热激蛋白在乳腺癌细胞中的表达及其意义

目的：探讨热激蛋白（heat shock protein，HSP）90、70、27在高转移性乳腺癌细胞株MDA—MB-435s和MDA—MB-231中的表达情况及其意义。方法：MTT法检测HSP90抑制剂geldanamycin（GA）对2株乳腺癌细胞株粘附基质胶能力的影响；侵袭小室重组人工基底膜侵袭实验检测HSP90抑制剂GA对2株细胞的侵袭能力的影响；RT—PCR和Western blot实验检测2株细胞中HSP90、HSP70和HSP27mRNA及其蛋白质水平的表达差异。结果：GA能够明显抑制MDA—MB435s和MDA-MB-231细胞粘附基质胶的能力（P〈0．01）；2株高转移性乳腺癌细胞株的侵袭能力比较无显著性差异（P〉0．05），GA能够明显抑制2株乳腺癌细胞的侵袭能力，与对照组相比，MDA—MB-231细胞侵袭能力下降（P〈0．05），MDA-MB-435s细胞的侵袭能力下降更为明显（P〈0．01）。MDA—MB-435s细胞中HSP90蛋白质和HSP90αmRNA表达水平都明显高于MDA-MB-231细胞（P〈0．01），MDA-MB-435s和MDA—MB-231细胞中HSP90βmRNA表达水平没有显著差异（P〉0．05）；MDA-MB-231细胞中HSP27的mRNA和蛋白质的表达水平均明显高于MDA—MB-435s细胞（P〈0．01）；MDA-MB-435s细胞中HSP70蛋白质的表达水平与MDA-MB-231细胞没有显著性差异（P〉0．05），HSP70mRNA表达水平低于MDA—MB-231细胞（P〈0．05）。结论：HSP表达特性与乳腺癌细胞的粘附、侵袭能力相关；MDA—MB-435s细胞中HSP90较高水平表达，MDA-MB-231细胞中HSP27表达水平较高。     

CXCL12 对人乳腺癌细胞株 MDA - MB - 435 失巢凋亡的研究

目的：研究趋化因子CXCL12对人乳腺癌高转移细胞系MDA—MB-435失巢凋亡的影响。方法：实验组培养基中加入终浓度为50ng／ml的CXCL12,对照组为无CXCLl2的DMEM培养基。两组细胞悬浮培养,建立人乳腺癌高转移细胞系MDA—MB-435失巢凋亡抵抗细胞模型。MTr检测CXCLl2对于失巢凋亡抵抗MDA—MB-435细胞系生长的影响,流式细胞仪检测两组细胞的凋亡情况,Transwe11实验检测细胞侵袭能力改变。结果：CXCLl2对于失巢凋亡抵抗MDA—MB-435细胞系在形态学方面与对照组相比无特异性改变。CXCLl2作用组失巢凋亡抵抗细胞增殖能力低于对照组,凋亡率增加,侵袭能力增加,穿过膜细胞数明显高于对照组（28±3．0VS15±2．4,P〈0．05）。结论：在人乳腺癌高转移细胞系MDA—MB-435失巢凋亡过程中,CXCL12能在一定程度上抑制失巢凋亡抵抗细胞的生长,但却能增加存活肿瘤细胞的侵袭性。     

药物诱导MDA-MB-435细胞表达ER α及其对内分泌治疗的敏感性

目的通过药物诱导雌激素受体（ER）阴性的乳腺癌细胞株MDA—MB-435恢复ER的表达,探讨其对内分泌治疗的敏感性。方法采用HDAC抑制剂古曲抑菌素（TSA）联合DNMT抑制剂5-AZA-CdR（AZA）作用于MDA-MB-435细胞;以RT-PCR方法检测细胞ERα及其下游基因产物孕激素受体（PR）、雌激素调节蛋白（pS2）的mRNA水平;以水溶性四氮唑盐-8（WST-8）方法检测诱导前后细胞增殖水平。将药物诱导后的MDA—MB-435细胞接种裸小鼠,观察其在体内增殖能力的改变。结果药物诱导后,MDA-MB-435细胞恢复ERα表达,ERα下游基因产物PR和psz的表达增加。2．5μmol／LAZA和100ng／ml TSA诱导MDA-MB-435细胞后,其ERα表达最强。诱导后的MDA—MB-435细胞在不同浓度的雌激素中表现出不同的增殖能力。与未经诱导的细胞相比,诱导后的MDA—MB-435细胞增殖能力下降（P〈0．01）;经诱导的细胞联合4-羟基三苯氧胺后,其增殖能力进一步下降（P〈0．01）;而单用4-羟基三苯氧胺不能抑制未经诱导的细胞的增殖（P〉0．05）。在裸鼠体内,诱导处理后的MDA—MB-435移植瘤较未经处理的细胞增殖能力下降（P〈0．01）。去除雌激素后,诱导后肿瘤细胞在体内增殖能力进一步受到抑制（P〈0．01）。结论通过TSA和AZA联合诱导作用,MDA-MB-435细胞株中沉默的ER恢复表达ERα。并且该ERα是具有功能的。经过诱导的细胞株在体内及体外对雌激素均恢复反应。联合应用HDAC抑制剂以及DNMTI抑制剂可以恢复乳腺癌细胞MDA—MB-435对内分泌治疗的敏感性,这为ER阴性的乳腺癌患者治疗开辟一条新的思路,具有重要的临床意义。     

4-氨基吡啶对多西紫杉醇抗人乳腺癌细胞作用影响的实验研究

目的：探讨选择性钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶（4-AP）对多西紫杉醇（docetaxel，DOC）抗人乳腺癌细胞MDA-MB-43—5S增殖、凋亡和周期的影响。方法：MTT比色法分析DOC、4-AP单独应用以及两药联合应用对MDA—MB-435S增殖的影响；流式细胞术Annexin V—FITC／PI双染法和PI单染法检测两种药物对MDA—MB-435S凋亡和周期的影响。结果：DOC和4-AP单独应用均能抑制MDA—MB-435S的增殖；5mmol／L的4-AP并用25μmol／L的DOC对MDA—MB-435S达最大抑制率的时间明显缩短，DOC和4-AP对MDA—MB-435S的增殖抑制有相加或协同作用，并呈剂量-时间依赖性。2和5μmol／L的DOC单独作用24h，MDA—MB-435S产生凋亡并不明显，当与5mmol／L的4-AP联合应用后，细胞早期凋亡和死亡明显增加。单用DOC可使MDA—MB-435S阻断在G2／M期，单用4-AP可使MDA—MB-435S阻断在G0／G1期，两药联合应用可使MDA—MB-435S阻断在G2／M期。结论：DOC和4-AP分别在G2／M期和G0／G1期抑制MDA—MB-435S的增殖，4-AP通过促进DOC诱导细胞凋亡从而抑制MDA—MB-435S的增殖。     

β2肾上腺素能受体在乳腺癌细胞中的表达及对侵袭能力的影响

目的：探讨β2肾上腺素能受体（β2 adrenergic receptor，β2-AR）在人乳腺癌细胞株中的表达以及对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法：RT—PCR法检测10种乳腺癌细胞株及正常乳腺上皮细胞中β2-AR的表达；用脂质体转染法将卢2“尺基因转入乳腺癌细胞MDA—MB-435；用细胞侵袭实验（Transwell）检测亲本细胞及转染细胞的侵袭能力。结果：β2-AR在正常乳腺上皮细胞HBL-100及乳腺癌细胞BT-549、HCC1937、BCaP-37中表达；在乳腺癌细胞MDA—MB-435、MDA—MB-435HM、MCF-7、T47D中基本无表达；在乳腺癌细胞MDA—MB-231、MDA-MB-231HM、MDA—MB-468中高表达。细胞侵袭实验证实表达B2-AR蛋白的MDA—MB-231及稳定转染卢2-AR基因的细胞克隆MDA—MB-435β2-AR可由β2-AR受体激动剂去甲肾上腺素趋化而定向迁移及侵袭。结论：β2-AR在多种乳腺癌细胞株中表达；转染β2-AR可使乳腺癌细胞的侵袭能力增强。     

ATP1B1协同阿霉素抑制乳腺癌细胞MCF-7生长及逆转耐药的作用

背景与目的：Na^＋-K^＋ATP酶（Na^＋-K^＋泵）是细胞能量转换的重要系统,可能与肿瘤转移有关,其B1亚基基因ATP1B1在高分化的肿瘤细胞中表达高,低分化细胞中表达低。本实验研究ATP1B1协同阿霉素（ADM）在人乳腺癌细胞株MCF-7和其耐药株MCF-7／ADM中的作用以及其逆转耐药效应的影响。方法：将重组质粒PEGFP—ATP1B1转染到MCF-7和MCF-7／ADM细胞,MTT法检测质粒及其B1亚基因沉默后ADM抑瘤效应,荧光显微镜和流式细胞术分析细胞内药物荧光强度,定磷法检测ATP酶活性,RT—PCR和real-timePCR检测MDR1 mRNA的表达,Western blot法检测P—gP蛋白的表达。结果：转染PEGFP-ATP1B1的MCF-7和MCF-7／ADM细胞对ADM的敏感性相对阴性对照ADM—C3组（pEGFP—C3空载体转染）和空白对照ADM—RPMI-1640组均明显增加,且ADM各浓度梯度ADM—ATP1B1组与ADM—RPMI-1640组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;而B1亚基沉默后阴性对照组ADM-shNC,相对实验组ADM—shATP1B1和空白对照ADM—RPMI-1640组细胞对ADM的敏感性明显偏高。荧光显微镜下观察ADM-ATP1B1组MCF-7和MCF-7／ADM细胞ADM红色荧光均高于对照组。流式细胞术显示,ADM—ATP1B1组MCF-7细胞中ADM平均荧光强度较对照组高（P〈0．05）,ADM—ATPlBl组MCF-7／ADM细胞中ADM平均荧光强度高于对照组（P〈0．05）。MCF-7和MCF-7／ADM细胞的ADM-ATP1B1组ATP酶活性均高于ADM—RPMI-1640组（P〈0．05）．而ADM-C3组与ADM-RPMI-1640组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。RT—PCR和real-time PCR检测结果显示,MCF-7／ADM细胞ADM—ATP1B1组MDR1 mRNA相对表达水平与两对照组相比差异均无统计学意义（P〉0．05）。Western blot显示P-gp蛋白的表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：ATP1B1对ADM抑制乳腺癌细胞生长具有协同作用,并可逆转耐药细胞MCF-7／ADM对ADM的耐药效应,其机理与MDR1基因无明显的相关性,?     

伊班膦酸钠对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453的体外生长抑制作用

目的：研究伊班膦酸钠（IBN）对体外培养的人乳腺癌细胞MDA—MB-231、MDA—MB-453细胞生长增殖的影响及其潜在的作用机制。方法：采用MTT法检测不同浓度的IBN、及相同浓度不同作用时间的IBN对MDA—MB-231、MDA—MB-453两类不同的人乳腺癌细胞系生长增殖的影响；应用流式细胞仪检测不同浓度IBN作用下，MDA—MB-231、MDA—MB-453细胞细胞周期的变化。结果：在（10～100）μg／ml的浓度范围内，IBN对MDA—MB-231、MDA—MB-453细胞生长增殖均有抑制作用（P〈0．01），抑制效果与IBN浓度呈剂量依赖性，与其作用时间呈时间依赖性；IBN可使细胞明显阻滞于S期，G2／M期细胞比例则明显减少，且呈剂量依赖趋势。结论：在（10～100）μg／ml的浓度范围内，IBN对体外生长的人乳腺癌细胞MDA—MB-231、MDA—MB-453产生剂量、时间依赖性的抑制作用，其机制可能与其将细胞阻滞在DNA合成的S期，阻碍肿瘤细胞分裂增殖有关。     

5-aza-2''''deoxycytidine联合trichostatin A抑制乳腺癌细胞增殖能力的研究

背景与目的：晚近报道应用DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-2’deoxycytidine（AZA）联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂trichostatin A（TSA）作用于多种肿瘤，可以达到治疗肿瘤的目的。本文在此探讨通过AZA联合TSA作用，抑制乳腺癌细胞株增殖能力。方法：联合应用两种药物作用于肿瘤细胞，应用RT—PCR的方法检测MDA—MB-435细胞株p21和p27的mRNA转录水平的改变。通过WST方法来检测乳腺癌细胞的增殖能力变化，将MDA—MB-435细胞根据药物处理共分四组：①对照组；②AZA＋TSA组；③AZA＋TSA＋4-OH TAM组；④4-OH TAM组。并且采用流式细胞仪来分析肿瘤细胞周期分布的改变，将MDA—MB-435分成另外四组：①对照组；②AZA＋TSA组；③AZA＋TSA＋E2组；④AZA＋TSA＋E2＋4-OH TAM组。结果：TSA以及AZA联合应用能使肿瘤细胞MDA—MB-435的p27的mRNA水平增加，而p21mRNA水平略减弱。增殖分析的四个组中：AZA＋TSA组细胞增殖能力减弱（P〈0．01），同时出现细胞阻滞于S期，加入雌激素后细胞阻滞稍减弱。AZA＋TSA＋4-OH TAM组增殖能力进一步减弱（P〈0．01）。4-OH TAM组增殖能力没有改变。细胞周期分析的四个组中：AZA＋TSA组出现细胞阻滞于S期，AZA＋TSA＋E2组细胞阻滞稍减弱。AZA＋TSA＋E2＋4-OH TAM组细胞阻滞再次提高。结论：两种药物联合应用能使得乳腺癌肿瘤细胞增殖能力下降，对于肿瘤细胞有一定抑制作用。     

乳腺癌细胞共激活因子SRC-1的表达变化与内分泌治疗的关系

目的：观察三苯氧胺作用前后ERd阳性细胞株T-47D和ERd阴性细胞株MDA—MB-231中共激活因子SRC-1的表达变化,研究共激活因子与内分泌治疗的内在关系。方法：四氮甲唑蓝（M1Tr）观察两细胞的生存状况,以筛选最佳的药物作用浓度和时间。单细胞凝胶电泳法（Comet法）检测细胞凋亡。细胞免疫组化法观察TAM作用前后细胞中ER“和SRC-1的表达情况。Westernblot法检测TAM作用前后细胞中ERd和SRC～1的表达水平变化情况。结果：MTT法测得TAM作用后T-47D和MDA—MB-231的OD值下降,与对照组相比有屁著性差异（P〈0．05）,对T-47D效果更强。0．10mmol／LTAM作用48h后两种细胞的活力均出现最低值。单细胞凝胶电泳法观察到TAM作用后两组绌胞均发生凋亡、染色体断裂现象,尾长、尾DNA％、尾矩、Olive尾矩等指标在给药组与对照组之间有显著性差异,T-47D与MDA—MB-231组相比也有显著性差异（P〈0．05）。细胞免疫组化法检测T-47D细胞在TAM作用后ERα阳性细胞减少,SRC-1在作用前后均为阴性;MDA—MB-231细胞SRC-1表达阳性,TAM作用后,SRC-1阳性细胞比例上调,ERα仍为阴性。Westernblot结果显示TAM作用后,T-47D细胞ER仪表达水平略有下降,SRC-1表达水平未见改变;MDA—MB-231细胞SRC-1表达水平略有升高,ERα表达水平未见改变。结论：在ERα阴性细胞株MDA—MB-231中,共激活因子SRC-1有较高水平表达。0．10mmol／LTAM作用于乳腺癌细胞MDA—MB-23148h后SRC-1表达轻微上调,此变化可不依赖于ERα的表达。     

光动力作用对人乳腺癌细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的实验研究

目的：探讨光动力作用（PDT）对人乳腺癌细胞Bax和Bcl-2的影响。方法：体外培养的人乳腺癌细胞MDA—MB-231，分别在PDT作用不同时间后，用免疫组织化学法检测促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达情况。结果：Bax蛋白表达在所有组无明显差异（P〉0．05），Bcl-2蛋白表达自PDT后6h起显著下降（P〈0．01）；PDT后6hBax／Bcl-2比值依次递增，且有统计学意义（P〈0．05）。结论：光动力作用可诱导人乳腺癌细胞发生凋亡，其机制可能与Bax和Bcl-2蛋白表达的比值有关。     

趋化性细胞因子受体CXCR4基因沉默对乳腺癌细胞体外侵袭和定向肺转移的影响

目的 利用RNA干扰技术下调趋化性细胞因子受体CXCR4基因的表达,探讨其沉默对乳腺癌细胞体外侵袭及肺转移潜能的影响.方法 设计合成CXCR4的特异性短发卡状RNA(shRNA),将其插入至pSilencer载体中,并将重组后的pSilencer质粒载体经脂质体包裹转染乳腺癌MDA-MB-231细胞株,抗性筛选稳定抑制CXCR4表达的永久细胞克隆.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法,检测shRNA对细胞内CXCR4基因表达的影响.利用Boyden小室模型检测细胞体外侵袭能力.二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖状况.通过裸鼠尾静脉瘤细胞注射方法,构建肺转移模型,检测CXCR4基因沉默对乳腺癌细胞肺转移能力的影响.结果 成功构建和筛选出CXCR4特异性的shRNA质粒载体,稳定转染CXCR4-shRNA的乳腺癌细胞的CXCR4 mRNA和蛋白的表达较空白对照组明显下调(29.5%±3.8%比69.7%±2.6%,15.4%±1.1%比39.0%±2.4%;均P<0.01),体外侵袭能力减弱,增殖速度减慢,肺转移能力下降.结论 以CXCR4为靶向的shRNA能够有效下调CXCR4基因的表达,降低人乳腺癌细胞体外侵袭、增殖以及肺转移的能力.CXCR4是乳腺癌侵袭和转移过程中的重要调控因子.     

肿瘤抗原MAGE-A4在乳腺癌组织和细胞系中的表达及其作用

目的检测正常乳腺组织及乳腺癌组织中MAGE-A4 (melanoma antigen-A4) mRNA的表达,探讨其与乳腺癌临床参数、生物学行为的关系以及对乳腺癌细胞增殖的影响。方法用RT-PCR方法检测77例正常乳腺组织及乳腺癌组织中MAGE-A4 mRNA的表达状况,用χ2检验分析其表达与乳腺癌临床参数及生物学行为的关系;用集落形成实验研究MAGE-A4对乳腺癌细胞增殖的影响。结果77例正常乳腺组织中没有检测到MAGE-A4 mRNA的表达;77例乳腺癌组织有33例MAGE-A4 mRNA阳性表达,阳性率为42.9%。60（含60岁）岁以上乳腺癌患者MAGE-A4 mRNA阳性表达率明显高于60岁以下患者(P<0.05);但MAGE-A4 mRNA表达与乳腺肿瘤的大小、临床分期、病理类型、组织学分级、淋巴结转移、有无瘤栓、ER/PR及HER-2状态之间无明显相关性 (P>0.05)。乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231均不表达MAGE-A4 mRNA,而乳腺癌细胞系MDA-MB-436中MAGE-A4 mRNA呈高表达。转染MAGE-A4基因可以抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞克隆的形成(P<0.05)。结论MAGE-A4在正常乳腺组织不表达,在乳腺癌组织中表达率为42.9%,提示MAGE-A4是一种肿瘤特异性抗原。该基因的表达与乳腺癌患者的年龄有关,与其他临床参数及生物学行为无明显相关性。在MAGE-A4阴性表达的乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中转染MAGE-A4基因可抑制该细胞的克隆形成。     

趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中表达的研究

目的探讨趋化受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其与肿瘤转移的关系,以及脂多糖(LPS)对其表达的影响.方法采用流式细胞仪和RT-PCR法检测23例乳腺癌患者的癌组织、癌旁组织、正常组织以及MDA-MB-231细胞中CXCR4在蛋白质和mRNA水平的表达情况,以及LPS对MDA-MB-231细胞 CXCR4表达的影响;用Transwell板检测经LPS作用前后MDA-MB-231对趋化因子SDF-1趋化活性的影响.结果乳腺癌组织MDA-MB-231细胞的趋化因子受体CXCR4在蛋白质和mRNA水平的表达均显著高于癌旁组织和正常组织(P<0.05),并且CXCR4的表达与乳腺癌的转移密切相关;脂多糖(LPS)能下调CXCR4的表达,经LPS作用后乳腺癌细胞趋化活性降低.结论趋化因子受体在乳腺癌的转移中起重要作用,下调乳腺癌细胞CXCR4的表达水平,可减少或抑制其转移.     

miRNA-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的增殖与侵袭

目的:研究miRNA-34a(miR-34a)对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的生物调控作用。方法:采用定量PCR检测人乳腺上皮细胞MCF-10A,乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a的表达水平。通过miR-34a mimics分别上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达水平,MTT和Transwell检测肿瘤细胞增殖能力、侵袭力等生物学行为的变化。结果:乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a处于低表达水平。通过miR-34a mimics上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达后,细胞的增殖能力被miR-34a抑制（P＜0.05）,miR-34a对细胞侵袭有显著抑制作用（P＜0.05）。结论:miR－34a在乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453及Hs578T中低表达,miR-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的细胞增殖和侵袭能力。     

沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。     

NDRG2上调PTEN表达抑制乳腺癌细胞迁移的实验

 目的 利用具有相同遗传背景但不同转移能力的乳腺癌细胞模型MCF-7、LM-MCF-7以及MDA-MB-231细胞,研究NDRG2调控乳腺癌细胞迁移的作用及机制。方法 利用RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测MCF-7、LM-MCF-7以及MDA-MB-231细胞中NDRG2和PTEN mRNA和蛋白表达水平;构建pCMV-NDRG2和pCMV-PTEN表达载体以及设计合成NDRG2和PTEN siRNA,通过转染过表达或沉默NDRG2和PTEN表达,Transwell迁移实验检测转染后细胞迁移能力改变,Western blot检测NDRG2和PTEN表达调控关系。结果 MCF-7细胞中NDRG2和PTEN mRNA水平和蛋白表达水平显著高于LM-MCF-7和MDA-MB-231细胞（P<0.05）;在LM-MCF-7和MDA-MB-231中上调NDRG2表达可降低细胞迁移能力至13.02%和26.33%（P<0.01）;在MCF-7细胞中沉默NDRG2表达可增强细胞迁移能力至354.62%（P<0.01）;蛋白免疫印迹检测显示PTEN表达受NDRG2调控;沉默（或过表达）NDRG2表达,同时过表达（或沉默）PTEN,MCF-7（或LM-MCF-7）细胞迁移能力未发生显著变化（P>0.05）。结论 乳腺癌细胞中,NDRG2的表达下调,导致PTEN表达下降,解除了对乳腺癌细胞迁移的抑制作用。NDRG2/PTEN信号途径的沉默是乳腺癌细胞获得高迁移能力的重要机制。     

ETS2在乳腺癌细胞中调控CXCR4转录的机制研究

背景与目的：肿瘤转移是乳腺癌患者死亡的主要原因。趋化因子受体CXCR4与乳腺癌转移密切相关。本研究探讨转录因子ETS2(人红血细胞增多症病毒致癌基因同源体2)对人乳腺癌细胞中趋化因子受体CXCR4表达的影响,以及ETS2调控CXCR4转录的分子机制。方法：在MCF-7和MDA-MB-231人乳腺癌细胞株中,本研究通过瞬时转染技术,以及RNAi技术,检测过表达ETS2或抑制ETS2的表达。然后分别应用RT-PCR以及ELISA检测CXCR4 mRNA的表达和蛋白水平,荧光酶素报告基因实验检测启动子活性,ChIP实验检测结合到CXCR4启动子上的ETS2的量。并且对CXCR4启动子上的2个ETS结合位点进行突变,通过荧光报告基因实验,检测突变对CXCR4启动子活性的影响。结果：转染了ETS2过表达质粒的MDA-MB-231和MCF-7人乳腺癌细胞中,CXCR4的表达在mRNA和蛋白水平都升高;报告基因实验结果提示,ETS2通过激活CXCR4启动子的活性提高CXCR4的表达;通过ChIP实验发现,在转染了ETS2表达质粒的MDA-MB-231和MCF-7人乳腺癌细胞中,结合到CXCR4启动子上的ETS2的蛋白量増高,提示ETS2通过直接结合到CXCR4启动子上,从而提高CXCR4启动子的活性;利用RNA干扰技术,抑制ETS2的表达,可以显著减弱CXCR4启动子的活性,降低CXCR4的表达和结合到CXCR4启动子上的ETS2的量;荧光酶素报告基因的结果显示,任意一个位点的突变都降低了CXCR4启动子的活性,2个位点的同时突变使CXCR4启动子的活性进一步降低。结论：在人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231细胞中,ETS2通过直接结合到CXCR4启动子上的2个结合位点(-540到-535和-240到-235),活化CXCR4启动子活性,从而对CXCR4发挥转录调控的作用。     

Semaphorin4C 在乳腺癌子宫内膜癌及前列腺癌中的表达及意义*

目的:研究轴突导向分子Semap horin4C（Sema4C）在乳腺癌、子宫内膜癌及前列腺癌组织和细胞水平的表达情况及其与上述三种恶性肿瘤转移的关系。方法:应用免疫组化技术检测45例乳腺癌、42例子宫内膜癌及49例前列腺癌组织中Sema4C的表达情况,分别采用蛋白免疫印迹法Western Blot及细胞免疫荧光方法检测Sema4C 在三种乳腺癌细胞（MDA-MB-435S、MDA-MB-231、MCF-7）、两种子宫内膜癌细胞株（AN3CA、HEC-1-B）和两种前列腺癌细胞株（PC- 3M-1E8、PC- 3M-2B4）的蛋白表达及其亚细胞定位情况。结果:乳腺癌和子宫内膜癌中,其分别在有淋巴结转移的乳腺癌组和子宫内膜癌组的原发灶中的表达高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义（P<0.05）。 前列腺癌中,Sema4C 的阳性表达率随着Gleason评分增加而升高（P<0.05）。 Western blot在七株肿瘤细胞均检测到Sema4C 的表达,且提示Sema4C 的表达与细胞的转移潜能呈正相关。荧光显微镜下观察到Sema4C 主要定位在细胞膜和细胞浆。结论:Sema4C 在乳腺癌、子宫内膜癌和前列腺癌组织和细胞中表达具有普遍性,且与上述三种恶性肿瘤转移关系密切,有望成为上述三种恶性肿瘤治疗的一个新的分子靶点。      

Mus81基因沉默对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖、凋亡及裸鼠成瘤能力的影响北大核心

目的:分析甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因(Mus81)在乳腺癌组织中的表达水平,观察Mus81基因敲减对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡和裸鼠移植瘤形成能力的影响。方法:从TCGA数据库下载乳腺癌样本基因表达数据,应用perl及R软件整理数据筛选出每个样本Mus81基因表达量。通过慢病毒介导的小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)技术构建Mus81基因敲减的MDA-MB-231乳腺癌细胞系(即Mus81敲减组)和阴性对照组MDA-MB-231乳腺癌细胞系,以实时定量PCR法检测Mus81基因的敲减效率,再以MTT检测实验、克隆形成实验、细胞流式检测及实时定量PCR法检测两组MDA-MB-231细胞的生长、增殖、细胞周期分布、凋亡水平及Mus81下游基因表达水平。最后,向BALB/c裸鼠右侧腋下注射Mus81基因敲减组和阴性对照组MDA-MB-231乳腺癌细胞,观察Mus81基因沉默对MDA-MB-231细胞在裸鼠中成瘤能力的影响。结果:Mus81基因在乳腺癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织(P<0.05)。Mus81基因敲减组MDA-MB-231细胞中Mus81基因的表达水平明显低于阴性对照组(P<0.05),Mus81基因的敲减效率达70.7%。较之阴性对照组,Mus81基因敲减组MDA-MB-231细胞的生长速度明显减缓(P<0.05);形成的细胞克隆数也明显下降(P<0.05);细胞凋亡水平、G2/M期细胞比例则明显升高(P<0.05)。STC2等Mus81下游基因的表达水平在两组MDA-MB-231细胞间也有明显差异(P<0.05)。裸鼠成瘤实验显示,Mus81基因敲减组形成的裸鼠瘤体体积和重量均明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论:Mus81基因在乳腺癌组织中的表达明显升高,且可能通过调控STC2等下游基因的表达促进三阴性乳腺癌细胞的生长增殖及裸鼠体内成瘤能力并抑制其凋亡,提示其可能是一个潜在的乳腺癌治疗靶点。