食蟹猴疟原虫抗原的固相放射免疫检测

<正> 疟疾是严重危害人民健康的疾病之一,但目前对疟疾的诊断仍以末梢血涂片染色镜检来确定。该技术不仅费时耗力,而且敏感度受镜检员的技术和疲劳程度的影响很大,所以不适于大规模流行病学调查之用。而血清学试验测定抗体的方法不能区分现症感染还是既往感染。因此急需寻找一个简便、灵敏、准确和适于大批样品快速处理的方法。     

食蟹猴MHC基因多态性研究进展

非人灵长类动物已经被广泛应用于药效评估和疾病发病机理的研究.经过研究人员多年探索,恒河猴已成为一种比较理想的实验动物模型.以HIV/AIDS(Human ImmunodeficiencyVirus/Acquired Immuno Deficieney Syrdrome)疫苗的研究为例,287株艾滋病疫苗中有200多株的实验数据是来源于恒河猴动物模型[1].     

食蟹猴皮下筋膜中ROS分布的形态学研究

目的生物体内的活性氧(ROS)可作为重要的信号分子参与细胞信号转导过程,在合成代谢中发挥着重要作用。过多的ROS及其氧化应激作用则会导致细胞和组织损伤,产生多种病变,加速机体的衰老和死亡。检测ROS在食蟹猴皮下筋膜中的分布,并探讨其形态学基础。方法采用DCFH-DA荧光探针和Mito SOXTM红色试剂对食蟹猴体内ROS进行了标记和检测,前者检测了细胞内ROS,后者靶向检测了线粒体超氧化物。结果经典解剖学和荧光成像表明,在食蟹猴全身浅筋膜中有大面积微弱荧光存在,在部分深筋膜(腱膜筋膜)中荧光强度大,尤其是在眶周组织、帽状腱膜、部分四肢腱膜和背部斜方肌外侧边缘。结论 ROS在食蟹猴皮下筋膜中多有分布,聚集处多为筋膜较发达部位,推测ROS的分布可能与胶原纤维有关,过量的ROS可能会是筋膜炎发生的一个因素。     

ELISA法检测肿瘤相关抗原神经元特异性烯醇化酶的方法学评价

对肿瘤相关抗原神经元特异性烯醇化酶(NSE)ELISA检测方法进行综合评价.选择临床诊断为小细胞肺癌、非小细胞肺癌及神经母细胞瘤等肿瘤患者、其它非肺癌肿瘤患者、良性疾病患者及健康人样本共223例,进行盲法比较.本方法的灵敏度为60.2%,特异性为93.8%,阳性预测值为87.5%,阴性预测值为76.7%.NSE在各入选人群中的阳性率分别为:小细胞肺癌组84.6%,非小细胞肺癌组47.6%,肺癌组总阳性率为58.4%,神经母细胞瘤组阳性率为100%,非肺癌肿瘤组的阳性率为13.3%,良性疾患组阳性率为0%,健康人群组阳性率为0%.中国正常人群cut-off值为7.78μg/L,与试剂盒提供的cut-off值相似.NSE在小细胞肺癌及神经母细胞瘤患者中有很高的阳性率,尤其是对于神经母细胞瘤有很高的临床意义.NSE在正常健康人及良性疾病患者、非肺癌肿瘤患者中的阳性率较低,检查NSE有助于肿瘤的鉴别诊断.     

免疫性食蟹猴肝纤维化模型的实验研究

目的：在食蟹猴上,通过皮下注射异种血清的方法建立免疫性肝纤维化模型,阐明该模型的特点。方法：选择雄性食蟹猴12例,随机分为模型组和对照组。模型组皮下注射小牛血清,剂量为0.4 ml/kg;对照组注射相同剂量的生理盐水。每周均注射两次。结果：造模第8周开始,模型组血清HA、PCⅢ、ⅣC、TGF-β1和α-SMA均较造模前显著升高（P<0.05,P<0.01）,模型组HA和PCⅢ比对照组显著升高（P<0.05）。造模第12周后,模型组血清ⅣC、TGF-β1和α-SMA均比对照组显著升高（P<0.05）,模型组血清LN和TCH水平较造模前显著升高（P<0.05）;模型组血清AST和ALT水平比对照组以及造模前均显著升高（P<0.05）,模型组ALB比造模前显著下降（P<0.05）。造模16周,模型组血清LN、TCH和TG水平比对照组显著升高（P<0.05）;模型组ALB水平明显低于对照组（P<0.05）;B超显示模型组肝脏光点较对照组粗糙,显示强光回声团;HE染色下显示,模型组肝细胞坏死和单核细胞浸润;Van-Gieson胶原染色下显示,模型组肝脏汇管区胶原纤维增生。结论：给予皮下注射小牛血清16周,成功建立食蟹猴肝纤维化模型。     

帕金森病MPTP食蟹猴模型嗅球细胞凋亡

目的 建立1-甲基-4-苯基-1, 2, 3, 6-四氢吡啶（MPTP）帕金森病（PD）模型,探讨模型组嗅球细胞凋亡和胶质细胞增生情况。方法 3只成年健康食蟹猴,静脉注射MPTP建立PD模型,另3只静脉注射生理盐水作为对照。取出嗅球,免疫组织化学染色检测Caspase-3、Bcl-2、离子钙接头蛋白分子1（Iba-1）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）在食蟹猴嗅球中的表达情况,采用Image J v1.8.0软件分析模型组和对照组之间的差异。 结果 MPTP损伤后,与对照组相比,模型组嗅球突触小球层Caspase-3阳性细胞数明显增加,而Bcl-2表达减少;与对照组相比,模型组嗅球突触小球层和外网状层的GFAP和Iba-1阳性细胞数增加。 结论 MPTP可诱导食蟹猴嗅球突触小球层细胞凋亡,并伴有星形胶质细胞增生和小胶质细胞激活,这可能与帕金森病的功能障碍有关。     

化学发光与ELISA法检测乙肝病毒血清学标志物的方法学比较分析

目的：比较ELISA法和化学发光法检测乙肝血清标志物的一致性和差异性。方法分别采用ELISA方法和化学发光法检测患者血清进行乙肝血清学标志物(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc),对检测结果进行字2检验分析,比较此两种方法的一致性和差异性。结果乙肝常见模式中,两种方法测定HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBcIgM结果符合率分别为92.31%、92.31%、95.38%、、92.31%,无统计学差异,抗-HBe符合率为81.54%,在两种检测方法有统计学差异(P<0.05);乙肝少见模式中,用ELISA法测单独HBsAg阳性的5例标本用化学发光法测得5例HBsAg全部阳性,但其中1例抗-HBe阳性。ELISA法测单独抗-HBe阳性的11例标本中用化学发光法测得11例抗-HBe全部阳性,其中2例HBsAg弱阳性,1例抗-HBs强阳性,1例抗-HBs弱阳性。用化学发光法测得单独抗-HBs>1000IU/L的5例标本用ELISA法测得全部阴性。用化学发光法测得单独抗-HBs>10IU/L且<1000IU/L的6例标本用ELISA法测得全部阴性。用ELISA法测得单独HBeAg阳性且经DNA扩增小于500拷贝的4例标本用化学发光法测得全部为阴性。结论乙肝普通模式中HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBcIgM用ELISA法和化学发光法一致性较好,用化学发光法检测抗-HBe更准确,更灵敏;乙肝少见模式的检测中ELISA法的灵敏度仍不够高,可导致某几项血清标志物的错报和漏报;不同目的的检测可以选用不同的方法：ELISA法可用于健康体检,术前肝炎病毒筛查等;化学发光法可用于肝炎患者的疾病监测、指导用药、疗效观察及判断预后等方面。     

ELISA检测肿瘤相关抗原CA19-9的方法学评价

对肿瘤相关抗原CA19-9酶联免疫法（ELISA法）进行方法学评价。选取各类标本204份,将本方法的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值与电化学发光免疫分析（ECLIA）的进行比较并综合分析。本方法检测的灵敏度为52.5%,特异性为82.9%,阳性预测值为82.1%,阴性预测值为54.0%。以ECLIA为相对标准,相对灵敏度为100%,相对特异性为100%,相对符合率为100%,与ECLIA相关性显著,r2=0.9749。相关分析结果表明,ELISA与ECLIA相关性好。本方法试剂稳定,结果准确、可靠,有很高的特异性。     

用免疫荧光试验观察恒河猴长期感染食蟹猴疟原虫的抗体消长

本文报告应用间接荧光抗体(IFA)试验,检测恒河猴感染了食蟹猴疟原虫后的抗体滴度,着重探讨长期感染的原虫密度和抗体滴度消长。结果表明,抗体滴度不仅在原虫密度高峰后较高,而且在红细胞内期低原虫密度阶段,甚至在原虫消失后4个多月内仍保持一定的水平。上述抗体滴度和原虫密度有规则的变化,对食蟹猴疟原虫-恒河猴模型的应用和间日疟的免疫研究提供了基础资料。     

猪到食蟹猴异位小肠移植模型的建立

目的：探讨稳定的猪到食蟹猴异位小肠移植模型建立方法,为异种小肠移植排斥反应的研究提供良好的实验工具。方法分别以白色杂种猪和食蟹猴做供、受体,采用供体小肠的肠系膜前动、静脉分别与受体肾下腹主动脉和肾下下腔静脉行端侧吻合,供体远、近端肠管结扎的方式建立异种节段性小肠移植模型。结果共行猪到食蟹猴异种节段小肠移植5例,移植肠肠长度为(52.0±5.7) cm,血管吻合成功率为100%,移植肠存活时间为(152±72) min(55~245 min)。结论本研究建立了猪到食蟹猴的异位小肠移植模型,模型稳定,可复性强,为进一步研究转基因猪到食蟹猴小肠移植提供了理想的平台。     

溴甲酚紫法检测血清白蛋白方法学评价

正血清白蛋白(albumin,ALB)是血浆中含量最多、功能最重要的一种蛋白质。它广泛地存在于人体的血液、淋巴、肌肉组织中,属于非专一性的运输蛋白,其含量的测定对临床疾病的诊断、治疗、预后判断都具有非常重要的意义,其测定结果的准确性也因此而受到广泛的重视。不同试剂在测定ALB时是否存在差异以及测定结果的可比性是一个值得关     

菲立磁胞内标记食蟹猴骨髓基质细胞

目的 探索利用菲立磁和转染试剂体外磁性标记食蟹猴骨髓基质细胞（BMSCs）方法的可行性。方法 无菌条件下取食蟹猴骨髓,梯度密度离心法分离获取BMSCs,使用菲立磁-多聚赖氨酸复合物（FE-PLL）标记BMSCs,普鲁士蓝染色、电镜和台盼蓝排除实验等方法鉴定FE-PLL标记食蟹猴BMSCs的效率和细胞的活力,倒置相差显微镜和免疫细胞化学方法检测BMSCs的增殖和分化能力。结果 菲立磁可以高效率地标记BMSCs,标记效率在99％左右。光镜和电镜下BMSCs胞质内分别可见细小的蓝色铁颗粒和许多包裹铁颗粒的囊泡。FE-PLL标记对BMSCs的活力、增殖和分化等能力没有明显的影响。结论 菲立磁可以用来体外标记食蟹猴BMSCs。     

巢式聚合酶链反应和ELISA法检测血液透析病人丙型肝炎的方法学比较

巢式聚合酶链反应和ＥＬＩＳＡ法检测血液透析病人丙型肝炎的方法学比较姜磊，杨道理，徐军，孙文杰，于春宝丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）主要经血传染，血液透析（ＨＤ）与ＨＣＶ传染有直接关系。我们用ＥＬＩＳＡ法和巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）对ＨＤ不同时间的病人进行丙型...     

生物薄膜干涉技术和ELISA法检测抗体药物免疫原性的方法学比较

采用生物薄膜干涉技术(BLI)开发快速检测治疗性单抗(抗EGFR单抗,Cetuximab)的抗抗体(ADAs)的检测方法。本研究利用ForteBio公司开发的Octet系统,在光纤制成的生物传感器底端覆盖生物分子相容层,偶联配体,形成生物膜层。当分析物结合传感器底端偶联的配体时,生物膜层厚度增加,反射光干涉光谱曲线产生可测量的漂移,从而可以实现对分子间相互作用的实时测量,同时以传统的抗体桥ELISA法作为平行对照。SA(Streptavidin)传感器结合生物素化的单抗,用免疫原性试剂孵育血清样品后,利用传感器检测血清样品的ADA。分别应用BLI和ELISA两种方法确定cutpoint,并进行剂量反应曲线的分析。研究结果表明BLI快速分析法具有同ELISA法极其相似的免疫原性检测行为,均能准确检测出筛选分析中的20例正常人血清的基线反应值。同时,BLI法在竞争抑制实验中体现出了很高的特异性。与ELISA相比,BLI技术用于治疗性抗体的临床免疫原性分析,更加省时,快捷,准确,而且可避免低亲和力ADA易受洗板干扰的弊端。因此,BLI技术可能成为抗体药物免疫原性检测的一种新的有效方法。     

食蟹猴血液学和生化学指标数据背景资料的建立

目的：药品非临床安全性评价研究是新药研发的核心内容之一。为安全、有效、质量可控的进行实验,必须建立起相应实验动物的血液学和生化学检测数据背景资料,特别是生物制品、基因工程类药物的研发。灵长类动物是首选的实验动物之一。对近年我室进行的食蟹猴长期毒性试验正常对照组动物的血液学和生化学指标数据进行统计整理,目的在于建立本室食蟹猴血液和生化指标数据背景资料,     

食蟹猴胚胎干细胞的培养及向神经细胞诱导分化

目的 建立食蟹猴胚胎干细胞系体外培养体系,并诱导其向神经细胞分化,为在体移植实验奠定基础。方法 用小鼠胚胎成纤维细胞作为滋养层,长期培养食蟹猴胚胎干细胞。在无血清培养基中添加小鼠重组Noggin的方式诱导其向神经细胞分化,并对分化各阶段细胞进行免疫组化染色检测分化效果。结果 食蟹猴胚胎干细胞在滋养层上成克隆样生长,可以长期扩增超过20代并保持胚胎干细胞的特性。诱导向神经细胞分化约14d,即可形成呈玫瑰花环样的神经前体细胞结构,可见大量Nestin阳性细胞,及部分Tuj-1阳性细胞;分化约21d时,可见大量Nestin阳性细胞以及大量Tuj-1阳性细胞;分化超过35d,可见GFAP阳性细胞,而Tuj-1阳性细胞减少。结论 成功建立食蟹猴胚胎干细胞的培养体系,在此基础上诱导其分化可获得大量神经前体细胞,尤其是早期神经细胞。     

食蟹猴疟原虫B株配子体对中老龄大劣按蚊的感染性

用中老龄（羽化后８．７５—１４．７５和２４．７５日龄）大劣按蚊（海南株）与其４．７５日龄蚊（对照）同时在感染Ｂ株猴疟的同一供血猴上血餐，饱血蚊饲养至第６—８ｄ解剖检查蚊胃、第１２ｄ检查涎腺。结果表明中老龄蚊胃感染率（８５—１００％）与对照（７７—１００％）无显著性差异，涎腺感染率中龄蚊（８３—１００％）与对照（７５—１００％）无显著性差异，胃与涎腺感染率比值中龄蚊（０．９２—１．０）与对照（０．９３—１．０）均很高，中老龄蚊的卵囊均数（７．３—１１５．０）为对照（５．４—８３）的１．Ｏ３—１．５８倍。结果提示Ｂ株猴疟配子体对中老龄大劣按蚊的感染性未下降。感染后的半数存活时间（ＬＴ５０），中龄蚊（１１—１５）比对照（１３—１８）少２—３ｄ。     

甲型肝炎灭活疫苗(SH株)接种食蟹猴的免疫原性研究

目的 研究甲型肝炎灭活疫苗(SH株)食蟹猴的免疫原性.方法 甲型肝炎病毒SH株接种人胚肺二倍体细胞(MRC-5),培养、收获的病毒液,经纯化、灭活后铝佐剂吸附制成甲型肝炎灭活疫苗.采用食蟹猴进行疫苗的免疫原性研究.结果 接种疫苗后的食蟹猴,体内产生抗HAV抗体和中和抗体,抗核抗体结果为阴性.结论该疫苗具有良好的免疫原性.