宫内炎症暴露对早产儿固有免疫应答的影响

目的探讨宫内炎症暴露对早产儿固有免疫应答的影响。方法 2013年6月至2014年6月出生、胎龄35周的早产儿47例纳入本研究。依据胎盘病理检查结果,将早产儿分为宫内炎症阳性组和阴性组。采用Ficoll密度梯度离心法和贴壁黏附法分别获得脐血单个核细胞以及单核细胞。用内毒素(LPS,100 ng/ml)刺激单个核细胞12 h后,流式细胞术(PCR)检测CD14+单核细胞HLA-DR的表达量以及CD3+CD4+/CD3+CD8+的比例。用LPS(100 ng/ml)刺激单核细胞6 h后,Real-Time PCR检测单核细胞IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-αm RNA表达量的变化。ELISA检测脐血以及单核细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平。结果宫内炎症阳性组脐血血浆IL-6水平高于宫内炎症阴性组,差异有统计学意义(P=0.001)。LPS刺激后,两组单核细胞IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-αm RNA表达量及培养上清液中蛋白水平均显著升高,与刺激前比较差异均有统计学意义(P0.05);但两组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。LPS刺激后,宫内炎症阳性组CD14+单核细胞HLA-DR表达量显著降低,而宫内炎症阴性组则显著升高,与刺激前比较差异均有统计学意义(P0.05);且阳性组HLA-DR表达量显著低于阴性组(P=0.002)。结论宫内炎症暴露并不影响早产儿脐血单核细胞对LPS的应答反应水平,但可抑制单核细胞激活后主要抗原递呈受体的表达。     

CD4+CD25+调节性T淋巴细胞与Th17细胞在新生儿脓毒症炎性免疫反应中的作用

目的 探讨CD4+ CD25+调节性T淋巴细胞(CD4+ CD25+Treg)与Th17细胞在新生儿脓毒症炎性免疫反应中的作用.方法 选取脓毒症新生儿20例,抽取其静脉血3 mL备检,未加任何体外丝裂原刺激培养.采用流式细胞术检测外周血CD4+ CD25+ Treg的比例;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测CD4+T淋巴细胞IL-17A、IL-17F、转录因子ROR-γt、Foxp3及相关细胞因子IL-6、TGF-β等mRNA表达;ELISA法检测IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α等前炎性因子蛋白表达;收集同期体检健康足月新生儿16例作为健康对照组.结果 与健康对照组比较:1.新生儿脓毒症组CD4+ CD25+Treg比例明显增高[(15.33±2.68)％比(2.96±0.56)％,P＜0.01],其转录因子Foxp3表达亦明显增高[(42.76±10.83) ×10-4比(22.34±4.17)×10-4,P＜0.01].2.新生儿脓毒症组较健康对照组CD4+T淋巴细胞高表达IL-17A及IL-17F[IL-17A:(13.56±3.21)×10“比(4.76 ±1.39)×10-6,P＜0.01;IL-17F:(7.62±1.45)×10-4比(1.89±0.48) ×10-4,P＜0.01].Th17细胞转录因子ROR-γt表达较健康对照组明显增高[(9.22±1.79) ×10-5比(2.84±0.56) ×10-5,P＜0.01].3.新生儿脓毒症组前炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α表达明显增高[IL-1β:(2977.36±653.97) pg/L比(480.52±120.36) pg/L,P＜0.01;IL-6:(3143.82±775.08) pg/L比(393.78 ±96.55) pg/L,P ＜0.01;IL-10:(3216.98±678.43) pg/L比(326.11±62.45) pg/L,P＜0.01; TNF-α:(3582.24±876.13) pg/L比(1233.68±289.39) pg/L,P＜0.01].结论 新生儿脓毒症CD4+ CD25+Treg介导的免疫抑制及Th17介导免疫激活反应同时存在.     

CD4+T细胞因子在胆道闭锁患儿肝脏组织中的表达及其意义

目的 检测T淋巴细胞中的11种CD4+T细胞因子在胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝脏组织中的表达,以探讨其在胆道闭锁发病机制中的意义.方法 在病理的基础上,采用流式微球技术对29例BA及9例对照组患儿肝脏组织CD4+T细胞表达的11种细胞因子(IL-12p70、IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-8、IL-6、IL-4、IL-5、IL-1β、TNF-α和TNF-β)同时进行定量检测,并对其代表因子IFN-γ进行免疫组化定位分析.结果 CD4+T细胞表达的11种细胞因子中,BA组患儿肝脏组织中IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α以及Th1细胞因子总量(IL-1β、IL-2、IL-8、IL-12p70、IFN-γ、TNF-α、TNF-β)与促炎因子总量(IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12p70、IFN-γ、TNF-α、TNF-β)分别为2920.69、1 106.01、152.22、12 614.22、834.18、161.29、19 504.55、19653.06,数值明显高于对照组的1 096.00、243.68、5.98、965.17、147.28、30.56、2 617.93、2 623.91,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 由CD4+Th1细胞及其细胞因子所介导的针对胆道上皮细胞的免疫炎症性疾病可能是造成胆道闭锁的主要原因之一.     

手足口病患儿血清细胞因子水平及其与病情的相关性

目的 探讨手足口病(HFMD)患儿血清细胞因子的水平及其与病情严重程度的相关性.方法 病例组为住院HFMD患儿37例,均已确诊为肠道病毒感染,其中轻型病例21例,重症病例16例;对照组为本院同期唇腭裂治疗中心的先天性唇腭裂、非感染择期手术同龄患儿10例.应用液相芯片分析平台检测病毒阳性患儿的血清标本及对照组血清细胞因子[TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12亚单位P40(IL-12P40)、IL-12亚单位P70(IL-12P20)、IFN-γ、IL4、IL-10、IL-13]水平,并分析其与病情严重程度的相关性.结果 1.重症组IFN-γ、IL-10、IL-12 P40、IL-1 α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8和TNF-α的表达水平均显著高于对照组(P均＜0.02);重症组细胞因子INF-γ和IL-2的表达水平均高于轻症组(P均＜0.02);轻症组IL-10、IL-12P40、IL-1α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8和TNF-α均显著高于对照组(P均＜0.02);轻症组IL-13和IL-12P70水平均低于对照组(P均＜0.02).2.病情严重程度与INF-γ(Rs=0.654)、IL-10(Rs=0.517)、IL-lα(Rs=0.575)、IL-1β(Rs=0.413)、IL-4(Rs=0.508)、IL-6(Rs=0.446)及TNF-α(Rs=0.409)中度相关(P均＜0.05),与IL-2(Rs=0.351)及IL-8(Rs=0.392)呈低度相关(P均＜0.05),与IL-13(Rs=-0.304)呈负相关(P＜0.05),与IL-12P40、IL-12P70及白三烯均无相关性(P均＞0.05).结论 HFMD患儿在感染病毒后其病情发展与细胞因子的表达水平有关,多数促炎因子和抗炎因子过度表达可能是发生重症HFMD的免疫病理基础.IFN-γ、IL-10、IL-12P40、IL-1 α、IL-1 β、IL-4、IL-6、IL-8、TNF-α及IL-2的高表达可能促进HFMD的进展.     

Toll样受体信号与新生儿脓毒症炎症反应机制初探

目的 探讨Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)及其信号传递分子在新生儿脓毒症炎症免疫反应中的作用.方法 新生儿脓毒症20例,正常新生儿对照组16例,抽取各组新生儿静脉血3ml备检,未加任何体外丝裂原刺激培养.采用适时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞TLR1～TLR10、髓样分化蛋白2(myeloid differentiation protein 2,MD-2)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α mRNA的表达;酶联免疫吸附试验检测IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等前炎症因子蛋白表达.结果 (1)新生儿脓毒症组TLR2、TLR4 mRNA表达均显著高于正常对照组(TLR2:55.16±12.78 vs 9.53±3.73,P＜0.01;TLR4:125.22±30.64 vs 23.17±5.78,P＜0.01),其他TLRs表达无明显改变;(2)新生儿脓毒症组TLR4信号传递分子MD-2及MyD88明显增高(MD-2:376.83±62.16 vs 12.92±2.54,P＜0.01;MyD88:11.97±2.48 vs 2.77±0.59,P＜0.01);(3)新生儿脓毒症组前炎症细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达明显增高[PCR:(IL-1β:21.72±5.56 vs 5.69±1.26,P＜0.01;IL-6:71.39±18.34 vs 9.65±2.13,P＜0.01;IL-8:29.39±6.72 vs 8.72±1.95,P＜0.01;TNF-α:65.42±16.95 vs 12.33±3.45,P＜0.01)],[ELISA:(IL-1β:2 977.36±653.97 vs 480.52±120.36,P＜0.01;IL-6:3 143.82±775.08 vs 393.78±96.55,P＜0.01;IL-8:2 510.78±686.77 vs 276.91±72.46,P＜0.01;TNF-α:3 582.24±876.13 vs 1 233.68±289.39,P＜0.01)].结论 新生儿脓毒症TLRs信号途径异常活化,前炎症细胞因子表达明显增高,提示新生儿天然免疫已具初步的抗感染免疫反应能力,TLRs异常活化可能是新生儿脓毒症免疫功能紊乱的始动因素.     

不同液体复苏对脓毒性休克早期大鼠血清细胞因子变化的影响

目的 探讨脓毒性休克大鼠早期经不同液体复苏后的细胞因子水平.方法 将114只SD大鼠随机分为6组:正常对照组(对照组),脓毒性休克组(休克组),假手术组(假手术组),9 g/L盐水复苏组(9 g/L盐水组),低分子右旋糖酐复苏组(低右组),人血清蛋白复苏组(清蛋白组).采用盲肠结扎穿刺法制作脓毒性休克大鼠模型,分别于术后6h、12h、24h采血送检,用ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10、IL-4水平.结果 与对照组比较,休克组大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10水平各时间点均升高(P均＜0.05).与休克组比较,9g/L盐水组、低右组、清蛋白组大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平在12 h、24 h时均降低(P均＜0.05);与休克组比较,低右组大鼠血清IL-10水平在不同时间点均升高(P均＜0.05),清蛋白组IL-10水平在6h升高(P＜0.05),9g/L盐水组在各时间点差异均无统计学意义;与休克组比较,各液体复苏组血清IL-4水平仅24h高于休克组大鼠(P＜0.05).3个液体复苏组间比较,血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-4水平差异均无统计学意义(P均＞0.05).与休克组比较,各液体复苏组7d生存率明显升高.结论 液体复苏可通过下调细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6及上调IL-10及IL-4水平,抑制脓毒性休克早期炎性因子的爆发,降低死亡率.     

儿童肺炎支原体肺炎血清细胞因子变化及临床意义

目的 探讨肺炎支原体肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)患儿血清细胞因子水平的变化及临床意义.方法 选择2008年1月至2009年12月我院儿内科收治的MPP患儿239例为MPP组,根据病情的严重程度再分为轻症MPP组(n=152)和重症MPP组(n=87).选择同期收治的急性支气管肺炎患儿263例为非MPP组.选择同期在儿外科住院的疝气和包皮过长择期手术患儿共50例作为对照组.所有肺炎患儿均于入院第1天进行肺炎支原体抗体检测和细胞因子[肿瘤坏死因子(TNF)-α、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-6]检测,患儿经治疗感染恢复期重新留取血清复查以上指标;对照组留取1次血清,检测细胞因子水平.结果 MPP组和非MPP组患儿血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平均高于对照组(P＜0.01);而IFN-γ、IL-4水平3组间比较差异无统计学意义(P ＞0.05);MPP组血清IFN-γ、IL-1β水平及IFN-γ/IL-4比值高于非MPP组(P＜0.01);MPP组恢复期TNF-α、IL-1β、IL-6水平和IFN-γ/IL-4比值较急性期明显降低(P ＜0.001,P＜0.05);重症MPP组血清TNF-a、IL-1β水平及IFN-γ、IL-4比值明显高于轻症MPP组(P＜0.01).结论 MPP患儿存在免疫功能紊乱,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平及IFN-γ/IL-4比值与病情严重程度相关,可用来评估病情.     

急性EB病毒感染患儿Toll样受体的变化

目的 探讨Toll样受体(TLRs)信号途径异常活化在急性EB病毒(EBV)感染免疫发病机制中的作用.方法 采用病例对照研究方法,选取急性EBV感染患儿15例,传染性单核细胞增多症(IM)患儿18例,同龄健康对照儿童25例,采用反转录-PCR(RT-PCR)及实时荧光定量PCR法检测其外周血单个核细胞TLRs(2、3、7、9)、TLR MyD88-依赖性途径转导分子髓样分化因子88(MyD88)、TNF受体相关因子6(TRAF6)、转化生长因子β激活性激酶1(TAKl)与MyD88-非依赖性途径转导分子β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、TNF受体相关因子3(TRAF3)、TANK结合激酶1(TBK1)、IL-1β、TNF-α及IFN-α、IFN-β mRNA的表达;应用ELISA法测其血浆IL-12、IFN-γ水平.结果 1.急性EBV感染组与IM组TLR2、TLR3、TLR7、TLR9表达均明显高于健康对照组(P均＜0.05),急性EBV感染组与IM组比较差异无统计学意义(P均＞0.05);TLR信号途径传导分子(MyD88、TRAF6、TAK1、TRIF、TRAF3、TBK1)在急性EBV感染组与IM组表达均较健康对照组显著升高(P均＜0.05).2.急性EBV感染组与IM组细胞因子IL-1β mRNA、TNF-α mRNA、IFN-αmRNA、IFN-β mRNA表达均较健康对照组显著升高(P均＜0.05),IM组IL-1β、TNF-α表达显著高于急性EBV感染组(P均＜0.05).3.急性EBV感染组和IM组血浆IL-12与IFN-γ水平均较健康对照组显著升高(P均＜0.05),IM组升高幅度均较EBV感染组显著(P均＜0.05).结论 TLR2、TLR3、TLR7、TLR9过度活化所致抗病毒反应/炎性反应失衡,可能是急性EBV感染导致体内免疫功能紊乱的原因之一.     

静脉用免疫球蛋白对脓毒症患儿免疫状态及转归的影响

目的 探讨静脉用免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)对脓毒症患儿免疫状态以及转归的影响.方法 2008年8月至2010年4月入住我院儿童重症医学科符合脓毒症诊断的患儿84例,分为对照组(48例)和治疗组(36例),治疗组一次性输注IVIG l g/kg,分别于用药前(0 h)及用药后24h、72 h和5d抽取两组患儿外周静脉血,在流式细胞仪上进行免疫细胞(CD3+、CD4+、CD56+、CD19+、CD8+)计数,采用ELISA法检测细胞因子[肿瘤坏死因子-d(TNF-α)、白细胞介素(IL)-10、IL-17]水平并计算TNF-α/IL-10.比较两组患儿各时间点免疫细胞计数、细胞因子水平以及TNF-α/IL-10变化,并观察比较两组患儿28d病死率.结果 治疗组患儿CD3+、CD4+、CD56+、CD19+细胞计数,TNF-at、IL-17以及TNF-a/IL-10在应用IVIG后24h、72h、5d均明显低于对照组(P＜0.05),并且呈进行性下降趋势;而IL-10则明显增高(P＜0.05),呈上升趋势;CD8+细胞计数无明显变化.治疗组28 d死亡10例(27.7％,10/36),对照组死亡8例(16.6％,8/48),两组比较差别无统计学意义(x2=1.50,P=0.169,OR=1.92,95％ CI:0.671～5.510).结论 IVIG可使脓毒症患儿机体处于免疫麻痹状态,并不能提高存活率.     

血清白细胞介素-6、白细胞介素-10及肿瘤坏死因子-α浓度与脓毒症患儿预后的相关性研究

目的 探讨脓毒症患儿血清白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-10及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的浓度与脓毒症预后的相关性.方法 对象为PICU收治的57例脓毒症患儿,其中存活44例(脓毒症存活组),死亡13例(脓毒症死亡组).另有65例非脓毒症患儿为对照(非脓...     

脓毒症患儿营养状况的评估

目的 本研究旨在评价感染严重程度与血清白蛋白、细胞因子(IL-6、IL-8及TNF-α)及血浆中氨基酸浓度的关系,以利于早期发现脓毒症患儿的营养不良,为其合理的营养支持提供理论依据.方法 根据感染严重程度将患儿分为脓毒症组(52例)、严重脓毒症组(41例),并设正常对照组(300例).在使用血制品及营养支持前测定各组患儿血浆中自蛋白、氨基酸浓度及细胞因子(IL-6、IL-8及TNF-α)水平.结果 严重脓毒症组患儿均存在低蛋白血症,其IL-6、IL-8和TNF-α浓度分别为(193.95±74.11)ng/L、(481.33±186.58)ng/L、(21.00±9.43)ng/L,明显高于脓毒症组和正常对照组(P＜0.01);其天冬氨酸、精氨酸、甘氨酸含量分别为(23.6±8.5)μmol/L、(6.1±4.7)μmol/L、(101.4±60.6)μmol/L,明显低于脓毒症组和正常对照组(P＜0.01).结论 严重脓毒症患儿均存在低蛋白血症,其天冬氨酸、精氨酸、甘氨酸等具有抗氧化和免疫调节作用的氨基酸含量明显降低,对其早期开始营养支持可能会改善临床预后.     

脓毒症大鼠心肌β1、β2、β3肾上腺素能受体mRNA表达水平的研究

目的 通过研究脓毒症大鼠心肌β1、β2、β3肾上腺素能受体(AR)基因表达的变化,初步探讨其在脓毒症时心功能障碍中的作用.方法 根据处理不同将Wistar大鼠随机分为对照组、脓毒症组,两组根据时间点不同又分为6、18、24、36 h四个亚组.采用逆转录-聚合酶链反应法检测β1、β2、β3-AR mRNA的变化.结果 对照组β1-AR与β-肌动蛋白(β-actin)mRNA比值为最高(1.07±0.13),脓毒症36 h亚组表达最低(0.59±0.13),组间差异有显著性(P＜0.05);对照组β2-AR与β-actin的mRNA比值为0.40±0.01,脓毒症各亚组均有下降趋势,36 h亚组为0.34±0.01,但与对照组差异无显著性(P＞0.05);脓毒症36 h亚组β3-AR与β-actin mRNA比值表达最高,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).结论 脓毒症时可能通过下调β-AR基因及上调β3-AR基因的表达导致心功能障碍.     

升主动脉注射鱼精蛋白对体外循环后婴儿细胞因子与补体的影响

目的 通过升主动脉及上腔静脉注射鱼精蛋白,观察和评价不同注射途径对体外循环后婴儿血浆IL-6、TNF-α、G3a、G5a浓度的影响.方法 年龄≤12个月行体外循环心内直视手术的患儿60例,数字随机分为实验组(经升主动脉注射鱼精蛋白组,n=30)和对照组(经上腔静脉注射鱼精蛋白组,n=30).于注射鱼精蛋白前(T1)、注射鱼精蛋白后1 h(T7)取右心房肝素抗凝血1 ml,用ELISA法测定血浆IL-6、TNF-α、G3a、C5a浓度.分别于注射鱼精蛋白前、注射鱼精蛋白后1 min、2min、3 min、5 min、10min测左侧桡动脉动脉收缩压.结果 注射鱼精蛋白前两组患儿血浆IL-6、TNF-α、C3a、C5a浓度无统计学差异(P＞0.05);对照组患儿在注射鱼精蛋白后1 h血浆IL-6浓度(25.4±10.7)ng/L、TNF-α浓度(26.1±0.2)ng/L、C3a浓度(23.0±3.5)μg/L、G5a浓度(0.9±0.1)μg/L,均较注射鱼精蛋白前显著增多(P＜0.01);实验组患儿在注射鱼精蛋白后1h血浆TNF-α浓度(25.2±0.4)ng/L、C3a浓度(19.6±3.5)μg/L、C5a浓度(0.8±0.1)μg/L均较注射鱼精蛋白前无显著性差异(P＞0.05);IL-6浓度均较注射鱼精蛋白前有统计学差异(19.2±10.2)ng/L(P＜0.05);对照组患儿在注射鱼精蛋白后1 h血浆IL-6、TNF-α、C3a、C5a浓度较实验组显著增高(P＜0.01).注射鱼精蛋白前两组患儿左侧桡动脉收缩压分别为(90.9±4.9)mmHg、(89.8±6.0)mmHg无统计学差异(P＞0.05);注射鱼精蛋白后1 min、2 min、3 min两组患儿左侧桡动脉收缩压分别为(86.3±4.7)mm-Hg、(85.1±5.4)mmHg、(79.2±4.4)mmHg、(80.1±5.1)mmHg、(82.5±4.5)mmHg、(84.1±4.5)mmHg,较注射鱼精蛋白前均下降(P＜0.01);两组患儿同时点左侧桡动脉收缩压相互比较无统计学差异(P＞0.05).结论 升主动脉途径注射鱼精蛋白可显著减少体外循环后婴儿血浆IL-6、TNF-α、G3a、G5a浓度.

Abstract：

Objective To study the effects of protamine on complement activation and cytokine generation in infants with cardiopulmonary bypass. Methods Sixty infants under 1 year of age underwent cardiopulmonary bypass (CPB) from heart surgery were recruited in this study, and randomly grouped into 2 groups. Experimental group had 30 patients, who received protamine injection via ascending aorta. The control group also had 30 patients, but they received protamine injection via superior vena cava. Blood samples were collected from right atrium at the time prior to protamine injection (T1) and 1 hour after the injection (T2). IL-6, TNF-α, C3a and Csa plasma levels were measured by ELISA. Left radial artery systolic arterial pressures (SAPs) were measured at the time prior to protamine injection (Time 1), 1 min (Time 2), 2 min (Time 3), 3 min (Time 4), 5 min (Time 5), and 10min (Time 6) after the injection. Results At Time 1, IL-6, TNF-α, C3a and C5a plasma levels were not significantly different between the control group and the experimental group (P＞0. 05). In the patients of control group, IL-6 (25. 4 ± 10. 7 ng/L), TNF-α (22. 1 3. 5μg/l), C3a (23. 0 ± 3. 5 μg/L), and C5a (0. 9 ± 0. 1 μg/L) at Time 7 were significantly increased compared with these at Time 1 (P＜0. 01). In the patients of experimental group, levels of TNF-α (25. 2 ± 0. 4 ng/L), C3a (19. 6 ± 3. 5μg/L) and Csa (0. 8 ± 0. 1 μg/L) at Time 7 were not significantly different from those at Time 1 (P＞0. 05), but IL-6 (19. 2± 10. 2 ng/L) at Time 7 was significantly increased than that at Time 1 (P＜0. 05). Before injection, no difference of left radial artery SAPs was found between experimental group and control group (P＜0. 05). After injection, the left radial artery SAPs of the patients of the 2 groups were decreased compared with the SAPs before injection (P＜0. 05), but no difference between experimental and control group was found (P＞0. 05). Conclusions Protamine injection via ascending aorta decreased IL-6, TNF-α, C3a and C5a plasma levels in the infants with cardiopulmonary bypass.     

肠道病毒71型感染患儿免疫功能探讨

目的 探讨肠道病毒71型(EV71)感染患儿免疫功能变化与病情程度的关系.方法 患儿46例,健康同龄儿童12例,根据病情由轻到重将患儿分为4组:手足口病组11例、中枢神经系统病变组20例、中枢神经系统病变伴自主神经功能失调组10例、神经源性肺水肿组(pulmonaryedema,PE组)5例.进行下述检测:CD14~+单核细胞人类白细胞DR抗原(HLA-DR)表达率、淋巴细胞免疫分型、CD4~+CD25~+Foxp3~(high)调节性T细胞(regulatory T cells,Treg cells)及TH17细胞比例;白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)、转录生长因子β(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17A(IL-17A)血浓度;CD~4T细胞Foxp3、ROR-γt基因表达;血清免疫球蛋白及补体等.结果 (1)前炎症细胞因子TNF-α及IL-1β在轻症患儿中增高,随病情加重而下降,PE组明显降低(P<0.05);抗炎细胞因子IL-10及IL-10/TNF-α比值随病情加重增高,PE组增高明显(P<0.05).(2)HLA-DR、CD3~+T细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、NK细胞随病情加重呈现逐步下降趋势,PE组下降最为明显(P<0.05).各组间B淋巴细胞及抗体差异无统计学意义.(3)Treg细胞比例、转录因子Foxp3 mRNA及诱导因子TGF-β血浓度随病情加重降低,而TH17细胞比例、IL-17A血浓度、转录因子ROR-γt mRNA及诱导因子IL-6血浓度随病情加重升高.结论 EV71感染患儿机体免疫功能随病情程度而变化,轻症患儿处于全身炎症反应状态,重症或危重症病例处于代偿性抗炎症反应或混合性拮抗反应状态,对EV71感染的免疫调控治疗应强调分阶段、个体化.     

IL-6、IL-10及TNF-α在脓毒症患儿肝损害中的作用

目的探讨IL-6、IL-10及TNF-α在脓毒症患儿肝损害中的作用。方法检测122例脓毒症患儿肝功能以及IL-6、IL-10及TNF-α,并记录病情转归;分别比较IL-6、IL-10、TNF-α增高与正常患儿之间的差异。结果 IL-6增高患儿的总蛋白、白蛋白、r-谷氨酰转肽酶(r-GT)、总胆红素水平等均高于IL-6正常患儿,差异有统计学意义(P<0.05);IL-10增高患儿的肝功能指标与正常患儿差异无统计学意义(P>0.05);TNF-α增高患儿的丙氨酸转氨酶、草酰乙酸转氨酶、r-GT及总胆红素水平高于正常患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。结论炎症递质IL-6及TNF-α对肝脏损害影响大。     

高迁移率族蛋白1在新生儿败血症中的表达与机制

目的 探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）在新生儿败血症中的表达与机制。方法 选取62例新生儿败血症患儿为败血症组,66例局部感染新生儿为局部感染组,70例健康新生儿为健康对照组。检测三组新生儿血清中IL-6、IL-8、IL-17、IL-23、C反应蛋白（CRP）和降钙素原（PCT）的含量,外周血单个核细胞中HMGB1、Toll样受体4（TLR4）、核转录因子κB（NF-κB）mRNA及TLR4、NF-κB蛋白的表达。将健康新生儿的外周血单个核细胞分为对照组、HMGB1处理组、HMGB1+TAK-242（TLR4抑制剂）组、HMGB1+PDTC（NF-κB抑制剂）组,检测各组TLR4、NF-κB、IL-8 mRNA及TLR4、NF-κB蛋白的表达。将健康新生儿的外周血单个核细胞分为对照组、LPS处理组、LPS+甘草甜素（HMGB1抑制剂）组,检测HMGB1、TLR4、NF-κB、IL-8 mRNA及TLR4、NF-κB蛋白的表达。结果 败血症组患儿血清中IL-6、IL-8、IL-17、IL-23、CRP、PCT含量均显著高于局部感染组和健康对照组（P < 0.05）。败血症组患儿外周血单个核细胞中HMGB1、TLR4、NF-κBmRNA及TLR4、NF-κB蛋白的相对表达量均显著高于局部感染组和健康对照组（P < 0.05）。HMGB1可以显著诱导外周血单个核细胞高表达TLR4、NF-κB mRNA及其蛋白（P < 0.05）;使用TAK-242可抑制TLR4、NF-κBmRNA及其蛋白的高表达,并进而抑制IL-8 mRNA的表达（P < 0.05）;使用PDTC可抑制NF-κB mRNA及其蛋白的高表达,并进而抑制IL-8 mRNA的表达（P < 0.05）。LPS可显著诱导HMGB1 mRNA,以及TLR4、NF-κBmRNA及其蛋白的高表达,进而刺激IL-8 mRNA的表达（P < 0.05）;使用甘草甜素可抑制HMGB1 mRNA的高表达,抑制TLR4、NF-κB mRNA及其蛋白的高表达,进而降低IL-8 mRNA的高表达（P < 0.05）。结论 HMGB1可能通过激活TLR4/NF-κB信号通路诱导IL-8等炎症因子的高分泌在新生儿败血症的发病中起重要作用,HMGB1阻断剂甘草甜素可抑制TLR4/NF-κB信号通路的活化及炎症因子的分泌。     

脓毒症危重患儿非甲状腺疾病综合征的发生及其与IL-6和IL-10的相关性

目的 回顾性比较脓毒症与非脓毒症危重患儿非甲状腺疾病综合征（NTIS）的发生率,并初步探讨其发生与白细胞介素（IL）-6、IL-10的关系。方法 回顾性收集97例脓毒症患儿（脓毒症组）和80例细菌感染相关非脓毒症危重患儿（非脓毒症组）的基本资料及甲状腺功能检测结果进行分析研究,并将IL-6、IL-10与甲状腺功能指标三碘酪氨酸（T3）、四碘络氨酸（T4）、促甲状腺激素（TSH）进行相关性分析。结果 脓毒症与非脓毒症组年龄、性别比较差异无统计学意义（P > 0.05）。脓毒症组序贯器官衰竭评分、住院时间、呼吸机使用率等均高于非脓毒症组（P < 0.05）。脓毒症组炎症指标C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、IL-6水平均显著高于非脓毒症组（P < 0.05）。脓毒症组甲状腺功能指标T3、T4、游离T3、游离T4、TSH水平均显著低于非脓毒症组（P < 0.05）。脓毒症组NTIS发生率、低T3低T4及低TSH发生率均显著高于非脓毒症组（P < 0.001）。相关分析发现脓毒症和非脓毒症患儿IL-6水平与T3、T4、TSH水平均无相关性（P > 0.05）,但两组患儿合并分析显示,IL-6水平与T3、T4水平均存在负相关关系（P < 0.001）。结论 脓毒症患儿相比非脓毒症危重患儿更容易合并NTIS,且高水平IL-6可能是造成NTIS发生的重要原因。