结核病血清学诊断抗原的研究进展

应用于结核病血清学诊断的理想抗原应具有种的特异性及强的免疫原性。目前已获得大量纯化和特异的抗原。本文综述了结核病血清学诊断抗原的现状和进展。     

日本血吸虫重组诊断抗原基因的分离和表达

为了提高血吸虫病病因诊断的特异性和敏感性，用慢性日本血吸虫病病人血清筛选以λｇｔｌｌ构建的日本血吸虫中国大陆株成虫ｃＤＮＡ表达库，获得一阳性克隆Ｓｊｇｔ４，其表达产物为１４８０００融合蛋白。插入的ｃＤＮＡ片段经聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增、纯化后，亚克隆入高表达载体ｐＧＥＸ，获得克隆ＳｊｐＧ５，其表达产物为５８０００融合蛋白，应用免疫印迹技术，其可被９６％（２４／２５）的日本血吸虫病病人血清中特异抗体所识别。     

11种分枝杆菌抗原用于肺结核和肺癌血清学鉴别诊断的效果 …

目的：对１１种分枝杆菌抗的制备物用于肺结核和肺癌血清学鉴别诊断的效果进行评估。方法：采用ＥＬＩＳＡ技术分别测定１０４例肺结核患者，１０４肺癌患者和５２例正常人血清中抗１１种分枝杆菌抗原制备物的抗体水平。结果：淋巴分枝杆菌菌体超声抗原Ｂ６ｂ检测肺结核血清抗体阳性率为８２％，显著高于抗ＰＰＤ抗体的阳性率６２％。Ｂ６ｂ抗原检测肺癌血清抗体的阳性率为１．９％，远低于抗ＰＰＤ抗体的阳性检出率１５．４％。结论     

重组结核分枝杆菌38KDa蛋白抗原制备及其血清学诊断价值

目的通过基因工程技术获取纯化的结核分枝杆菌重组38KDa蛋白并评价其血清学诊断价值。方法在大肠杆菌中表达38KDa蛋白，通过亲和层析纯化并复性后用于ELISA检测结核患者血清中特异性抗结核抗体。结果38KDa蛋白表达量占总蛋白的22．80％，以包涵体的形式存在。纯化复性后的蛋白抗原检测54例肺结核患者敏感性为62．96％，其中检测痰涂阳性和痰涂阴性患者的敏感性分别为64.29％和62．50％，二者无显著性差异（X^2=0.02，P〉0．05），检测38KDa抗体特异性为84．38％。另外，通过与结核蛋白芯片检测，结果比较发现研制的重组38KDa蛋白免疫活性与国外进口的蛋白免疫活性相当。结论制备的重组38KDa蛋白抗原具有血清学诊断价值，可用于结核病诊断试剂的开发。     

日本血吸早重组诊断抗原基因的分离和表达

为了提高血吸虫病病因论断的特异性和敏感性，用慢性日本血吸虫病病人血清筛选经λｇｔｌｌ构建的日本吸虫中国大陆株成虫ｃＤＮＡ表达库，获得一阳性克隆Ｓｉｇｔ４，其表达产物为１４８０００融合蛋白。     

异种丝虫抗原免疫酶染色试验诊断丝虫病的评价

用马来丝虫、牛丝虫成虫冰冻切片抗原免疫酶染色试验检测抗丝虫ＩｇＧ抗体，比较二者的敏感性和特异性。两种抗原免疫酶染色试验的敏感性分别为９２．９％和８７．１％，假阳性率分别的５．１％和１０．２％，经统计学处理两种抗原敏感性和假阳性率差异均无显著性。马来丝虫、牛丝虫抗原对肠道线虫病人血清抗体的交叉反应率分别为９．４％和２５．９％，经统计学处理二者差异具高度显著性；牛丝虫抗原交叉反应的抗体滴度亦显著高于马来丝虫抗原。牛丝虫粗抗原检测丝虫抗体的应用有其局限性。     

HA-DR抗原标准血清学分型与基因分型的比较研究

目的：比较研究顺序特异引物聚合酶链厦应(PCR-SSP)方法与标准血清学方法对人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)分型的精确性和临床应用价值。方法：选择肾移植受者101例，供者61例，采用PCR—SSP和血清学方法同步行HLA-DR分裂，比较其检测时间、敏感性、特异性和临床实用性。结果：162份样本，PCR-SSP分型均获成功，检出DR等位基因总数308个．分型时间5小时，特异性和重复性100％。血清学分型耗时20小时，8个位点不肯定，29个分型错误，35个空白位点中20个存在第二个位点，总误差率30．2％。结论：PCR—SSP方法用于HLA-DR分型较血清学方法快速、精确，试剂与临床样本易得，适合于临床应用。     

用牛丝虫G抗原的ELISA诊断犬、狨猴、鹿、牛和人丝虫病的研究

根据不同种属问丝虫具有交叉抗原反应的特点，选用牛腹腔丝虫的提纯Ｇ抗原，应用ＥＬＩＳＡ的多种方法检测实验动物和人丝虫病血清抗体，可用于该病的诊断，现场应用并具有灵敏度高、特异性强的特点。尤其是对犬丝虫病和人丝虫病的检出率各为９７％和９５．５８％，假阳性率都在３％以下，与其他几种寄生虫的交叉反应亦极少，可用于现场大规模的人或犬丝虫病诊断。     

结核分枝杆菌重组MTB48蛋白抗原血清学诊断价值的研究

目的 研究重组MTB48(recombinant MTB48,rMTB48)蛋白的抗原性,评价其在结核病血清学诊断中的价值,寻找更有效的结核病诊断试剂.方法 应用基因工程技术表达、纯化rMTB48蛋白,通过酶联免疫吸附试验方法检测402例血清中抗结核抗体.结果 rMTB48蛋白在大肠杆菌细胞内以包涵体形式高效表达,表达量占菌体总蛋白的30%左右,分子量约57.6 kD,具有良好的抗原特异性.在210例结核病患者血清中,103例菌阳患者和107例菌阴患者抗MTB48抗体的阳性率分别为41.7%和24.3%,总的灵敏度为32.9%.在192例正常人血清中,95例PPD阴性者和97例PPD阳性者抗MTB48抗体的阳性率分别为0.0%和11.3%,总的特异性为5.7%.结论 rMTB48蛋白可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一.     

梅毒螺旋体基因重组抗原研究及其临床应用

梅毒是一种由梅毒螺旋体引起的、可治愈的、慢性经典性传播疾病,梅毒的病原体为梅毒螺旋体(Treponemapaltidum,Tp),其基因重组抗原的研究在梅毒血清学检测中应用广泛。为此,结合与临床诊断学有关的梅毒螺旋体基因重组抗原的生物学特性和临床应用进展进行综述,并展望今后的研究及发展方向。     

CLINICAL EVALUATION OF FOUR RECOMBINANT TREPONEMA PALLIDUM ANTIGEN-BASED RAPID TESTS IN THE DIAGNOSIS OF SYPHILIS

Objective To assess the sensitivity,specificity,and feasibility of 4 recombinant Treponema pallidum antigen-based rapid tests in the diagnosis of syphilis.Methods A total of 970 outpatients were selected from the Sexually Transmitted Diseases Centre of Peking Union Medical College Hospital.Venous blood was collected and serum was extracted.T.pallidum antibodies in whole blood,anticoagulant whole blood,and serum were detected using 4 recombinant T.pallidum antigen-based rapid tests.T.pallidum haemagglutination test(TPHA) was considered as the gold standard for the detection of T.pallidum specific antibodies in serum.The sensitivities and specificities of four methods were analyzed.Results The sensitivities and specificities of Abbott Determine Syphilis TP test,SD-BIOLINE Syphilis 3.0 test,VISITECT-SYPHILIS test,and Syphicheck-WB test for serum specimens were 100% and 98.9%,95.7% and 98.0%,94.6% and 98.2%,68.1% and 98.9%;for whole blood were 74.1% and 99.5%,87.9% and 99.4%,73.2% and 99.7%,64.7% and 99.7%.The observed sensitivities of the 4 rapid diagnosis tests were not significantly different with TPHA(P>0.05).Conclusions The 4 rapid tests show good performance and characteristics in the diagnosis of syphilis.Furthermore,they are more sensitive for serum specimens than whole blood.     

临沂市丝虫病监测与控制

目的 观察丝虫病在当地的流行趋势,探讨临沂市消灭丝虫病成因。方法 对人群进行病原学监测及血清学监测(采用I-FAT):设立观测点对传播媒介的构成比、传播强度与作用进行定点监测;调查动物丝虫与人类的关系。对检出的微丝蚴阳性者给予4.2g海群生全程治疗,1年后再给以全程治疗。结果1984-2002年全市共血栓人群286 633人,达流行区总人口的5.73％,覆盖了全部流行乡镇的49.22％,微丝蚴总阳性率为0.023％,并呈逐年下降趋势;基本消灭丝虫病后出生的人群未发现阳性者;1987年后累计血检166 503人.占流行区总人口的3.33％,未发现微丝蚴阳性者。IFAT检测,丝虫特异抗体IgG4水平,基本消灭丝虫病前、后出生的人群差异有统计学意义。淡色库蚊为当地优势蚊种(50.75％),是当地人体斑氏丝虫病的唯一传播媒介;淡色库蚊幼丝虫感染率为0.029％,并逐年下降,至1988年已降为零;在捕到的阳性蚊蝶中,仅发现1只体内存有Ⅲ期幼虫;低密度微丝蚴血症者与人蚊接触机会的减少.使得蚊媒传播能力降低,进而切断了传播途径。动物丝虫阳性物种对人类及其传播媒介的作用,不能在人群中形成传播。结论监测结果证实,丝虫病在3地的传播已被阻断,该市达到了消灭丝虫病标准。     

毛蚴抗原免疫酶染色法诊断日本血吸虫病

用毛蚴抗原免疫酶染色法(IEST)共检测94例血吸虫病患者血清,阳性率92.6％;90名健康献血员血清,假阳性率1.1％;肝吸虫病患者血清40份,交叉反应率2.5％;肺吸虫病患者血清36份,无交叉反应。本法血清工作浓度以1:200～1:400为佳;反应时间45min为宜;室温(16℃)与37℃下,实验结果无显著性差异;自来水与PBS洗涤效果无差别。本法敏感性高,特异性强、重现性及稳定性好,方法简便、经济、取得结果较快及标本容易保存。     

膀胱肿瘤抗原检测试验在膀胱癌无创诊断中的应用

目的：探讨无创早期诊断膀胱癌的有效方法：对膀胱癌患者进行尿液中膀胱肿瘤抗原（ＢＴＡ）测定与分析。方法：对６４例膀胱癌及２８例非膀胱癌患者的尿进行ＢＴＡ测定及尿脱落细胞学检查，比较这两种方法的敏感度、特异度、准确度、阳性及阴性似然比。结果：ＢＴＡ测定的敏感度、准确度、特异度、阳性及阴性似然比分别为９０６％、８９３％、９０２％、８５及０１；尿脱落细胞学检查这些指标分别为４６９％、９２９％、６０９％、６６及０５７。ＢＴＡ测定的敏感度、准确度、阴性似然比与尿脱落细胞学检查指标比较存在显著性差异（Ｐ＜００５）；阳性似然比高于脱落细胞学检查，但无统计学意义（Ｐ＞００５）；特异度在二者也无差异性（Ｐ＞００５）。ＢＴＡ敏感度随肿瘤的分级、分期的增高而呈升高趋势，但差异并无统计学意义（Ｐ＞００５）。结论：ＢＴＡ测定是无创、快速诊断及监测膀胱癌的方法，有较高的敏感度及准确性。     

人泡球蚴抗原诊断泡球蚴病的价值

用人泡球蚴抗原检测了81例泡球蚴患者和126例对照血清。阳性率95．1％，假阳性率2.38%，11例囊虫病均为阴性。泡球蚴病、其它寄生虫病、囊虫病、结核病、手术证实其它疾病和健康者的消光值均数±标准差各为0.74 0．27、0．23±0．07、0．26±0．05、0．29±0．07．0.2±0.09和0.19±0.07试验表明：人泡球蚴抗原可用于诊断人体泡球蚴病。     

巨细胞病毒感染的快速诊断——低速离心和单克隆抗体间接免疫荧光方法检测早期抗原

应用低速离心和巨细胞病毒早期核抗原单克隆抗体间接免疫荧光方法(简称DEACF),检测临床标本中巨细胞病毒(CMV),并与传统病毒分离方法进行比较。结果:139份临床标本病毒分离方法阳性16份(11.5%),细胞病变(CPE)出现时间平均9.2日,其中2份DEACF检测阳性;DEACF检测阳性18份(13.0%),培养16h61.1%出现阳性,培养88h可检出全部阳性标本,其中4份病毒分离阴性标本中,3份有证据不是DEACF的假阳性反应。DEACF的敏感性为89.5%,特异性为99.2%。DEACF检测的139份标本中,用低速离心可使培养88h的阳性检出率从未离心的44.4%提高到100%。     

血清癌胚抗原水平测定对肺癌临床诊断意义的研究

本实验应用酶联免疫法对107例肺癌患者进行了血清癌胚抗原(SCEA)水平测定,并与健康人,胸部良性疾病和消化道恶性肿瘤患者进行比较。结果表明;SCEA水平测定可作为肺癌诊断的一个辅助指标,有助于胸部疾病中肺癌与良性疾病的鉴别,特别对周围型肺癌与胸部良性病灶的鉴别诊断意义显著。在已确诊的肺癌患者中,SCEA测定对于判定病期、手术切除可能性的估计均有一定意义。SCEA≥15μg/L是病期较晚的一个标志。     

超声显像与膀胱镜对膀胱肿瘤的诊断价值

对经手术和病理证实的８３例膀胱肿瘤进行超声显像和膀胱镜检查的对比性分析。结果表明，膀胱镜对膀胱肿瘤的诊断符合率为９７．５％，略高于超声显像符合率的９５．２％；但对膀胱肿瘤的术前分期，膀胱镜检查尚存在局限性，而超声显像可弥补膀胱镜检查的不足。本文超声显像对膀胱肿瘤的术前分期准确率达８９．５％。超声显像对小于０．５ｃｍ的小膀胱肿瘤之检出率不如膀胱镜高。因此在常规检查以及对肿瘤的术前分期时，应以超声显像作为首选，同时结合膀胱镜检查，可进一步提高膀胱肿瘤的术前诊断正确率。     

良、恶性胸水表达CEA差别的研究与应用

目的:分析癌胚抗原(CEA)在良、恶性胸水中表达的差别,探讨应用CEA指标诊断恶性胸水的价值。方法:采集胸水为检测标本,其中恶性胸水92份、良性胸水54份。应用磁性抗体分离免疫测定技术(MAIA)检测CEA。结果:不同胸水表达CEA的阳性结果分别为:良性4/54(7.4％)、恶性50/92(54.3％),差别具有显著性(P<0.001)。CEA指标诊断与鉴别诊断恶性胸水的特异性和敏感性分别为92.6％和54.3％。结论:CEA在良、恶性胸水中表达的差别具有显著性,可以用作诊断和鉴别诊断恶性胸水的指标。     

乙型肝炎病毒重组e抗原在大肠杆菌中的高效表达及初步应用

为了获得重组表达乙型肝炎病毒 ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）。利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增和重组技术，在大肠杆菌中的高表达非融合型重组ＨＢｅＡｇ。结果：为模拟天然ＨＢｅＡｇ的结构，除第一个氨基酸为起始密码子ＡＴＧ所编码的甲硫氨酸外，共包括Ｐｒｃｅ－Ｃ区羧基端的９个氨基酸和ＨＢｃＡｇ Ｎ－末端的１４９个氨基酸残基、经诱导表达，其产物相对分子质量约为１７．５ × １０３，产量占细菌总蛋白的１１％。结论：用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法分析，本表达产物可与特异性的ＨＢｅＡｇ抗体反应。用斑点酶免疫法可以检测患者血清的抗ＨＢｅ。