Rv0220蛋白IFN-γ释放试验对结核潜伏感染的诊断价值研究

目的 探讨Rv0220蛋白γ-干扰素(IFN-γ)释放试验(IGRA)在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)潜伏性感染中的诊断价值。方法 使用目前IGRA广泛使用的ESAT-6、CFP-10、TB7.7三种刺激抗原作为参照,用Rv0220蛋白刺激112例新疆喀什结核病防治中心(肺核医院)健康体检外周血样本,分析Rv0220蛋白在IGRA时检测结核潜伏性感染的灵敏性与特异性。结果 Rv0220蛋白在刺激IFN-γ释放水平上与ESAT-6、CFP-10、TB7.7混合抗原刺激无显著性差异,以ESAT-6、CFP-10、TB7.7混合抗原检测结果为参照,Rv0220的蛋白检测临床样本的灵敏性与特异性分别为72.73%、100%,阳性预测值为72.73%,阴性预测值为40%。结论 Rv0220抗原蛋白在人结核病外周血IFN-γ体外释放实验中可作为刺激原,对于结核潜伏性感染具有较高的诊断价值。     

基于结核病宿主免疫反应的实验室检测技术及其临床应用

结核分枝杆菌是引起人类结核病的病原体。作为胞内致病菌,结核分枝杆菌与宿主免疫系统的相互作用决定了疾病发生、发展及患者的治疗转归,因此宿主对结核分枝杆菌的免疫应答具有作为结核病早期诊断及治疗预后判断的潜在价值。特别是在目前病原学诊断技术存在诸多弊端的情况下,如何利用宿主的免疫学指标反映疾病的状态是结核病实验室诊断的重要领域。作者主要从基于结核病宿主免疫反应的临床检测技术为切入点,系统回顾了近年来本领域的基础研究热点和临床应用实例,为早期精准诊断结核病提供重要的新思路。     

新型结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测技术对结核病辅助诊断的价值评估

目的:评价以干扰素诱导蛋白-10（IP-10）为靶标的新型结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测技术,即结核感染T细胞检测（PCR荧光探针法,简称IP-10.TB）在结核病辅助诊断中的性能,及该检测技术与结核感染T细胞斑点检测（T-SPOT.TB）技术的一致性。方法:2018年3月至2019年11月,在首都医科大学附属北京...     

影响聚乙二醇干扰素α-2b治疗慢性乙型肝炎患者疗效的多因素分析*

目的 探讨应用α-干扰素治疗的慢性乙型肝炎（CHB）患者血清干扰素-γ诱导蛋白-10（IP-10）、I型干扰素受体（IFNAR）和辅助性T细胞17（Th-17）水平变化及其对治疗应答的影响。方法 2015年6月~2017年12月我科收治的105例CHB患者,采用聚乙二醇化干扰素α-2b治疗48周。采用RT-PCR法检测血清HBV DNA载量,采用双抗体夹心法检测血清干扰素-γ诱导蛋白-10（IP-10）,采用RT-PCR法测定外周血单个核细胞α/β干扰素受体（IFNAR-α、IFNAR-β）、辅助性T细胞17（IL-17A）和IL-17F。采用多因素Logistic回归分析影响聚乙二醇化干扰素α-2b治疗CHB患者应答的影响因素。结果 在治疗结束时,在105例CHB患者中获得完全应答56例（53.3%）,未获得完全应答49例;单因素分析显示获得完全应答与未获得完全应答患者血小板、白蛋白、总胆红素、凝血酶原时间、IFNAR-α和IFNAR-β差异无统计学意义（P>0.05）,应答组基线白细胞计数、血清丙氨酸氨基转移酶、HBV DNA、HBsAg、IP-10、IL-17A和、IL-17F水平分别为（5.6±1.7）×10⁹/L、（108.6±9.5） U/L、（5.4±0.8） lg copies/ml、（4.6±0.9） lg IU/ml、（324.5±86.9） pg/ml、（3.2±0.6） 平均荧光强度（MFI）、（3.1±0.5） MFI,与未应答组的（6.4±1.9）×10⁹/L、（82.5±10.0）U/L、（6.1±0.9） lg copies/ml、（5.8±1.1） lgIU/ml、（381.4±79.6） pg/ml、（3.8±0.7） MFI、（3.6±0.7） MFI比,差异显著（P<0.05）;多因素Logistic回归分析显示,血清HBV DNA、HBsAg、IP-10、IL-17A和IL-17F水平是影响α-干扰素治疗CHB患者应答的因素（P<0.05）。结论 除常识性认识到的血清HBV DNA和HBsAg水平外,本研究发现检测血清IP-10和Th-17水平有助于对CHB患者在α-干扰素治疗后应答反应的预测,或许能为临床做出治疗决定有裨益。     

重视结核分枝杆菌抗原检测技术研发

结核病疫情防控面临的新形势需要考虑新的快速、便捷的早期筛查或诊断技术。简便、快速和廉价的免疫学诊断技术是结核病研究人员重点关注并且坚持不懈的努力方向。目前结核分枝杆菌抗原靶标包括单一抗原的检测和多种抗原同时检测,涉及的检测技术包括免疫学技术、质谱技术及纳米技术。随着技术的进步,结核分枝杆菌抗原在检测技术和研究思路上都取得了较大的进展,但仍存在一些问题。结核分枝杆菌抗原研发的方向应注重多种特异性抗原同时检测。随着新型纳米材料和传感方法的发展,特异性强、免疫原性好的抗原得到不断发现和深入研究,这将有助于结核分枝杆菌抗原检测得到新的完善和发展。     

CFP10-ESAT6融合蛋白用于结核分枝杆菌感染诊断ELISA方法的初步研究

目的 制备结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白,探讨CFP10-ESAT6融合蛋白在结核分枝杆菌免疫诊断中的应用价值。方法 PCR扩增得到CFP-10、ESAT6基因片断,将其先后克隆入pET-28a表达载体。优化表达条件、用镍亲和层析的方法纯化带His标签的重组CFP10-ESAT6融合蛋白(rCFP10-ESAT6)。制备兔多克隆抗体,建立rCFP10-ESAT6为抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,以健康者血清为对照,检测170例结核患者血清的抗体。结果 重组质粒 pET28a-CFP10-ESAT6靶基因测序结果与预计设计完全一致。融合蛋白在E.coli BL21(DE3)工程菌中均为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的40%。利用金属螯合亲和层析直接纯化重组蛋白,纯度达到95%以上。Western blot分析表明,重组蛋白能与结核患者血清发生特异性免疫结合反应,与健康者血清不发生反应。CFP10-ESAT6的兔多克隆抗体的效价为1∶8 000,CFP10-ESAT6作为包被抗原的检测结核病人血清中特异性抗体的间接ELISA最佳包被浓度为0.002 μg/mL,患者血清的最佳稀释度为1∶500。检测结果与临床诊断的符合率,ELISPOT>ELISA(rCFP10-ESAT6)>ELISA(kit)。结论 CFP10-ESAT6融合蛋白具有较高的抗原特异性和免疫反应性,有可能成为结核病免疫学诊断的特异抗原,对结核的诊断具有重要参考价值。     

结核分枝杆菌EsxV亚单位疫苗黏膜免疫诱导的免疫应答

目的 研究结核分枝杆菌抗原Rv3619c(EsxV)黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答水平。方法 PCR法扩增esxV基因克隆入原核表达载体pET28a(+),获得的重组E.coli诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定蛋白的表达,亲和层析法纯化EsxV蛋白。以EsxV和/或联合环二腺苷酸(c-di-AMP)经鼻黏膜免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠特异性抗体水平及亚类,MTS法检测脾细胞增殖,qRT-PCR检测脾和肺脏细胞因子表达水平,ELISA法检测脾细胞因子分泌水平。结果 成功构建EsxV的原核表达载体pET28a(+)-esxV并诱导表达目的蛋白,亲和层析法获得了纯化的重组EsxV蛋白。EsxV经黏膜免疫可诱导显著的体液免疫应答,但诱导的细胞免疫应答水平不高。EsxV与c-di-AMP经黏膜接种可诱导特异性IgG水平增加,EsxV蛋白特异的脾细胞增殖,脾和肺细胞的IFN-γ转录增加。c-di-AMP显著提高EsxV特异的IFN-γ、IL-2、IL-10和IL-17细胞因子分泌,而不诱导炎症因子TNF-α和IL-6表达。结论 EsxV与c-di-AMP佐剂构建的亚单位疫苗可诱导特异性体液和细胞免疫应答,可进一步用于新型结核病亚单位疫苗的研制。     

不同国家γ干扰素释放试验临床应用指南的概述

γ干扰素释放试验(interferon gamma release assays,IGRAs)是一种新型的快速诊断结核分枝杆菌感染的免疫学方法.目前已经有16个国家制定了IGRAs诊断结核分枝杆菌感染的应用指南.各国IGRAs应用指南主要针对以下情况进行制定的:成人活动性结核病、成人潜伏结核感染、医疗工作者潜伏结核感染...     

应用蛋白芯片技术快速诊断肺结核病的研究

目的评价结核分枝杆菌蛋白芯片在检测临床标本中结核分枝杆菌抗体的应用价值。方法应用结核分枝杆菌蛋白芯片检测117例结核病患者的血清标本、103例肺部其他疾病患者和健康人的血清标本,并与痰涂片镜检法相比较。结果在菌阳肺结核、菌阴肺结核中,结核分枝杆菌抗体芯片检测的阳性率分别是100%(26/26)、49.6%(45/91),在肺部其他疾病患者和健康人中,结核分枝杆菌抗体芯片检测的阴性率是98.1%(101/103)。结论结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片是一种集基因工程技术、芯片技术和免疫学技术的检测一体化的新型结核病快速诊断方法,具有简便、快速、大量、敏感性高和特异性强、检测成本较低的特点,是结核病、尤其是菌阴结核病辅助诊断的有效方法。     

临床标本中结核分枝杆菌抗原蛋白鉴定的研究进展

结核病是由结核分枝杆菌感染导致的严重的呼吸系统传染病,其传播隐匿,防控难度大。目前的结核病快速发现技术存在一定缺陷,亟需新的诊断技术。抗原检测技术具有适用广泛、操作简便、快速精确的优点,但尚未发现具有良好的稳定检测效果的靶标。另外,即使是针对同一抗原靶标,不同研究的检测效能差异也较大。因此,笔者对不同鉴定方法和实验研究证实的各种临床标本中存在的抗原蛋白的检测状况进行综述,以重新思考结核分枝杆菌抗原在临床标本中实际存在的状态和含量,以及改进抗原发现和鉴定的方法,为结核病抗原诊断技术的发展提供理论参考。     

儿童结核病的实验室诊断现状与进展

儿童结核病是全球结核病防控工作的重要组成部分,诊断儿童结核病主要依靠实验室检查结果,但由于儿童结核病本身和标本的特殊性,实验室准确、快速地诊断儿童结核病仍面临挑战。病原学诊断作为儿童结核病诊断的金标准,其敏感度不佳;以超敏结核分枝杆菌和利福平耐药基因检测(Xpert MTB/RIF Ultra)为代表的新型分子生物学检测技术因其较高的敏感度和较短的检测时间有其应用前景;结核菌素皮肤试验(TST)被WHO推荐用于中低收入国家;直接抗原检测技术在少菌、肺外结核标本中敏感度高,在儿童结核病的检测中具有独特价值;其他免疫学新方法对于区分潜伏和活动性结核感染方面具有重要意义;此外,目前已有检测结核分枝杆菌感染后基因表达、蛋白质产生和生物标志物变化的新方法投入研究。留取多份标本或不同标本类型、不同检测方法联合检测有助于提高儿童结核病的检出率。提高结核病在现有方法和非侵入性、易获取标本中的检出率,以及评估新的生物标志物和新技术的适用性是未来儿童结核病实验室诊断研究的方向。     

结核分枝杆菌细胞外RNA的研究现状

结核分枝杆菌引起的结核病,已成为全球十大死因之一。对于结核病,我们迫切需要更早期的诊断和更有效的治疗方法。细胞外RNA(extracellular RNA,exRNA)在作为多种疾病生物标志物和治疗手段上,表现出巨大的潜力。为了后续探讨结核分枝杆菌exRNA在结核病诊断及治疗方面的应用,作者总结了目前结核分枝杆菌exRNA的研究现状,并讨论了结核分枝杆菌exRNA的产生机制,希望对结核分枝杆菌exRNA的探究提供有利的帮助。     

Research progress of extracellular RNA of Mycobacterium tuberculosis

结核分枝杆菌引起的结核病,已成为全球十大死因之一。对于结核病,我们迫切需要更早期的诊断和更有效的治疗方法。细胞外RNA(extracellular RNA,exRNA)在作为多种疾病生物标志物和治疗手段上,表现出巨大的潜力。为了后续探讨结核分枝杆菌exRNA在结核病诊断及治疗方面的应用,作者总结了目前结核分枝杆菌exRNA的研究现状,并讨论了结核分枝杆菌exRNA的产生机制,希望对结核分枝杆菌exRNA的探究提供有利的帮助。     

结核分枝杆菌抗体检测试剂及相关问题的探讨

结核分枝杆菌抗体检测试剂在结核病辅助诊断中的作用已写入相关指南。WHO对结核抗体检测试剂在临床的应用价值提出了质疑。作者分析了结核分枝杆菌抗体检测试剂在中国的注册现状并剖析了可能的原因;同时,对结核抗体检测试剂注册申报中的主要原材料、分析性能,以及临床试验中的重点问题进行了阐述。     

非编码RNA在结核病中的研究进展

结核病是结核分枝杆菌引起的慢性传染病,是世界上最严重的传染病之一。尽管结核病的检测技术和治疗方法已取得重大进展,但仍缺少早期筛查和针对性治疗的解决方案。非编码RNA (non-coding RNA,ncRNA) 广泛参与包括结核分枝杆菌感染在内的多种生物学过程,并发挥着重要作用。针对机体与结核分枝杆菌的相互作用,笔者对...     

实验室检测技术在肺结核活动性判断中的应用进展

我国肺结核疫情十分严峻,临床上确诊活动性肺结核的“金标准”是结核分枝杆菌病原学检查,但对病原学阴性肺结核活动性的判断存在困难。作者介绍了目前用于病原学阴性肺结核活动性判断的实验室评价指标,包括结核分枝杆菌抗原、炎性和急性期反应标志物、免疫学指标、血液转录标志物等,指出了目前实验室检测技术在肺结核活动性判断及临床应用中存在的问题,并对其未来发展进行了论述与展望。     

巨噬细胞在抗结核感染中的作用

巨噬细胞在结核病发病过程及机体抗结核免疫过程中扮演重要的角色。巨噬细胞是机体天然免疫的重要组成细胞,同时又是一类主要的抗原提呈细胞。在天然免疫和获得性免疫中都起着关键的作用。结核病是由结核分枝杆菌引起的严重危害人类健康的主要传染病,结核分枝杆菌可以通过多种途径来干扰机体巨噬细胞的免疫应答。本篇综述的目的在于讨论宿主被结核分枝杆菌入侵后,巨噬细胞在各种抗结核感染的免疫应答中的作用机制。     

加强结核病病理学诊断的临床应用与研究

结核病是一种由结核分枝杆菌复合群引起的传染性疾病,严重危害着人类的健康。国家卫生和计划生育委员会于2017年11月9日发布了《WS 196—2017结核病分类》与《WS 288—2017肺结核诊断》两项强制性卫生行业标准,并且于2018年5月1日起施行;同时废止《WS 196—2001结核病分类》和《WS 288—2008肺结核诊断》。在《WS 288—2017肺结核诊断》标准中,显著提高了病理学诊断在肺结核诊断和精准治疗中的地位。病理学诊断阳性的患者即可确诊为肺结核;影像学检查结果支持肺结核的诊断,同时分子生物学检查阳性的患者也可以确诊为肺结核。多聚酶链反应(PCR)技术可以快速诊断结核分枝杆菌感染,核酸杂交技术可以快速检测基因的突变位点,判断结核分枝杆菌对抗结核药物的耐药种类和数量。深入学习与贯彻《WS 288—2017肺结核诊断》标准,对于明确和了解病理学诊断在结核病临床诊断和精准治疗方面作用具有十分重要的意义。