芜菁汁对正常肝细胞及肝癌细胞株的影响

许多研究表明 ,某些蔬菜特别是十字花科蔬菜对致突变的活性有抑制作用 [1 ,2 ]。流行病学和动物资料表明 ,花椰菜、甘蓝、花菜等十字花科蔬菜具有肿瘤化学预防作用 [3]。芜菁 ( Brassica rapa Linn)属十字花科芸苔属蔬菜 ,其块根肥大、扁圆如盘 ,俗称盘菜。盘菜为温州特产 ,其块根肉质 ,洁白 ,脆嫩 ,营养丰富 ,颇受消费者喜爱。研究表明 ,温州产芜菁块根汁及叶汁对 6 0 Co-γ引起的辐射损伤均具有明显的防护和修复效应[4 ,5] ;对环磷酰胺引起的突变有明显的抑制作用 [6 ] 。本研究观察芜菁块根汁对 L-0 2细胞与 SMMC-772 1细胞生长的影…     

镉对人肝癌细胞增殖及凋亡影响

目的 研究镉对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法 体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721分别以0、40、80、160μmol/L的CdCl2处理0～48 h,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞相对存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,分光光度法检测半胱天冬酶Caspase-3酶活性的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(western blot)法测Caspase-3 mRNA和蛋白表达的变化。结果 随着镉处理浓度的增加,氯化镉对细胞活力的抑制作用明显增强,40、80、160μmol/L氯化镉处理SMMC-7721细胞,其抑制率分别为33.94%、48.04%和68.54%,均明显高于0μmol/L氯化镉处理组,差异均有统计学意义(P<0.01);40、80、160μmol/L镉处理组细胞的凋亡百分率分别为(25.77±4.66)%、(34.97±9.25)%和(55.14±5.67)%,与0μmol/L镉处理组比较明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);镉处理SMMC-7721细胞24和48 h,Caspase-3相对酶活性均随着镉浓度的增加而明显增强;40μmol/L镉处理SMMC-7721细胞,12、24和48 h可明显上调细胞中Caspase-3基因及蛋白的表达,Caspase-3基因mRNA表达水平分别为对照组的4.1、3.7和3.9倍,Caspase-3蛋白表达分别为对照组的5.8、6.0和7.2倍。结论 镉能明显抑制人肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,Caspase-3基因在镉诱导SMMC-7721细胞凋亡过程中起着重要的作用。     

凋亡基因表达与FGR胎盘细胞凋亡的相关性研究

目的:探讨凋亡相关基因P53、Bc l-2和Bax在两组胎盘细胞中的表达情况及与胎儿宫内生长受限(FGR)病因的相关性。方法:应用免疫组化法检测凋亡相关基因P53、Bc l-2和Bax在两组胎盘细胞中的表达情况。结果:①Bc l-2、Bax的表达强度在FGR组与对照组间差异有统计学意义(P<0.05),P53的阳性率及表达强度在FGR组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);②Bc l-2、Bax、P53的阳性率及表达强度在FGR组中的FGR不伴有PIH组及FGR伴有PIH组两组间差异无统计学意义。结论:①正常孕妇和FGR患者胎盘组织中均有细胞凋亡,但FGR患者胎盘细胞凋亡较多,这可能是引起FGR发生的重要病理过程;②FGR胎盘细胞凋亡可能是非P53依赖性的,由Bax、Bc l-2介导的细胞凋亡。     

镉诱导HL-7702细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3的表达

镉是一种有毒的重金属元素，易在体内蓄积，镉对机体毒性效应十分复杂。肝脏是镉损伤的主要靶器官之一，目前对镉致肝细胞损伤机制尚不十分清楚。镉可诱导多种细胞发生凋亡，如大鼠肝细胞、人肝癌细胞株和原代培养的鼠肺上皮细胞等。我们就镉诱导人正常肝细胞系HL-7702细胞凋亡作用进行研究，并对其凋亡机制进行了初步探讨。     

重复加热对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨连续10d加热后残留的HepG2细胞的凋亡率改变及Bc l-2和Bax基因/蛋白的表达变化。方法HepG2细胞经43℃加热,每次80m in,2次/d,共10个循环后,检测其细胞凋亡率、Bc l-2和Bax基因/蛋白的表达。结果热处理前、后HepG2细胞的凋亡率分别为(9.0%±0.8%)、(5.8%±1.3%)(P<0.05);热处理后HepG2细胞的Bax基因/蛋白的表达无明显变化,但Bc l-2基因/蛋白的表达增强,且Bc l-2/Bax比值的增加。结论热处理后HepG2细胞的凋亡率降低与其Bc l-2基因/蛋白的强表达及Bc l-2/Bax比值的增加有关。     

蓬子菜总黄酮诱导NB4细胞株凋亡作用

目的 探讨蓬子菜总黄酮（FGVL）抗急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4的作用及诱导凋亡的分子机制。方法 噻唑蓝法检测FGVL对细胞增殖的抑制作用;吖啶橙/溴乙锭荧光染色观察NB4细胞凋亡的形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链式反应检测凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达。结果 FGVL明显抑制NB4细胞增殖,FGVL50、100、200 μg/mL组细胞增殖抑制率分别为（24 h：6.7%、7.4%、24.3%,48 h：2.3%、18%、45.9%,72h：3.7%、24%、51.7%）;细胞形态学观察可见明显的细胞凋亡特征;并有典型的DNA“梯形”凋亡条带出现。FGVL下调Bcl-2 mRNA表达,上调Bax mRNA表达,呈剂量和时间依赖关系。结论 FGVL可抑制急性早幼粒细胞白血病NB4细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制与调节Bcl-2/Bax表达有关。     

裙带菜多糖诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的研究

目的:检测裙带菜多糖(UPPS)对人肝癌HepG-2细胞生长的抑制作用,并探讨其诱导细胞凋亡和抗肿瘤作用的关系。方法:采用MTT法、流式细胞术检测UPPS对HepG-2细胞生长的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用;采用免疫细胞化学染色,观察Bax和Bcl-2表达水平的变化。结果:UPPS能抑制HepG-2细胞增殖,明显高于对照组(P<0.01)。诱导细胞凋亡作用发生在UPPS处理24～48h;UPPS处理HepG-2细胞后,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达下调。结论:UPPS对HepG-2的抑制作用是通过诱导细胞凋亡实现的,可能与Bcl-2和Bax表达水平的变化有关。     

氟对人成骨样细胞株凋亡的影响

目的研究氟化钠(NaF)对人成骨样细胞株凋亡的影响及其机制。方法四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖能力,萤光染剂(Hoechst 33342)染色,DNA梯形(DNA Ladder)琼脂糖电泳,流式细胞仪分析检测细胞凋亡,RT-PCR半定量分析抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax mRNA表达,显色法检测凋亡相关激酶半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活性。结果NaF(4,6,8×10-3mol/L)可以剂量依赖性地抑制细胞增殖(P<0.01),Hoechst33342染色、琼脂糖电泳和流式细胞仪均可检测到氟对成骨细胞凋亡的诱导作用。RT-PCR结果显示:NaF可以剂量依赖性地抑制Bcl-2 mRNA表达(P<0.01),提高Bax mRNA表达(P<0.01),并显著增强Caspase-3的活性(P<0.01)。结论NaF可以显著的抑制人成骨样细胞株增殖和诱导其凋亡,并可能是通过抑制Bcl-2表达,促进Bax表达和提高Caspase-3活性来诱导人成骨样细胞株凋亡。     

肿瘤坏死因子诱导凋亡配体诱导胃癌细胞株MKN28细胞凋亡及机制探讨

目的探讨肿瘤坏死因子诱导凋亡配体(TRAIL)对胃癌细胞株MKN28细胞体外诱导凋亡的作用及机制。方法采用MTT法培养、分析细胞增殖抑制率及细胞存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期,AO/EB染色观察凋亡细胞。结果 TRAIL可明显抑制MKN28细胞的增殖,并可诱导细胞的凋亡。结论 TRAIL可诱导MKN28细胞株的凋亡,并呈剂量依赖性。     

锰诱导PC12细胞凋亡与P53、MDM2蛋白表达

目的 探讨锰对嗜铬细胞瘤细胞(PC12cells)凋亡的诱导作用及与抑癌基因P53、原癌基因MDM2蛋白表达的关系.方法 以PC12细胞作为多巴胺能神经元的模型细胞,取对数生长期的PC12细胞,用含200,400,800μmol/LMnCl2的培养液分别染毒培养24,36,48h.四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞的生长情况,流式细胞仪(FMC)和原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡状况;用免疫细胞化学法检测细胞P53、MDM2蛋白表达强度.结果 氯化锰可呈时间和剂量依赖性抑制PC12细胞的增殖和诱导细胞凋亡,抑制率为11.8%～73.6%,凋亡率为8.72%～53.60%.免疫化学法检测结果显示,随锰浓度的增高,P53蛋白的表达增加(P<0.01),而MDM2蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.01),且呈剂量依赖关系.结论 锰可诱导PC12细胞凋亡,上调P53基因的表达和下调MDM2基因的表达可能在其诱导PC12细胞凋亡中起着重要的作用.     

麦胚黄酮类提取物诱导乳腺癌细胞株凋亡的作用

目的　检测麦胚黄酮类提取物对人体乳腺髓样癌细胞株 BCap- 37凋亡的诱导作用 ,探讨其分子学机制。方法　用流式细胞仪检测麦胚黄酮类提取物对人体乳腺髓样癌细胞株BCap- 37细胞凋亡的诱导作用及对 bcl- 2基因蛋白表达的抑制作用。用光学显微镜观察凋亡细胞的形态学特征。结果　 1 .麦胚黄酮类提取物主要阻断乳腺癌细胞由 G2 - M向 S期转变 ,并能诱导细胞发生凋亡 ,呈现剂量 -效应关系 ( P<0 .0 0 0 1 )。 2 .麦胚黄酮类提取物亦能明显抑制人体乳腺癌细胞株 BCap- 37中 bcl- 2基因的蛋白表达 ,其表达率与麦胚黄酮类提取物浓度成负相关 ( P<0 .0 1 )。3.显微镜下观察 ,可见乳腺癌细胞出现凋亡特征性形态学改变 :细胞体积缩小、胞浆浓缩、胞核固缩、染色质靠核膜凝集成不同形态 ,如马蹄型、月牙型、肾型 ,形成凋亡小体。结论　麦胚黄酮类提取物具有诱导人体乳腺髓样癌细胞株 BCap- 37凋亡的作用 ,bcl- 2蛋白表达水平的降低可能是促进细胞凋亡的重要条件     

新疆天然植物黑加仑对食管癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察新疆天然植物黑加仑水提物对食管癌细胞的影响及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度(10-1、10-2、10-3g/ml)黑加仑水提物作用不同时间(12、24、36h)对人食管癌细胞株Eca109的细胞存活量的影响,以大鼠正常肝细胞(BRL)为正常对照细胞株;用Bradford法测定肿瘤细胞蛋白质合成的变化;采用流式细胞技术(FCM)观察黑加仑作用后肿瘤细胞周期变化及凋亡情况;通过倒置显微镜观察细胞的形态变化。结果:黑加仑水提物10-1g/ml组对人食管癌细胞株Eca109作用24h后,癌细胞的生长和蛋白合成均有明显抑制作用(P<0.05),对正常肝细胞的存活量及蛋白合成均无影响;流式细胞仪检测二倍体峰前出现凋亡峰,细胞凋亡率为49.6%;并且癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态。结论:黑加仑水提物可通过诱导细胞凋亡而抑制人食管癌细胞株Eca109细胞的生长。     

TSA诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及对FHIT表达的影响

[目的]研究去乙酰化转移酶抑制剂TSA对人肝癌HepG2细胞的作用及其FHIT表达的影响。[方法]培养的人肝癌HepG2细胞随机分为两组:对照组给予等量DMSO,实验组给予终浓度分别为125、250、500、1 000、2 000nmol/L的TSA,培养24 h后收集细胞,MTT比色法检测细胞活性,TUNEL法检测细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学检测FHIT的mRNA和蛋白表达水平。[结果]与对照组相比,经TSA处理的细胞增殖速度明显减慢,TUNEL阳性细胞百分率随TSA浓度的升高呈剂量依赖性增高(P﹤0.01),细胞FHIT mRNA表达增强(P﹤0.01),FHIT蛋白表达差异具有统计学意义(P﹤0.01)。[结论]TSA可能通过抑制HDACs的活性,上调FHIT表达,诱导细胞凋亡而抑制肝癌细胞生长。     

植酸对人肝癌细胞株HepG_2细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的研究肌醇六磷酸(IP6)对人肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响并探讨其作用机制。方法以体外培养人肝癌细胞株HepG2为研究对象,应用流式细胞仪检测不同浓度IP6作用24h后对HepG2周期的影响;以免疫细胞化学法检测IP6对细胞周期相关蛋白cyclinD1、Rb、P27表达的影响;RT-PCR法检测IP6对HepG2细胞cyclinD1、CDK4 mRNA表达的影响。结果经IP6作用处理的HepG2细胞的细胞周期发生G1期阻滞。免疫细胞化学结果显示:与对照组比,各IP6浓度组均能抑制cyclinD1蛋白的表达(F=225.02,q=15.20-25.35,P<0.05),上调Rb(F=63.31,q=2.77-13.06,P<0.05)、P27蛋白的表达(F=254.75,q=4.71-25.71,P<0.05);RT-PCR结果显示,与对照组相比,各IP6浓度组均能抑制cyclinD1(F=672.34,q=16.41-41.99,P<0.05)和CDK4 mRNA(F=108.35,q=5.32-16.27,P<0.05)的表达。结论 IP6对HepG2细胞生长具有明显的抑制作用。其机制可能是IP6降低cyclinD1、CDK4水平,上调Rb、P27蛋白的水平而作用于G1-S限制点,使HepG2细胞周期发生G1期阻滞,从而起到抑制细胞增殖的作用。     

叶黄素对人肝癌细胞HepG2的抑制作用及其机制研究

目的研究叶黄素对人肝癌细胞的抑制作用并探讨其可能机制。方法以HepG2人肝癌细胞株和L02正常人肝细胞株为研究对象,设叶黄素低、中、高剂量组(20、40、80 mol/L)和溶剂对照组。常规细胞培养后进行细胞计数、MTT法测定细胞存活率、DCFH-DA法测定ROS活性、HPLC法测定ATP含量、RT-PCR测定Bax mRNA及p53mRNA表达水平。结果 HepG2细胞经叶黄素干预处理后,低、中、高剂量组的细胞存活率显著降低(P<0.05),并且随干预时间的增加而持续降低,ROS水平和ATP含量显著降低(P<0.05);高剂量组的Bax mRNA表达和中、高剂量组的p53 mRNA表达显著增加(P<0.05)。而L02细胞经叶黄素干预处理后,细胞存活率和ATP含量均无显著性变化。结论叶黄素能抑制人肝癌细胞的生长,其机制可能与叶黄素清除细胞内ROS、抑制肝癌细胞ATP生成及上调凋亡基因Bax和p53 mRNA的表达有关。[营养学报,2012,34(4):332-335]     

微囊藻毒素-LR对睾丸支持细胞活性及凋亡基因表达的影响

[目的]研究微囊藻毒素-LR对睾丸支持细胞活性的影响及其对细胞凋亡相关基因表达的影响. [方法]分离纯化大鼠睾丸支持细胞,用低剂量(0～500×10-3 μg/ml)和高剂量(1～20 μg/ml)微囊藻度素-LR染毒细胞,细胞培养24 h、48 h和72 h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验和中性红吸收(NR)实验检测微囊藻毒素-LR对支持细胞活性的影响;将纯化后的部分睾丸支持细胞接种于6孔板中,给予不同剂量的微囊藻毒素-LR (0,1,10μg/ml),于24h和48 h后提取细胞总RNA,RT-PCR方法检测细胞中凋亡相关基因P53、bax和bcl-2表达水平.[结果]低剂量(0～500×10-3 μg/ml)微囊藻毒素-LR作用于支持细胞24、48、72 h,细胞活性增强.高剂量微囊藻毒素-LR(10和20μg/ml)作用24、48 h,细胞活性显著降低.时闻效应实验结果显示随着暴露时间的延长细胞活性降低.细胞暴露于1 μg/ml微囊藻毒素-LR后与对照组细胞相比较P53和bcl-2 mRNA水平相对表达量增加,bax表达量降低.暴露予10 μg/ml微囊藻毒素-LR后P53和bax mRNA水平相对表达增加,bcl-2表达降低.[结论]低剂量的微囊藻毒素-LR对 细胞具有兴奋效应,随着剂量的增高及暴露时间的延长微囊藻毒素-LR能够明显抑制细胞活性.同时微囊藻毒素-LR可通过P53、bax和bcl-2基因的表达影响睾丸支持细胞的凋亡.     

丁酸钠对大肠癌HT-29细胞凋亡以及钙离子浓度的影响

目的研究丁酸钠(sodium butyrate,NaB)诱导大肠癌细胞HT-29凋亡的机制。方法 Hoechst 33342染色、Annexin V+PI和免疫印迹法检测NaB诱导大肠癌HT-29细胞的凋亡作用;激光共聚焦显微镜检测内质网(endoplasmic reticulum,ER)和细胞质中游离Ca2+浓度。结果 NaB可诱导大肠癌HT-29细胞凋亡,且具有剂量和时间反应关系;NaB浓度为2.5mmol/L,作用24h时凋亡标志分子(poly ADP-ribose polymerase,PARP)出现明显的切割片段;NaB可降低ER中游离Ca2+浓度以及升高细胞质内游离Ca2+浓度。结论 NaB可通过调节ER和细胞质中Ca2+浓度而诱导大肠癌HT-29细胞凋亡。     

COX-2及凋亡基因表达在二十二碳六烯酸抑制人胰腺癌细胞体外增殖中的变化

目的研究COX-2和凋亡相关基因Bcl-2、Bax在二十二碳六烯酸(DHA)抑制人胰腺癌细胞体外增殖中表达的变化,探讨DHA抑制肿瘤细胞的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验、流式细胞技术对细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期以及肿瘤相关蛋白COX-2和凋亡基因Bcl-2、Bax进行分析。结果DHA能以时间-剂量依赖关系抑制人胰腺癌细胞增殖,同时诱导细胞凋亡。DHA对正常人成纤维细胞的增殖无明显影响。流式细胞仪检测显示:G0-G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降。DHA作用24h后,胰腺癌细胞的COX-2、Bcl-2、Bax蛋白表达下降。结论DHA下凋COX-2、Bcl-2、Bax的表达可能是其抑制胰腺癌细胞增殖的作用机制之一。     

枸杞多糖对慢性辐射小鼠细胞凋亡及bc1-2基因表达的影响

目的:探讨枸杞多糖(LBP)对辐射小鼠细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响。方法:以水提取-乙醇沉淀法制备枸杞多糖,并制成0.8%的饲料,给予受试小鼠(枸杞多糖组)。正常对照组、辐射对照组给予普通饲料。除正常对照组外,另两组均用60Coγ射线对动物进行全身性照射,每天照射1次,每天照射剂量为0.084Gy,每周照射5d,连续照射6w,照射总剂量为2.52Gy。检测骨髓微核率、睾丸精母细胞染色体畸变、精子畸形率、肝细胞caspase-3mRNA表达水平、细胞凋亡及凋亡相关基因bc1-2表达等指标。结果:LBP可使辐射引起的微核率、染色体畸变、及精子畸形率显著降低,骨髓细胞增殖活性提高,凋亡率降低,使辐射小鼠bc1-2基因表达提高、caspase-3mRNA表达水平降低。结论:枸杞多糖的抗辐射作用与其调控细胞bc1-2基因表达,影响细胞凋亡有关。