佐米耐药细胞增殖及凋亡的影响;并应用Rh123/PI双染法检测药物处理前后细胞内线粒体跨膜电位的变化;同时采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测线粒体凋亡相关基因转录水平及抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1的蛋白水平的改变。结果：硼替佐米(20 nmol/L)与毛喉素(50 nmol/L)能够协同诱导硼替佐米耐药细胞凋亡。进一步研究发现,毛喉素可协同硼替佐米促使耐药细胞内线粒体跨膜电位下降并下调其Bcl-2和Mcl-1蛋白的表达。结论：毛喉素联合硼替佐米能够诱导硼替佐米耐药骨髓瘤细胞凋亡。     

茶多酚诱导人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的凋亡及其作用机制

目的:研究茶多酚对人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞生长及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:通过MTT法、瑞氏染色法和FCM法分别检测不同浓度的茶多酚对RPMI 8226细胞增殖和凋亡的影响;FCM法检测对细胞线粒体膜电位的影响;蛋白质印迹法检测△caspase-3片段和凋亡相关蛋白bc1-2的表达;ELISA法检测对RPMI 8226细胞分泌细胞因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平的影响.结果:与对照组相比,茶多酚浓度129.6和259.1 μmol/L处理RPMI 8226细胞1～3 d后均能明显抑制细胞的增殖,且呈时间-剂量相关性;统计显示,24 h时的半数细胞抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值为165.7μmol/L.茶多酚(129.6μmol/L)作用24 h后,RPMI 8226细胞出现典型的凋亡形态学改变;茶多酚(129.6和259.1 μmol/L)作用24 h后,RPMI 8226细胞凋亡率分别为(24.6±2.3)％和(43.5±3.9)％,与对照组比较差异均有统计学意义;细胞的线粒体膜电位降低,活性△caspase-3片段产生,bc1-2蛋白表达水平下降,IL-6分泌水平降低.结论:茶多酚能抑制RPMI 8226细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与产生活性△caspase-3片段,抑制bc1-2蛋白表达,降低细胞分泌IL-6水平相关.