铜银法镀银漂白复染技术

<正> 多年来神经追踪技术一直受到人们广泛的关注。人们用各种追踪技术及镀银染色对中枢神经系统损伤后神经纤维和终末的溃变进行了研究。其中镀银技术的出现对溃变纤维的镀染又作出了重大的贡献并较好地显示了溃变纤维的全貌。早期的镀银染色较难区分溃变纤维和正常纤维,追踪溃变纤维很不容易。因此以后又出现了不少改良方法,旨在增加溃变纤维的特异性,从而区分溃变纤维和正常纤维及鉴定轴突的终末。而铜银法为此改良法之一,由DeOlmos首次报道。在国内,作者首次用于实验中,证明是一种追踪溃变纤维较好的方法。在此法的基础上增加了漂白复染技术。     

改良神经髓鞘的依来铬氰R染色法

为研究周围神经髓鞘被覆状态 ,我们经常要进行髓鞘染色 ,在实践中 ,我们摸索了一种便捷、有效、经济的染色方法 ,介绍如下。一、材料和方法1.取材、固定、切片 :取大鼠正常坐骨神经组织 ,4%甲醛生理盐水固定。石蜡切片 6～ 10 μｍ厚 ,6 0℃左右烘箱烘 3～4ｄ。2 .试剂配制 :(1)依来铬氰Ｒ液 :依来铬氰Ｒ 0 .2ｇ ,蒸馏水 96ｍｌ,10 %铁明矾液 4ｍｌ,浓硫酸 0 .5ｍｌ。 (2 )苦味酸丽春红Ｓ液 :1%丽春红Ｓ水溶液 10ｍｌ,苦味酸饱和水溶液 86ｍｌ,1%醋酸水 4ｍｌ。3.染色程序 :(1)石蜡切片 ,常规脱蜡水洗 ,吸干或烘干切片。 (2 )依来铬氰Ｒ液染…     

改良溃变神经纤维镀染方法经验介绍

对于溃变神经纤维的镀染 ,Nute法是较可靠的形态学方法之一 ,但存在着程度较为复杂、烦锁等问题。为此我神经切片研究室在实际应用中 ,对于一些实验步骤 ,大胆地进行了改良和简化 ,结果与改良前相比没有显著差异 ,但操作过程却比原方法简便、易行、结果稳定 ,使实验者的工作量明显下降。现将改良的关键处介绍如下 :一、固定 :原方法 :灌注固定　先灌 0 .9%生理盐水冲出血液 ,再以 5 %重铬酸钾和 2 .5 %铬酸钾的水溶液 5 0 0 ml灌注固定。取出组织固定于 1 0 %中性福尔马林 1 w或更长至 3m。改良后 ,我们增加了取材后组织再浸泡于灌流液中 2…     

发育中和成年哺乳动物中枢神经系统束路追踪的新技术

一、前　言远在 Golgi和 Cajal时代 ,追踪神经元之间的联系即已是神经解剖学研究中的重大目标 ,它对研究神经的功能、神经系统的发育和成熟都具有重要的价值。这种方法学的建立始于 19世纪末的逆行和顺行溃变的研究。逆行溃变主要是指毁损轴突后神经元胞体 (即去除其靶区之后的神经元胞体 )的溃变 [1 7,1 70 ] ;而顺行溃变技术是以 Marchi法显示的 Waller变性 (胞体或轴突损伤后的轴突终末的溃变 ) [1 2 0 ] 。在神经解剖学形成的早期 ,在 Golgi及其支持者倡导的“网状说”和Cajal提倡的 :“神经元说”论战的推动下 ,Cajal利用 Galgi镀…     

改良快蓝焦油固紫染色法

改良快蓝焦油固紫(Luxol Fast Blue—CresylViloet)染色是根据Diamond法改良而建立的联合染色方法.可以同时在一张切片上观察神经细胞、神经胶质细胞和髓等结构.该方法具有两个突出优点:(1)使用冰冻切片法,制作时间周期短.染色方法简便,切片不易破碎.可制直径>2厘米的连续切片,对脑切片尤为适宜,便于科研工作中的连续观察.(2)集神经细胞,神经胶质细胞和髓鞘于一体.结构清晰,容易分辨.可使用于中枢神经系统的研究和教学中.1 方法1.1固定10%福尔马林液灌注或直接固定.10%盐水福尔马林用碳酸镁饱和液再固定14～20天.中间更换新固定液一次.1.2 冲洗 组织流水冲洗1小时,入20%蔗糖内至组织块下沉.1.3 切片 冰冻切片20～40μm.收集切片于20%酒精溶液中,便于展平切片.     

大鼠脑组织高尔基染色三种制备方法的比较

<正>1873年意大利著名的神经解剖学家卡米洛·高尔基发明硝酸银染色法,从此可以定性定量地观察神经元的形态~([1])。随后Cox等~([2-4])对高尔基染色法的固定液和染色液进行改良,提高结果的可视性,但初学者选择合适的染色方法仍较为困难。本实验采用相同的固定、染色和显色液,采用不同的制作方法(冷冻切片、石蜡切片、振动切片)进行大鼠脑组织高尔基染色,比较三种制作方法各自的优缺点,为科研实验和制作典型的教学示教切片提供可选方法 。     

应用微波辐射促进Cajal镀银染色

cajal氨酒精法镀银染色是组织学中常用的神经组织块染色方法，该方法适于大量切片制做，并且染色后大型神经元和神经纤维鲜明突出。但该方法染色时程较长(6～9d)，为探索加快cajal氨酒精法镀银染色的有效方法，作者对Cajal氨酒精法镀银染色过程中的固定、浸银、还原等步骤进行了微波辐射处理实验。     

显示大脑皮质神经元的银浸改良法

本文以Lindere银浸技术为基础,在方法上进行了改进.改良后的方法,能够同时显示出大脑皮质多种神经元,并可使其胞体、突起、神经纤维以及神经元上的棘状突起显示得清晰可辨.此法特异性强,结果可靠,操作简便.便于观察大脑皮质各层神经元的形态结构、分布以及相互联系,为教学及研究提供一种简便可行的方法.1 材料和方法1.1 取材与固定 采用健康成年Wistar大鼠4只,体重200～250g断头处死,立即取出大脑皮质,固定于10%甲醛钙液或Bouin液中12～16h或者采用4%多聚甲醛磷酸缓冲液pH7.2灌注内固定处理12h,然后取出大脑皮质,再固定于上述固定液中4h,制作厚10μm的石蜡切片或厚20μm的冰冻切片.1.2 试剂配制(1)三甲基吡啶缓冲贮存液 取三甲基吡啶6.5ml加大约450ml双蒸水制备0.lmol/L溶液,过滤后,加入足量的10%硝酸溶液,调pH至7.2然后再加入双蒸水至500ml.此液在4℃冰箱中可长期保存.(2)稀释工作缓冲液取8ml三甲基吡啶缓冲贮存液加入92ml双蒸水制备成工     

改良Warthin-Starry染色技术的新用途

我们用改良Ｗａｒｔｈｉｎ Ｓｔａｒｒｙ(Ｗ Ｓ)染色方法检查一些病原体取得较好效果 ,现将我们的工作体会介绍给同行。1　材料和方法1.1　材料　实验材料均取自外检组织 ,包括梅毒螺旋体感染的皮肤粘膜组织、鼻硬结症之鼻腔粘膜 ,侵袭性霉菌病之上颌窦粘膜组织、胃炎粘膜组织及淋病炎性渗出物涂片。组织均经常规处理、石蜡包埋 ,每份切成数张 6 μｍ厚的切片备用。涂片常规固定 1ｍｉｎ后漂洗吹干备用。1.2　染色液的配制和染色程序1.2 .1　 染色液的配制　①明胶原液 :明胶 5 ｇ ,蒸馏水 10 0ｍｌ,加热溶解。②显色剂 :明胶原液 8ｍｌ、2 …     

神经原纤维Bodian染色法的改良

Ｂｏｄｉａｎ染色法[1] 于 1936年首创 ,是一种用于观察神经元、轴突和树突内神经原纤维变化的浸银染色法。基本原理是把甲醛固定后的石蜡切片浸于银溶液中 ,再用还原液处理后 ,使银颗粒沉积于神经纤维上呈现为棕色或棕黑色。传统染色液的配制是在蛋白银溶液内放入金属铜。但此方法存在着以下几个缺陷 :(1)背景色深 ,血管和胶原纤维有共染现象 ,影响对神经纤维的观察。 (2 )染色时间难于掌握。 (3)容易脱片。我们对经典Ｂｏｄｉａｎ染色法进行了改良 ,建立了一种去铜改良型Ｂｏｄｉａｎ染色法 ,并对其应用进行了探索。一、材料与染色步骤1.…     

轴突损伤距离对成年金黄地鼠视网膜节细胞轴突在正常或预先溃变周围神经移植物中再生的影响

目的　系统研究轴突损伤的距离与轴突再生之间的关系 ,以及预先溃变周围神经移植物对视网膜节细胞 (简称节细胞 )轴突在不同距离损伤后再生的影响。　方法　在距成年金黄地鼠眼球后极 0 .5、1、1.5、2、3或7m m处切断左侧视神经 ,视神经眶侧断端同正常 (正常组 )或预先溃变 (溃变组 )的周围神经移植物相吻合。　结果　移植术后 2 8d,两组荧光金逆行标记的发出再生轴突的节细胞数量均随轴突损伤距离的增加而下降 ,并以 0 .5～3m m距离点之间下降最为明显。比较两组对应距离点 ,溃变组标记节细胞数量在 2、3mm距离点较正常组显著增多。　结论　成年金黄地鼠节细胞轴突损伤的距离 ,决定了发出再生轴突的节细胞数量。预先溃变周围神经移植物对节细胞轴突再生具有促进作用 ,并以轴突损伤距离为条件。     

大鼠孤束核向伏核投射的神经元接受迷走神经的初级传入——溃变与HRP追踪结合法的电镜观察

本文用切断一侧结状神经节近侧端的迷走神经和HRP注入伏核逆行追踪相结合的方法,在电镜水平对孤束核向伏核投射的神经元是否接受迷走神经初级传入纤维终末进行了研究。在孤束核内可见下列突触关系:(1)溃变轴突终末与HRP逆标树突形成轴-树突触;(2)无标记正常轴突终末与HRP逆标胞体或树突分别形成轴-体或轴-树突触;(3)HRP顺标轴突终末与无标记树突形成轴-树突触;(4)溃变轴突终末与无标记树突形成轴-树突触。由上述结果可知:孤束核向伏核投射的神经元接受迷走神经的初级传入终末;伏核神经元的下行终末与孤束核内的神经元之间有突触联系。     

颈髓后角缝-脊5羟色胺溃变终末和P物质样免疫纤维的超微结构观察

在内源性痛调制系统中,中缝大核(NRM)及其邻近结构的轴突到达脊髓后角,其释放的5羟色胺可能对痛传递神经元、中间神经元以及初级传入纤维施加影响,从而对脊髓的痛觉传入进行调制,但直接起源于NRM的5-羟色胺轴突终末在脊髓后角的分布,突触联系以及突触后成分的性质尚不清楚。本实验在大鼠NRM内微量注入5-羟色胺神经毒素5,6-DHT,以P物质抗体对颈髓上段切片行免疫细胞化学反应,在电镜下观察NRM内溃变结构特征和颈髓后角内溃变轴突终末和P物质免疫反应成分的分布。结果表明:NRM内存在不同溃变阶段的核周质,树突和轴突,溃变结构符合5-羟色胺神经元的超微结构特征。颈髓     

石蜡切片显示大脑神经细胞方法探讨

以片显示大脑各种神经细胞一般都是用含有重铬酸钾的固定液固定,用硝酸银浸染的方法进行,所以要想制作大批教学标本只能用传统的方法。而大脑神经细胞的特殊染色,只能用火棉胶切片或冰冻切片制作标本,操作步骤复杂、时间长。为此我们对石蜡切片、镀银染色显示大脑神经细胞的方法进行了探讨。本实验选用小白鼠大脑,组织块大小为2×2cm,勿超过3cm;固定后入1%～1.5%硝酸银水溶液浸染5～7天;蒸馏水洗2分钟;用还原液作用24小时;组织块脱水、透明、浸蜡、包埋、切片,因低浓度酒精易使组织块退色,因此组织块经还原后在酒精内的脱水时间一定要精确。…     

猫后索核内后根初级传入终末与丘脑投射神经元之间的突触联系

用ＨＲＰ逆行追踪与顺行溃变相结合的方法，研究了猫后索核内初级传入终末与丘脑投射神经元之间的突触联系形式。在电镜下可见后索核内有５种突触联系式：１．溃变轴突终末与ＨＲＰ标记树突形成的轴－树突触；２．溃变轴突终末与ＨＲＰ标记胞体形成的轴－体突触；３．溃变轴突终末与非标记树突形成的轴－树突触；４．轴－轴－树连续性突触；５．非溃变的含扁平小泡或多形小泡轴突终末与ＨＲＰ标记的神经元胞体形成的轴－体突触。本文     

家鼠类肾上腺嗜铬细胞简易染色法

一、染色方法 :( 1 )固定小家鼠肾上腺髓质于下列固定液中 2 4hr:即 3%重铬酸钾水溶液 1 0 ml,1 0 %福尔马林 2 0 ml,蒸馏水2 0 ml。 ( 2 )移浸入 3%重铬酸钾水溶液 48hr。( 3)水洗 2 4hr。 ( 4 )石蜡包埋、切片。 ( 5 )切片脱蜡至蒸馏水。 ( 6 )常规苏木素染液 1 5 min、水洗。 ( 7) 1 %盐酸酒精分化适度、水洗1 5 min。 ( 8)各级酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。结果 :肾上腺髓质嗜铬细胞颗粒呈现棕黄色 ,细胞核呈蓝色。二、注意事项 :( 1 )动物选择家鼠类 ,组织力求新鲜。 ( 2 )固定液临用前配制。 ( 3)组织铬化过程需每日更换新液…     

微波修复在冰冻切片免疫组化中的应用

微波修复法多用于石蜡切片 ,我们在长期的研究生免疫组化教学过程中 ,实行改良 ,将微波抗原修复法用于冰冻切片 ,取得了满意的效果 ,方法如 :1.常规固定取脑组织冰冻切片。 2 .漂洗后 3%H2 O2 封闭 10分钟 ,蒸馏水洗 2分钟 3次。3.微波抗原修复 :入柠檬酸盐缓冲液 (PH6 .0 ) ,用微波或电炉加热 ,循环 3次后入 1% BSA孵育 15分钟。 4.入一抗 30分钟 ,转入二抗2 0分钟 ,三抗 2 0分钟 ,显色。结果讨论 :1.与对照切片成比 ,阳性细胞染色增强 ,背景变浅 ,阳性检出率提高。由于常规的冰冻切片免疫组化方法所用的固定剂多含甲醛 ,醛基与蛋白质中…     

三种改良的阮森吡啶-硝酸银法显示大鼠脊髓组织的比较

目的 对3种改良的阮森吡啶-硝酸银法(Ranson)在显示大鼠脊髓组织中的应用进行比较. 方法 对照组采用传统的阮森吡啶-硝酸银法,即取大鼠的新鲜脊髓组织,在酒精中加纯氨水固定,经纯吡啶、硝酸银、还原液染色,常规石蜡切片并观察.实验组采用改良的阮森吡啶-硝酸银法,即分别采用NaOH溶液、Na2CO3溶液和95%酒精替换在对照组中使用的纯氨水,其他染色步骤同对照组. 结果 实验组的脊髓组织切片分别经3种改良的阮森吡啶-硝酸银法染色,神经元的胞体和突起均呈黄棕色,神经纤维呈棕褐色,切片染色结果与对照组比较无明显差异,尤以酒精替换组的染色效果为最佳. 结论 以改良的阮森吡啶-硝酸银法显示大鼠脊髓组织中神经元及神经纤维染色效果良好,方法更加简便易行,且避免了氨水的刺激气味,有利于改善教学和科研的局部工作环境.     

P>四氯化碳对大鼠海马CA1区神经元低亲和力神经生长因子受体p75表达的影响/P>

目的 研究四氯化碳(CCl4)对大鼠脑海马CA1区神经元低亲和力神经生长因子受体p75的表达和凋亡的影响.方法 将24只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组和CCl4组.对照组每周一、四背部皮下注射橄榄油(0.12ml/100g),CCl4组分别在每周一或/和周四背部皮下注射60?l4-橄榄油溶液(0.3ml/100g)1次(1d组)、2次(1周组)和4次(2周组),实验结束时处死大鼠.取脑后沿正中矢状面切开,右侧半脑石蜡切片,行Nissl染色,观察海马CA1区神经元的形态学改变;行p75、Bax免疫组织化学染色和Western blotting分析,检测海马CA1区神经元p75、Bax的表达,行原位缺口末端标记法(TUNEL)观察海马CA1区神经元的凋亡.结果 Nissl染色显示对照组CA1区神经元染色较深,细胞数目较多,排列整齐,神经元内可见大量尼氏体;CCl4组CA1区神经元排列较对照组紊乱,部分锥体细胞体积缩小,核固缩,呈三角形,胞浆内尼氏体数目减少或消失.对照组海马CA1区可见少量表达p75和Bax的阳性细胞;CCl4组海马CA1区表达p75和Bax的阳性细胞数较对照组明显增多,以1周CCl4组增多最为明显;Western blotting结果与免疫组织化学染色结果一致.对照组海马CA1区未见TUNEL阳性细胞;CCl4组海马CA1区可见大量细胞核呈棕黄色着色的TUNEL阳性细胞,以1周CCl4组的阳性细胞数最多.结论 注射CCl4后,大鼠脑海马CA1区p75的表达明显增强,Bax的表达也相应增强,凋亡的神经元明显增多.     

介绍一种骨髓组织脱钙新方法

骨髓组织活检标本来之不易 ,在制片过程中若处理不当 ,会给诊断造成极大的困难。如何既快又好地制作高质量的骨髓病理组织切片对正确诊断尤为重要。笔者通过 2年的反复实践 ,摸索出一种骨髓组织脱钙后的常规制片方法(简称“新法”) ,现介绍如下。1　材料与方法1.1　标本　中南大学湘雅医院骨髓穿刺的活检组织 4 0例。1.2　试剂　脱钙液 :2 %硝酸 ,即浓硝酸 2ml加 98ml自来水 ;固定液 :10 %福尔马林液 ;染色液 :Gill苏木精 ,沉淀酸化伊红Y乙醇液。1.3　方法　穿刺活检组织入 10 %福尔马林液中固定 30min ;入 2 %硝酸脱钙液 ,室温下脱钙。在…