STAT3siRNA对肺腺癌A549细胞STAT3表达和细胞生物学行为的影响

目的:观察经RNA干扰沉默STAT3基因对人肺腺癌细胞A549生长和凋亡的影响。方法:设计并经化学合成了针对STAT3基因不同位点的3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列(STAT3siRNA1、STAT3siRNA2、STAT3siRNA3),在脂质体(LipofectamineTM2000)介导下转染人肺腺癌细胞株A549,采用RT-PCR法检测STAT3mRNA表达变化,筛选出抑制作用最强的STAT3-siRNA。免疫印迹法检测细胞STAT3、Cyclin D1、BAX、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达。AM-BLUE法测定A549细胞体外增殖情况。流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:经RNA干扰能有效降低A549细胞STAT3mRNA表达水平(P0.05),转染STAT3siRNA后,A549细胞STAT3、Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低(P0.05),而BAX、Caspase-9蛋白的表达水平升高(P0.05)。STAT3蛋白表达分别与CyclinD1、Bcl-2蛋白表达呈正相关(r=0.854,0.910,P0.05);与BAX蛋白表达呈负相关性(r=-0.848,P0.05);与Caspase-9蛋白表达呈无相关性(r=-0.787,P0.05)。RNA干扰法沉默STAT3基因表达后,A549细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加。结论:STAT3siRNA可有效抑制A549细胞STAT3表达,抑制A549细胞生长并促进其凋亡。     

微小RNA-622对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨微小RNA (miRNA)-622对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法 培养A549细胞,分为miRNA-622组和miRNA-622阴性对照组 (NC组),分别转染miRNA-622模拟物及miRNA-622阴性对照。使用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miRNA-622组和NC组miRNA-622的表达水平,采用噻唑蓝实验检测两组细胞增殖能力,采用流式细胞学技术检测两组细胞凋亡率。结果 miRNA-622组和NC组细胞中miRNA-622的相对表达水平分别为0.993±0.058、0.631±0.053,OD值分别为0.631±0.049、0.922±0.058,细胞凋亡率分别为12.230%±0.176%、7.400%±0.208 %,miRNA-622组miRNA-622的相对表达水平和细胞凋亡率均高于NC组,而OD值低于NC组,差异均有统计学意义(t=23.650、17.710、3.822,P值均<0.01)。结论 miRNA-622可抑制A549细胞增殖,促进A549细胞凋亡。     

miR-7-5p靶向丝氨酸/苏氨酸激酶11调控非小细胞肺癌细胞A549的凋亡

目的探讨miR-7-5p是否靶向丝氨酸/苏氨酸激酶11(LKB1)调控非小细胞肺癌细胞A549的凋亡。方法通过TargetScanHuman分析miR-7-5p与LKB1的匹配情况,然后通过荧光素酶报告系统检测miR-7-5p是否靶向LBK1;miR-7-5p mimics过表达或者miR-7-5p inhibitor敲低miR-7-5p的情况下,通过免疫印迹检测凋亡相关蛋白质Cleaved-caspase3和Bax的表达量,AMPK的总蛋白和是p-AMPK的表达量;通过Annexin-V染色检测非小细胞肺癌细胞A549的细胞凋亡水平。结果 miR-7-5p靶向LKB1的3′UTR;过表达miR-7-5p后,LKB1的表达量下降(P0.05),凋亡相关蛋白质Cleaved-caspase3和Bax的表达量上升(P0.05),p-AMPK的表达量减少(P0.05),非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平上升(P0.05),但是此种效应能被AMPK的抑制剂BML-275抑制;敲低miR-7-5p后,LKB1的表达量下降(P0.05),凋亡相关蛋白质Cleaved-caspase3和Bax的表达量下降(P0.05),p-AMPK的表达量上升(P0.05),非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平下降(P0.05)。结论 miR-7-5p通过靶向LKB1的3′UTR通过AMPK通路促进非小细胞肺癌细胞A549的细胞凋亡。     

miR23a促进肺癌细胞株A549细胞凋亡蛋白Caspase-3表达的分子机制

目的研究miR23a通过JNK信号通路促进肺癌细胞株A549细胞凋亡蛋白Caspase-3表达的分子机制。方法利用脂质体转染试剂Lipo2000将mi23a转染到肺癌A549细胞,实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)法检测阴性对照(NC)组和转染mi23a组细胞中miR23a的表达;划痕实验检测肺癌细胞株A549的迁移能力;Western blotting法检测JNK通路中p-JNK水平的变化;RT-PCR法和Western blotting检测肺癌细胞株A549转染miR23a后细胞凋亡蛋白Caspase-3的mRNA和蛋白质水平的表达。结果 Real-time PCR结果显示,转染miR23a组其miR23a表达水平显著高于阴性对照(NC)组(P0.05),A549细胞转染miR23a后,细胞增殖和扩散能力均显著降低(P0.05);Western blotting结果显示,转染miR23a组中p-JNK和Caspase-3的水平均有明显升高(P0.05)。结论 miR23a可通过活化JNK信号通路,进而促进肺癌A549细胞中细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达,从而抑制其肿瘤细胞的增殖和扩散能力。     

miR-1254靶向GLTSCR2调控非小细胞肺癌增殖和活力

目的探讨miR-1254、GLTSCR2与非小细胞肺癌凋亡和增殖活力的关系。方法检测非小细胞肺癌和正常肺细胞中miR-1254与GLTSCR2的表达;运用TargetScan在线分析miR-1254与GLTSCR2的相关性;利用luciferase assay检测miR-1254是否靶向调控GLTSCR2;转染miR-1254 mimics或miR-1254 inhibitor进非小细胞肺癌A549细胞,通过Western blot检测GLTSCR2的表达量和非小细胞肺癌A549细胞凋亡标志蛋白表达情况;通过CCK-8试验检测不同条件下A549细胞的增殖活力。结果非小细胞肺癌A549的miR-1254相对表达量最高(P <0.05); GLTSCR2在非小细胞肺癌A549和H1299表达量最低(P<0.05);miR-1254靶向GLTSCR2的3'UTR的193-200区域;miR-1254过表达时,GLTSCR2的表达量下降(P<0.05),细胞凋亡相关蛋白BAK的表达量明显下降(P<0.05),而BCL-2的表达量明显上升(P<0.05),并且CASPASE9/CLEAVED-CAS9的比例明显上升(P<0.05),细胞增殖活力明显上升(P<0.05);敲低miR-1254后,GLTSCR2的表达量明显上升(P<0.05),细胞凋亡相关蛋白BAK的表达量明显上升(P<0.05),而BCL-2的表达量明显下降(P <0. 05),并且CASPASE9/CLEAVED-CAS9的比例明显下降(P <0.05),细胞增殖活力明显下降(P<0.05)。结论 miR-1254能通过降低GLTSCR2的表达来降低非小细胞肺癌细胞凋亡以及提高非小细胞肺癌A549的增殖和活力。     

miR-210 调控Mex3B 蛋白对肺癌细胞侵袭和增殖的影响

目的:探讨miR-210 和Mex3B 蛋白对肺癌细胞侵袭和增殖能力的影响。方法:运用qPCR 检测miR-210 在正常肺组织和癌旁组织中的表达情况;运用qPCR 检测Mex3B 在肺癌组织、癌旁组织中的表达;qPCR 检测miR-210 在不同肺癌细胞株中(A549、H1299、H1650 和H358)的表达水平;双荧光素酶报告基因系统检测miR-210 对Mex3B 转录的影响;细胞活性实验检测miR-210 的表达对肺癌细胞活性的影响;平板克隆实验检测miR-210 的表达对肺癌细胞A549 的增殖能力的影响;Transwell 侵袭实验检测miR-210 的表达对肺癌细胞株A549 的侵袭能力的影响。结果:和癌旁组织比较,miR-210 在肺癌组织中表达明显增高,和癌旁组织比较,Mex3B 在肺癌中表达较低,双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-210 可以直接调控Mex3B 的转录活性,抑制miR-210 的表达活性后,A549 肺癌细胞的细胞活性受到一定的抑制;抑制miR-210 后,肺癌细胞株A549 的侵袭和增殖能力明显降低。结论:miR-210 可以靶向调控肺癌细胞的侵袭和增殖能力。     

c-Met基因调控肺腺癌A549细胞放射敏感性

目的探讨上调和下调肺腺癌细胞株A549细胞中c-Met基因表达水平后,该细胞鼠移植瘤放射敏感性的变化情况。方法利用电穿孔法将c-Met siRNA和重组表达载体pc DNA3.1-c-Met分别转染入肺癌A549细胞后采用G418筛选得到稳定转染的肺癌细胞系。转染48 h后用RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞中c-Met基因和蛋白表达水平,采用CCK-8法检测细胞增殖活性;克隆形成实验研究分别上调和下调c-Met基因表达水平对肺腺癌细胞株A549放射敏感性的影响;TUNEL法检测细胞凋亡影响,移植瘤实验检测基因沉默和激进c-Met基因表达水平并联合放射射线照射对肺腺癌细胞生长的抑制作用。结果 c-Met下调组中肺癌A549细胞内c-Met基因和蛋白表达水平明显降低,而上调组中的表达水平则得到了明显升高。c-Met下调组肺癌A549细胞放射敏感性升高,c-Met上调组肺癌A549细胞放射敏感性降低(P0.05)。下调组中肺癌A549细胞的增殖活性受到抑制而细胞凋亡率显著增加(P0.05),上调组肺癌细胞的增殖能力明显增强而细胞凋亡率明显降低(P0.05);下调组裸鼠移植瘤的平均体积明显小于对照组,而上调组裸鼠移植瘤的瘤体平均体积则显著大于对照组(P0.05)。结论基因沉默c-Met的基因表达水平能显著降低肺癌细胞的增殖活性,抑制人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长并明显提高移植瘤瘤体的放射敏感性。     

miR-98-5p通过降低STAT3水平促进A549细胞凋亡并抑制其侵袭和迁移

目的研究微小RNA-98-5p (miR-98-5p)对肺癌A549细胞生长的影响及机制。方法实时定量PCR检测正常支气管上皮细胞HBE细胞和非小细胞肺癌来源的细胞(A549细胞、H1299细胞和H460细胞)中miR-98-5p的水平,后续选择miR-98-5p水平最低的A549细胞进行实验。CCK-8法检测miR-98-5p模拟物(miR-98-5p mimic)及miR-98-5p抑制物(anti-miR-98-5p)对A549细胞增殖的影响,流式细胞术检测miR-98-5p对A549细胞的凋亡的影响,商品化试剂盒检测胱天蛋白酶3(caspase-3)和caspase-9的活性,TranswellTM小室实验检测miR-98-5p对A549细胞侵袭和迁移的影响,实时定量PCR检测miR-98-5p对A549细胞信号转导子与转录激活子3(STAT3) mRNA水平的影响,Western blot法检测miR-98-5p对A549细胞STAT3蛋白水平的影响。结果与HBE细胞相比,A549细胞、H1299细胞和H460细胞中miR-98-5p的表达水平降低。上调A549细胞miR-98-5p水平后,能够显著抑制A549细胞的增殖、促进细胞凋亡,并抑制细胞侵袭和迁移,同时,miR-98-5p可以显著降低STAT3的表达。结论 miR-98-5p通过降低STAT3水平促进A549细胞凋亡,并抑制其增殖、侵袭和迁移。     

hsa＿circ＿001988抑制A549细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡影响NSCLC发生发展

目的：本研究探究hsa＿circ＿001988在肺癌发生发展中的作用以及机制。方法：利用circbase生信系统，选取hsa＿circ＿001988作为研究对象；原位杂交FISH和qRT-PCR检测hsa＿circ＿001988在肺癌组织和细胞系中的表达；Transwell、细胞划痕、CCK-8及TUNEL细胞凋亡检测hsa＿circ＿001988过表达和基因敲减对A549、NCI-H460细胞侵袭、迁移、增殖及凋亡的影响；检测皮下瘤体体积和重量；PCNA免疫组化实验检测hsa＿circ＿001988过表达和基因敲减对体内细胞增殖的调控。结果：hsa＿circ＿001988在肺癌组织和各细胞系中呈低表达；hsa＿circ＿001988抑制A549细胞侵袭、迁移、增殖及促进凋亡，circ＿001988敲减后则促进NCI-H460细胞侵袭、迁移、增殖及抑制凋亡；hsa＿circ＿001988抑制皮下瘤体生长及抑制体内细胞增殖，hsa＿circ＿001988敲减后则促进肿瘤生长及细胞增殖。结论：hsa＿circ＿001988可能通过调控肺癌细胞生物学功能从而参与NSCLC发生发展过程。     

沉默GRP94表达对肺癌A549细胞增殖能力的影响

目的:探讨沉默GRP94基因对肺癌A549细胞增殖能力的影响及可能机制。方法:分别采用qRT-PCR法、Western blot检测不同肺癌细胞系和肺支气管上皮细胞中GRP94的表达;设计、合成靶向GRP94基因siRNA,通过脂质体转染至人肺腺癌A549细胞中,采用qRT-PCR、Western blot分别检测转染siRNA-GRP94后细胞内GRP94、c-myc及细胞周期蛋白cyclin D1 mRNA及蛋白水平表达的影响;采用CCK-8实验,平板集落实验检测沉默GRP94对细胞的增殖能力的影响。结果:qRT-PCR和Western blot结果显示GRP94在肺癌细胞中的表达较肺支气管上皮细胞显著高表达(P0.05,P0.01),siRNAGRP94组中GRP94、c-myc及cyclin D1表达明显下调(P0.05);A549细胞增殖能力受到明显抑制(P0.01,P0.05)。结论:GRP94在肺癌细胞中高表达,沉默GRP94可明显抑制肺癌A549细胞的增殖能力,其可能通过调控c-myc、cyclin D1表达参与其中。     

虾青素通过阻断JAK1/STAT3通路抑制肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡

目的探讨虾青素对A549肺癌细胞增殖、凋亡的影响及可能的作用机制。方法实验分为对照组、DMSO溶剂对照组、(20、40、60、80、100)μmol/L虾青素组;CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bax、信号转导子和转录激活子3(STAT3)和Janus激酶1(JAK1)蛋白水平。结果虾青素能够抑制A549细胞增殖,使A549细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡增加;虾青素上调Bax蛋白水平,下调Bcl-2、STAT3、JAK1蛋白水平。结论虾青素通过抑制JAK1-STAT3信号通路抑制肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡。     

ATG5敲低后抑制人肺癌细胞H1299自噬并增强南蛇藤素诱导的细胞凋亡

目的构建自噬相关基因5(autophagy-related gene 5,ATG5)低表达肺癌细胞株,观察肺癌细胞自噬活性,检测南蛇藤素对肺癌细胞凋亡的影响。方法用ATG5 shRNA技术构建ATG5敲低的人肺癌H1299细胞株作为ATG5敲低组,未敲低ATG5的H1299细胞作为对照组;荧光定量PCR和Western blot检测肺癌细胞中ATG5的表达和自噬标志物微管相关轻链蛋白3(microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3,LC3)及死骨片蛋白1的(sequestosome 1,P62)表达,并转染红色荧光标记的LC3质粒观察LC3斑点聚集情况;经南蛇藤素刺激后,以流式细胞术检测细胞凋亡,最后使用Western blot检测cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax等蛋白的表达。结果慢病毒感染组ATG5较对照组mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05);ATG5敲低后LC3-Ⅱ水平下降,P62水平上升,并且转染后RFP-LC3斑点聚集减少(P0.05)。相比对照组,南蛇藤素明显促进ATG5敲低细胞凋亡(P0.01);ATG5敲低组中促凋亡分子Bax、cleaved caspase-3表达比对照组明显增加(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少(P0.05)。结论 ATG5敲低抑制肺癌细胞自噬后,南蛇藤素能够明显增强人肺癌细胞的凋亡,提示抑制肺癌细胞自噬可能为针对性处理肺癌细胞耐药提供新的思路。     

科罗索酸通过抑制Hippo-YAP信号转导通路促进非小细胞肺癌细胞的凋亡

目的：研究科罗索酸对肺癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法：MTT、Caspase3/7活性检测、Western blot等方法检测不同浓度的科罗索酸是否影响肺癌细胞株A549的增殖和凋亡;Western blot、免疫荧光实验等方法检测科罗索酸对肺癌细胞A549 Hippo通路中YAP蛋白进行定量和定位的检测。结果：MTT结果显示科罗索酸能够抑制肺癌细胞株A549的增殖,半抑制浓度为40 μmol/L;Caspase活性检测结果显示科罗索酸能够促进肺癌细胞株A549的凋亡,半致死浓度为40 μmol/L;Western blot、免疫荧光试验结果显示科罗索酸能明显抑制肺癌细胞株A549中YAP蛋白的表达。结论：科罗索酸可能通过调控Hippo-YAP信号通路抑制肺癌细胞的增殖并促进其凋亡。     

熊果酸通过调节miRNA-133a抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭

目的:探讨熊果酸(ursolic acid,UA)是否通过调节miRNA-133a影响肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力。方法:MTT法检测细胞活力;real-time PCR法检测UA干预和转染miRNA-133a mimics及inhibitor后细胞中miRNA-133a的表达;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果:UA可显著抑制肺癌A549细胞的活力(P0.05),随着给药剂量的增加,UA对肺癌细胞的生长抑制率显著上升,并呈一定的剂量依赖关系,UA作用于肺癌A549细胞24 h后的IC50为31.04μmol/L。在不同浓度的UA作用下,肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P0.01)。Real-time PCR实验结果显示,在10、20μmol/L UA作用24 h后,A549细胞内miRNA-133a的表达显著高于溶剂对照组(P0.01);细胞瞬时转染miRNA-133a mimics后可上调A549细胞中miRNA-133a的表达,而转染miRNA-133a inhibitor后下调A549细胞中miRNA-133a的表达(P0.01)。肺癌A549细胞转染miRNA-133a mimics后,细胞活力、迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P0.01);相反,转染miRNA-133a inhibitor后,细胞活力、迁移和侵袭能力明显增强(P0.01)。结论:UA能抑制肺癌A549细胞活力、迁移和侵袭,其作用机制可能是通过上调miRNA-133a介导来实现的。     

miR-708-5p通过靶向URGCP抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、转移的研究

目的 探讨miR-708-5p对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与上调基因-4(upregulated gene-4/upregulator of cell proliferation,URG4/URGCP)的靶向关系.方法 选取非小细胞肺癌细胞株A549,正常肺成纤维细胞HLF-1为研究对象,根据A549细胞转染物质的不同,分为Control组(未进行任何处理),NC组(转染随机序列RNA Oligo),miR-708-5p组(转染miR-708-5p mimics).MTT检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell小室实验检测侵袭能力,划痕实验检测迁移能力,Western blot检测URGCP表达水平;实时荧光定量PCR检测miR-708-5p、URGCP基因mRNA表达水平;荧光素酶实验验证miR-708-5p与URGCP的靶向关系.结果 与HLF-1细胞株相比,肺癌细胞株A549细胞miR-708-5p表达水平降低,URGCP-mRNA表达升高(P<0.05),同时,URGCP蛋白水平升高.转染72h后,与Control、NC组比较,miR-708-5p组细胞URGCP基因mRNA明显降低,URGCP蛋白表达量明显降低(P均<0.01).miR-708-5p组细胞增殖、迁移和侵袭能力明显低于Control、NC组(P<0.05).与WT-URGCP组相比,miR-708-5p+WT-URGCP组细胞荧光素酶活性明显降低(P<0.01).结论 miR-708-5p在非小细胞肺癌A549细胞中低表达,过表达miR-708-5p可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,机制可能与负性调控URGCP有关.     

桔皮素对人非小细胞肺癌细胞生长及侵袭的影响

目的:探讨桔皮素(TGN)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生长和侵袭的影响及其分子机制。方法:体外培养非小细胞肺癌A549细胞,分别用不同浓度的TGN处理,MTT比色法检测细胞活性,Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞侵袭,RT-PCR分析MMP-2和MMP-9的mRNA表达水平,Western blotting检测Ki67、Cyt C、caspase-3、cleaved caspase-3、MMP-2、MMP-9、Akt、p-Akt以及p-PI3K表达水平。结果:桔皮素剂量依赖性地抑制A549细胞增殖(P0.05),同时伴随有增殖标记分子Ki67表达水平的下调。分析发现,桔皮素诱导细胞中Cyt C、caspase-3和cleaved caspase-3的表达上调(P0.01),加速A549细胞的凋亡。此外,桔皮素作用后,A549细胞中侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9的表达量下降,且侵袭数目随桔皮素浓度增加而减少。进一步研究表明,桔皮素作用后A549细胞中p-Akt和p-PI3K表达水平降低(P0.05),阻断PI3K/Akt信号通路后,不同浓度TGN对细胞活性影响没有变化。结论:桔皮素能抑制A549细胞生长及侵袭,促进细胞凋亡,可能通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活起作用。因此,本研究将为非小细胞肺癌的防治提供新的研究方向。     

BAG2基因影响A549细胞增殖的机制研究及其临床意义

目的:研究Bcl-2相关抗凋亡基因2(Bcl-2-associated athanogene,BAG2)对人肺腺癌A549细胞增殖能力的影响及作用机制,并探讨其临床意义。方法:以Western blot法分析BAG2在A549细胞与正常上皮细胞系HBE中的蛋白表达水平;在体外以RNA干扰(RNAi)技术敲低A549细胞中BAG2基因的表达,并采用CFSE染色结合流式细胞术、WST-1法和Western blot法对A549细胞增殖和细胞周期相关蛋白进行评价。此外,我们利用q PCR检测BAG2在肺癌组织c DNA芯片中的表达情况,同时分析了GEO数据库中BAG2表达与肺癌患者预后之间的关系。结果:与HBE细胞比较,A549细胞中BAG2的表达显著升高(P0.05);干扰BAG2基因后,A549细胞在48 h和72 h时点时增殖均被抑制;在48 h时点,干扰BAG2可导致细胞周期蛋白cyclin B1与cyclin E1表达显著下调(P0.05)。在人肺癌组织中,BAG2基因表达显著高于癌旁组织,并与肺癌患者生存预后呈显著负相关(P0.01)。结论:BAG2基因可能通过上调细胞周期蛋白cyclin B1与cyclin E1影响A549细胞的增殖,其表达量与肺癌患者预后呈显著负相关。     

FRMD8抑制肺癌细胞的增殖与迁移

目的 探讨FERM domain-containing protein 8（FRMD8）在肺癌发生发展中的作用。 方法 用Western blotting检测肺癌组织及相应癌旁正常组织中FRMD8的表达情况;敲低FRMD8后平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,MTT法检测细胞增殖情况;过表达FRMD8后流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测过表达FRMD8后某些细凋亡相关蛋白表达变化;过表达及敲低FRMD8后Transwell细胞迁移实验检测对A549细胞迁移能力的影响。 结果 1. 与正常组织相比,肺癌组织中FRMD8表达下调（P＜0.05）; 2. FRMD8敲低,细胞克隆形成能力及增殖速度提高; 3. FRMD8可诱导细胞凋亡,并影响细胞凋亡相关基因的表达或活化： FRMD8过表达可下调Caspase-3、8和bax表达,而p53、激活型Caspase-3、8以及bcl-2 的表达上调; 4. FRMD8过表达抑制细胞迁移能力（P＜0.01）,而敲低FRMD8则促进细胞迁移（P＜0.001）。 结论 FRMD8可抑制肺癌的发生发展,并具有肿瘤抑制子的功能。     

microRNA干扰Id3基因表达对A549细胞增殖和凋亡功能的影响

目的:研究微小RNA(miRNA)干扰细胞分化抑制因子3(Id3)基因表达对人肺腺癌细胞株A549细胞体外增殖和凋亡作用的影响。方法:构建含靶向Id3 mRNA的miRNA所对应寡核苷酸的重组干扰载体pcDNATM6.2-GW/EmGF-PmiRId3(pcDNA/miRId3),通过脂质体转染技术将miRNA干扰质粒pcDNA/miRId3和含Id3基因的重组表达载体pEGFP/Id3共转染A549细胞。荧光显微镜观察EGFP表达情况;流式细胞术(FCM)分析转染24 h后A549细胞的EGFP表达效率;半定量RT-PCR和Western blot技术检测转染后A549细胞内Id3 mRNA及蛋白的表达;MTT法和Annexin V-FITC/7-AAD双染法结合FCM检测靶向Id3基因的miRNA转染A549细胞后对增殖和凋亡的影响。结果:RT-PCR和Western blot结果表明,将pEGFP/Id3和pcDNA/miRId3共转染A549细胞24 h后,A549细胞中外源性Id3 mRNA和Id3蛋白质的表达量均明显受到抑制。MTT和Annexin V/7-AAD双染法结果表明,pEGFP/Id3转染A549细胞24 h后,对A549细胞增殖功能有明显抑制作用,细胞早期凋亡率明显增加,与pEGFP对照组相比均呈统计学差异(P0.01),但pEGFP/Id3与pcD-NA/miRId3共转染A549细胞后,细胞增殖率和凋亡率均未发生明显变化。结论:外源性Id3基因在A549细胞中的表达能够抑制细胞增殖并诱导凋亡,同时导入靶向Id3 mRNA的miRNA干扰质粒pcDNA/miRId3,可逆转外源性Id3表达对细胞增殖的抑制和致凋亡作用,重组MiRNA表达载体的构建及应用为研究Id3致A549细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用机制奠定了实验基础。     

白细胞介素-12 通过抑制STAT3 途径调控非小细胞肺癌细胞生物学行为及免疫逃逸因子分泌的研究北大核心CSCD

目的探索白细胞介素-12(IL-12)对非小细胞肺癌细胞生物学行为及免疫逃逸因子分泌的影响。方法收集126例非小细胞肺癌患者癌组织及癌旁正常组织,通过实时定量PCR检测IL-12、STAT3 mRNA的表达水平。构建人肺腺癌A549细胞模型,分为空白对照组、腺病毒对照组、IL-12腺病毒组、质粒对照组、STAT3质粒组、IL-12与STAT3共转染组。比较各组细胞增殖及凋亡情况,采用ELISA法检测细胞培养液中IL-2、INF-γ、TNF-α的分泌量,采用Western blot法检测IL-12、STAT3、pSTAT3蛋白表达水平。结果肺癌组织较癌旁组织IL-12 mRNA表达量降低、STAT3 mRNA表达量增高。IL-12腺病毒组较各对照组细胞增殖及活力降低、凋亡增加。STAT3质粒组细胞增殖及凋亡结果则与之相反。IL-12、STAT3共转染组细胞增殖、活力以及凋亡情况介于IL-12腺病毒组与STAT3质粒组之间。此外,IL-12腺病毒组细胞培养液中IL-12、TNF-α、IFN-γ含量明显高于STAT3质粒组,而STAT3质粒组STAT3、p-STAT3蛋白表达水平显著高于在IL-12腺病毒组。结论IL-12对非小细胞肺癌细胞具有抑制增殖、降低活力及诱导凋亡的能力,其作用机制可能通过抑制STAT3途径以及免疫逃逸而实现。