丹参酮加强电针对去卵巢大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴异常功能的调整作用

目的　通过观察去卵巢大鼠外周血雌激素 (E2 )水平 ,肝脏和脂肪组织芳香化酶 (雌激素合成关键酶 )表达的变化 ,探讨丹参酮对去卵巢大鼠下丘脑 -垂体 -卵巢轴 (HPOA)异常功能的影响 ;及丹参酮能否加强针刺调整 HPOA异常功能的作用。方法　动物分成正常组 (INT)、去卵巢组 (OVX)、去卵巢 丹参酮组 (OVX T)、去卵巢 电针组 (OVX EA )和去卵巢 电针 丹参酮组 (OVX EA T) ;采用 Western- blot和放射免疫分析法 ,测定肝脏和脂肪组织芳香化酶蛋白表达及血 E2 的水平。结果　 OVX T和 OVX EA大鼠脂肪组织和肝脏芳香化酶蛋白表达和血 E2 水平都比 OVX明显增加 (P<0 .0 5 ) ;OVX EA T大鼠脂肪组织芳香化酶蛋白表达和血 E2 水平 ,比 OVX EA显著升高 (P<0 .0 5 ) ,但肝脏组织的酶蛋白表达无明显改变。结论　丹参酮可能通过促进去卵巢大鼠脂肪和肝组织芳香化酶蛋白表达 ,对去卵巢大鼠 HPOA功能异常有一定的治疗作用 ;丹参酮可能有加强电针调整 HPOA异常功能的作用。     

电针对雌激素调节生殖内分泌功能的作用及机制研究

目的:研究针刺对药物调节生殖内分泌功能的作用效应。方法:以去卵巢SD大鼠为模型,通过实时定量聚合酶链反应及酶联免疫吸附法分析正常组、模型组、针刺关元组、雌激素组(0.5 mg/kg)、针刺关元+小剂量雌激素组(0.25 mg/kg)下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)、G蛋白耦联受体54(GPR54)、肿瘤转移抑制因子(Kiss)-1、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA的表达及外周血雌激素、皮质醇水平。结果:模型组与正常组相比,下丘脑GnRH、GPR54、Kiss-1 mRNA的表达明显增高(P<0.05),下丘脑CRHmRNA的表达明显降低(P<0.05),血清皮质醇及雌激素水平明显降低(P<0.05)。关元+小剂量雌激素组、雌激素组与模型组相比,GnRH、GPR54、Kiss-1 mRNA的表达明显降低(P<0.05),CRH mRNA的表达明显增高(P<0.05),血清皮质醇及雌激素水平增高(P<0.05)。关元组与模型组相比,GnRH mRNA的表达明显降低(P<0.05),GPR54、Kiss-1 mRNA的表达有降低的趋势(P>0.05),CRH mRNA的表达有增高的趋势(P>0.05),血清皮质醇及雌激素水平有增高的趋势(P>0.05)。结论:电针能促进小剂量雌激素对生殖内分泌功能的调节作用。     

健乳灵对乳腺增生大鼠GnRH及其受体mRNA表达的影响

目的观察乳腺增生大鼠下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)及垂体促性腺激素释放激素受体(GnRHR)mRNA表达与正常大鼠的差异,并观察治疗乳腺增生症的中药制剂健乳灵对其的影响,探寻乳腺增生症的内分泌机制及健乳灵治疗乳腺增生症的内分泌环节。方法将SD大鼠分为空白组、模型组、治疗组,后两组制成乳腺增生大鼠模型,空白组和模型组大鼠予生理盐水灌胃,治疗组大鼠予健乳灵药液灌胃;治疗60d,采用RT-PCR法检测GnRH及GnRHR基因表达。结果模型组与空白组比较,GnRH及GnRHRmRNA表达水平均明显上调;治疗组与模型组比较,GnRHRmRNA表达水平均明显下调;治疗组与空白组比较,GnRHmRNA表达水平明显上调,GnRHRmRNA表达水平无明显差异。结论乳腺增生症的内分泌发生机制可能与下丘脑GnRH及垂体GnRH受体表达增加有关;健乳灵对乳腺增生的治疗机理可能与调节下丘脑GnRH及垂体GnRH受体表达减少有关。     

电针对去卵巢大鼠下丘脑GnRH系统影响的分子机制

目的：探索电针调整下丘脑垂体卵巢轴功能异常的中枢机制，观察切除卵巢后大鼠下丘脑GnRH及其受体改变，以及电针对它们的影响。方法：应用免疫组化和RT-PCR方法，观察大鼠切除卵巢4星期后，下丘脑GnRH免疫阳性神经元数量和分型、GnRH免疫阳性纤维的变化以及GnRHmRNA和垂体GnRH受体mRNA的改变，及电针对它们的影响。结果：电针后，大鼠下丘脑GnRH神经元数目较去卵巢4星期时明显增多，棘型细胞比例增加，纤维膨体密度增加，下丘脑组织GnRHmRNA表达增高，垂体GnRH受体mRNA表达升高。结论：电针可在分子水平调整去卵巢大鼠中枢GnRH的合成与释放，以及垂体GnRH受体的表达，这可能是电针调整下丘脑－垂体卵巢轴功能异常的中枢机制。     

电针及去卵巢术对大鼠脑内催乳素释放肽的影响

目的 :通过观察去卵巢术和电针对大鼠脑内催乳素释放肽 (prolactinreleasingpeptide,PrRP)的影响 ,以进一步探讨PrRP是否参与生殖内分泌功能调节及其在电针调整雌性生殖内分泌功能异常中的作用。方法 :动物分为假手术组 (Sham)、去卵巢组 (OVX)和去卵巢 +电针组 (OVX+EA)。用放射免疫法 (RIA)测定电针前后去卵巢大鼠血清中催乳素 (prolactin ,PRL)含量的变化 ;免疫组化和RT PCR观察电针及去卵巢对大鼠脑内PrRP蛋白及mRNA表达的影响。结果 :OVX大鼠与Sham组相比 ,血清PRL水平、孤束核PrRP免疫阳性细胞数、终纹床核PrRP阳性纤维相对光密度值及延髓PrRPmRNA都显著降低 (P <0 .0 1或 0 .0 5) ;OVX +EA大鼠与OVX组相比 ,以上指标均显著升高 (P <0 .0 5)。结论 :PrRP可能参与雌性大鼠下丘脑 垂体 卵巢轴 (HPOA)的调节 ;电针对HPOA异常功能的调整作用 ,可能部分是通过脑内PrRP系统实现的     

针刺对痛经大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的影响

目的：观察针刺对病经大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴（HPOA）的影响，并初步探讨其作用机制。方法：观察了针刺对痛经大鼠β-内啡肽（β-EP）、下丘脑激素（促性腺激素释放激素GnRH）、垂体激素（促性腺激素释放激素受体GnRH-R、卵泡刺激素FSH、黄体生成素LH）和卵巢激素（雌激素E2、雌激素受体ER、孕激素P及孕激素受体（PR）的影响。结果：针刺治疗后，β-EP、GnRH、GnRH—R、FSH、LH、E2、ER、P和PR的水平改变，因此针刺对痛经大鼠HPOA的有调节作用。结论：针刺对痛经大鼠HPOA的作用机制可能与针刺调节HPOA的性激素及其受体的表达有关。     

人工栽培北冬虫夏草子实体对大鼠下丘脑GnRH细胞mRNA表达的调节作用

目的观察人工栽培北冬虫夏草子实体细粉和复合粉对下丘脑促性腺激素释放激素细胞（GnRH细胞）作用的影响。方法用腺嘌呤加入饲料喂饲大鼠,造成大鼠肾阳虚模型,用人工栽培的北冬虫夏草子实体细粉和复合粉进行治疗,通过分子原位杂交的方法显示下丘脑GnRH细胞的mRNA表达以观察北冬虫夏草子实体细粉对其的影响。结果与正常组相比,模型组的Gn-RH细胞杂交信号减弱,阳性细胞数减少,而中药组GnRH杂交信号及阳性细胞数较模型组有提高趋势。结论人工栽培的北冬虫夏草子实体细粉和复合粉可促进大鼠下丘脑GnRH细胞的mRNA表达,增加GnRH分泌,从而调节大鼠的生殖功能。     

针刺镇痛机制中内源性CRH对中枢5-HT含量的影响

目的:探讨内源性促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)参与针刺镇痛可能的中枢作用机制。方法:以佐剂性关节炎(AA)大鼠为炎症痛模型,以痛阈为指标观察AA大鼠鞘内注射抗CRH血清对电针镇痛的影响,用高效液相电化学法检测AA大鼠下丘脑5-羟色胺(5-HT)含量,观察电针夹脊穴时鞘内注射抗CRH血清对下丘脑5-HT含量的影响。结果:电针夹脊穴时AA大鼠鞘内注射抗CRH血清可明显降低痛阈和下丘脑5-HT含量(P<0.05)。结论:内源性CRH参与电针镇痛的机制可能和中枢5-HT含量有密切关系。     

电针对功能性消化不良模型大鼠行为学及下丘脑5-HT3R、CRH mRNA表达的影响

目的:观察电针“印堂”“内关”“足三里”对功能性消化不良(FD)大鼠的行为模式及下丘脑5-羟色胺3受体(5-HT3R)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA表达水平的影响。方法:模型组和电针组大鼠采用多因素造模法复制FD模型。电针组电针“印堂”“内关”“足三里”,每次干预30 min,1次/d,连续2周。观察各组大鼠治疗前后的体重变化; 旷场实验检测电针对FD模型大鼠新环境的自主适应能力以及紧张度的影响; HE染色法观察大鼠胃窦形态的改变; 实时荧光定量PCR法测定大鼠下丘脑5-HT3R、CRH mRNA的表达。结果:干预前,模型组和电针组大鼠体重、旷场自主运动距离以及运动速度均低于空白组(P<0.01)。干预后,电针组大鼠体重、旷场自主运动距离以及运动速度较干预前升高,均高于模型组(P<0.01)。模型组大鼠胃窦组织黏膜下层轻度水肿,黏膜层排列疏松,伴有少量的淋巴细胞存在; 空白组和电针组大鼠胃窦组织结构完整,黏膜层排列整齐,胃腺间质无异常增生,不存在明显病理改变。与空白组相比,模型组大鼠下丘脑5-HT3R、CRH mRNA表达明显上升(均P<0.05)。与模型组相比,电针组大鼠下丘脑5-HT3R、CRH mRNA表达显著降低(均P<0.05)。结论:电针能改善FD大鼠消化不良症状,提高FD大鼠自主运动水平,减轻大鼠胃窦炎症细胞浸润,其机制可能与抑制下丘脑5-HT3R、CRH mRNA的表达有关。     

滋阴泻火中药对性早熟模型大鼠促性腺激素释放激素及其受体mRNA表达的影响

目的：观察滋阴泻火中药对达那唑诱导的性早熟模型大鼠下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)和垂体GnRH受体mRNA表达的影响,探讨滋阴泻火中药的作用机制。方法：将动物分为正常组、模型组、生理盐水组和中药组。模型组、生理盐水组和中药组动物5日龄时皮下注射达那唑300μg;中药组在15日龄时开始喂饲滋阴泻火中药,生理盐水组同时给予等量的生理盐水。免疫组织化学ABC法观察大鼠下丘脑GnRH的表达;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)观察下丘脑GnRHmRNA和垂体GnRH受体mRNA的表达。结果：和正常组比较,模型组和生理盐水组大鼠阴门开启和建立性周期的时间提前,下丘脑GnRHmRNA和垂体GnRH受体mRNA的表达升高,下丘脑GnRH免疫阳性神经元减少;中药组大鼠阴门开启和建立性周期的时间延缓,下丘脑GnRHmRNA和垂体GnRH受体mRNA的表达降低,下丘脑GnRH免疫阳性神经元增多。结论：滋阴泻火中药可能通过抑制下丘脑GnRH的合成和释放以及降低垂体对GnRH的反应性,抑制提前启动的下丘脑-垂体-性腺轴功能,这可能是滋阴泻火中药治疗性早熟的机理。     

电针对焦虑大鼠室旁核促肾上腺皮质素释放激素及其Ⅰ型受体mRNA表达的影响

目的:通过观察电针对下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴应激系统的关键结构之一下丘脑室旁核(PVN)、促肾上腺皮质素释放激素(CRH)及其Ⅰ型受体mRNA(CRHR1mRNA)表达的影响,探讨电针抗焦虑效应的部分神经内分泌作用机制。方法:SD雄性大鼠33只,随机分为空白组、模型组、电针组,采用不可预知的情绪应激刺激方法,建立慢性情绪应激焦虑模型。电针"百会"三阴交"穴,每日1次,每次15min,治疗21d。运用高架十字迷宫测试大鼠焦虑行为,免疫组化法检测下丘脑室旁核CRH的表达,原位杂交法观察下丘脑室旁核CRHR1mRNA的表达。结果:模型组大鼠在开臂停留时间(OT)和进入开臂的次数(OE)分别占进入两臂区停留总时间和总次数的百分比(OT%和OE%)与空白组比较明显下降(P<0.01);电针能显著提高模型动物的OE%和OT%值(P<0.05,P<0.01),并接近正常水平。模型组大鼠下丘脑室旁核CRH和CRHR1mRNA表达明显高于空白组(P<0.05,P<0.01);电针可显著降低模型大鼠CRH和CRHR1mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论:抑制HPA轴的关键激活环节——下丘脑室旁核CRH及其受体表达,可能为电针抗焦虑效应的重要途径之一。     

The methanolic extract of Withania somnifera ACTS on GABAA receptors in gonadotropin releasing hormone (GnRH) neurons in mice

The effect of the methanol extract of Withania somnifera (mWS) on the gonadotropin releasing hormone (GnRH) neuron was examined in juvenile mice using the whole cell patch clamp technique. GnRH neurons are the fundamental regulators of the pulsatile release of GnRH needed for puberty and fertility. GnRH neurons were depolarized by bath application of the mWS (400 ng/μl) under the condition of a high Cl^? pipette solution in current clamp mode. In voltage clamp mode, mWS induced reproducible inward currents (31.7 ± 5.51 pA, n = 14). The mWS‐induced inward currents persisted in the presence of tetrodotoxin (TTX, 0.5 μM), but were suppressed by bicuculline methiodide (BMI, 20 μM), a GABA_A receptor antagonist. These results show that mWS affects the neuronal activities by mediating the GABA_A receptor, which suggests that WS contains an ingredient with possible GABAmimetic activity. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

针药结合对脑缺血大鼠下丘脑室旁核脑源性神经营养因子和血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察电针、天麻多糖及电针结合天麻多糖对脑缺血大鼠下丘脑室旁核(PVN)脑源性神经营养因子(BDNF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨针药结合治疗脑缺血的可能机制。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、天麻多糖组和电针结合天麻多糖组,每组8只。以线栓法制备脑缺血模型。造模成功后,电针组和电针结合天麻多糖组大鼠给予"百会""足三里"穴电针刺激,30min/次,每天1次,连续14d;天麻多糖组和电针结合天麻多糖组大鼠每天给予天麻多糖100mg/kg灌胃,连续14d。采用免疫组化法观察各组大鼠PVN的BDNF和VEGF表达变化。结果:模型组缺血侧PVN的BDNF、VEGF阳性表达较正常组增加(P0.05);电针组、天麻多糖组和电针结合天麻多糖组缺血侧PVN的BDNF、VEGF阳性表达均较模型组增加(P0.05);电针结合天麻多糖组PVN的BDNF、VEGF阳性表达较电针组或天麻多糖组增加(P0.05)。结论:电针结合天麻多糖疗法对大鼠脑缺血损伤有保护作用,其机制可能与脑缺血大鼠缺血侧PVN的BDNF、VEGF表达增加有关,且效果优于单用电针或天麻多糖。     

纳洛酮及电针对雌性大鼠视前区GnRH释放的影响

本文用推挽灌流技术和特异性放射免疫分析法，测定大鼠视前区灌流液中GnRH和γβ-内啡肽的含量，以观察腹腔注射纳洛酮和电针对视前区GnRH和γβ-内啡肽释放的影响，结果表明，卵巢切除组大鼠GnRH的基础含量明显高于正常组大鼠（P＜0.02），腹腔注射纳洛酮30分钟后，卵巢切除组大鼠视前区GnRH含量比注射前明显升高（P＜0．01），而γβ-内啡肽含量未见明显改变，注射纳洛酮对正常组大鼠GnRH含量无明显影响。电针对卵巢切除组和正常组大鼠视前区GnRH及γβ-内啡肽含量均无明显影响，以上结果提示正常生理情况下，雌激素的反馈抑制可能是视前区GnRH释放的主要调节机制，巢卵切除后，雌激素的反馈机制被去除，中枢内阿片肽对视前区GnRH的释放抑制转为其主要的调节机制。     

电针"内关"穴抗心肌缺血损伤中下丘脑室旁核内阿片肽的作用

目的:探讨电针"内关"穴抗心肌缺血损伤的作用机理.方法:取清洁级日本大耳白兔40只,按随机数字表法分为模型对照组10只;纳络酮对照组10只;电针加脑脊液组10只;电针加纳络酮组10只.观察下丘脑室旁核(PVN)微量注射纳络酮后电针"内关"穴对心肌缺血家兔心肌超微结构、Ⅱ导联心电图及心肌细胞跨膜电位的影响.结果:PVN纳络酮微量注射对正常家兔心肌功能无影响,对缺血心肌功能影响轻微,在结扎(缺血)60 min时发挥一定的保护作用(P<0.05);电针"内关"穴对缺血心肌有明显的保护作用,该作用可被PVN注射纳络酮所削弱(P<0.05),但不能完全阻断.结论:(1)PVN在电针"内关"穴抗心肌缺血效应过程中发挥了重要作用;(2)PVN内阿片肽参与介导了"内关"穴抗心肌缺血的针刺效应;(3)除PVN及其内阿片肽外,PVN内的其他递质和中枢其他核团也可能在电针"内关"穴抗心肌缺血效应中发挥作用.     

逆针“关元”“三阴交”对去卵巢大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的影响

目的:观察逆针"关元"三阴交"穴对去卵巢大鼠下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴的调节作用,探讨腧穴主治作用的特异性。方法:选取3月龄SD大鼠,设正常对照组(6只)、假手术组(6只)、模型组(6只)、逆针关元组(11只)、逆针三阴交组(11只)、逆针关元续针组(11只)、逆针三阴交续针组(11只),共7组。4组逆针组预先电针15次(隔日1次)后与模型组一同去除大鼠双侧卵巢造模。两组续针组于造模12d后继续电针5次(隔日1次)。采用酶联免疫法测定各组大鼠下丘脑中促性腺激素释放激素(GnRH),垂体中卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)和子宫中雌二醇(E2)的含量。结果:与正常组相比,模型组大鼠E2水平显著降低(P<0.05),FSH、LH、GnRH水平明显升高(P<0.01);与模型组相比,各电针组E2水平均有不同程度升高,FSH、LH、GnRH水平均有不同程度降低(P<0.05,P<0.01);但各电针组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:逆针"关元"三阴交"能够良性调节去卵巢大鼠紊乱的HPO轴功能,两穴之间未表现出明显穴位特异性。     

中药天癸方对雄激素致不孕大鼠促性腺激素释放激素的影响

目的探讨中药天癸方对雄激素致不孕大鼠(ASR)下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)及雄激素受体(AR)mRNA 的影响。方法新生9日龄 SD 雌性大鼠一次性皮下注射丙酸睾丸酮,建立 ASR 模型,免疫组织化学法检测下丘脑视前区 GnRH 含量,RT-PCR 法测定下丘脑 AR mRNA 表达水平,并观察中药治疗前后上述两种物质的变化。结果 ASR 模型下丘脑视前区 GnRH 含量显著低于对照组(P<0.01),下丘脑 ARmRNA 表达水平显著升高(P<0.05),中药天癸方治疗后,下丘脑视前区 GnRH 含量上升至正常大鼠水平(P>0.05),AR mRNA 表达水平显著下降(P<0.001)。结论 ASR 模型下丘脑 AR mRNA 过度表达,视前区GnRH 含量降低,是引起该模型低促性腺激素和无排卵的原因之一,中药天癸方可使 AR mRNA 表达下降,改善低促性腺激素状态而产生促排卵作用。