胶体金与胶乳增强免疫比浊法测定心肌肌钙蛋白Ⅰ的比较

目的 用北京九强公司的胶体金法与胶乳增强免疫比浊法定量测定我院60例血清肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)水平.方法 结合临床最后诊断,评价两种测定方法的分析性能.比较胶体金法与胶乳增强免疫比浊法测定cTn Ⅰ总符合率、灵敏度、特异性、误诊率和漏诊率.结果 胶体金法与胶乳增强免疫比浊法与临床诊断总符合率好,灵敏度高,特异性强,误诊率和漏诊率低.两种检测方法测定结果之间差异无统计学意义,P＞0.05.结论 胶乳增强免疫比浊法定量测定cTn Ⅰ方法简便、快速,具有较高的灵敏度和精密度,可用全自动分析仪进行测试,适用于大批量及临床常规使用.胶体金法方便快速,适合临床科室床旁检测.     

脂蛋白(a)测定试剂性能评价

目的 评估Lp(a)测定试剂盒的胶乳增强免疫透射比浊法在分析性能方面的表现。方法 采用日立7180全自动生化分析仪,按照CLSI EP文件要求对Lp(a)测定试剂的正确度、精密度、线性和参考区间进行评估。结果 胶乳增强免疫透射比浊法Lp(a)测定试剂盒在正确度、精密度、线性和参考区间方面均符合性能评价标准。具体而言,Lp(a)测定试剂的批内精密度为低浓度1.40%、高浓度1.20%;批间精密度为低浓度1.90%、高浓度1.80%。线性范围良好,相关系数r=0.9999。健康人群的Lp(a)参考范围小于300mg/L。结论 胶乳增强免疫透射比浊法Lp(a)测定试剂盒在正确度、精密度、线性和参考区间等方面均达到性能评价标准,具备临床应用的可行性。     

视黄醇结合蛋白两种测定方法的可比性与不同真空采血管间干扰性评价

目的观察视黄醇结合蛋白(RBP)免疫比浊法(340nm波长)和胶乳增强免疫比浊法(600nm波长)两种检测方法的可比性,以及不同采血管的影响差异。方法用三种采血管,随机抽取40例样本,由同一操作者在同一生化仪上,用两种不同方法学的RBP试剂进行检测。并用SPSS17.O统计软件进行处理,以P<0.05为有统计学意义。结果普通无抗凝剂采血管用两种方法测定比较,P>0.05无显著性差异;免疫比浊法用肝素抗凝采血管与普通无抗凝剂管相比,有显著性差异(P<0.05);胶乳增强免疫比浊法用分离胶采血管与普通无抗凝剂管相比,有显著性差异(P<0.05)。结论视黄醇结合蛋白(RBP)两种检测方法的检测结果具有可比性,可应用于临床;免疫比浊法(340nm波长)受肝素抗凝管干扰影响结果 ;胶乳增强免疫比浊法(600nm波长)受分离胶采血管干扰影响结果 。     

胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测癌胚抗原结果比对

目的探讨胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测血清中癌胚抗原的结果差异性。方法随机抽取门诊体检标本204例,用胶乳增强透射免疫比浊法和电化学发光免疫分析法同时检测血清中癌胚抗原的浓度,比较两者间差异及相关性。结果两方法学检测结果具有高度相似性,Sprerman相关性检验,相关系数为0.998。结论胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测值的相关性良好,胶乳增强透射免疫比浊法值得在临床上推广使用。但建议各地区基层医院实验室建立本实验室参考范围。     

人血清PCT直接化学发光免疫分析方法的建立及性能评价北大核心CSCD

目的:建立人血清PCT直接化学发光免疫分析方法并进行性能评价。方法:根据双抗夹心法原理制备磁微粒试剂、吖啶酯-抗体试剂与生物素化抗体试剂,3种试剂与血清PCT抗原反应后形成双抗夹心免疫复合物。利用磁场清洗复合物后,加入预激发液与激发液,化学发光免疫分析仪检测反应的发光强度,方程拟合后计算出样本中PCT浓度,并对线性范围、准确度、精密度、特异性及与干式免疫法试剂盒相关性进行性能评估。结果:本方法空白限为0.01 ng/ml,线性范围为0.02~100.00 ng/ml,准确度为95.65%,批内精密度为5.06%~5.35%,批间精密度为5.44%~5.69%,特异性均在可接受范围内,与干式免疫法试剂盒具有良好的相关性。结论:本方法各项性能指标均达到临床检验质量要求,与临床使用的干式免疫法试剂盒具有良好的相关性,有望实现临床转化应用。     

免疫比浊法检测梅毒螺旋体抗体的方法评价

目的评价免疫比浊法在梅毒螺旋体抗体检测中的临床应用价值。方法分析免疫比浊法的精密度、线性、稳定性、干扰因素、携带污染指标,并与化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)进行阳性率比较。结果免疫比浊法批内CV为1.64%~2.22%、批间CV为3.57%~3.74%;黄疸、脂血及溶血对本方法无明显干扰;阳性率均为16.8%,差异无统计学意义(x^2=0,P>0.05)。结论免疫比浊法检测结果与CMIA法检测结果相关性良好,可以满足临床诊断需要。     

CA15-3时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的:利用时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)技术建立人血清糖类抗原CA15-3的检测试剂.方法:采用双抗体夹心法建立CA15-3-TrFIA检测试剂,对试剂的各项性能指标进行评价.结果:CA15-3-TrFIA检测试剂的测量范围为(2～300)U/L,灵敏度为2U/L,分析内和分析间的精密度分别为5.6%～6.1%,7.1%～8.4%;与CEA、CA125、CA19-9和CA50无交叉反应.402份正常女性血清标本测试结果表明,该试剂的正常参考值范围是(0～30)U/ml.30份临床血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测,其相关系数为0.922.结论:试剂各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品.     

斑蝥素间接竞争性ELISA检测方法的建立

目的通过获得的斑蝥抗血清,建立快速、简便、有效的斑蝥素间接竞争ELISA检测方法。方法以合成的斑蝥素完全抗原免疫家兔,获得高效价的抗血清,通过优化条件,建立斑蝥素间接竞争ELISA检测方法的标准曲线,并设定浓度梯度,测定检测灵敏度、检测稳定性和可靠性。结果建立的标准曲线方程为y=-13.421x+102.45,R2=0.988,检测范围为:0.1～24μg/ml。其最低检测下限为0.01μg/ml,批内和批间变异系数分别为4.27%和4.56%。结论本方法具有良好的灵敏性和可重复性,可为进一步开发斑蝥素检测试剂盒提供基础。     

建立联合检测人附睾蛋白4、糖类抗原15-3荧光层析方法

目的:建立联合检测HE4、CA15-3荧光免疫层析的方法。方法:采用双抗体夹心法与荧光免疫层析相结合,联合检测HE4、CA15-3,并对检测时间、线性范围、最低检出限、精密性等指标进行评价。结果:检测时间15 min,HE4和CA15-3线性范围分别为15.6～1 500 pmol/L和7.8～500 U/ml;最低检出限分别为14.33 pmol/L和5 U/ml;批内与批间精密性均小于15%;准确率均在90%以上;与罗氏电化学发光法平行检测60份临床样本,相关系数均在95%以上。结论:初步建立了定量联合检测血清中HE4、CA15-3的荧光免疫层析检测方法,有较好的临床应用前景。     

胰岛素光激化学发光免疫分析法的建立

目的建立血清中胰岛素(INS)光激化学发光免疫分析的定量检测方法。方法用2株配对的INS单克隆抗体,一株INS单克隆抗体包被受体微球,另一株INS单克隆抗体用生物素标记,与链霉亲合素的供体微球共同组成检测试剂检测人血清中的INS。结果 INS-AlphaLISA的灵敏度为0.753μU/ml,线性测量范围为0.753～180μU/ml,分析内和分析间的精密度分别为7.46%～9.74%、5.24%～7.31%,与C肽无明显交叉反应、与胰岛素原有轻微交叉反应,125份临床血清样本用本试剂与罗氏化学发光试剂检测,其相关系数为0.983。结论本法建立的INS-AlphaLISA是一个各项指标均能达到临床要求的、可靠的检测,有望替代国内外同类产品用于临床。     

抗青霉素单克隆抗体的制备及初步应用

目的:制备抗青霉素的单克隆抗体(mAb)并建立双抗体夹心ELISA检测方法,对临床上引起青霉素过敏反应的过敏原青霉噻唑蛋白进行研究。方法:将半抗原青霉素和载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术建立稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株。常规制备腹水,用辛酸-硫酸铵法纯化,并对纯化的mAb进行特异性鉴定。通过对不同抗体组合的分析和条件的优化,建立检测过敏原的双抗体夹心ELISA方法。结果:经细胞融合、筛选及克隆化,共获得9株稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株,其中5株亲和力较高。建立了双抗体夹心ELISA相对定量检测方法,该方法灵敏度达到870 U/L,平均回收率为107.81%,批内变异系数平均为6.7%,批间变异系数平均为9.3%,可用于A群链球菌制剂中青霉噻唑蛋白的检测。结论:成功地制备了抗青霉素的mAb,并建立了相对定量检测青霉噻唑蛋白的双抗体夹心ELISA法。     

ELISA差减分析——一种简便实用的免疫逃逸变异HBsAg检测新方法

目的:立足现有实验技术与试剂,建立一项血清免疫逃逸变异HBsAg检测的新方法。方法:以市售ELISA试剂筛选其检测信号在灰区范围的HBV感染者;采用2种不同免疫逃逸变异HBsAg检测能力的ELISA试剂对选留血清进行检测,以"ELISA差减分析"方式确认免疫逃逸变异HBsAg阳性者;以中和实验及雅培化学发光试剂验证检测结果的特异性;并对部分免疫逃逸变异HBsAg阳性者以PCR及直接测序做HBV DNA分析。结果:自10231例受检者中筛选HBsAgELISA检测信号灰区标本244例;复核检测显示G6ELISA、市售ELISA两者对野生HBsAg检测敏感性分别为0.0625ng/ml,与0.125ng/ml;检测阳性率分别为16.80%(G6ELISA)及5.73%(市售ELISA)。ELISA差减分析确定免疫逃逸变异HBsAg阳性者27例,阳性率为11.07%。对部分免疫逃逸变异HBsAg阳性血清做进一步考核,抗HBs中和强度为(84.07%±6.32%),中和率100%(13/13);雅培化学发光试剂复核阳性率为94.4%(17/18,阳性者中包括两份单项G6-ELISA检测最低阳性信号标本);HBV DNA阳性率36.9%(7/19),略低于同期HBsAg低信号阳性者(6/14,42.9%,P0.05);直接测序发现其中"a"区变异3例,分别为P142L、T126A及M133T/K160T;S蛋白亲水区非"a"决定簇变异1例,变异类型为L109Q。结论:ELISA差减分析法能有效地用于部分免疫逃逸变异HBsAg的临床诊断,其诊断能力视所依托试剂免疫逃逸变异检测能力不同而有显著差别。     

ELISA 法检测食蟹猴血浆中rhCNB 多肽的方法学评价

目的:酶联免疫吸附法(ELISA)定量测定食蟹猴血浆中rhCNB多肽的方法学评价。方法:利用双抗体夹心ELISA法,对rhCNB多肽的方法学灵敏度、线性范围、精密度与准确度和回收率进行方法学验证。结果:该方法特异性高,在0.195~12.5 ng/ml的线性范围内,线性关系良好,标准曲线方程为Y=15.1X-0.26,R~2=0.996 8,定量下限(LLOQ)为0.195 ng/ml;该方法的批内精密度CV分别为3.55%、1.39%和4.71%;批间精密度CV分别为1.59%、3.2%和3.8%,均5%,准确度在91.9%~108.8%之间,方法回收率在88.5%~108.3%之间,110%,说明该ELISA方法的准确度较高。符合验证要求。结论:双抗体夹心ELISA法灵敏度高、通量大、重复性、准确度及精密度好,可用于生物样品中rhCNB多肽的定量检测。     

孕酮化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立具有较宽检测范围的孕酮(P)化学发光免疫分析方法.方法 采用竞争一步法原理建立P化学发光免疫分析检测体系,对各种影响因素如免疫试剂的稀释度、免疫试剂的稀释体系及温育时间等进行了考察和优化,最终选定的实验条件分别对该体系的最低检出限、线性、精密度、准确性、特异性进行评估,并与进口全自动化学发光试剂检测结果进行对比.结果 本系统线性范围为0.5~90 ng/mL,最低检出限为0.05ng/mL,批内批间变异变异系数均小于10%,与高浓度孕烯醇酮、雄烯二酮、雌二醇均无交叉反应,添加回收率在96.1%~106.2%.与进口全自动化学发光试剂同时测定175份样本的P浓度,二者测定结果的相关系数r为0.981.结论 成功建立了孕酮化学发光免疫分析法,该方法线性范围宽,灵敏度高,可作为进口化学发光试剂的替代试剂在临床进行推广.     

人肌酸激酶同工酶MB(质量法)化学发光免疫分析定量检测方法的建立及性能评价

利用化学发光免疫分析技术,建立一种人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)定量检测方法。采用基于化学发光免疫分析的双抗体夹心法(以纳米磁微粒为固相载体包被抗人CK-MB抗体,以另一抗体交联碱性磷酸酶为标记物)研制CK-MB化学发光免疫定量检测试剂盒。并进行一系列性能评估及临床相关性试验。该检测方法的线性范围为(0.1~300)ng/ml;空白限为0.1 ng/ml;批内精密度和批间精密度均小于5%;准确度:添加回收率在(100±5)%以内;在正常人血清中添加100 ng/ml的CK-BB及10000 ng/ml的CK-MM,对测定结果没有产生影响;当样本中存在高浓度的甘油三酯、血红蛋白、胆红素以及RF和HAMA时测试偏差在±15%范围以内;试剂在37℃放置72h后。稳定性良好,各性能指标均达到要求;相关性试验结果r0.98,一致性结果良好。参考值范围为:(0.42~6.34)ng/ml。本研究建立的CK-MB化学发光免疫分析定量检测方法的各项性能指标均达到了临床检测要求,可用于临床血清CK-MB检测。     

免疫透射比浊法测定血清IgE的方法建立与评价

目的：评价采用免疫透射比浊法检测血清免疫球蛋白E（IgE）的可行性。方法：在贝克曼CX4全自动生化分析仪上,应用德赛公司试剂,以免疫透射比浊法,采用二点终点法,主波长560nm,副波长700nm,温度37℃,六点校准。结果：本方法线性范围（50～960）IU/ml,日内不精密度1.02%～2.56%,日间不精密度1.24%～5.61%,检测低限为12.7IU/ml,回收率为93.2%～102.5%,免疫透射比浊法（Y）与贝克曼IMAGE特定蛋白分析仪的免疫散射比浊法（X）比较：Y=0.959X＋4.623。决定系数（r2）=0.9883。结论：免疫透射比浊法简便、灵敏、试剂稳定,适合一般医院血清免疫球蛋白E的自动化分析。     

髓过氧化物酶胶乳增强免疫比浊检测法的建立

目的 建立一种可用全自动生化分析仪定量检测血浆中髓过氧化物酶浓度的胶乳增强免疫比浊法,用于心脑血管疾病的预测和辅助急性冠脉综合症诊断.方法 针对三个厂家的7株单克隆抗体,采用每株抗体单独与胶乳颗粒交联,逐一配对的方法,筛选出最佳的两株单克隆抗体组合.进一步对胶乳颗粒的粒选、反应体系进行筛选和优化.评价本方法的重复性,线性,灵敏度,抗干扰能力和回收率,并进行了大量的样本检测.结果 筛选到两株最适单克隆抗体,使单克隆抗体与胶乳颗粒通过化学交联的模式连接,建立了用于髓过氧化物酶检测的胶乳增强免疫比浊法.该方法的灵敏度：LoB＝4ng/mL,LoD=6ng/mL,LoQ=12ng/mL;批内变异系数（CV）：2.85％;批间变异系数（CV）：3.45％;平均回收率：100.0％±1.2％;参考值范围：54～266ng/ml.结论 本法可用全自动生化分析仪定量检测髓过氧化物酶,具有较高的灵敏度和稳定性,操作简单,在心脑血管疾病的预测和辅助诊断中有很好的应用前景.     

微粒子酶免疫分析法和胶乳增强免疫比浊法测定β2-微球蛋白的评价

对微粒子酶免疫分析法和胶乳增强免疫比浊法测定血清和尿液β2-微球蛋白（β2-MG）结果偏差进行评估。按照美国国家实验室标准委员会（NCCLS）EP9-A文件,以微粒子酶免疫分析法为实验方法,胶乳增强免疫比浊法为比较方法进行对比及偏差评估,将测定数据进行相关分析,并对两种分析系统之间的预期偏差进行评估。结果发现,除高浓度（〉10mg/L）尿液样本外,其余各浓度的血清和尿液β2-MG用两种方法的测定结果的偏差均在可接受的范围。在使用性能较好的全自动生化分析仪和相配套试剂的前提下,微粒子酶免疫分析法和胶乳增强免疫比浊法对血清和尿液β2-MG的测定结果基本一致。     

AFP电化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种快速、特异、灵敏的检测人甲胎蛋白（AFP）的电化学发光免疫分析法。方法用链霉亲和素包被的磁性微粒、生物素标记的抗AFP单克隆抗体、钌复合物标记配对的抗AFP单克隆抗体组成AFP电化学发光免疫分析法试剂,在电化学发光免疫分析仪上对其准确性、灵敏度、特异性等效能进行方法学评价,同时用所建方法与进口的同类电化学发光免疫分析法试剂（Roche）对80例肝癌患者血清AFP检测结果进行相关性分析。对218名健康志愿者血清AFP进行了正常值调查。结果自建电化学发光免疫分析法检测AFP的批内精密度在2.8%～4.5%之间,批间精密度在3.2%～9.8%之间,分析灵敏度为0.605ng/ml。与进口同类试剂比较,直线回归方程为y=0.9936x-0.4566（r=0.9877,P〈0.05）。分析测量范围为0.605～1452.0ng/ml,自建试剂与CEA和CA199无交叉反应。自建电化学发光免疫分析法检测AFP的正常参考值为〈6.7ng/ml。结论自建AFP电化学发光免疫分析法特异性高,灵敏度好,与进口同类试剂检测结果相关性达0.9877。确定的实验室正常参考范围接近进口同类试剂,具备产业化的潜能。     

双标记AFP及Free-β-HCG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的：研制能同时检测人血清AFP和Free-β-HCG的双标记时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）试剂盒。方法：铕（Eu3＋）标记抗AFP单克隆抗体,用钐（Sm3＋）标记抗Free-β-HCG单克隆抗体,采用双抗体夹心法建立AFP/Free-β-HCG双标记TrFIA试剂,对试剂的各项性能指标进行评价。结果：AFP分析灵敏度为0.1U/ml,分析内和分析间的精密度分别为1.2%～5.9%和2.8%～6.3%,检测试剂的测量范围为（0.1～500）U/ml;Free-β-HCG分析灵敏度为0.25ng/ml,分析内和分析间的精密度分别为1.5%～6.2%和3.5%～5.6%,检测试剂的测量范围为（0.25～200）ng/ml。孕妇血样用本试剂盒与进口的同类试剂盒同时检测,AFP和Free-β-HCG的相关系数分别为0.987、0.968,具有较好的一致性。结论：自制AFP/Free-β-HCG双标记TrFIA试剂盒的各项性能指标均能达到临床检测要求,可替代国外同类产品。