去甲斑蝥素抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮-间充质转分化的实验研究

目的:利用单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型,观察去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对肾小管上皮细胞间质转分化的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(UUO组)和UUO+NCTD治疗组(NCTD组),每组6只。采用单侧(左)输尿管结扎方法,建立梗阻性肾小管间质纤维化大鼠模型,Sham组只游离输尿管而不结扎。术后14d处死动物,取结扎侧肾脏,同时处死Sham组大鼠,取出肾组织。采用免疫组化、Western Blot及RT-PCR检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)与转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白的mRNA表达的变化。结果:免疫组化、Western Blot及RT-PCR均显示,与Sham组比较,UUO组肾组织α-SMA和TGF-β1的mRNA表达升高、E-cadherin蛋白和mRNA表达降低(P<0.05);NCTD能抑制UUO大鼠肾组织α-SMA和TGF-β1表达的上调,上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论:NCTD具有抑制UUO大鼠肾小管上皮-间充质转化的作用,该作用可能与抑制TGF-β1的过表达有关。     

阿托伐他汀对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路的干预作用

目的探讨阿托伐他汀对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路的干预作用。方法 36只SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和阿托伐他汀组,各组分别设7 d、14 d两个时间点。HE、Masson、PAS染色法观察肾脏病理改变;免疫组化观察Wnt4和β-catenin蛋白在肾组织的表达;Western印迹检测各组大鼠肾皮质Wnt4、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、Ecadherin、α-SMA和CollagenⅠ蛋白的相对表达量。结果与假手术组相比,模型组肾皮质Wnt4和β-catenin、p-GSK-3β、α-SMA蛋白表达显著增多(P<0.05),CollagenⅠ沉积增多(P<0.01),E-cadherin蛋白表达显著减少(P<0.01),GSK-3β在各组大鼠肾组织表达无差异;与模型组相比,阿托伐他汀组肾组织Wnt4、β-catenin、p-GSK-3β和α-SMA蛋白表达减少(P<0.05),CollagenⅠ蛋白沉积显著减少(P<0.05),并伴有E-cadherin蛋白表达显著增多(P<0.05),而GSK-3β蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论 Wnt4/β-catenin信号通路的活化促进了UUO大鼠肾脏纤维化的发生发展,阿托伐他汀能改善肾脏纤维化病变,减轻肾间质细胞外基质的沉积,可能与其抑制Wnt4/β-catenin信号通路的激活和传导有关。     

去甲斑蝥素不依赖钙调蛋白磷酸酶信号通路抑制高糖刺激肾小管上皮细胞细胞外基质的表达

目的:在证实去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)能减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾间质纤维化和抑制高糖刺激的肾小管上皮细胞细胞外基质表达的基础上,观察NCTD对高糖刺激的肾小管上皮细胞钙调蛋白磷酸酶(calcineurin,CaN)通路的影响,探讨NCTD抗DN肾小管间质纤维化与其抑制CaN的关系。方法:常规培养人肾小管上皮细胞(HK-2),转染CaN siRNA,细胞分五组:(1)正常糖组(D-glucose5.5mmol/L);(2)高糖组(HG,D-glucose30mmol/L);(3)高糖+CaN siRNA组;(4)高糖+CaN siRNA+NCTD(5mg/L)组;(5)高糖+NCTD(5mg/L)组。采用Western-blot、免疫荧光和实时定量PCR,观察NCDT对HK-2细胞CaN/NFAT通路的影响,明确CaN siRNA的干扰效果。采用Western blot,检测NCTD对转染CaN siRNA后的HK-2细胞纤维连接蛋白(FN),胶原蛋白IV(Collagen IV,Col IV)及转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达的影响。结果:高糖可促进HK-2细胞CaNmRNA及蛋白的表达,NCTD可在基因及蛋白水平抑制CaN的表达(P0.05)。免疫荧光发现CaN下游活化T细胞核因子(NFATc)在正常对照组中存在于胞质,高糖刺激后细胞核内开始表达,高糖刺激30min后发生明显的核转位,NCTD能在一定程度上抑制核转位的发生,并能减少高糖刺激后核内NFATc蛋白的表达。转染CaN siRNA后,高糖刺激后HK-2细胞中CaN mRNA以及蛋白表达均降低,而FN,Col IV以及TGF-β1蛋白水平表达都明显增强(P0.05)。NCTD可抑制转染CaN siRNA后高糖刺激的HK-2细胞FN,Col IV和TGF-β1的表达。结论:NCTD能下调肾小管上皮细胞CaN表达,阻断CaN/NFATc信号通路;但NCTD抑制高糖刺激后肾小管上皮细胞细胞外基质的表达,与其阻断CaN/NFATc信号通路无关。     

黄芪甲苷抑制转化生长因子β1诱导肾小管上皮细胞凋亡的实验研究

目的:探讨黄芪甲苷(AS-IV)抑制转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肾小管上皮细胞凋亡的机制。方法:体外采用TGF-β1(10 ng/m1)刺激人近端小管上皮细胞(HK-2),采用不同浓度的AS-IV(50μg/rl、100μg/ml、200μg/ml)进行干预治疗24h收集细胞。体内建立小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型,C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(UUO组)和治疗组(AS-IV组)。采用单侧(右)输尿管结扎建立UUO模型,Sham组仅游离输尿管但不结扎,AS-IV组连续7天给予AS-Ⅳ[20mg/(kg·d)]灌胃,UUO组和Sham给予等剂量溶剂灌胃,术后第14天采集肾脏组织。TUNEL法检测凋亡,CCK法观察细胞活性,Western印迹检测TGF-β1和被切割的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase 3)表达,并观察c-Jun氨基末端激酶(JNK)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化情况。结果:AS-Ⅳ改善UUO诱导的肾组织TGF-β1表达及细胞凋亡(P0.01),抑制TCF-β1诱导的HK-2细胞活性下降及细胞凋亡,200μg/mlAS-Ⅳ作用最明显(P0.01)。体内体外实验均可见,AS-IV减少caspase 3活化,抑制JNK MAPK磷酸化。结论:AS-IV可抑制TGF-β1的表达及其诱导的肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与JNK MAPK通路有关。     

氧化苦参碱对TGF-β1刺激的胰腺星状细胞Smad通路相关因子表达的影响

目的:观察氧化苦参碱(oxymatrine,OM)对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)刺激的胰腺星状细胞株LTC-14细胞株Smad通路信号分子Smad2/3/4/7的影响.方法:取大鼠胰腺星状细胞株LTC-14细胞,分别分为对照组、TGF-β1刺激组、OM干预组[TGF-β1+OM(1 mg/m L)]组.12 h后提取细胞RNA及蛋白,应用实时定量PCR及Western blot检测基因及蛋白表达量的变化情况.结果:OM干预组与TGF-β1刺激组相比,OM干预组均可降低Smad2/3/4基因及蛋白表达,结果有统计学意义(OM干预组vs TGF-β1刺激组,P0.05).OM干预组与TGF-β1刺激组相比,OM干预组使Smad7基因表达降低(OM干预组vs TGF-β1刺激组,P0.05),Smad7蛋白表达升高(OM干预组vs TGF-β1刺激组,P0.05).结论:体外实验中OM可以干预TG F-β1/Smad通路相关信号因子的基因蛋白表达;可能对TGF-β1介导的胰腺星状细胞为核心的胰腺纤维化过程存在治疗作用.     

1,25-(OH)2D3对UUO模型大鼠ILK及TGF-β1表达的影响

目的 探讨1,25-(OH)2D3减轻单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的作用及其机制.方法 将96只雄性SD大鼠随机分为对照组、UUO组、假手术组、干预组各24只,其中UUO组和干预组均于左肾下极处游离并结扎左输尿管建立UUO模型,假手术组开腹后仅游离左输尿管,对照组不行特殊处理.其后干预组予1,25-(OH)2D3 0.5 μg(溶于1 mL花生油中)灌胃、余三组均予1 mL花生油灌胃;各组分别于术后第1、3、7、14天每天各处死6只大鼠,留取左侧肾脏标本,光镜观察肾脏组织形态学改变及肾脏病理损害,免疫组化法观察整合来连接激酶( ILK)、转化生长因子(TGF) -β1蛋白表达,RT-PCR法检测ILK mRNA表达.结果 ①与对照组相比,UUO组肾皮质变薄、肾间质炎细胞浸润明显增多、纤维化随时间延长而加重(P＜0.05);与UUO组相比,干预组肾组织炎细胞浸润减少、纤维化程度减轻、病变积分明显降低(P＜0.05).②与对照组相比,UUO组ILK蛋白阳性表达随时间延长显著增加(P＜0.01);与UUO组比较,干预组ILK蛋白表达减少(P＜0.01);与对照组相比,UUO组TGF-β1蛋白随时间延长阳性表达显著增加(P＜0.01);与UUO组比较,干预组TGF-β1蛋白表达减少;ILK蛋白表达与TGF-β1蛋白表达呈显著正相关(r =0.872,P＜0.05).③与对照组比较,UUO组和干预组ILK mRNA表达均随时间延长明显增强(P＜0.01),其中干预组表达在7、14 d无显著差异;干预组各期均显著低于UUO组(P＜0.01).结论 1,25-(OH) 2D3可减轻UUO大鼠肾间质纤维化、保护肾脏功能,可能机制为间接或直接抑制肾间质ILK、TGF-β1表达;此为防治肾间质纤维化提出了新的方向.     

肉苁蓉多糖通过激活Wnt/β-catenin信号通路对6-HODA致帕金森病大鼠的神经保护作用

目的探讨肉苁蓉多糖通过激活Wnt/β-catenin信号通路对6-羟多巴胺(6-HODA)所致帕金森病大鼠受损神经的保护作用。方法将45只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和肉苁蓉多糖治疗组,采用6-HODA立体定向微量注射制备帕金森病大鼠模型。第32天观察实验动物行为学改变,之后将大鼠处死,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)检测大鼠脑黑质内Wnt1、β-catenin蛋白表达;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组游泳静止时间缩短,自主活动站立次数下降,肉苁蓉多糖治疗后上述两种行为得到恢复;模型组脑黑质内Wnt1、β-catenin蛋白水平低于假手术组;肉苁蓉多糖治疗组脑黑质内Wnt1、β-catenin蛋白水平高于模型组(P0.05);模型组脑黑质内GSK-3βmRNA高于假手术组;肉苁蓉多糖治疗后,帕金森病大鼠脑黑质内GSK-3βmRNA水平下降(P0.05)。结论肉苁蓉多糖能改善6-HODA所致帕金森病SD大鼠模型临床症状,这种作用可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路,抑制GSK-3β活性,进而发挥多巴胺神经保护作用。     

转化生长因子-β1/Smad3信号通路在肾间质纤维化大鼠肾脏组织中的表达和作用

目的探讨转化生长因子(TGF)-β1/Smad3信号通路在肾间质纤维化(RIF)大鼠肾脏组织中的表达和作用。方法 80只SD雄性大鼠编号,随机平均分为单侧输尿管结扎(UUO)模型组和假手术组,UUO模型组行大鼠左侧输尿管结扎术,假手术组游离左侧输尿管但不予结扎,术后第3、7、10、14、21天时每组分别处死8只,留取大鼠左侧肾脏用于病理以及蛋白测定,HE、Masson染色光镜观察肾脏组织形态学的改变,应用蛋白质印迹法(Western印迹)和免疫组化法(SP)检测TGF-β1、Smad3蛋白表达,PCR检测TGF-β1、Smad3 mRNA的表达。结果电镜观察结果显示RIF大鼠建模成功,随着结扎时间延长,UUO模型组RIF指数、Smad3与TGF-β1蛋白及mRNA表达均逐渐升高(P0.05),同一时间UUO模型组各指标均高于假手术组(P0.05)。Smad3、TGF-β1与RIF指数呈正相关(r=0.564,0.735,P0.05),TGF-β1与Smad3间呈正相关(r=0.673,P0.05)。结论通过检测肾脏组织中Smad3、TGF-β1的表达可判断RIF病情,对疾病的早期发现有重要意义。     

贵州苗药刺梨调控SIRT1-TGFβ/Smads信号途径延缓肾纤维化的机制

目的 探讨苗药刺梨延缓单侧输尿管、结扎术(UUO)模型大鼠肾间质纤维化的作用机制.方法 将50只SPF级雄性SD大鼠,适应性喂养1 w后,随机分为假手术组和手术组;手术组行UUO,假手术组只行输尿管分离,但不结扎.术后第2天,手术组随机分为模型组、SIRT1激动剂组、刺梨中剂量组、氯沙坦钾组,每组10只.各组于分组当天参照马氏定理设定干预剂量.氯沙坦组给予氯沙坦10 mg/(kg·d),浓度为20%;刺梨中剂量给予刺梨冻干粉3 g/(kg·d),浓度为3%;SIRT1激动剂组给予白藜芦醇25 mg/d.模型组和假手术组均同时给予同等容积无菌生理盐水灌胃.实验大鼠均每天干预1次,连续干预14 d后处死大鼠.取大鼠肾组织做苏木素-伊红(HE)、Masson染色以观察其病理变化;免疫组织化学法测定Western印迹检测肾组织转化生长因子(TGF)-β1、TGF-βⅠ型受体(TGF-βRⅠ)、Smad2、Smad3、Smad7的表达;用RT-PCR技术检测TGF-β1 mRNA、TGF-βRⅠmRNA、Smads2、Smad3、Smad7 mRNA的表达.结果 与假手术组比较,模型组病理损伤程度显著增加,丙二醛(MDA)含量增加、超氧化物歧化酶(SOD)含量降低(P<0.01),TGF-β1、TGF-βRⅠ的表达水平明显增加(P<0.05).与模型组比较各治疗组病理损伤减轻,TGF-β1、TGF-βRⅠ表达减少,Smda2、Smad3的表达降低,Smda7表达增加(均P<0.05).刺梨中剂量组与SIRT1激动剂组比较差异无显著性(P>0.05).结论 刺梨冻干粉与SIRT1激动剂(白藜芦醇)均可减轻单侧输尿管结扎肾间质纤维化大鼠的肾组织脂质过氧化物的产生,同时能增加抗氧化酶的含量,保护受损肾小管上皮细胞,有效改善肾脏纤维化病变.其机制可能与其富含维生素C、SOD、刺梨黄酮等多种抗氧化成分,激活体内SIRT1,从而活化Smda7以下调TGF-β1、TGF-βRⅠ及Smda2、Smad3的表达有关.     

培哚普利抗绝经后骨质疏松的作用与Wnt信号通路的关系

目的探索培哚普利改善骨质疏松的作用及机制。方法将50只实验大鼠分为正常对照组、假手术(Sham)组、卵巢去势(OVX)组、培哚普利组、雌二醇(E_2)组各10只。培哚普利组给予培哚普利4 mg/kg灌胃,E_2组用1.2 mg/kg戊酸E_2灌胃,正常对照组、Sham组及OVX组大鼠给予相同体积蒸馏水灌胃,1次/d,持续给药12 w。用药12 w后,取其左侧股骨测量骨密度(BMD),取右侧股骨用于提取RNA行荧光PCR检测骨组织中Wnt3a、低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)5及β-连环蛋白(catenin)mRNA的表达量。结果经过12 w的药物干预后,与Sham组相比,OVX组大鼠BMD显著降低(P0.01);与OVX组相比,培哚普利组、E_2组大鼠BMD明显上升(P0.05,P0.01)。与Sham组比较,OVX组Wnt3a、LRP5、β-catenin mRNA表达均下降(P0.05);与OVX组相比,培哚普利组、E_2组明显上调Wnt3a、LRP5、β-catenin mRNA表达(P0.05,P0.01)。结论培哚普利可增加OVX大鼠的骨质疏松,其机制可能是通过上调Wnt3a、LRP5、β-catenin启动Wnt通路,从而促进骨形成。     

梗阻性黄疸大鼠胆道外引流术前术后肝脏中转化生长因子β1表达

目的探讨转化生长因子(TGF)-β1在梗阻性黄疸大鼠胆道外引流术前后肝脏中的表达。方法监测梗阻性黄疸大鼠胆道外引流术前及术后不同时间组及假手术组TGF-β1的表达强度。结果 TGF-β1在梗阻性黄疸大鼠胆道外引流术前表达强度较高,术后3、6、9 d表达强度逐渐下降,与假手术组有明显差异(P<0.05)。结论 1TGF-β1在梗阻性黄疸大鼠胆道外引流术前术后肝脏中的表达存在显著差异,术后不同时段差异不同,术后随时间推移TGF-β1表达减弱。2胆道外引流术可改善梗阻性黄疸大鼠肝损伤,越早引流肝损伤恢复越快。     

Wnt/β-catenin信号通路通过下调自噬改善大鼠脑缺血再灌注损伤

目的观察Wnt/β-catenin信号通路通过调控大鼠皮层神经元细胞自噬水平对脑缺血再灌注(CIR)损伤的影响。方法将56只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、CIR组、Wnt/β-catenin激动剂氯化锂(Li Cl)处理组(Li Cl+CIR组)、生理盐水(NS)处理组(NS+CIR组),每组14只。采用大脑中动脉线栓阻塞法建立大鼠CIR损伤模型,缺血2 h后再灌注24 h。采用Garcia神经功能缺陷评分评估各组大鼠神经行为学改变;氯化三苯基四氮唑染色测定脑梗死体积;Western blot测定大鼠皮层β-catenin、LC3-Ⅱ及P62蛋白表达。结果再灌注24 h后,与Sham组相比,CIR组神经行为学评分升高,脑梗死体积增加,皮层β-catenin表达降低,LC3-Ⅱ表达升高,P62蛋白表达水平下降(P0.05);与CIR组相比,Li Cl+CIR组神经行为学评分降低,脑梗死体积减少,皮层β-catenin表达增加,LC3-Ⅱ表达降低,P62蛋白表达水平增加(P0.05)。结论 Wnt/β-catenin信号通路通过调控自噬改善大鼠CIR的神经损伤。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对肾间质纤维化大鼠的保护作用

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的保护作用.方法 将30只健康、雄性SD大鼠随机分为3组:分别为UUO组、假手术组(SOR)、和UUO+EGCG组,术前分别给UUO组和SOR组生理盐水灌胃,UUO+EGCG组EGCG 20 mg·kg-1·d-1灌胃,连续3 d.术后第8天分别处死各组大鼠用免疫组织化学方法测定转化生长因子β(TGF-β) 和P53的表达情况.行HE和Masson染色,动态观察肾间质形态学改变.结果 UUO+EGCG组P53的表达明显低于UUO组;UUO+EGCG组TGF-β的表达量(1.92±0.35)与UUO组(3.27±0.56)比较有明显的下降(P<0.01);能减轻胶原在肾间质的沉积,改善了肾脏病理改变.结论 EGCG对UUO所致的大鼠肾脏纤维化的形成有明显的抑制作用,其作用可能跟降低TGF-β的表达阻止细胞损伤有关.     

β连环蛋白在肝硬化大鼠心肌肥厚中的作用机制研究

目的探讨肝硬化大鼠心肌中的β连环蛋白(β-catenin)表达,以阐明β-catenin在肝硬化大鼠心肌肥厚中的作用机制。方法建立肝硬化大鼠模型,通过模型组和对照组比较,免疫组化法检测各组心肌组织中β-catenin表达水平; Western blot检测大鼠心肌中的β-catenin和Wnt诱导的分泌型蛋白1(WISP-1)表达差异。结果模型组体重增长较慢,且小于对照组。免疫组化及Western blot结果显示对照组β-catenin蛋白的表达水平低,肝硬化模型组β-catenin蛋白的表达水平高,二者比较差异有统计学意义(P 0. 01)。结论 Wnt/β-catenin(Wnt/β-连环蛋白)信号通路参与肝硬化所致心肌肥厚的病理过程。     

和厚朴酚通过Wnt/β-连环蛋白通路抗动脉粥样硬化

目的 体内外观察和厚朴酚(HNK)对动脉粥样硬化(AS)模型Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路及动脉硬化的影响;探讨和厚朴酚调控Wnt/β-catenin信号通路对AS形成过程影响的可能机制。方法 动物实验：8只SD大鼠作为正常对照组,24只高脂喂养SD大鼠随机分为AS组(高脂喂养+维生素D₂注射建立AS模型),AS+HNK组[建立模型后HNK腹腔注射5 mg/(kg·d),2次/d,连续8周]和AS+HNK-PNU组[AS+HNK组的基础上加用Wnt/β-catenin拮抗剂PNU-74654 100 mg/(kg·d),连续8周],每组8只。检测各组血脂水平,HE染色图像分析测定胸主动脉中膜面积及血管壁厚度,免疫印迹法检测大鼠胸主动脉组织Wnt/β-catenin的蛋白表达。细胞实验：培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMC)分为对照组、AS模型组[使用20 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)干预48 h诱导建立细胞AS模型],AS+HNK组(AS+HNK 32μmol/L干预48 h)、AS+HNK-PN...     

白介素-10对梗阻性黄疸大鼠肝组织转化生长因子β1表达和肝细胞凋亡的影响

目的:探讨白介素-10(IL-10)对梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡的作用.方法:Wistar♂大鼠随机分为假手术(SO)组、梗阻性黄疸(OJ)组和IL-10组.OJ组和IL-10组结扎切断胆总管建立梗阻性黄疸模型,SO组仅游离胆总管.IL-10组术后第1天开始每天腹腔内注射IL-10(4μg/kg).实时荧光定量PCR法检测肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的水平,免疫组织化学法检测肝组织TGF-β1蛋白表达情况.末端脱氧核甘酸介导生物素标记(TUNEL)法检测大鼠肝细胞凋亡情况,并检测血清TBIL、DBIL、ALT和AST水平.结果:胆总管结扎术后3d,与SO组相比,OJ组大鼠血清转氨酶、肝组织TGF-β1表达水平及肝细胞凋亡率均明显升高(ALT:91.83U/L±21.47U/Lvs47.67U/L±12.79U/L;AST:208.67U/L±32.36U/Lvs75.17U/L±11.96U/L;TGF-β1mRNA:7.48±1.51vs1.21±0.79;TGF-β1蛋白:6.11%±1.11%vs1.26%±0.64%;凋亡:15.06%±1.17%vs3.94%±0.46%;均P<0....     

皮肤原位再生医疗技术治疗大鼠糖尿病足溃疡创面的效果及作用机制

目的探讨皮肤原位再生医疗技术(MEBT/MEBO)治疗大鼠糖尿病足溃疡创面的效果及对转化生长因子(TGF)-β1、磷酸化smad3(P-smad3)、β-catenin mRNA表达的影响。方法选取50只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、模型对照组、MEBT/MEBO组、贝复济组,各10只。比较四组大鼠治疗8 d的创面愈合率、平均创面愈合时间及TGF-β1蛋白、P-smad3蛋白、β-catenin mRNA的表达。结果正常对照组、MEBT/MEBO组、贝复济组的平均创面愈合时间都低于模型对照组,模型对照组治疗8 d的创面愈合率低于正常对照组、MEBT/MEBO组、贝复济组(P<0. 05); MEBT/MEBO组的平均创面愈合时间低于贝复济组,但高于正常对照组(P<0. 05)。模型对照组的TGF-β1、P-smad3蛋白表达及β-catenin mRNA表达均低于正常对照组、MEBT/MEBO组、贝复济组(P<0. 05),MEBT/MEBO组的TGF-β1、P-smad3蛋白表达低于正常对照组(P<0. 05)。MEBT/MEBO组的β-catenin mRNA表达高于贝复济组(P<0. 05)。结论 MEBT/MEBO可增强TGF-β1、P-smad3蛋白及β-catenin mRNA的表达,这可能是MEBT/MEBO治疗糖尿病足溃疡的作用机制。     

补阳还五汤对线栓大鼠模型脑损伤和血脑屏障通透性的影响

目的:观察补阳还五汤对线栓大鼠模型脑损伤和血脑屏障通透性的影响。方法:通过线栓法建立大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,分为MCAO组(生理盐水)、补阳还五汤组(灌胃补阳还五汤)、血塞通组(尾静脉注射血塞通)及联合组(补阳还五汤+血塞通),另设假手术组(生理盐水)。评估大鼠行为学,检测血清中枢神经特异性蛋白(S-100β)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及脑组织伊文思蓝(EB)含量、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、水通道蛋白-4(AQP-4)、紧密连接相关蛋白(Claudin-5)mRNA和蛋白表达。结果:与MCAO组比较,补阳还五汤组、血塞通组及联合组神经功能评分、贴纸去除时间及S-100β、NSE、EB含量、AQP-4 mRNA和蛋白表达量均降低,且联合组最低,Wnt3a、β-catenin、Claudin-5 mRNA和蛋白表达量均升高,且联合组最高(P<0.05)。结论:补阳还五汤可减轻MCAO大鼠脑损伤,降低血脑屏障通透性,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

罗格列酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质炎症及其纤维化的保护作用

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体激动剂罗格列酮(RSG)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质炎症的保护作用及其作用机制。方法:将雄性SD大鼠随机分成五组,①假手术对照组(Sham);②假手术 大剂量罗格列酮[30mg/(kg·d]组(Sham RSG);③UUO不用药组(UUO);④UUO 小剂量罗格列酮[5mg/(kg·d)]治疗组(UUO RSG1);⑤UUO 大剂量罗格列酮[30mg/(kg·d)]治疗组(UUO RSG2)。除假手术对照组外,其余各组根据不同干预时间细分为3天、7天、14天亚组。观察RSG对肾小管间质纤维化的影响及图象分析的不同时间点梗阻侧肾间质ED1阳性巨噬细胞浸润数量;肾皮质炎性因子单核细胞趋化蛋白1(MCP1)、肿瘤坏死因子1(TNFα)、巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)等的mRNA表达(逆转录聚合酶链反应检测);及ELISA检测肾皮质MCP1蛋白含量。结果:14天时RSG能显著减轻UUO模型肾小管间质纤维化指数。与UUO组相比,RSG组使UUO7天及14天时梗阻侧肾间质ED1阳性的巨噬细胞浸润数显著减少;MCP1mRNA水平和蛋白水平表达均显著降低;MCSFmRNA及TNFαmRNA表达显著下调。结论:RSG能抑制UUO模型大鼠肾间质炎症和纤维化,减少肾间质巨噬细胞浸润和肾皮质炎性细胞因子表达。     

Wnt/β-catenin信号通路介导参麦注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用

目的观察Wnt/β-catenin信号通路是否介导参麦注射液(SM)对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠的脑保护作用。方法 84只SD大鼠按随机区组的方法分成7组:假手术组(Sham)、模型组(MCAO)、参麦注射液+模型组(SM+MCAO)、生理盐水(NS)+模型组(NS+MCAO)、磷酸盐缓冲液(PBS)+参麦注射液+模型组(PBS+SM+MCAO)、Wnt/β-catenin拮抗剂Dickkopf-1(Dkk-1)+参麦注射液+模型组(Dkk-1+SM+MCAO)、Dkk-1+模型组(Dkk-1+MCAO),每组12只。采用线栓大脑中动脉阻塞(MCAO)法建立大鼠CIRI模型。在脑缺血即刻,SM+MCAO组、PBS+SM+MCAO组、Dkk-1+SM+MCAO组大鼠腹腔注射参麦注射液(15 mL/kg),NS+MCAO组大鼠注射等量生理盐水。Dkk-1+SM+MCAO组、Dkk-1+MCAO组大鼠分别在建立模型前30 min脑室注射Dkk-1(1 g/L,1μL),PBS+SM+MCAO组大鼠脑室注射等量PBS。再灌注24 h,评估各组大鼠神经行为学评分,检测脑梗死体积以及脑梗死半暗带区Bcl-2、Bax和β-catenin蛋白表达量,并计算Bcl-2/Bax比率。结果与假手术组相比,MCAO组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积、Bcl-2和Bax以及β-catenin蛋白表达量均增加(P0.05),而Bcl-2/Bax比率减小(P0.05);与MCAO组相比,SM+MCAO组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积以及Bax蛋白表达量明显减少(P0.05),Bcl-2和β-catenin蛋白表达量以及Bcl-2/Bax比率明显增加(P0.05);与SM+MCAO组相比,Dkk-1+SM+MCAO组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积、Bax蛋白表达量明显增加(P0.05),而Bcl-2蛋白表达量、Bcl-2/Bax比率明显减小(P0.05)。结论参麦注射液通过上调Wnt/β-catenin信号通路改善CIRI大鼠的脑损伤。