敲除toll样受体4基因对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响

目的:研究toll样受体4（TLR4）在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）发病中的作用。方法:C57BL/6野生型（WT）和Tlr4敲除(Tlr4^-/-)小鼠注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG_35-55)建立EAE模型。定期记录神经功能评分及体重变化;苏木素-伊红（HE）和劳克坚牢蓝（LFB）染色观察脊髓组织内炎症细胞浸润及髓鞘脱失情况;免疫荧光染色检测髓鞘碱性蛋白（MBP）的表达。结果:MOG_35-55免疫后,与WT组相比,Tlr4^-/-小鼠体重下降程度较轻、发病时间延迟、神经功能评分降低、炎性细胞浸润减少、髓鞘脱失减轻、MBP表达增加。结论:敲除Tlr4可减轻EAE小鼠的病理症状。     

补阳还五汤对实验性自身免疫性脑脊髓炎单核巨噬细胞的免疫调控作用

目的:探讨补阳还五汤(BYHWD)治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的有效性及对单核巨噬细胞免疫调控的作用及机制。方法:雌性C57BL/6小鼠用小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55肽段(MOG_(35-55))免疫制作慢性EAE模型,随机分为生理盐水处理组和BYHWD组。在免疫后第3天开始分别予以生理盐水和BYHWD灌胃,500μL/d,持续观察临床症状和体质量变化。免疫后17 d各组统一处死部分动物,HE染色观察炎性细胞浸润情况,髓鞘染色观察脊髓髓鞘脱失比例,流式细胞术检测脾细胞M1型和M2型巨噬细胞表型;免疫荧光组织化学染色和Western blotting检测脊髓巨噬细胞iNOS、TNF-α、arginase及IL-10的表达。结果:BYHWD推迟EAE起病,减轻EAE症状,抑制中枢神经系统脊髓的炎性浸润和髓鞘脱失,促进脊髓及脾组织中M1型巨噬细胞转化为M2型。结论:BYHWD干预可缓解EAE行为学和病理学的改变,其作用机制可能与其诱导巨噬细胞极性转化相关。     

二甲双胍抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠NLRP3炎性体相关蛋白表达并减轻其炎症

目的探讨二甲双胍(MET)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠含pyrin结构域寡核苷酸结合结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性体的调节作用。方法建立EAE小鼠模型同时设正常阴性对照组,在免疫的第14天(小鼠开始出现神经功能缺损),将建模小鼠随机分成EAE组和MET处理组,MET处理组腹腔注射MET,剂量为200 mg/kg,持续给药11 d,模型组及正常阴性对照组腹腔注射等体积PBS。观察小鼠药物干预前后临床评分,免疫组织化学染色观察脊髓病变部位NLRP3、胱天蛋白酶1(caspase-1)、含胱天蛋白酶激活和募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达情况;HE染色观察脊髓炎症细胞浸润、固蓝(FB)染色观察髓鞘脱失的情况;ELISA检测血清中促炎因子白细胞介素18(IL-18)和抑炎因子IL-10的水平。结果与EAE组相比,MET处理组临床评分显著降低,脊髓组织浸润的炎细胞减少,脱髓鞘明显改善;NLRP3、caspase-1、 ASC蛋白表达显著减少;与正常组相比,EAE组IL-18表达明显增加,IL-10表达量下降;而MET处理组IL-18表达量下降,IL-10表达量增加。结论 MET抑制NLRP3炎性体相关蛋白的表达,抑制炎症因子的释放,减轻EAE小鼠的炎症反应。     

口服烟酰胺核糖抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎的初步研究

目的：探讨口服烟酰胺核糖(nicotinamide riboside, NR)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)的治疗效果和作用机制。方法：采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55, MOG35-55)免疫C57BL/6雌性小鼠制备EAE模型,随机分为EAE组和NR组。从免疫后第3天开始,EAE组小鼠灌胃给予生理盐水,NR组小鼠灌胃给予NR,每天1次至免疫后第27天。免疫当天至免疫后第28天,观察并记录各组小鼠临床评分和体重。免疫后第28天处死小鼠,制备脾细胞悬液和脊髓组织冰冻切片。HE染色和髓鞘染色分别检测脊髓炎性细胞浸润和髓鞘脱失,Western blot和免疫荧光染色分别检测脊髓组织中ROCK-II、TLR4、p-NF-κB、iNOS表达及相应的阳性细胞数量,ELISA检测脾细胞培养液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量。结果：口服NR可推迟EAE发病时间,减轻EAE临床症状,缓解小鼠体重丢失,减少外周炎性细胞...     

骨髓间充质干细胞异体移植对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)异体移植对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用。方法全骨髓贴壁培养法获得大鼠BMSCs,流式细胞术检测细胞免疫表型,并诱导成骨方向分化。取雌性C57BL/6小鼠,随机分为3组:正常对照组、PBS组和大鼠BMSCs组,用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35~55联合完全弗氏佐剂诱导建立EAE模型。小鼠免疫后38d和48d腹腔注射PBS或大鼠BMSCs进行治疗,神经功能评分观察各组小鼠神经功能变化。二次治疗12d后取各组小鼠脊髓、脾脏和外周血。HE染色及Luxol fast blue染色观察脊髓炎性细胞浸润及髓鞘脱失情况;脾脏制成单细胞悬液,细胞CFSE标记后10mg/L刀豆球蛋白(Con A)和MOG_(35~55)刺激培养3d,观察脾细胞增殖情况。ELISA检测大鼠BMSCs移植后外周血细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素17(IL-17)含量。结果流式细胞术显示,大鼠BMSCs第3代(P3)细胞表达抗原CD29、CD90、CD106,不表达CD45。体外诱导其能向成骨分化。小鼠发病后,大鼠BMSCs组小鼠神经功能缺损症状较PBS组减轻,评分降低。HE染色和Luxol fast blue染色结果显示,大鼠BMSCs组脊髓炎细胞浸润和脱髓鞘比同时间点PBS组减轻(P0.05)。Con A和MOG_(35~55)刺激培养后,PBS组和大鼠BMSCs组脾细胞增殖增加,而大鼠BMSCs组又较PBS组降低。与PBS组相比,大鼠BMSCs组血浆细胞因子IFN-γ、IL-17含量降低(P0.05)。结论全骨髓贴壁培养法能有效分离纯化BMSCs,大鼠BMSCs异体移植对小鼠EAE模型有治疗作用。     

地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠髓鞘保护作用的研究

目的:分析地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠炎症反应、髓鞘脱失及髓鞘再生的影响,探讨地塞米松治疗多发性硬化的新作用。方法:应用MOG35-55免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型。小鼠随机分为正常对照组、EAE组及地塞米松组,观察各组临床症状;采用HE染色、LFB染色、透射电镜扫描及免疫组化染色方法,检测免疫后第13、20、30 d各组小鼠脊髓组织炎症反应、髓鞘脱失及髓鞘再生情况。结果:地塞米松显著降低EAE小鼠发病率、延缓起病时间、减轻疾病严重程度。各个时间点地塞米松组脊髓组织炎性细胞浸润、髓鞘脱失及轴索变性程度较EAE组明显减轻。免疫后第20、30 d,EAE组Olig2阳性细胞数较正常对照组明显增加;免疫后各时间点,地塞米松组Olig2阳性细胞数较正常对照组均明显增加,第13、20 d较EAE组明显增加。结论:地塞米松可增加脊髓组织Olig2表达、促进髓鞘再生,这可能为地塞米松治疗EAE及多发性硬化的效应途径。     

银杏提取物对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的影响

目的:探讨银杏提取物(GBE)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠炎症脱髓鞘病变的影响。方法:应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白33-55(MOG33-55)配以完全弗氏佐剂(CFA)免疫小鼠,诱发EAE模型。将小鼠分为CFA对照组、EAE模型组和GBE治疗组(每日腹腔注射GBE70mg/kg)。通过神经功能评分、行为学实验以及免疫荧光染色,观察GBE对EAE小鼠的影响。结果:GBE组小鼠各时间段神经功能评分均低于EAE组(P0.05),行为学检测显示发病高峰期falling latency时间较EAE组延长10s;GBE组较EAE组视神经髓鞘碱性蛋白(MBP)表达水平增高,可见MBP阳性髓鞘结构包绕轴突;海马伞矢状切片免疫荧光染色证实GBE组CD11b阳性小胶质细胞较EAE组明显减少,但是GFAP阳性星形胶质细胞数量与EAE组无明显差别。结论:GBE可能通过抑制小胶质细胞激活从而延缓EAE小鼠脱髓鞘进程,提示GBE对多发性硬化具有一定的治疗作用。     

银莲花素A 对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠自噬的调控作用及机制研究

目的:银莲花素A(RA)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠自噬及p38MAPK通路的影响。方法:选取60只C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、EAE模型组及RA低、中、高剂量组,每组12只,后4组建立EAE模型。RA低、中、高剂量组分别腹腔注射RA 0.05、0.1、0.2 mg/(kg·d),连续10 d,空白对照组及EAE模型组给予等量生理盐水。观察小鼠发病、脊髓组织脱髓鞘以及LC3、p-p38MAPK、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达情况。结果:空白对照组小鼠未发病,EAE模型组及RA各剂量组小鼠出现不同程度发病;与EAE模型组相比,RA各剂量组小鼠发病潜伏期延长、进展期缩短、神经功能评分降低,且剂量越大作用越明显(P0.05或P0.01)。空白对照组小鼠脊髓组织未见明显脱髓鞘,EAE模型组髓鞘脱失最明显,RA药物干预组脱髓鞘情况较轻,且随着剂量的增加,脱髓鞘的情况逐渐减轻。与空白组相比,EAE模型组LC3表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下降,p-p38MAPK、p-mTOR、p-p70S6K表达上升(P0.05或P0.01);与EAE模型组对比,RA各剂量组LC3表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上升,p-p38MAPK、p-mTOR、p-p70S6K表达下降,且剂量越大作用越明显(P0.05或P0.01)。结论:银莲花素A能改善EAE小鼠发病情况及脱髓鞘情况,且呈剂量依赖关系。其作用机制可能是通过调控p38MAPK通路,抑制mTOR磷酸化,上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,诱导EAE小鼠细胞自噬有关。     

补阳还五汤对EAE 小鼠免疫调节的作用

目的:探讨补阳还五汤对实验性自身免疫性脑脊髓炎的抗炎治疗效果和免疫调节机制。方法:雌性C57BL/6小鼠采用MOG35-55 多肽诱导建立EAE 模型后,随机分为生理盐水组、补阳还五汤组,每组13 只。造模的第3 天给药,生理盐水组给予生理盐水25 ml/ kg 灌胃,补阳还五汤组给予补阳还五汤生药量50 g/ kg 灌胃,共治疗25 d。每天记录临床症状评分和体重变化。HE 染色检测脊髓组织炎细胞浸润,髓鞘染色观察髓鞘脱失情况,免疫荧光技术检测脾脏ROCK 表达。流式细胞术检测脾脏CD4+ T 细胞亚群变化。Western blot 法检测脊髓TLR4、Myd88、NF-B、COX-2、ROCK 和脑ROCK 的表达。结果:与生理盐水组比较,补阳还五汤治疗后明显降低EAE 小鼠神经功能评分(P<0.001),抑制中枢神经系统炎细胞浸润(P<0.05),减轻髓鞘脱失(P<0.05),增加CD25+(P<0.05)、IL-10+(P<0.05)、TGF-β+(P<0.01)、IFN-β+(P<0.05)CD4+ T 细胞的比例;抑制外周和中枢ROCK域的表达(P<0.05);减少脊髓TLR4、Myd88、NF-B、COX-2 的表达(P<0.05)。结论:补阳还五汤可以通过抑制ROCK / TLR4/ NF鄄资B 炎性通路和调节外周T 细胞亚群比例发挥其抗炎和免疫调节作用。     

促红细胞生成素改善实验性变态反应性脑脊髓炎症状观察

目的:观察促红细胞生成素(EPO)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的神经保护作用。方法:制备EAE小鼠模型,对EPO干预组和EAE对照组小鼠进行临床症状及病理组织学评估;提取制备外周及中枢浸润淋巴细胞,应用流式细胞仪观察CD4+T亚群、炎性细胞因子水平以及细胞死亡情况;应用LDH测定评估不同浓度EPO对外周淋巴细胞死亡的影响。结果:EPO可改善EAE小鼠临床症状和病灶局部淋巴细胞浸润(P0.05);EPO干预组小鼠中枢浸润细胞以及外周淋巴细胞CD4+T细胞比例下降,IL-17和IFN-γ等炎性因子水平降低(P0.05),而细胞死亡比例以及IL-10、CD4+CD25+调节性T细胞水平与EAE对照组无显著差异(P0.05);1~1 000 U/ml浓度范围内EPO对外周单核淋巴细胞LDH的释放无显著影响(P0.05)。结论:EPO可以通过减少病灶炎性细胞浸润以及抑制IL-17和(或)IFN-γ水平等途径,对EAE具有神经保护作用。     

上调TAM 受体对实验性脑脊髓膜炎Th 细胞作用的研究

目的:通过上调实验性脑脊髓膜炎小鼠的TAM受体酪氨酸激酶(RTK),观察Th细胞的变化,进一步探讨了TAM受体减轻多发性硬化炎性脱髓鞘的机制。方法:将36只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为正常对照组、EAE组、雷帕霉素组(n=12)。EAE组采用MOG35-55与完全弗氏佐剂的混合物制备模型,观察动物的发病情况并每天进行神经功能评分,记录体质量变化。分别提取三组小鼠7 d、21 d、30 d时脑组织总RNA,实时定量PCR法检测Tyro3、Axl、Mer的表达。心脏取血ELISA法检测IL-17、IFN-γ的表达。结果:EAE组小鼠体质量逐渐下降,神经功能在免疫后第7天开始出现症状,21 d时最严重(P0.01)。EAE组Tyro3、Mer的表达升高,于21 d时最高(P0.01)。但是,Axl的表达在21天时最低,之后于30 d时最高(P0.05)。与EAE组相比,21 d时雷帕霉素组Tyro3、Axl、Mer的表达均明显升高(P0.01)。EAE组小鼠血液中IL-17、IFN-γ的表达21 d时达到高峰,之后逐渐下降(P0.05)。雷帕霉素组IL-17、IFN-γ的水平均低于EAE组(P0.01)。结论:TAM受体在EAE组小鼠脑组织中的表达上调,发挥免疫保护作用;雷帕霉素可以通过上调TAM受体的表达减少Th1、Th17细胞的分化,抑制炎性脱髓鞘。     

降纤药治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的机制

目的:研究降纤药巴曲酶对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的预防及治疗作用,初步探讨纤维蛋白沉积在多发性硬化(MS)中的作用机制。方法:采用MOG35-55免疫的C57雌性小鼠,诱发EAE动物模型,分别在免疫后立即(预防组)及免疫后出现症状(治疗组)隔日连续给予降纤药巴曲酶注射至实验结束,观察发病情况并进行临床症状评分。于免疫后30天、40天及60天分别将预防组、治疗组及EAE对照组小鼠脊髓与小脑组织取材后进行组织病理学与免疫组化染色分析,Western blot及实时荧光定量PCR技术观察药物干预对炎性浸润、脱髓鞘、纤维蛋白沉积及胶质细胞活化的影响。结果:降纤预防组及治疗组均可明显减轻EAE小鼠的发病症状、降低临床评分。预防组和治疗组较EAE未用药对照组小鼠炎性细胞浸润明显减少、髓鞘脱失及胶质细胞活化减轻,但轴索损害的改善作用不明显。免疫组化及免疫荧光显示,预防组和治疗组较EAE未用药对照组的髓鞘碱性蛋白(MBP)表达升高而胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达降低,Western blot结果示MBP蛋白表达升高而p-Akt表达降低。实时荧光定量PCR技术也证实了预防及治疗组MBP的mRNA表达升高,组织型纤溶酶原激活物(-tPA)的mRNA表达也升高。结论:在EAE的发病过程中纤维蛋白沉积发挥了重要作用,巴曲酶通过有效降低EAE小鼠体内的纤维蛋白从多个方面改善临床症状和发病过程。     

不同磷脂肽段诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎模型病理特征多样性的研究

目的:探索是否不同磷脂肽段可以诱导Lewis大鼠产生不同的病理学表现。方法:采用髓鞘碱性蛋白82-99(MBP82-99)、MBP68-86、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)免疫Lewis大鼠,每天进行神经功能评分。免疫后取各组大鼠大脑、小脑、脑干和脊髓组织,观察炎性细胞浸润部位和浸润程度、有无脱髓鞘和轴索损害。结果:MBP68-86和MBP82-99两组大鼠的大脑、脑干、小脑和脊髓组织均有炎性细胞浸润,脊髓炎症程度重于其他部位;MBP68-86和MBP82-99诱导的脊髓炎症程度无统计学差异;MOG35-55组大鼠仅脊髓组织受累,且炎症程度明显低于MBP组,其余各组未见炎性细胞浸润。各组大鼠神经组织均未见脱髓鞘和轴索受累。结论:不同磷脂肽段诱导Lewis大鼠神经组织炎性细胞浸润的分布和程度不同。     

β-榄香烯对自身免疫性脑脊髓炎小鼠早期炎性损伤的治疗作用及其免疫学机制

目的探讨β-榄香烯对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠早期炎性损伤的治疗作用及可能的免疫学机制。方法 6～8周龄健康雌性野生型C57BL/6小鼠(SPF15)共64只,均分为对照组、模型组和β-榄香烯治疗组。采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelinoligodendrocyte glycoprotein peptide35-55,MOG35-55)多肽作为抗原诱发EAE小鼠模型。于免疫后15日剥离脊髓组织进行病理学研究,MTT实验检测EAE小鼠MOG抗原特异性增殖反应及β-榄香烯(β-elemene)对MOG抗原特异性增殖反应的影响,定量PCR技术分别检测各组小鼠脊髓及淋巴结细胞白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)、转录因子孤儿核受体(retinoid acid-related orphan receptors-γt,RORγt)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素23(interleukin-23,IL-23)、转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)以及叉头蛋白3(Foxp3)的mRNA的表达。结果模型组的神经功能评分高于治疗组(<0.05),治疗组小鼠脊髓炎症及轴索损伤较模型组减轻。免疫后11d,与模型组比较,治疗组小鼠脊髓IL-17、RORγt、IL-6、IL-23的mRNA的表达减少(<0.05),Foxp3mRNA的表达增加(<0.05),并持续至免疫后15d。体外研究发现模型组T淋巴细胞增殖较对照组更明显(<0.05),治疗组β-榄香烯对T淋巴细胞增殖抑制呈现明显的量效关系(<0.05);与模型组比较,治疗组体外培养的淋巴细胞IL-17、RORγt、IL-6、IL-23mRNA表达水平增加,Foxp3mRNA表达水平减少(<0.05)。结论β-榄香烯减轻EAE小鼠早期炎性损伤,可能与其抑制髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽反应性T细胞的激活以及维持Th17细胞/调节T细胞亚群的平衡密切相关。     

MOG诱导小鼠EAE模型的建立及相关免疫指标的变化

目的用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG)多肽免疫C57BL/6小鼠建立实验性自身免疫35-55性脑脊髓炎(EAE)模型,探讨EAE模型发病期与相关免疫指标的关系。方法用MOG抗原免疫C57BL/6雌35-553性小鼠,观察其临床症状和中枢神经系统的病理改变;应用H方法测定EAE小鼠脾脏T淋巴细胞活化增殖程度;++应用流式细胞术检测中枢及外周脾脏淋巴细胞中CD4 CD25调节性T细胞;荧光定量RT-PCR检测IL-17A、Foxp3、IFNγ的表达水平。结果成功建立EAE模型。与对照组相比,EAE组中可见小鼠中枢神经系统有淋巴细+++胞浸润,脾脏T淋巴细胞增殖随MOG多肽浓度增加而增强,CD4 CD25调节性T细胞占CD4 T细胞的比例明显降35-55低(P0.01),IL-17和IFNγm RNA表达量显著升高(P0.05),Foxp3 m RNA表达量显著降低(P0.05)。结论 MOG多肽成功诱导了C57BL/6小鼠EAE模型,Th17与Treg细胞共同参与调控EAE的病理过程。35-55     

实验性变态反应性脑脊髓炎AQP-4、CD4~+CD25~+调节性T细胞研究

目的:以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外免疫球蛋白样结构域(MOGIgd)为抗原免疫C57BL/6小鼠,建立EAE模型,并检测AQP-4、CD4+CD25+T细胞的表达水平。方法:①采用分子克隆技术诱导表达MOGIgd-TrxA融合蛋白,纯化后以此融合蛋白为抗原于侧腹壁皮下多点注射免疫C57BL/6小鼠作为实验组(MOG组);同时以硫氧还蛋白(TrxA)、豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)免疫小鼠分别作为阴性、阳性组。评估动物的临床神经功能、组织病理情况,评价模型的质量。②免疫组化法、荧光定量PCR技术测定AQP-4表达水平;经流式细胞仪(FACS)检测小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞。结果:①MOG组及GP-SCH组小鼠均呈慢性非缓解型病程,两组在发病时间、达峰时间、临床神经功能评分等方面差异无统计学意义(P0.05)。TrxA组无一动物发病。模型组(包括MOG组和GPSCH组)动物HE染色可见血管周围炎性细胞浸润,胶质结节形成,髓鞘染色可见斑片状髓鞘脱失,大脑、小脑、脑干和脊髓均有不同程度受累。免疫组化定性和半定量分析显示MOG组和GPSCH组病灶周围炎症浸润处AQP-4表达与TrxA组相比明显增高(P0.05);②MOG组CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞比例为(4.71±1.61)%,GPSCH组为(1.44±0.65)%,均明显低于TrxA组(P0.01),且MOG组和GPSCH组之间的差异亦具有统计学意义(P0.01)。结论:用MOGIgd免疫C57BL/6小鼠诱导EAE模型稳定,发病率高,为今后进一步研究MS的免疫发病机制和采取有效治疗措施打下基础。EAE模型动物AQP-4的表达量与炎症浸润的严重程度相关。     

黄芪糖蛋白对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的免疫调节作用

目的探讨黄芪糖蛋白(HQGP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗效果及可能机制。方法用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)诱导C57BL/6雌性小鼠建立EAE模型。分为黄芪糖蛋白治疗组和EAE对照组,隔天记录小鼠临床评分和体质量变化。HE染色和免疫荧光技术检测脊髓组织炎细胞浸润;MTT法检测细胞活性;Griess法检测一氧化氮(NO)释放;ELISA测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)分泌,γ干扰素(IFN-γ)释放;流式细胞术检测CD4+T细胞亚群变化。结果 HQGP处理可减轻EAE症状,抑制中枢神经系统炎细胞浸润。抑制脾淋巴单核细胞活性、NO和TNF-α、IL-6分泌,促进IFN-γ的分泌。增加CD4+CD25+、CD4+IL-10+、CD4+IFN-γ+T细胞亚群的比例。结论 HQGP通过调节T细胞亚群比例,抑制炎症细胞因子释放,减轻EAE炎症反应。     

复方蛹虫草改善DSS联合高脂饮食诱导的溃疡性结肠炎的作用和机制

目的探究复方蛹虫草(CCM)对葡聚糖硫酸钠(DSS)联合高脂诱导的溃疡性结肠炎(UC)的改善作用及初步机制。方法C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组、巴柳氮钠组及CCM 90、180和540 mg·kg~(-1)·d~(-1)组。采用DSS联合高脂饮食建立UC小鼠模型。造模同时ig给药,每天1次,连续8周,每周称量各组小鼠体质量,联苯胺法检测粪便隐血水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清细胞炎性因子TNF-α、IL-1β。HE染色法比较各组结肠组织病理改变,蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测结肠组织中IκB-α、NF-κBp65、TNF-α的表达。结果与正常组相比,模型组粪便隐血分数在第1、3、5、6周显著增加(P0.05);小鼠结肠组织发生明显炎性细胞浸润(P0.05);血清炎性因子TNF-α、IL-1β含量显著增高(P0.01);结肠组织TNF-α、NF-κBp65表达显著增高(P0.01),IκB-α表达显著降低(P0.01)。与模型组相比,CCM组小鼠体质量均显著降低(P0.05,P0.01);CCM组小鼠粪便隐血显著减少(P0.05);CCM高剂量组小鼠血清TNF-α显著降低(P0.05),CCM中剂量组小鼠血清IL-1β显著降低(P0.05);CCM中剂量组小鼠结肠组织炎性细胞浸润显著减少(P0.05);CCM给药各组小鼠结肠组织TNF-α、NF-κBp65表达显著降低(P0.01),IκB-α表达显著增高(P0.01)。结论 CCM可以改善DSS联合高脂诱导的溃疡性结肠炎,其机制可能与其抑制NF-κB通路的激活有关。     

白细胞介素-37对小鼠心力衰竭的抑制作用

目的研究白细胞介素(interleukin,IL)-37对小鼠心力衰竭的作用及其机制。方法将小鼠随机分成正常对照组、模型组(每天腹腔给予15 mg/kg异丙肾上腺素,连续9 d)、阴性对照组(隔天同时腹腔注射Ig G蛋白1μg)和实验组(隔天同时腹腔注射重组人IL-37蛋白1μg)。9 d后检测小鼠心脏功能参数,HE染色观察心脏病理学变化,q PCR与酶联免疫吸附测定检测小鼠心肌细胞细胞因子m RNA和蛋白的表达。结果与正常对照组相比,模型组中小鼠心脏功能受损(P0.05),心肌组织出现局部水肿和炎性细胞浸润且心肌肌纤维排列紊乱,同时IL-17和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的表达升高(P0.05),IL-10的表达降低(P0.05);与模型组相比,实验组中小鼠心脏功能显著改善(P0.05)且其心肌肌纤维排列相对整齐,炎性细胞浸润明显减少,同时IL-17和TNF-α的表达明显降低(P0.05),IL-10的表达显著升高(P0.05)。结论 IL-37对小鼠心力衰竭具有抑制作用,可能是通过下调促炎因子IL-17和TNF-α的表达,上调抗炎因子IL-10的表达发挥作用的。     

银杏叶提取物对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的作用研究

目的:建立雌性Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型,观察银杏叶提取物EGb761腹腔注射对EAE大鼠的可能疗效及神经保护作用和机制。方法:建立Wistar大鼠EAE模型,腹腔注射EGb761(70 mg/kg),连续7 d,于免疫后第14 d和第31 d取颈膨大,分别进行HE、LFB和改良BLS染色,观察各组大鼠炎细胞浸润、髓鞘脱失和轴突缺失情况。结果:(1)EGb761组与EAE组相比临床评分明显减低(P0.05);(2)HE染色显示:EGb761组炎症浸润与EAE组相比明显减低(P0.01);(3)LFB染色显示:EGb761脱髓鞘评分与EAE组相比明显降低(P0.05);(4)改良Bielschowsky染色显示:EGb761组高峰期轴突平均缺失面积与EAE组相比明显下降(P0.01)。结论:EGb761通过减轻炎细胞浸润、促进髓鞘再生和防止轴突缺失,从而对EAE大鼠临床症状的改善起到一定作用。