快速检测精子性染色体分析技术的建立

目的建立一种应用双色荧光原位杂交技术快速分析正常男性精子XY染色体数目及异常率的方法。方法采用X、Y号染色体着丝粒探针对7例健康男性精子样本进行荧光原位杂交实验,检测精子XY染色体数目异常情况（非整倍体,双倍体）。结果计数10 078个精子,杂交率99.00%。其中X染色体杂交率为（49.789±1.346）%,Y染色体杂交率为（48.814±1.296）%,精子中双体类型为XX、XY、YY,其中XX杂交率为（0.110±0.053）%,XY杂交率为（0.222±0.077）%,YY杂交率为（0.094±0.038）%。结论采用荧光原位杂交技术建立了一种能够快速高效分析精子染色体数目异常的检测方法,可作为精子质量遗传学检测手段,应用于男性不育症的临床检测。     

双色荧光原位杂交检测男性不育患者精子X和Y染色体

目的建立男性不育患者精子核双色荧光原位杂交技术（FISH）的检测方法。方法将20例男性不育患者精子标本经低渗液处理、固定后制片,用二硫苏糖醇（DTT）使精子去凝集,变性后与双色荧光标记（CEPX、Y）探针杂交。结果20例患者的6672个精子中,X染色体精子率为47．78％,Y染色体精子率为47．24％,性染色体数目异常的精子率为4．53％,有效杂交率为99．55％。结论成功地建立了检测人精子X和Y染色体的检测方法。     

168对不育夫妇的遗传病因学分析

目的分析不育夫妇的遗传学病因。方法采用对不育夫妇进行外周血染色体检查、分析,对部分男性进行Y染色体无精子症因子（azoospermia factor,AZF）基因检测。结果 168对夫妇205例染色体检查发现15例染色体结构或数目异常,占7.32%;染色体多态25例,占12.20%;男性少弱精子症或染色体核型小Y者进行Y染色体无精子症因子检查12例,1例b、c区域发现缺失。结论不育者的遗传病因学检查很有意义,可为其生育提供指导。     

双色FISH检测人精子染色体非整倍体方法的建立

建立：用双色FISH检测人精子染色体非整倍体的方法。方法：采用双色荧光原位杂交（FISH）方法取适量精子标本用EDTA／PBS处理,然后用二硫苏糖醇（DTT）,使精子去凝集。固定后滴片,然后与双色荧光直接标记探针杂交。结果：在OLYMPUS荧光显微镜下可以清楚看到精子头部的蓝色杂交信号,头部有1个绿色荧光杂交信号的精子为X染色体精子（X精子）,有1个红色荧光杂交信号的精子为Y染色体精子（Y精子）。精子头部有2个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子。结论：双色荧光原位杂交（FISH）方法可以用于测定人精子染色体非整倍体率的变化。     

不育男性无精子因子基因检测分析

目的筛查男性不育患者Y染色体无精子因子（AZF）区域微缺失情况,探讨AZF基因微缺失与原发无精、严重少精症之间的关系。方法采用多重聚合酶链反应（PCR）技术,对某市118例原发无精子症、84例原发严重少精症患者及66例正常生育男性进行Y染色体AZF基因家族AZFa、AZFb、AZFc三个区域微缺失分析。结果 66例正常生育男性未发现Y染色体AZF区域微缺失,202例生精障碍患者中发现AZF微缺失25例,总缺失率为12.4%。其中12例无精症患者和5例少精症患者的缺失发生在AZFc区域,缺失率为8.4%;1例无精症患者和2例少精症患者发生AZFb、AZFc双重缺失,缺失率为1.5%;1例无精症患者发生AZFa、b、c三个区域同时微缺失,缺失率为0.5%。生精障碍组与正常生育男性组比较Y染色体AZF区域微缺失率差异具有显著性（P〈0.001）。结论 Y染色体AZF区域微缺失是引起男性无精、少精子症的重要原因之一,对原发无精、少精子症患者在单精子注射（ICSI）之前进行微缺失筛查是必要的。     

对无精子症和严重少精子症患者Y染色体畸变和微缺失的研究及评估

目的 研究无精子症和少精子症患者染色体畸变及Y染色体(Yq11区)无精子症因子(azoospermic factor,AZF)微缺失情况,建立Y染色体微缺失的临床筛查方法。对原发性无精子及少弱精症患者与AZF、微缺失的关系。方法 对145例患者(无精子症102例,严重少精子症43例)经染色体核型分析及．AZF的3个位点8对引物PCR扩增,检测染色体畸变和Y染色体微缺失率。选取6个Y染色体特异性序列标签位点(STS),用PCR技术检测145例精子发生障碍患者AZF区微缺失情况。结果 145例中染色体核型异常12例,占8．3％。AZF、区微缺失21例,缺失率为14．5％。无精子症和严重少精子症．AZF缺失率分别为14．70％和11．62％。145例中AZF区微缺失21例,表现为无精子症。缺失均在AZFc区,7例为DAZ(sY254、sY255)缺失,另2例为DNA加sY157缺失。结论 染色体畸变和Y染色体微缺失是导致无精子症和严重少精子症的主要原因之一。无精子症缺失率高于严重少精子症患者。AZF3个位点8对引物PCR扩增可作为Y染色体微缺失的临床筛查方法。     

少精子症、弱精子症和畸形精子症患者精子凋亡率比较

目的：比较少精子症、弱精子症和畸形精子症患者精子凋亡率。方法：应用计算机辅助精液分析（CASA）对生育组(n=14)、不育组［(n=48),少精子症(精子密度<10×10^６•mL^-1)11例、弱精子症(a+b级精子百分率<50%)25例、畸形精子症(形态正常精子百分率<14%)12例］进行精液参数检测,瑞-姬染色检测精子凋亡率。结果：不育组及不育组中的少精子症组精子凋亡率均明显高于生育组（P<0.05）;弱、畸形精子症组精子凋亡〖JP3〗率与生育组比较差异均无显著性（P>0.05）。密度异常组(精子密度<20×10⁶•mL^-1)精子凋亡〖JP〗率明显高于密度正常组(精子密度≥20×10⁶•mL^-1)（P<0.05）;a+b级异常组(a+b<50%)精子凋亡率与正常组比较差异无显著性（P> 0.05）;精子形态异常组(形态正常精子<14%)凋亡率与正常组比较差异无显著性（P> 0.05）。结论：不育组精子凋亡率高于生育组,尤其是少精子症患者精子凋亡率增加更明显。     

少弱精子症男性不育症的中药治疗概况

少精子症（oligospermia）是指精液中精子的数目低于正常具有生育能力男性的一种病症。临床上少精子症常与精子活率低下、前向运动能力差以及精子畸形率高同时存在,此时称之为少、弱精子症。少、弱精子症临床常见,约占男性不育症的70％。近年来中药治疗少、弱精子症取得了一定的进展,笔者搜集了近5年的相关文献资料,现综述如下：     

男性不育患者Y染色体AZF区微缺失分析

目的：探讨Y染色体上无精子因子(AZF)微缺失与男性不育的关系。方法：应用多重PCR技术,采用AZF区9个序列标签位点（STS）,对107例男性不育患者（83例无精子症和24例严重少精子症）和20例正常生育男性外周血进行微缺失分析。结果：在107例无精症和少精子症不育患者中11例AZF区域微缺失,缺失率10.3%,其中无精症组缺失率为9.6％（8/83）,少精子症组缺失率为12.5％（3/24）。11例微缺失患者中,单独AZFc区缺失患者5例（45.5%）, AZFc+d区缺失患者4例（36.4％）, AZFb+c区、AZFb+c+d区缺失患者各1例(9.1%);位点sY254和sY255缺失患者分别为72.7％（8/11）和100％（11/11）。20例正常生育男性未检测出Y染色体微缺失。结论：Y染色体AZF微缺失是导致男性不育患者精子发生障碍的重要原因。     

精子因素对反复自然流产的影响

目的 分析精子因素对反复自然流产的影响.方法 病例组:21例不明原因反复自然流产患者丈夫,对照组:20名已生育男子,采用精子染色质结构分析方法 分析精子DNA完整性,参照WHO标准分析精液质量,选用X、Y和18号染色体探针进行荧光原位杂交(FISH)检测精子的非整倍体性.结果 病例组正常形态率(10.8±2.8)%低于对照组,DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)值(21.7±6.7)%、18染色体非整倍体率(0.23±0.09)%、性染色体非整倍体率(0.80±0.14)%均明显高于对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论 精子形态、DNA完整性和染色体非整倍体率是反复自然流产的相关性因素.     

1例身材矮小患者的分子细胞遗传学分析

目的明确1例身材矮小患者的分子细胞遗传学特征。方法采用G带核型分析、Q带核型分析、荧光原位杂交（FISH）和比较基因组杂交（CGH）技术对患者染色体异常进行逐步细化分析。结果此患者最终诊断核型为46,X,der（X）。ish psu dic X t（X;Y）（p11.3;p11.1）（DXZ1＋,DYZ3＋,DYZ1＋,SRY-,PCPXYp-,PCPXYq＋＋）。ish cgh del（X）（p11.3pter）,dup（Y）（p11.2）。结论结合应用染色体显带核型分析技术,FISH和CGH技术可以精确诊断患者的染色体异常。     

Investigation of the frequency of chromosomal aneuploidy using triple fluorescence in situ hybridization in 12 Chinese infertile men

Background Chromosomal aberrations are the major cause of pre- and post-implantation embryo wastage and some studies suggest that half of all human conceptions have a chromosomal abnormality. A chromosomal aberration in human sperms is also one of the causes of failure of in vitro fertilization. This study was designed to ascertain whether chromosomal aneuploidy in spermatozoa is a risk factor for male infertility.Methods Twelve infertile men were divided into two groups: 10 with oligoasthenoteratozoospermia (OAT, Group A) and two with a normal semen analysis (Group B). Two normal healthy sperm donors acted as controls (Group C). We used fluorescence in situ hybridization (FISH) and probes for chromosomes X, Y and 18 to determine the frequency of aneuploidy. Results The frequencies of spermatozoa disomy for chromosomes X, Y and 18 were 0.30% and 0.30%, respectively, in Group B. The percentages were not significantly different from those of Group C （0.15% and 0.16%）. The frequencies of nullisomy for chromosomes X, Y and 18 were 0.15% and 0 for Group B, and 0 and 0.15% for Group C (P&gt;0.05). In Group A, the incidences of disomy were 1.13% and 0.96% and the frequencies of nullisomy were 1.13% and 1.60%. In these three groups, the incidences of diploidy were 0.60%, 1.00%, and 0.30%, respectively. Both the frequencies of disomic and nullisomic spermatozoa for chromosomes X, Y, and 18 and of diploid spermatozoa were significantly higher in Group A than in Groups B and C. The estimated total aneuploidy rates in the sperm from the three groups were 42.44%, 6.05%, and 2.59%, respectively.Conclusion These results indicate that chromosomal aneuploidy in spermatozoa may be a risk factor for infertility.     

FISH技术在快速诊断自然流产胚胎染色体数目异常中的应用

目的探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术在快速诊断自然流产胚胎染色体数目异常的应用价值。方法选择100例早期自然流产胚胎或绒毛进行染色体核型分析,同时应用FISH技术针对高发的13、16、18、21、22、X/Y号染色体进行染色体数目检测,并以染色体核型分析为"金标准"进行FISH方法的评估。结果 100例标本中,FISH诊断流产绒毛染色体数目异常39例,非整倍体异常32例,多倍体异常7例;与核型分析相比,2例细胞培养失败的标本通过FISH检测,诊断为16三体,3例标本染色体核型分析诊断为46,XX,经FISH检测发现2例为22三体,1例为46,XY,经其他方法检测,结果与FISH诊断结果相符。两方法进行Kappa检验分析,κ系数=0.735>0.7,P=0.000<0.05,说明FISH方法与染色体核型分析吻合度有统计学意义且较强。结论 FISH技术是一种快速的细胞分子诊断技术,建议经济承受力较强的流产患者在进行流产绒毛染色体核型分析的同时行FISH检查。     

FISH技术诊断自然流产胚胎染色体数目异常的实验研究

目的 探讨荧光原位杂交（FISH）技术在诊断自然流产胚胎染色体数目异常的应用价值.方法 用FISH技术对770例自然流产胚胎绒毛组织13、16、18、21、22、X及Y染色体数目进行检测.结果 770例标本FISH检测全部成功,胚胎染色体数目异常342例（44.42％）.异常标本中非整倍体259例（75.73％）,三倍体67例（19.59％）,四倍体12例（3.51％）,嵌合体4例（1.17％）.检出最多的染色体数目异常类型为16三体（29.54％）,其次为X单体（15.51％）,其他比例较高异常类型为22三体（14.05％）、69,XXY（9.94％）、69,XXX（9.65％）、21三体（7.32％）及13三体（4.39％）.孕妇既往自然流产次数、孕妇年龄与染色体数目异常无明显关系（P＞0.05）.结论 染色体数目异常是导致自然流产的重要因素之一,FISH技术是检测染色体数目异常的有效方法,对自然流产病因诊断、再次妊娠指导具有重要意义.     

不同体外微环境条件对精子生存质量的影响

目的探索精子生存质量最佳的体外微环境条件。方法收集禁欲5~7 d的精液标本30份,精液处理前将梯度离心液和冲洗液分别放在37℃恒温水浴箱（甲组）和室温（乙组）中复温,室温下液化后以密度梯度离心处理并且洗涤1次,然后分别放在室温（条件A）、37℃6%CO2培养箱（条件B）、37℃恒温水浴箱（条件C）3种不同培养条件下保存,于24 h、48 h和72 h检查精子的存活率。结果培养液在甲组中复温的精子24 h、48 h和72 h的存活率（74.0±9.4）%、（68.2±13.6）%（、52.9±26.5）%,略高于乙组的（70.5±16.2）%、（61.1%±15.8）%、（50.5%±17.4）%,但两组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。培养液在甲组或乙组复温并处理后,精子在体外微环境条件下培养随着时间延长其存活率均有降低趋势,而在保存时间相同情况下,培养在室温（条件A）中的精子与培养在37℃恒温水浴箱（条件C）内的精子存活率比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但是培养在37℃6%CO2培养箱（条件B）内的精子存活率显著低于培养在室温或37℃恒温水浴箱内的精子的（P〈0.05）。结论精液处理前所用培养基最好放置于37℃恒温水浴箱中复温,处理好的精子应立即做授精准备。     

应用荧光原位杂交技术检测男性肺癌细胞性染色体数目的改变

目的 应用荧光原位杂交技术（FIsH）研究肺癌细胞性染色体数目的改变及其意义。方法 用X、Y号染色体的着丝粒探针与17例男性肺癌标本的间期细胞进行杂交检测。结果男性患者中，X染色体的获得占10例（58．82％），Y染色体的丢失占9例（52．94％），Y染色体的获得占2例。结论 FISH技术可检测肺癌间期细胞的染色体数目改变，性染色体数目异常在肺癌中的发生率很高，与肺癌的发生、发展有一定的联系。     

大剂量γ射线照射诱发人精子与淋巴细胞染色体畸变研究

目的 :探讨大剂量60 Coγ射线事故照射和离体照射对人精子与淋巴细胞染色体畸变的影响。方法 :应用人精子穿透金黄地鼠卵获得精子中期分裂相和微量全血培养法制备淋巴细胞中期分裂相 ,分析两例在60 Co辐射事故中全身受到大剂量γ射线照射的急性放射病患者照后 6( 7)年的精子和淋巴细胞染色体畸变 ,以及60 Coγ射线离体照射人精子与淋巴细胞诱发染色体畸变 ,并对全身照射与模拟离体照射进行比较。结果 :两例事故受照患者的畸变精子率显著高于对照组 ,亦显著高于同期淋巴细胞染色体畸变水平 ;两患者精子染色体断裂型畸变是重接型的 2倍 ,而淋巴细胞重接型畸变是断裂型的 2倍 ,两患者的Y 精子与X 精子的比例明显增高 ( 1 60∶1)。在离体照射条件下 ,人精子和淋巴细胞的畸变细胞率基本相同 ,均与照射剂量呈正相关 ;结构畸变类型明显不同 ,精子染色体断裂型畸变是重接型的 8倍 ,淋巴细胞重接型畸变是断裂型的 4倍 ;Y 精子与X 精子的比例为 1∶1。在相同剂量点 ,模拟照射组的人精子染色体畸变率显著高于全身照射组 ,两受照组精子染色体均以断裂型畸变为主 ,但事故照射组精子重接型畸变的比例显著高于离体照射组。结论 :在全身照射情况下 ,电离辐射对生殖细胞影响的重点是精原干细胞 ,而且在精子发生的过程中有