泛素特异性蛋白酶53在结直肠癌中的表达及其对HCT116细胞的抑制作用

目的:探讨泛素特异性蛋白酶53(ubiquitin specific peptidase 53,USP53)在结直肠癌组织中的表达水平及其过表达对人结直肠癌HCT116细胞功能的影响.方法:运用Real-time PCR及IHC方法检测结直肠癌及癌旁组织中USP53的表达情况;利用UCSC CANCER BROWSER提供的TCGA数据库,检测USP53 mRNA表达水平与临床特征及预后的关系;HCT116细胞中瞬时过表达USP53,利用CCK-8及克隆形成实验检测HCT116细胞增殖变化.结果:免疫组化结果显示,USP53在癌旁组织中的表达显著高于肿瘤组织[91.67％(44/48) vs 18.75％ (9/48),P＜0.01].癌旁组织中USP53 mRNA水平也高于癌组织[(0.85±0.32) vs (0.46 ±0.27),P＜0.05].组织中USP53 mRNA表达水平与预后有关,表达越低预后越差(P＜0.05).过表达USP53后,细胞克隆形成数目显著下降[(123 ±27.22) vs (338±55.24)个,P＜0.01];CCK-8实验结果显示,肿瘤细胞增殖受到显著抑制[(0.14±0.01) vs (0.18±0.04),P＜0.05;(0.23±0.01)vs(0.32±0.01),P＜0.01;(0.45±0.03) vs (0.80±0.05),P＜0.01;(0.83 ±0.03)vs (1.18±0.10),P＜0.01].结论:USP53在结直肠癌中表达下调与不良预后相关,USP53可抑制肿瘤细胞增殖,提示USP53可作为诊断及治疗结直肠癌的新靶标.     

lncRNA ALMS1-IT1在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)ALMS1-IT1在结肠癌组织中的表达及其临床意义,并探索其对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:应用GEPIA平台分析TCGA数据库中ALMS1-IT1在结肠癌与正常组织中的表达水平及其与患者预后的相关性。通过实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）检测ALMS1-IT1在结肠癌及癌旁组织中的表达并分析其与临床病理特征的相关性。pcDNA3.1-ALMS1-IT1和ALMS1-IT1 siRNA分别转染HCT116细胞,RT-qPCR检测转染效率,CCK-8、EdU和Transwell小室检测HCT116细胞增殖和侵袭能力。结果:TCGA数据提示,ALMS1-IT1在结肠癌组织中表达显著高于正常组织,我们的数据也证实ALMS1-IT1在结肠癌组织中显著高表达。TCGA数据生存分析发现ALMS1-IT1高表达的结肠癌患者总生存率和无病生存率均显著降低。干扰ALMS1-IT1显著抑制HCT116细胞增殖和侵袭,而过表达ALMS1-IT1则明显增强结肠癌细胞增殖和侵袭。结论:ALMS1-IT1在结肠癌组织中表达上调,其高表达提示患者预后不良,ALMS1-IT1通过促进结肠癌细胞增殖和侵袭发挥癌基因功能。     

Nucleophosmin/B23对结肠癌侵袭能力的影响

目的:探讨核仁磷酸蛋白(Nucleophosmin/B23)在人结肠癌组织中的表达及对人结肠癌细胞侵袭能力的影响.方法:选取2000年6月至2005年10月就诊于天津医科大学附属肿瘤医院结肠癌患者31例,并收集其肿瘤组织、对应的癌旁组织和转移淋巴结组织,采用免疫组织化学染色方法检测B23的表达情况.采用Western blotting 技术检测不同结肠癌细胞系中B23的表达情况,利用小干扰RNA技术下调B23在结肠癌细胞中的表达,利用Transwell侵袭实验观察B23表达下降对结肠癌细胞侵袭能力的影响.结果:免疫组织化学染色显示B23在结肠癌组织的表达高于结肠癌旁组织表达(P=0.001 6),在转移淋巴结中的表达高于结肠癌旁组织(P=0.000 7),差异有统计学意义.Western blotting证实在转染B23特异性小干扰RNA的结肠癌细胞HCT116中B23的表达明显下降,同时明显抑制结肠癌细胞的侵袭能力.结论:B23在结肠癌和转移淋巴结中高表达,且能影响结肠癌细胞的侵袭能力.提示B23可能在结肠癌的发生、进展和浸润转移中起调节作用.     

EZH2蛋白对人结肠癌细胞HCT116生物学行为的影响

目的:探讨泛素连接酶EZH2蛋白对人结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、转移等生物学行为的影响。方法:设计合成特异性干扰EZH2蛋白表达的小干扰RNA,通过QPCR、Western blot技术检测转染小干扰RNA后的干扰效果;MTT法检测沉默EZH2蛋白表达对结肠癌细胞系增殖的影响;流式细胞仪测定EZH2蛋白对结肠癌细胞凋亡的影响;Transwell实验检测EZH2蛋白对结肠癌细胞侵袭转移的影响。结果:设计合成的小干扰RNA能有效沉默EZH2蛋白的表达,EZH2蛋白被沉默后,人结肠癌细胞HCT116的增殖明显受到抑制,细胞的凋亡明显增加,侵袭与转移能力降低。结论:EZH2蛋白参与人结肠癌细胞HCT116生物学行为的调控,可能在结肠癌的发生发展中发挥着重要的作用,有望成为结肠癌治疗的新靶点。     

Bcl-3表达对结直肠癌组织和HCT 116细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨Bcl-3蛋白在人结直肠癌组织中的表达以及沉默Bcl-3基因后对结肠癌HCT 116细胞增殖与凋亡的影响。方法：选取2012年1月至2015年12月于江苏大学附属昆山医院行结直肠癌根治术的86例患者结直肠癌组织及相对应的癌旁组织标本,应用免疫组织化学法检测结直肠癌组织中Bcl-3蛋白的表达。将HCT 116细胞分为3组：空白对照组、Control siRNA组和Bcl-3 siRNA组,按分组转染Bcl-3 siRNA和Control siRNA,Western blotting法检测各组Bcl-3表达量以鉴定转染效率;MTT法、平板克隆实验、流式细胞术分别检测各组增殖能力、克隆形成能力、细胞周期分布及细胞凋亡率的变化。结果： Bcl-3蛋白在结直肠癌组织明显高于相应癌旁组织阳性表达率（72.09% vs 48.84%,P<0.05）。结直肠癌组织中Bcl-3蛋白的表达与组织学分级、淋巴结转移及Dukes分期有关（P<0.05）。转染48 h后,空白对照组、Control siRNA组Bcl-3相对蛋白量表达水平明显高于Bcl-3 siRNA组（P<0.05）。MTT实验中可见Bcl-3siRNA组光密度（D）值在转染24、48、72、96 h时均明显低于空白对照组和Control siRNA组（P<0.05）,Bcl-3 siRNA组克隆形成率明显低于其他2组（P<005）。流式细胞术显示,Bcl-3 siRNA组G2期细胞比例及凋亡率高于空白对照组和Control siRNA组（P<0.05）。结论： 结直肠癌组织中Bcl-3蛋白的高表达与组织学分级、淋巴结转移及Dukes分期有关;沉默Bcl-3可能导致结肠癌HCT 116细胞的细胞周期停滞在G2期,抑制细胞增殖能力及克隆形成能力,并促进细胞凋亡。     

IL-6在不同Dukes分期结肠癌中的表达及临床意义

目的：探讨不同 Dukes 分期结肠癌组织及癌旁组织中的 IL -6以及结肠癌患者外周血 IL -6的表达情况。方法：收集56例结肠癌、癌旁组织的标本及15例正常结肠组织标本。收集结肠癌患者术前外周血标本和正常对照组外周血标本。采用免疫组织化学 SP 法检测 IL -6蛋白的表达及用酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清中 IL -6的水平。结果：结肠癌患者组织 IL -6阳性率显著多于癌旁对照组（P <0.05）及正常对照组（P <0.05）。阳性表达率与淋巴结转移、临床 Dukes 分期有关（P <0.05）,与组织学分级、肿瘤大小无关（P>0.05）;结肠癌外周血 IL -6水平显著高于正常对照组（P <0.05）。结论：IL -6在结肠癌中表达明显增高,且与临床分期有关,可作为诊断结肠癌的预警信号和判断预后的有用指标。     

NucIeophosmin/B23对结肠癌侵袭能力的影响

  目的  探讨核仁磷酸蛋白(Nucleophosmin/B23)在人结肠癌组织中的表达及对人结肠癌细胞侵袭能力的影响。  方法  选取2000年6月至2005年10月就诊于天津医科大学附属肿瘤医院结肠癌患者31例, 并收集其肿瘤组织、对应的癌旁组织和转移淋巴结组织, 采用免疫组织化学染色方法检测323的表达情况。采用Western blotting技术检测不同结肠癌细胞系中B23的表达情况, 利用小干扰RNA技术下调B23在结肠癌细胞中的表达, 利用Transwell侵袭实验观察B23表达下降对结肠癌细胞侵袭能力的影响。  结果  免疫组织化学染色显示B23在结肠癌组织的表达高于结肠癌旁组织表达(P=0.001 6), 在转移淋巴结中的表达高于结肠癌旁组织(P=0.000 7), 差异有统计学意义。Western blotting证实在转染B23特异性小干扰RNA的结肠癌细胞HCT116中B23的表达明显下降, 同时明显抑制结肠癌细胞的侵袭能力。  结论  B23在结肠癌和转移淋巴结中高表达, 且能影响结肠癌细胞的侵袭能力。提示B23可能在结肠癌的发生、进展和浸润转移中起调节作用。      

MicroRNA-99a促进结肠癌细胞的增殖和迁移及其可能机制

目的:探讨结肠癌患者组织中microRNA-99a表达水平以及对结肠癌细胞增殖和迁移的影响.方法:取南京医科大学附属常州二院胃肠病中心49例结肠癌患者肿瘤组织、癌旁组织(癌旁5cm)标本以及结肠癌细胞HCT-116、HT-29、SW-480、Caco-2和正常结肠上皮细胞HCoePic,采用实时荧光定量PCR检测结肠癌患者肿瘤组织和结肠癌细胞中microRNA-99a表达水平;结肠癌细胞株HT-29转染microRNA-99a抑制剂后,CCK-8法检测microRNA-99a对结肠癌细胞增殖的变化;transwell法观察microRNA-99a对结肠癌细胞迁移的影响;Western blotting检测了HT-29中FGFR-3的表达水平.结果:microRNA-99a表达在结肠癌组织中明显高于癌旁组织(6.27±0.48 vs 1.34±0.54,P＜0.05)、在肿瘤细胞中明显高于正常结肠上皮细胞(5.48±0.34,7.67±0.24,5.78±0.22,6.28±0.44 vs 1.45±0.37,P＜0.05).转染microRNA-99a抑制剂后,HT-29细胞的增殖和迁移能力均明显下降(P＜0.05);同时,HT-29中FGFR-3显著降低(P＜0.05).结论:microRNA-99a在结肠癌组织中高表达,低表达microRNA-99a可减弱结肠癌细胞的增殖和迁移能力,且可能通过FGFR-3信号通路发挥作用.     

miR-222与MBD2在结肠癌组织中的表达及其临床意义

背景与目的:MicroRNAs是一类19～25 bp内源非编码的小分子RNA,通过靶向抑制基因的转录和翻译水平。本文旨在探讨miR-222与甲基结合结构域蛋白2(methyl-CpG binding domain protein 2,MBD2)在结肠癌组织中的表达及其临床意义。方法:收集2008年1月—2010年6月结肠癌患者手术标本76例,癌旁组织作为正常对照,分别运用原位杂交、免疫组化检测结肠癌组织及癌旁组织中miR-222、MBD2的表达水平,分析其与结肠癌临床病理参数的关系。结果:原位杂交检测显示,在76例结肠癌组织中miR-222阳性表达率为92.1%,与癌旁对照组28.9%相比,差异有显著统计学意义(P<0.01);光密度值检测发现,miR-222的表达随着结肠癌临床分期的演进而增加,且结肠癌中有淋巴结转移的miR-222的表达显著高于无淋巴结转移组(P<0.01);免疫组化结果显示,在76例结肠癌组织中MBD2蛋白阳性表达率为19.7%,与癌旁对照组81.6%相比,差异有显著统计学意义(P<0.01);光密度值检测发现,MBD2的表达随着结肠癌临床分期的演进而下调,结肠癌中有淋巴结转移的MBD2的表达显著低于无淋巴结转移组(P<0.01);相关性分析表明,miR-222表达与MBD2的表达呈负相关(P<0.05)。结论:高表达的miR-222可通过靶向抑制MBD2的表达参与结肠癌的发生、发展、侵袭和转移,miR-222及MBD2可成为结肠癌治疗、预后判断的潜在生物学指标。     

MTA1通过上调CK19促进结肠癌细胞HCT116的侵袭

目的探讨肿瘤转移相关因子1(MTA1)与细胞角蛋白19(CK19)在结肠癌中的表达及意义。方法选取80例结肠癌患者的结肠癌组织及癌旁组织标本,采用免疫组织化学法检测组织中MTA1及CK19的表达,分析两者在结肠癌组织中表达的相关性。采用慢病毒感染法、crispr基因编辑技术分别建立MTA1过表达及敲除MTA1的结肠癌HCT116细胞系及对应的对照细胞系(分别命名为HCT116MTA1、HCT116crMTA1、HCT116control 1、HCT116crMTA1control 2),利用RNA干扰技术、质粒转染法分别在HCT116MTA1、HCT116crMTA1细胞中敲降、过表达CK19,并构建对照细胞系(分别命名为HCT116MTA1siCK19、HCT116crMTA1CK19、HCT116MTA1control、HCT116crMTA1control)。通过Transwell侵袭实验检测MTA1、CK19表达的改变对细胞侵袭能力的影响。利用c BioPortal数据分析平台筛选与MTA1和CK19表达均相关的基因,对所获得的基因集进行功能富集分析。结果结肠癌组织中MTA1、CK19评分均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.01)。MTA1与CK19在结肠癌组织中表达呈显著正相关(r=0.490,P<0.01);在MTA1过表达的HCT116MTA1细胞中CK19表达上调,而在敲除MTA1的HCT116crMTA1细胞中CK19表达下调。与MTA1和CK19表达均相关的基因富集在细胞黏附、m RNA剪接、细胞代谢、蛋白质合成等过程。结论MTA1与CK19在结肠癌组织中表达呈正相关,MTA1可通过上调CK19表达促进结肠癌细胞HCT116的侵袭。     

miRNA-34 a对人结肠癌细胞 HCT116增殖及侵袭转移的影响

目的：研究微小RNA-34a（microRNA-34a,miR-34a）在人结肠癌细胞株HCT116中的过表达对细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法设计合成并构建携带绿色荧光蛋白（ GFP）的miR-34a真核表达载体,脂质体法稳定转染HCT116细胞。通过Realtime PCR验证转染后miR-34a的表达变化。 MTT法检测转染前后HCT116细胞增殖能力变化, Transwell法检测转染前后HCT116细胞侵袭能力改变,western blot检测目的蛋白的表达。结果 miR-34a转染HCT116细胞后其表达量增加到（7．32±1．34）倍,而HCT116细胞增殖能力也受到显著抑制,下降到（0．49±0．10）;Bcl-2蛋白受到miR-34a表达的抑制,而BAX的表达则受到miR-34a表达的增强;HCT116细胞侵袭能力在miR-34a过表达后显著增强,相应的MMP-2和MMP-9表达也出现显著增强。阴性对照组与空白对照组比较无显著性差异。结论 miR-34a的过表达能够抑制人结肠癌细胞HCT116的增殖及侵袭转移,与调控Bcl-2／BAX和MMP-2和-9蛋白的表达密切相关。     

Linc00355在结肠癌中表达上调并促进肿瘤细胞增殖和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA) Linc00355在结肠癌组织中的表达水平,以及沉默Linc00355表达对结肠癌HCT116细胞增殖及迁移和侵袭能力的影响.方法:通过对肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达综合(Gen...     

AEBP1通过激活Wnt/β-catenin信号通路调控EMT促进结肠癌细胞增殖迁移

目的:探讨脂肪细胞增强结合蛋白1（AEBP1）对结肠癌细胞增殖迁移的影响及其机制。方法:Oncomine数据库对结肠癌中AEBP1表达情况进行分析;GEPIA、ualcan数据库对AEBP1表达与结肠癌患者预后进行分析。分析AEBP1在正常结肠上皮细胞和结肠癌细胞中的表达情况。在HCT116细胞过表达AEBP1建立过表达细胞系,在过表达细胞系中对AEBP1进行敲降。利用CCK-8实验、克隆形成实验检测AEBP1对细胞增殖的影响;Transwell实验检测AEBP1对细胞迁移能力的影响。实时荧光定量PCR与免疫组化实验检测结肠癌组织及配对正常组织AEBP1表达水平,Western blot法检测过表达AEBP1的结肠癌细胞AEBP1、β-catenin、cyclinD1、c-myc、E-cadherin、Vimentin蛋白的水平。结果:结肠癌组织中AEBP1表达增加。高表达AEBP1与结肠癌患者总生存期、无病生存期负相关,高表达AEBP1与结肠癌患者肿瘤分期、淋巴转移相关。过表达AEBP1后,HCT116结肠癌细胞增殖加快,克隆形成数增加、Transwell迁移细胞数增加,在过表达细胞中敲降AEBP1后得到相反结果。过表达AEBP1后β-catenin,cyclinD1,c-myc,Vimentin蛋白表达增加,E-cadherin蛋白表达下降。结论:AEBP1在结肠癌中高表达并通过激活Wnt/β-catenin信号通路诱导EMT进程促进结肠癌细胞增殖迁移。     

RasGRF2 promotes migration and invasion of colorectal cancer cells by modulating expression of MMP9 through Src/Akt/NF-κB pathway

Ras-specific guanine nucleotide-releasing factor 2 (RasGRF2) is a member of the guanine nucleotide exchange factors family which is expressed in a variety of tissues and cancer. However, the role of RasGRF2 in cancer is less reported, especially in colorectal cancer(CRC). Hence, the present study aimed to investigated the function of RasGRF2 and ways in which it affects tumor progression in CRC samples and cell lines. We first measured RasGRF2 mRNA level in 26 paired tumor and nontumor colon tissues after colon cancer surgical resection, and determined RasGRF2 protein level in 97 paired paraffin-embedded colon cancer tissues, and found that levels of RasGRF2 mRNA and protein were increased in colorectal tumor tissues, compared with adjacent non-tumor tissues. We then examined the effects of RasGRF2 knockdown on proliferation, migration and invasion were analyzed in CRC cells (SW480, HCT116 and LS174T). HCT116 cells with RasGRF2 knockdown were injected into the tail vein in nude mice to yield metastatic model, and tumor metastasis was measured as well. We found that knockdown of RasGRF2 in CRC cells reduced their migration and invasion in vitro and metastasis in mice. Furthermore, we explored the underlying molecular mechanism for RasGRF2-mediated CRC migration and invasion. The results showed that knockdown of RasGRF2 in CRC cells impairing the expression of MMP9 and inhibiting the activation of Src/Akt and NF-κB signaling. We conclude that RasGRF2 plays a role in controlling migration and invasion of CRC and modulates the expression of MMP9 through Src/PI 3-kinase and the NF-κB pathways.     

DAPK loss in colon cancer tumor buds: implications for migration capacity of disseminating tumor cells

Defining new therapeutic strategies to overcome therapy resistance due to tumor heterogeneity in colon cancer is challenging. One option is to explore the molecular profile of aggressive disseminating tumor cells. The cytoskeleton-associated Death-associated protein kinase (DAPK) is involved in the cross talk between tumor and immune cells at the invasion front of colorectal cancer. Here dedifferentiated tumor cells histologically defined as tumor budding are associated with a high risk of metastasis and poor prognosis. Analyzing samples from 144 colorectal cancer patients we investigated immunhistochemical DAPK expression in different tumor regions such as center, invasion front, and buds. Functional consequences for tumor aggressiveness were studied in a panel of colon tumor cell lines using different migration, wound healing, and invasion assays. DAPK levels were experimentally modified by siRNA transfection and overexpression as well as inhibitor treatments. We found that DAPK expression was reduced towards the invasion front and was nearly absent in tumor buds. Applying the ECIS system with HCT116 and HCT116 stable lentiviral DAPK knock down cells (HCTshDAPK) we identified an important role for DAPK in decreasing the migratory capacity whereas proliferation was not affected. Furthermore, the migration pattern differed with HCTshDAPK cells showing a cluster-like migration of tumor cell groups. DAPK inhibitor treatment revealed that the migration rate was independent of DAPK''s catalytic activity. Modulation of DAPK expression level in SW480 and DLD1 colorectal cancer cells significantly influenced wound closure rate. DAPK seems to be a major player that influences the migratory capability of disseminating tumor cells and possibly affects the dynamic interface between pro- and anti-survival factors at the invasion front of colorectal cancer. This interesting and new finding requires further evaluation.     

Biglycan及FAK信号通路对结肠癌细胞侵袭、转移能力的影响及机制

目的 观察Biglycan对局部黏着斑激酶(Focal adhesion kinase,FAK)活化的影响,探索其是否通过调控FAK信号通路影响结肠癌细胞的侵袭和迁移。方法 构建过表达Biglycan的人结肠癌细胞系HCT116并施加FAK抑制剂处理。实验设置空白对照组(HCT116)、空载体对照组(Vector),空载体抑制剂处理组(Vector+PF-562271)、Biglycan过表达组(Biglycan)和Biglycan过表达抑制剂处理组(Biglycan+PF-562271)。抑制剂处理24h后,采用Western blot技术检测FAK、p-FAK在各组结肠癌细胞中的表达;采用Transwell实验分析各组结肠癌细胞的侵袭和迁移能力。结果 Biglycan过表达后会显著提高FAK的磷酸化水平,促进HCT116细胞的侵袭和迁移(P＜0.01);FAK抑制剂PF-562271能够明显降低p-FAK的表达,逆转Biglycan对结肠癌细胞侵袭和迁移能力有影响(P＜0.01)。结论 Biglycan通过激活FAK信号通路影响结肠癌细胞系HCT116的侵袭和转移。     

肠癌组织中miR-141的表达及其对HCT116细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨miR-141在肠癌组织中的表达情况以及其对HCT116细胞生物学功能的影响及其作用机制。方法:选取2016年05月至2018年05月在中国医科大学附属第一人民医院手术切除的30对肠癌组织以及癌旁组织进行miRNA芯片筛查。逆转录定量聚合酶链反应分析其中异常表达miRNA情况,评估miR-141的表达与肿瘤相关信息的相关性。通过TargetScan软件分析miR-141可能靶向的蛋白,在HCT116细胞中通过荧光素酶报告基因实验检测miR-141对DEK蛋白的靶向作用。HCT116细胞中分别过度表达和沉默表达miR-141后,通过MTT实验检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞的迁移情况。结果:芯片分析和逆转录定量聚合酶链反应指出miR-141在肠癌组织中表达低于癌旁组织,miR-141与肿瘤的进程具有相关性,TargetScan软件指出miR-141可以靶向作用于DEK,荧光素酶报告基因实验印证了miR-141对DEK的靶向作用。MTT实验指出miR-141过度表达显著抑制细胞增殖,miR-141沉默表达显著促进细胞增殖,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）。Transwell实验显示,miR-141过度表达可以抑制HCT116细胞的迁移,miR-141沉默表达后HCT116细胞的迁移得到促进。结论:miR-141通过靶向DEK蛋白能够抑制HCT116细胞的增殖和迁移。