双青咽喉片中绿原酸与甘草酸的含量测定

目的:建立双青咽喉片中绿原酸和甘草酸含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱:Dikma Kromasil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);绿原酸的测定,流动相为甲醇-0.08 mol·L~(-1)磷酸溶液(22:78),流速:1.0 mL·min~(-1),检测波长:326 nm;甘草酸的测定,流动相为甲醇-0.2 mol·L~(-1)酸铵-冰醋酸(66:34:1);流速:0.8 mL·min~(-1);检测波长:252 nm。结果:绿原酸在0.08～0.8μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为98.90%(n=12);甘草酸的线性范围0.4～4μg(r=0.9999),平均加样回收率为99.04%(n=12);。结论:该方法简便、快速、准确,具有良好的重复性和回收率,可作为该制剂的定量分析方法。     

川渝产山银花中总黄酮和总绿原酸的含量测定

目的：建立川渝产山银花中总黄酮和总绿原酸的含量测定方法。方法：采用UV法测定总黄酮和总绿原酸。结果：总黄酮在0．02-0．08mg／ml范围内具有良好的线性关系（R=0．9998）,回收率为98．15％,RSD为0．45％。总绿原酸在0．8～8μg/ml范围内具有良好的线性关系（r=O．9998）,平均回收率为98．75％,RSD为0．29％。结论：该方法操作简便、快速、有效、灵敏、准确、具有良好的重复性和回收率,可作为山银花总黄酮和总绿原酸的含量测定方法。     

HPLC测定桑菊感冒片中绿原酸的含量

目的:建立桑菊感冒片中绿原酸的含量测定方法。方法:采用HPLC法测定绿原酸的含量,色谱柱:Dikma KromasilC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(26∶74);检测波长:326nm;柱温:30℃;流速:0.8ml/min。结果:绿原酸在0.09～0.9μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为98.52%,RSD为0.42%(n=9)。结论:该方法简便、快速、有效、灵敏、准确、具有良好的重复性和回收率,可作为该制剂的定量分析方法。     

HPLC法测定复方鱼腥草合剂中绿原酸、黄芩苷的含量

目的:建立同时测定复方鱼腥草合剂中绿原酸、黄芩苷的高效液相色谱法.方法:采用Sinochrom ODS-BP(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流动相为甲醇:0.2%磷酸溶液,进行梯度洗脱;柱温:30℃流速为0.9 ml·min-1,检测波长为315 nm.结果:绿原酸在0.1～1.0 μg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.999 5),平均回收率为100.26%,RSD=0.53%(n=9);黄芩苷在1.8～18.0 μg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.996 6),平均回收率为100.04%,RSD=0.87%(n=9).结论:本方法简便易行,能够准确、快速测定复方鱼腥草合剂中的绿原酸和黄芩苷的含量.     

HPLC法测定退热饮口服液中绿原酸的含量

目的:采用HPLC法建立退热饮口服液中绿原酸的测定方法.方法:采用Diamonsil C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸(15:85);检测波长为327 nm;体积流量为1.0 ml·min-1.结果:绿原酸在8.01~72.07 μg·ml-1线性关系良好,r=0.999 7,平均回收率为99.25%,RSD=1.26%.结论:本方法重复性好,灵敏度高,可用于退热饮口服液中绿原酸的含量测定.     

清凉泡腾片中绿原酸的含量测定

目的:建立清凉泡腾片中绿原酸的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Agilent ZORBAX Eclips XDBC18(4.6 mm×250 rmm,5 μm);流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(0.1 mol·L-1,pH 2.7)(30:70);流速为1 mL·min-1;检测波长为328 nm.结果:绿原酸进样量在0.049 5～0.495 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 7),平均回收率为96.21%,RSD为1.07%.结论:本方法具有良好的精密度、稳定性和重复性,可作为清凉泡腾片的质量控制标准.     

RP-HPLC法测定蒲公英中绿原酸的含量

目的以高效液相色谱法测定蒲公英中绿原酸的含量。方法色谱柱:YMC-pack ODS S-5μm,4.6 mm i.d×150mm;流动相:乙腈-0.01%磷酸水溶液(体积比为15∶85);流速:0.8 ml.min-1;检测波长:326 nm。结果该方法具有良好的线性关系,回归方程为:A=337.9C+496.1,r=0.9996(n=5),平均回收率为95.23%、RSD为1.33%,最小检测限为6 ng。结论该方法具有操作简便、快速、准确等优点。     

RP-HPLC法同时测定复方鱼腥草片中绿原酸、连翘苷、黄芩苷的含量

目的: 建立同时测定复方鱼腥草片中绿原酸、连翘苷、黄芩苷的反相高效液相色谱方法.方法: 采用Phenomenex ODS柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-0.002%磷酸溶液为流动相梯度洗脱,流速为1.0 ml﹒min-1,检测波长为280 nm.结果: 绿原酸在0.54～4.47 μg范围内线性关系良好(r=0.999 1),平均回收率为98.9%(n=3);黄芩苷在0.32～2.67 μg范围内线性关系良好(r=0.999 1),平均回收率为97.3%(n=3);连翘苷在0.37～3.07 μg范围内线性关系良好(r=0.999 3),平均回收率为97.5%(n=3).结论: 本方法专属性强,准确、快速,适用于复方鱼腥草片的质量控制.     

HPLC测定细叶亚菊中的绿原酸

目的 采用HPLC测定细叶亚菊中的绿原酸含量.方法 采用Hypersil ODS-2柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-含0.04%磷酸的水溶液(19:81),流速1 mL·min~(-1),检测波长328 nm,柱温30℃.结果 绿原酸进样量的线性范围为0.0306～1.530 μg,与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为99.7%,RSD=2.6%(n=5),细叶亚菊中绿原酸的含量为9.457 mg·g~(-1).结论 所建方法快速、简便、准确、重复性好,绿原酸可作为细叶亚菊的质量控制指标.     

川渝产山银花中总黄酮和总绿原酸的含量测定

目的建立川渝产山银花中总黄酮和总绿原酸的含量测定方法。方法采用UV法测定总黄酮和总绿原酸。结果总黄酮在0．02—0．08mg／ml范围内具有良好的线性关系（r=0．9998）,回收率为98．15％,精密度实验的相对标准偏差（RSD）为0．45％。总绿原酸在0．8—8μg范围内具有良好的线性关系（r=0．9998）。结论该方法操作简便、快速、有效、灵敏、准确,具有良好的重复性和回收率,可作为川银花总黄酮和总绿原酸的含量测定方法。     

HPLC测定风热清胶囊中的绿原酸和牛磺熊去氧胆酸

目的建立测定风热清胶囊中绿原酸和牛磺熊去氧胆酸的方法。方法采用HPLC法,绿原酸的测定用Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(9:91),流速为0.8 m.lmin-1,柱温为35℃;牛磺熊去氧胆酸的测定用Phenomenex双子星C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.03 mo.lL-1磷酸二氢钠溶液(65:35)(磷酸调pH4.4),流速为0.8 ml.min-1,柱温35℃。结果绿原酸进样量0.3176~2.3820μg与峰面积的线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为103.82%,RSD=0.30%;牛磺熊去氧胆酸进样量0.2036~1.6288μg与峰面积的线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为98.72%,RSD=0.98%。结论所用方法简便可行、重复性好,可控制风热清胶囊的质量。     

Absorptive profile of chlorogenic acid in rats

The objective of this work was to systematically investigate the absorptive profile of chlorogenic acid (CGA) in rats and to increase its intestinal absorption using absorption enhancers. The rat in situ intestinal perfusion technique was used to examine absorptive rate and extent of CGA. In vitro enzymatic drug degradation study was carried out with rat intestinal washings. Various experimental conditions such as different concentrations, extraction purity, and different absorption enhancers such as sodium taurocholate (ST), sodium lauryl sulphate (SLS), carbomer, borneol were examined. Absorption rate constants were determined by the plot of log remaining amount of drug in perfusate vs. time. During the in vitro enzymatic degradation study, no measurable degradation was observed. It was found that CGA could be poorly absorbed by the gastrointestinal tract. The absorptive rate of CGA is independent of the drug concentration. Absorption processes fit first order processes. Extraction of high purity is benefit to the absorption of CGA. Drug absorption extent could be increased via absorption enhancers except SLS. ST appeared to be more effective for enhancing the intestinal absorption of CGA than the other absorption enhancers. In vivo studies were carried out to compare the pharmacokinetic parameters of solutions with and without ST. The order of increasing CGA absorption caused by the enhancers was ST > carbomer > borneol > SLS.     

鉴定大鼠注射绿原酸后体内的代谢产物

绿原酸为多种中药注射液的主要成分, 本文采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法 (UPLC/Q- TOF MS) 鉴定大鼠注射给予绿原酸后胆汁、尿、粪和血浆中的代谢产物。利用碰撞能量梯度 (MS^E) 和质量亏损过滤 (MDF) 技术, 在大鼠胆汁、尿、粪和血浆中共检测到35种代谢产物。胆汁中主要代谢产物为O-甲基绿原酸谷胱甘肽结合物, 其排泄量超过胆汁中全部代谢物的80%, 尿中主要为原形、O-甲基结合物、水解代谢产物及葡糖醛酸结合物, 粪中主要为O-甲基结合物及其半胱氨酸结合物, 血浆中主要为原形化合物。绿原酸及其代谢产物经尿和粪便排泄比例相近。实验结果表明, 绿原酸在大鼠体内代谢广泛, 主要途径之一是与谷胱甘肽结合, 提示绿原酸的烯酮双键具有亲电性, 可能与蛋白的巯基共价结合, 导致过敏性不良反应, 应予以关注。     

HPLC法测定小儿咽扁颗粒中绿原酸的含量

目的建立小儿咽扁颗粒中绿原酸的定量方法。方法高效液相色谱法。色谱柱Shim-pack VP-ODS C18(250mm×4.6mm;5μm);流动相乙腈-0.4%磷酸(8∶92);检测波长327nm。结果绿原酸的线性范围为0.201μg~1.005μg(r=0.9999,n=5),平均加样回收率为97.18%,RSD=0.79%。结论本法简便、灵敏、准确,可用于小儿咽扁颗粒的质量控制。     

Mast cell degranulation induced by chlorogenic acid

Aim:

To investigate the mechanism of chlorogenic acid (CA)-induced anaphylactoid reactions.

Methods:

Degranulation of peritoneal mast cells was assayed by using alcian blue staining in guinea pigs, and the degranulation index (DI) was calculated. CA-induced degranulation of RBL-2H3 cells was also observed and assayed using light microscopy, transmission electron microscopy, flow cytometry, and β-hexosaminidase release.

Results:

CA 0.2, 1.0, and 5.0 mmol/L was able to promote degranulation of peritoneal mast cells in guinea pigs in vitro, but it did not increase the degranulation of peritoneal mast cells in CA-sensitized guinea pigs compared with control (P>0.05). Treatment with CA 0.2, 1.0, and 5.0 mmol/L for 30, 60, and 120 min induced degranulation in RBL-2H3 cells in a dose- and time-dependent manner (P<0.01). Under transmission electron microscope typical characteristics of degranulation, including migration of granular vesicles toward the plasma membrane and integration combined with exocytosis, were observed, after CA or C48/80 treatment. Fluorescent microscopy and flow cytometric analysis showed that CA induced concentration-dependent translocation of phosphatidylserine in RBL-2H3 cells. β-hexosaminidase release in RBL-2H3 cells was significantly increased after incubation with 1 mmol/L CA for 60 min and 5 mmol/L CA for 30 min (P<0.01).

Conclusion:

CA induces degranulation of peritoneal mast cells and RBL-2H3 cells in guinea pigs, which might be one of the mechanisms of the generation of anaphylactoid reactions induced by CA.     

绿原酸对动物的致敏性研究

目的 研究绿原酸对动物可能存在的致敏性.方法 采用豚鼠全身主动过敏试验和大鼠被动皮肤过敏试验;用平衡透析法分离提取物中的大小分子化合物;并用HPLC大分子分离柱分离分析含大、小分子的透析内、外液;采用LC-MS分离鉴定产生过敏反应的内液物质的分子量范围.结果 透析前提取物中,绿原酸纯度<92%时,出现不同程度的过敏反应,绿原酸纯度>92%的提取物及其注射剂均未发生过敏性反应;透析后提取物中绿原酸纯度为33.17%的透析内液表现出较强的过敏反应,外液以及纯度99%以上的绿原酸原料药及其注射剂的透析内、外液均末发生过敏反应.结论 低纯度绿原酸提取物可引起过敏反应.其中,致敏原与提取物中大分子杂质密切相关.     

治咽颗粒的鉴别及其绿原酸含量测定

目的建立治咽颗粒的质量控制方法。方法采用TLC法鉴别金银花、甘草。采用HPLC法测定绿原酸的含量,色谱柱为Zorba SB-Aq-ODS(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈∶0.025%磷酸溶液(13∶87),检测波长为327 nm,柱温为25℃,流速为1 mL/min,进样量10μL,以外标法测定治咽颗粒中绿原酸含量。结果金银花、甘草TLC鉴别色谱特征明显,专属性强;绿原酸在28.8～67.2μg/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.999 9,平均回收率为98.6%(n=6,RSD=1.37%)。结论该方法可用于治咽颗粒的质量控制。     

HPLC法测定蒲公英中绿原酸和咖啡酸的含量

目的建立HPLC法同时测定蒲公英中咖啡酸和绿原酸的含量。方法采用Agilent ZORBAX SB-C_(18)(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-20mL·L~(-1)磷酸盐缓冲液(19∶81);检测波长:326nm;流速:1.0mL·min~(-1);柱温:30℃。结果绿原酸和咖啡酸质量浓度分别在1.152～23.040和2.524～50.480μg·mL~(-1)范围内线性关系良好,线性方程分别为y_1=102.9x_1+13.219(r_1=0.999 5),y_2=236.65x_2+29.535(r_2=0.999 6);平均回收率分别为97.59%和97.61%;RSD值分别为0.88%和0.95%。结论该方法专属性强,分离度好,稳定可靠,简便易行,可用于蒲公英药材中咖啡酸和绿原酸的含量测定。