江苏省首例人感染ST1型猪链球菌的快速检测及分子特征分析

目的对2014年江苏省一起疑似人感染猪链球菌病的病原菌进行实验室快速检测并分析其分子特征。方法采用实时荧光PCR方法对病人标本中提取的DNA进行猪链球菌血清2型特异基因检测,运用PCR方法进行猪链球菌毒力基因鉴定及多位点序列分析。结果病人标本中检测到猪链球菌种特异基因(16srRNA)和血清2型荚膜多糖编码基因(cps-2J),5种毒力基因(mrp,sly,ef,gapdh,fbps)全部阳性,多位点序列分析结果为ST1型。结论该病例的病原菌为携带5种毒力基因的ST1型猪链球菌血清2型菌株,该型别在江苏省尚属首次报道。     

PCR快速检测猪链球菌2型方法的建立

目的建立一种快速、特异且敏感的猪链球菌菌型的检测方法。方法从疑似猪链球菌感染患者血液（抗凝血）中提取DNA为模板，并合成引物检测猪链球菌特异性16 Sr RNA基因片段、2型猪链球菌特异性荚膜多糖编码基因片段cps2J、溶菌酶释放相关蛋白编码基因片段mrp、细胞外蛋白因子编码基因片段ef。结果PCR扩增结果证实是猪链球菌2型。结论PCR反应体系是一种检测和鉴定猪链球菌2型的快速、特异且敏感的方法。     

人感染猪链球菌病的病原分离与PCR方法的快速检测

目的研究人感染猪链球菌的生物学特征，并建立一种快速、特异且敏感的检测方法。方法将疑似猪链球菌感染患者的血液进行增菌培养，对所分离的病原菌进行染色形态观察、API 32 Strep生化鉴定；同时从该疑似患者血液（抗凝血）中提取DNA为模板，并合成引物检测猪链球菌特异性16SrRNA基因片段、2型猪链球菌特异性荚膜多糖编码基因片段cps2J、溶菌酶释放相关蛋白编码基因片段mrp、细胞外蛋白因子编码基因片段ef。结果PCR扩增结果证实是猪链球菌2型，而从血液中分离的病原菌，经API 32 Strep生化鉴定，也证实为猪链球菌2型。结论人感染猪链球菌的病原学及PCR检测符合猪链球菌2型，同时该PCR反应体系是一种检测和鉴定猪链球菌2型的快速、特异且敏感的方法。     

猪链球菌2型多重PCR鉴定方法建立

目的 建立猪链球菌2型多重PCR鉴定方法.方法 根据猪链球菌种特异基因16S rRNA序列和猪链球菌2型特异性荚膜多糖编码基因cps2J基因序列,设计和合成2对特异引物,通过条件和体系优化,建立多重PCR检测方法.结果 猪链球菌2型参考株及18株分离株均扩增到清晰的目的 条带,而6株非猪链球菌2型参考菌株不能扩增出目的 条带.结论 多重PCR可以用于猪链球菌2型检测,特异性和敏感性好,为该病的快速诊断和分子流行病学调查提供了新的技术方法.     

聚合酶链式反应诊断2型猪链球菌

目的从分子水平鉴定四川省2005年不明原因疾病病原菌的属、种、型及毒力基因,为诊断和治疗提供科学依据。方法聚合酶链式反应(PCR)检测链球菌属特异性基因(TUF)、猪链球菌种特异性基因(Species)、2型和毒力特异性基因(CPS2J)以及毒力基因溶菌酶释放相关蛋白基因(MRP)和溶血素基因(SLY);同时与VITEK2等全自动生化鉴定仪鉴定结果进行比对。结果所试103份标本中,98份均具有所检测的5个基因,确定为猪链球菌2型;另5份标本排除猪链球菌可能。73株纯培养细菌用VITEK2全自动生化鉴定仪鉴定有68株菌被鉴定为猪链球菌2型,3株菌被鉴定为猪链球菌1型,2株菌不能鉴定。结论2005年四川省不明原因疾病疫情为猪链球菌2型感染人造成。PCR检测5个特异基因鉴定猪链球菌2型,其结果优于VITEK2全自动生化鉴定仪。     

贵州省死亡病例1型猪链球菌的分离及分子生物学特征分析

目的 对来自贵州省1例疑似人感染猪链球菌患者的血液标本进行细菌分离鉴定,了解该菌株的分子生物学特征,为病例的快速确诊提供病原学依据。方法 采用血培养法对疑似感染猪链球菌患者的血液进行细菌分离培养,对分离菌株采用细菌16S rRNA 基因通用引物进行PCR扩增和DNA序列测定,将测序结果通过GenBank数据库的BLAST程序进行在线比对,再用猪链球菌种特异的16S rRNA 基因进行猪链球菌种的鉴定,进一步分别采用PCR检测常见强致病性血清型1、2、7和9型特异的cps 1j、cps 2j、cps 7h和cps9h基因以鉴定其血清型,并对菌株毒力基因gapdh、mrp、sly和ef进行检测。结果 血培养分离出1株链球菌可疑菌株,序列比对结果显示该分离菌株16S rRNA基因与猪链球菌的同源性最高,进一步的猪链球菌特异性PCR检测显示分离菌株16S rRNA基因为阳性,血清型特异PCR检测结果显示cps 1j基因为阳性,而cps 2j、cps 7h和cps 9h基因为阴性,毒力基因检测结果显示分离菌株gapdh,sly和ef毒力基因为阳性,而mrp为阴性。结论 本次从疑似感染猪链球菌死亡病例分离的菌株为猪链球菌1型,其毒力特征为gapdh、sly和ef基因阳性,mrp基因阴性,该病例为1型猪链球菌感染所致,且菌株毒力较强。     

2014—2022年湖南省病人来源猪链球菌2型鉴定及毒力基因分析

目的 了解2014—2022年湖南省人感染猪链球菌病病人分离株型别分布与毒力基因携带情况,为人感染猪链球菌病的防控提供依据。方法 收集2014—2022年湖南省人感染猪链球菌病临床分离株,通过传统生化反应和聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)检测猪链球菌种特异性基因16S rRNA,同时用PCR对2型血清型鉴定基因(兼荚膜多糖毒力基因)cps2J和7种毒力基因进行扩增,用毛细管电泳检测扩增产物,分析病人来源猪链球菌的型别与毒力基因携带情况。结果 2014—2022年湖南省38株人感染猪链球菌病临床分离株中,1株为羊链球菌,32株为猪链球菌2型,5株生化鉴定为2型的菌株经分子分型鉴定为猪链球菌其他型别。32株猪链球菌2型菌株中,46.88%的菌株携带全部8种毒力基因,40.63%的菌株携带除mrp外的7种毒力基因。携带cps2J、fbps、ef、gdh、orf2、gapdh 6种毒力基因与携带cps2J、sly、gdh、orf2、gapdh 5种毒力基因的菌株均占3.13%,6.25%的菌株携带cps2J、gdh、orf2、gapdh 4种毒力基因...     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7和霍乱弧菌的多重PCR检测

目的　建立同时检测肠出血性大肠杆菌 (O15 7∶H7)和霍乱弧菌的多重PCR方法 ,为霍乱和肠出血性大肠杆菌感染的快速诊断提供实验依据。方法　首先选择O15 7∶H7的O抗原(rfbE)、H鞭毛抗原 (fliC)基因以及霍乱弧菌外膜蛋白 (ompW )和肠毒素A亚单位 (ctxA)基因特异的 4对引物 ,分别或共同对O15 7∶H7和霍乱弧菌进行PCR扩增 ,并以琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。结果　所有O15 7∶H7菌株均在 4 97bp和 6 2 5bp处出现O15 7rfbE基因和H7fliC基因扩增产物 ;霍乱菌株均出现 5 6 0bp、30 2bp的ompW和ctxA基因扩增产物 ,O15 7∶H7和霍乱弧菌共同扩增可出现 4条单一条带。结论　选择 4对特异引物的多重PCR方法可简便、特异、快速、灵敏地对O15 7∶H7和霍乱弧菌进行同时检测。     

广西人感染猪链球菌病的病原学及分子生物学鉴定分析

目的:用细菌分离培养和分子生物学方法鉴定猪链球菌,为确定疫情、及时治疗及控制提供依据.方法:疑似患者血液、脑脊液,死亡患者的肝、脾、肾等尸检组织进行分离培养、API 20 Strep生化鉴定、药敏试验及PCR检测.结果:从11份血液、4份脑脊液标本中分离出5株猪链球菌,API 20 Strep生化鉴定为猪链球菌Ⅱ型;经PCR检测5株菌均具有猪链球菌种特异性基因16St‘RNA(spe)基因、猪链球菌2型特异性荚膜多糖编码基因(cps2J)和猪链球菌溶菌酶释放相关蛋白编码基因(mrp),1例死亡患者尸检组织标本和2例患者(1例为死亡病例)的脑脊液标本,具有猪链球菌2型特异性荚膜多糖编码基因(cps2J),脾脏组织和1份脑脊液标本具有猪链球菌溶菌酶释放相关蛋白编码基因(mrp),全部确定为猪链球菌2型,并携带强毒力基因.药敏试验表明,猪链球菌2型对万古霉素、氯霉素、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢曲松、克林霉素敏感.结论:广西6起疫情均为人感染猪链球菌2型所致.     

PCR方法快速检测猪链球菌2型的研究

目的 利用PCR方法鉴定疑似猪链球菌(S.suis)菌株,对其应用效果进行评价.方法 采用S.suis种特异性基因(16s rRNA)和荚膜多糖S.suis2型特异性基因(cps2J)引物对3株疑似S.suis菌株进行PCR扩增,并和常规培养方法进行比较.结果 PCR方法对3株疑似S.suis菌株扩增出16s rRNA和cps2J基因条带,鉴定结果为S.suis2型,与常规培养方法结果相符.结论 与常规培养方法相比,S.suis2型PCR检测方法准确、快速,适合S.suis疫情的快速检测.     

江苏省中部地区猪链球菌主要致病血清型分子流行病学调查

目的 了解江苏省中部地区正常猪群猪链球菌及主要致病血清型分布.方法 采集江苏省中部地区正常屠宰猪样本303份,用聚合酶链反应(PCR)法进行猪链球菌及主要致病血清型的检测,并对3株分离的猪链球菌菌株进行系统的生物学和分子遗传学鉴定.结果 303份猪标本中,2005年正常猪群中猪链球菌的携带率达88.0%,其中1(或14)型、2(或1/2)型、7型和9型携带率分别为9.6%、8.5%、11.3%、29.5%;2006年正常猪群中猪链球菌的携带率为82.5%,1(或14)型、2(或1/2)型、7型和9型携带率分别为17.6%、2.4%、25.8%、20.0%;3株分离菌株均为2型,2a毒力因子表现型为cps2+/gdh+/mrp-/epf-/sly-/fbps+/orf2+/89k-,2f、14e毒力因子表现型均为cps2+/gdh+/mrp-/epf-/sly-/fbps-/orf2-/89k-;3株分离菌株对阿莫西林、氨苄西林、青霉素等高度敏感,但对阿米卡星和四环素有显著的耐药性;对BALB/c小鼠和家兔无明显致病性.结论 江苏省中部地区正常猪群中猪链球菌携带率处于较高水平,多种血清型同时存在,毒力因子表型与流行毒力株有显著差异.     

致病性猪链球菌主要毒力因子基因多重PCR检测

目的建立多重PCR体系．实现猪链球菌毒力相关因子基因cps、mrp、epf，（epf^＊）和sly的同步检测。方法根据上述毒力因子基因核苷酸序列，设计和合成4对特异性引物，通过体系和条件优化，建立多重PCR检测方法，并对72株种属背景明确的实验菌株（其中猪链球菌48株、阴性对照株24株）及49株猪临床分离的链球菌样本进行检测分析。结果48株猪链球菌中，cps2检出率为33．3％（16／48）、mrp检出率为29．2％（14／48）、epf检出率为25％（12／48）、epf^＊检出率为6．3％（3／48）、sly检出率为54．2％（26／48），上述检测结果与菌株的毒力因子背景情况完全相符；24株阴性对照和49株猪临床分离样本毒力因子检测结果均为阴性。结论多重PCR可用于猪链球菌毒力相关因子CPS2、MRP、EF、Sly的基因检测，特异性和敏感性好，为该病快速诊断和分子流行病学调查提供了新的技术手段。     

人感染2型猪链球菌快速多重PCR检测方法的建立

目的：用多重PCR从临床标本中同时检测猪链2型特异性及5个毒力相关基因，建立SS2实验室快速诊断及应急检测的核酸鉴定方法。方法：根据已报告的引物序列设计并合成8对引物（含1对内对照引物），经过PCR反应条件的优化与组合，采用同一PCR反应条件与循环程序，直接从临床标本或培养物中同时一次性扩增属特异性（tuf）、种特异性（16S rRNA）、荚膜多糖（cps2J）、溶菌酶释放蛋白（mrp）、细胞外蛋白因子（ef）、溶血素（sly）和甘油醛-3-磷酸脱氢酶（gapdh）等基因；并对方法的特异性和敏感性进行评估。结果：运用所建立的方法可直接从临床疑似猪链感染患者的脑脊液、血液、双相培养液和血培养物中一次性扩增出上述8对引物的目的基因，并经基因序列分析、细菌分离培养和生化鉴定进一步证实。其敏感性为78cfu（克隆形成单位）。结论：所建立的方法具有敏感、特异、快速、简便的特点，可应用于SS2感染应急检测、流行病学监测和实验室快速诊断。     

猪链球菌2型gdh基因的克隆与表达

目的 克隆表达猪链球菌2型诊断性抗原谷氨酸脱氢酶GDH. 方法 根据基因库中的gdh基因序列设计PCR引物,自病人分离株2007SF0165基因组扩增GDH的编码基因gdh,克隆至pMD19-T载体后进行测序分析,并且构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coli BL21（DE3）,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测. 结果 PCR法自猪链球菌2型菌株2007SF0165基因组扩增出约1.3kb的目的片段;序列分析显示猪链球菌的GDH具有GDH蛋白家族Ⅰ的典型保守序列;构建筛选的原核重组表达质粒pGEX4T-2-gdh经诱导表达,获得蛋白相对分子质量为45 kDa目的蛋白. 结论 克隆并表达出猪链球菌2型诊断性抗原GDH,可为进一步研究奠定坚实的基础.     

四川省一起伴中毒性休克综合征的人感染猪链球菌2型暴发

目的 调查2005年7月中旬四川省资阳市一家医院报告5例以败血症休克为主要临床表现的聚集性病例的病因。方法 建立了病例主动发现、报告的加强监测系统，根据病例的流行病学暴露史和临床表现进行临床诊断；采集患者标本进行细菌分离培养和生化反应鉴定，应用PCR方法对猪链球菌2型的种属和毒力基因进行检测和序列测定；与当地往年报告的流行性脑脊髓膜炎发病数进行比较。结果 2005年6月10日至8月21日，四川省共报告了68例实验室确诊人感染猪链球菌病例，发病前都有屠宰、洗切、加工等病（死）猪的直接暴露史。其中26例（38％）表现为中毒性休克综合征，15例（58％）死亡。其他病例临床表现为轻型败血症或脑膜炎。分离菌株应用PCR方法检测猪链球菌2型的种属和毒力基因（tuf、16S rRNA、cps2J、mrp、sly、ef）均为阳性。同期还报告了136例有相似暴露史，但缺乏实验室确诊依据的临床诊断病例。结论 证实该起发生在四川省部分农村地区直接暴露于病（死）猪后的疾病为猪链球菌2型感染暴发。推测这种罕见的、表现为高病死率的中毒性休克综合征可能是由于感染某种高致病性菌株循环所致。     

安徽省首例人感染猪链球菌病的实验诊断

目的分析、报告安徽省首例人感染猪链球菌病例的实验室诊断结果,为该类实验检测提供依据。方法采用PCR试验方法对病人的血液标本进行猪链球菌2型特异性核酸片段的体外扩增。结果在病人血液标本中扩增出特异性目标核酸片段。结论在病原培养无法捡出病原菌,病人难以得到及时确珍的情况下,PCR实验检测特异性核酸片段是诊断人感染猪链球菌病的有效技术手段,具有极高的实用价值。