miR-24通过SIRT1调控晶状体上皮细胞凋亡的研究

目的探讨氧化应激情况下miR-24对晶状体细胞凋亡的调控。方法采用实时定量PCR检测40例白内障患者晶状体上皮组织及临近晶状体上皮组织中miR-24的表达水平,并在氧化应激情况下检测miR-24的表达变化。通过miR-24 mimics、miR-24 inhibitor转染晶状体上皮细胞SAR01/04以过表达和敲低miR-24,利用pcDNA3.1-SIRT1转染SAR01/04以过表达SIRT1,FITC/PI流式细胞术检测晶状体细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况,CCK-8检测细胞活性状态。结果miR-24在白内障晶状体上皮组织中的表达高于临近组织,氧化应激情况下促进miR-24表达增高,差异有统计学意义(P<0.05);氧化应激情况下,敲低miR-24抑制晶状体上皮细胞的凋亡;过表达或敲低miR-24可以分别降低或促进SIRT1的表达;过表达miR-24和过表达SIRT1后抑制了晶状体细胞的凋亡。结论氧化应激促进晶状体上皮细胞miR-24表达上调,miR-24通过下调SIRT1促进晶状体上皮细胞的凋亡,为白内障的靶向治疗提供一定的策略。     

榄香烯诱导晶状体上皮细胞凋亡及其机制

目的 :探讨天然药物单体榄香烯 (Elemene,Ele)诱导晶状体上皮细胞 (lensepithelialcell,LEC)凋亡及其机制。方法 :通过透射电子显微镜观察Ele对LEC超微结构的影响 ;采用流式细胞术 (flowcytometry ,FCM)研究Ele对LEC的DNA含量及线粒体跨膜电位 (mitochondrialtransmembranepotential,ΔΨm)的影响。结果 :透射电镜下可观察到Ele组LEC呈现核染色质凝集、固缩、边集、核碎裂等典型的细胞凋亡形态学改变。Ele组LEC细胞核的DNA含量随药物作用时间的延长而下降 ,与空白对照组有显著差异 (P <0 0 1) ;细胞质线粒体ΔΨm在药物作用早…     

半乳糖诱导大鼠晶状体上皮细胞凋亡与白内障形成的关系

目的研究半乳糖对大鼠晶状体上皮细胞凋亡的影响,并探讨细胞凋亡与白内障形成的关系。方法将半乳糖单侧眼球后注射W istar大鼠,裂隙灯下观察晶状体混浊情况,运用流式细胞仪检测各组晶状体上皮细胞C-MYC水平,用末端标记(Tunel)法检测细胞凋亡。结果半乳糖诱导第7天半数以上晶状体混浊度为Ⅱ期,至14 d时87%晶状体混浊度为Ⅳ~Ⅴ期,在第24天时100%晶状体混浊度Ⅳ~Ⅴ期;乳糖诱导第7天细胞凋亡率为5.6%~8.4%,从第7天开始凋亡细胞数逐渐增多,第14天时细胞凋亡率达30.2%~41.8%,第24天时镜下最多可观察到60%的凋亡细胞;晶状体上皮细胞C-MYC水平在半乳糖诱导第7天和14天均高于对照组(P<0.05),24 d接近正常水平。结论半乳糖诱导大鼠白内障形成过程中出现晶状体上皮细胞的凋亡,其机制可能与半乳糖诱导晶状体上皮细胞C-MYC高表达有关。     

miR-29b通过调控Bax基因抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡

目的探讨miR-29b对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的A549细胞分为对照组、LPS组(给予10 mg/L的LPS处理)、LPS+miR-NC组(转染miR-29b mimics阴性对照后给予LPS处理)、LPS+miR-29b组(转染miR-29b mimics后给予LPS处理);用RT-qPCR检测细胞中miR-29b的表达水平;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验检测Bax和miR-29b的靶向关系。结果与对照组相比,LPS组、LPS+miR-NC组和LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显降低,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显升高,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实Bax是miR-29b的潜在靶基因。结论miR-29b可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控Bax表达有关。     

4种归肝经明目中药对晶状体上皮细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的调控

目的 :探讨 4种归肝经明目中药车前子、青葙子、菊花和熟地对实验性氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞 (lensepithelialcell,LEC)凋亡相关基因Bcl- 2和Bax的调控。方法 :将SD大鼠双眼随机分成 7组 :空白对照组、过氧化氢 (H2 O2 )组、吡诺克辛(PS)组和 4种归肝经明目中药车前子、青葙子、菊花和熟地组。无菌操作摘除眼球并在手术显微镜下分离晶状体 ,使晶状体孵育在 30 0 μmol·L-1H2 O2 培养液中复制LEC凋亡模型 ,同时采用 4种归肝经明目中药干预 ,置二氧化碳培养箱共同孵育 2 4h。取晶状体前囊膜采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl- 2…     

低表达miR-21对苦参碱诱导的肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的:探讨miR-21低表达能否增强苦参碱(matrine,MAT)对肝癌细胞的促凋亡作用。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测不同浓度MAT作用HepG2细胞后miR-21的表达情况。流式细胞术检测miR-21低表达对MAT诱导的细胞凋亡的影响;RT-qPCR和Western blot检测miR-21低表达对MAT诱导的细胞凋亡中Bc1-2和Bax mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:miR-21表达量随MAT作用浓度的增加而增加;miR-21低表达可促进MAT诱导的细胞凋亡,并促进Bax mRNA和蛋白的表达(P0.05),而抑制Bcl-2 mRNA和蛋白的表达(P0.05)。结论:miR-21低表达可通过抑制Bcl-2和促进Bax的表达来增强MAT诱导的HepG2细胞凋亡。     

人胎儿晶状体上皮细胞增殖、凋亡及相关因子的研究

本实验应用TUNEL和免疫组化法，选用人正常胎儿晶状体，分为9，10，12，16，20，24，28，32周，每组6例，观察了晶状体发育过程中，晶状体上皮细胞凋亡率以及PCNA、EGF、TGF-β1的变化，以期为基础医学和临床医学对晶状体研究提供理论依据和形态学资料。PCNA、EGF、TGF-β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达，     

ADV-miR-184体外转染对人晶状体上皮细胞移行的影响

目的 探讨携带miR-184的重组腺病毒(ADV-miR-184)体外转染对人晶状体上皮细胞移行的影响.方法 ADV-miR-184在293细胞中扩增、纯化并滴定病毒滴度;ADV-miR-184体外感染人晶状体上皮细胞(HLE-B3),采用细胞划痕法测定ADV-miR-184对HLE-B3移行距离的影响.结果 测定ADV-miR-184的病毒滴度为1.6×109 puf/mL;分别将ADV-miR-184以MO110、MO150、MOI100、MOI200、MOI500转染HLE-B3 72 h后,细胞移行距离随着ADV-miR-184的浓度增加而减少,MOI100组与MOI50组、MOI10组相比有明显差异(P＜0.05).但与MOI200、MOI500实验组相比变化不明显.与对照组比较,MOI100感染细胞的移行距离在转染后24 h、48 h、72 h、96 h明显缩短(P＜0.05).结论 ADV-miR-184可成功转染人晶体上皮细胞,并可抑制细胞的移行,提示miR可能参与后发性白内障的形成过程.     

ADV-miR-184体外转染对人晶状体上皮细胞移行的影响

Objective Investigate the effects of the recombinant adenoviral vector containing microRNA-184 (ADV-miR-184) on the migration of human lens epithelial cells in vitro.Methods ADV-miR-184 WaS amplified,purified,and titmted in 293 cell line.Human lens epithelial cells (HLE-B3) were then transfected with ADV-miR-184.The) effect of miR-184 on the migration of these transfected cells was evaluated by the scratch assay.Results The original titer of ADV-miR-184 was 1.6×109 puf/mL.HLE-B3 cells were transfected with ADV-miR-184 at different multiplicity of infection (MOI),including MOI10,MOI50,MOI100,MOI200 and MOI500,for a period of 72 h.The migrating distances of HLE-B3 cells were inbitied by MOI100 significantly higher titers of ADV-miR-184 transfection.Transfection with inhibited the migration of HLE-B3 cells compared with groups of control,MOI10,or MOI50 (P＜0.05).In contrast,no differences were showed between MOI100 and MOI200 or MOI500 groups.The migrating distances of HLE-B3 ceils transfected with MOI100 were also significantly inhibited at 24h,48h and 96h tremments compared with controls (P＜0.05).Conclusion ADV-miR-184 could be successfully used to tnmsfect human lens epithelial cells.The miR-184 inhibited the migration of human lens epithelial cells,which suggests that the miR virus may play a role in the development of the posterior capsular opacification.     

异补骨脂素对人晶状体上皮细胞雌激素受体表达的上调作用

目的: 研究人晶状体上皮细胞(HLECs)雌激素受体(ER)表达的情况及中药植物雌激素异补骨脂素(ISR)对ER表达的影响,为中药植物雌激素防治老年性白内障提供实验依据。方法: 本研究将ISR与HLEC共同孵育,以雌二醇(E₂)作为阳性对照,再用H₂O₂对HLECs造成氧化损伤后,采用流式细胞术检测不同浓度的ISR对ER蛋白表达的影响。结果: 正常HLECs存在ERα、β的表达;H₂O₂组HLECs ERα、β表达明显下降,与空白组比较差异显著(P<0.01);E₂和ISR高、中、低浓度组HLECs的ERα、β表达明显升高,与H₂O₂组比较差异显著(P<0.01);且随ISR浓度的增高ERα、β表达逐渐升高,呈明显的浓度依赖关系。 结论: E₂、ISR能上调经H₂O₂处理的HLECs的ERα、ERβ表达,并呈明显的浓度依赖关系,其抗氧化损伤作用,可能是通过上调ERα、ERβ表达实现的。     

肿瘤坏死因子对晶状体上皮细胞的粘附移行作用

目的：探讨肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ α,ＴＮＦ－０６３３）对晶状体上皮细胞在细胞外基质上的粘附移行作用。以及在此过程中整合素分子的表达情况。方法：借助细胞粘附实验和移行实验研究ＴＮＦ－α对体外培养的牛晶状体上皮细胞在细胞外基质上的粘附和移行,以及整合素抗体封闭后对细胞的影响。ＴＮＦ－α对细胞表面整合素的表达调节经免疫荧光染色后由流式细胞仪检测。结果：ＴＮＦ－α可以明显促进晶状体上皮细胞在Ⅳ型胶原、层粘蛋白、纤维连接蛋白上的粘附移行。抗体封闭实验表明整合素β１、α２、α５亚基参与细胞的粘附,在细胞移行中发挥主要作用的是α亚基而非β亚基,流式细胞仪检测表明ＴＮＦ－α可上调晶状体上皮细胞中整合素的表达。结论：胶原、层粘蛋白、纤维连接蛋白是晶状体囊的主要成分。肿瘤坏死因子α促进晶状体上     

阿魏酸钠对大鼠晶状体上皮细胞凋亡相关基因BCl-2和bax的调控

目的:本研究旨在探讨阿魏酸钠 (SF)对实验性氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞 (LEC)凋亡相关基因BCl-2和bax的调控。方法:将SD大鼠双眼随机分成空白对照组、过氧化氢 (H₂O₂)组、吡诺克辛 (PS)组和SF组。无菌操作摘除眼球并在手术显微镜下分离晶状体,使晶状体孵育在 300μmol·L^-1H₂O₂ 培养液中复制LEC凋亡模型,同时加入终浓度为 5mmol·L^-1的SF,置二氧化碳培养箱共同孵育 2 4h。取晶状体前囊膜采用免疫组化法检测凋亡相关基因BCl-2和bax的蛋白表达并进行比较。结果:(1)正常SD大鼠LEC中BCl-2和Bax均有表达,BCl-2表达较Bax表达强。 (2)H₂O₂ 组BCl-2表达显著下调,Bax表达显著上调 (Ridit检验,P <0.01);BCl-2 /Bax比率下降。(3)与H₂O₂ 组比较,SF可明显上调BCl-2表达,下调Bax表达 (P <0.01),BCl-2 /Bax比率上升。 (4)PS与SF的调节作用相似,但SF的作用强于PS(P <0.05)。结论:本研究结果表明,SF调控凋亡相关基因BCl-2和bax的表达可能是SF抑制LEC凋亡的分子机制.     

circITCH靶向miR-106b-5p对高糖诱导的肾小管上皮细胞IL-6、TNF-α表达和细胞凋亡的影响

目的探讨cirITCH对高糖(HG)诱导的人肾小管上皮细胞炎症因子IL-6、TNF-α表达和凋亡的影响和可能机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,用25 mmol/L葡萄糖诱导24 h,RT-qPCR法检测细胞中cirITCH和miR-106b-5p表达。分别转染cirITCH过表达载体、miR-106b-5p抑制剂或共转染cirITCH过表达载体与miR-106b-5p模拟物至HK-2细胞后,用25 mmol/L葡萄糖诱导24 h,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中IL-6和TNF-α水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证cirITCH和miR-106b-5p调控关系。结果 HK-2细胞经高糖诱导后,细胞中circITCH表达降低,而miR-106b-5p表达升高。上调cirITCH或下调miR-106b-5p可减少高糖诱导的HK-2细胞分泌IL-6和TNF-α,并降低细胞凋亡率和Bax蛋白表达,而增加Bcl-2蛋白表达。circITCH靶向负调控miR-106b-5p表达,上调miR-106b-5p...     

C-反应蛋白诱导人肾小管上皮细胞凋亡

目的:探讨与微炎症状态相应的C-反应蛋白(CRP)水平是否诱导肾小管上皮细胞凋亡。方法:以微炎症状态相应的CRP浓度刺激HK-2细胞。采用AnnexinⅤ-FITC、PI染色和流式细胞术检测凋亡细胞的百分率。采用Hoechst 33258染色观察肾小管上皮细胞凋亡的形态学改变。比色法检测细胞caspase-3活性。Real-time PCR检测促凋亡基因bax、抗凋亡基因bcl-2的mRNA表达。结果:CRP呈剂量和时间依赖性地诱导HK-2细胞凋亡,细胞凋亡在CRP浓度为10 mg/L时达高峰,在20 mg/L时则以晚期凋亡和坏死为主。Hoechst 33258细胞核染色显示CRP作用的HK-2细胞呈现染色质浓缩、碎裂或染色质边集等细胞凋亡的特点。CRP增高细胞caspase-3的酶活性、上调促凋亡基因bax的表达和下调抗凋亡基因bcl-2的表达。结论:CRP轻度增高可诱导肾小管上皮细胞凋亡。     

miR-377调控THEM4对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT的作用

目的:探讨微小RNA-377(miR-377)对硫酯酶超家族成员4(THEM4)的靶向作用及对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞上皮间充质转化(EMT)的影响.方法:将人近端肾小管上皮细胞HK-2分为正常葡萄糖组(NG组:5mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG 组:30 mmol/L葡萄糖)、HG+miR-NC 组(HG+转...     

miR-21在周围神经损伤时调控雪旺细胞凋亡

目的:探讨周围神经损伤时,微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)与雪旺细胞(SC)凋亡的关系及相关分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测动物模型中miR-21以及人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10,PTEN)的表达情况;通过将miR-21类似物(miR-21-mimic)、miR-21抑制物(miR-21-inhibitor)和阴性对照miRNA(negative control miRNA,NC-miRNA)转染入RSC96细胞中,构建出过表达miR-21的雪旺细胞株(MI-SC)、抑制miR-21表达的雪旺细胞株(IN-SC)及表达对照miRNA的雪旺细胞株(NC-SC);采用流式细胞仪检测3组细胞的凋亡情况;real-time PCR检测3组细胞中miR-21以及PTEN的表达情况;Western blot检测3组细胞中PTEN及凋亡相关蛋白激活型caspase-3(cleaved caspase-3)的表达情况。结果:神经损伤组miR-21的表达量与对照组相比明显升高,神经损伤组PTEN mRNA的表达水平与对照组相比明显降低;与NC-SC相比,上调miR-21组细胞的凋亡比例减少,PTEN mRNA及蛋白的表达水平降低,cleaved caspase-3的表达水平降低,下调miR-21组细胞的凋亡比例增加,PTEN mRNA及蛋白的表达水平升高,cleaved caspase-3的表达水平升高(P0.05)。结论:miR-21可能通过下调PTEN的表达抑制雪旺细胞的凋亡,从而可能在周围神经的损伤修复中发挥作用。     

miR-21在白藜芦醇诱导A549肺癌细胞株凋亡中的作用

目的探讨白藜芦醇对A549肺癌细胞株凋亡的影响,并揭示miR-21参与其中的机制。方法以高糖DMEM培养基培养A549肺癌细胞株,给予100μmol/L的白藜芦醇,过表达(或不过表达)miR-21培养3 d。Real-time PCR检测miR-21表达;MTT法检测细胞活力;Hoechst染色观察细胞凋亡;Western blot检测细胞凋亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)的表达。结果白藜芦醇能抑制A549肺癌细胞株miR-21的合成,上调PDCD4的表达,抑制细胞生长,降低细胞活力,诱导A549细胞凋亡(P0.05)。过表达miR-21能显著抑制白藜芦醇的抗肿瘤作用,PDCD4表达变化不明显,细胞生长状态、活力以及凋亡等均无明显变化(P0.05)。结论白藜芦醇能通过抑制miR-21合成,降低PDCD4表达,诱导A549肺癌细胞株凋亡。     

miR-195过表达促进人神经胶质瘤细胞T98G凋亡

目的检测过表达miR-195对人神经胶质瘤细胞T98G增殖的影响,探讨miRNA-195在胶质瘤发病过程中可能机制。方法用合成的miR-195模拟物,转染miR-195表达水平较低的人神经胶质瘤细胞T98G,用MTT、流式细胞术和TUNEL法分别检测T98G细胞增殖、细胞周期和凋亡,用Western blot检测细胞BCL-2的表达。结果 miR-195模拟物转染T98G后,成熟miR-195明显升高(P<0.05)。在T98G中过表达miR-195后,可明显抑制细胞增殖,过表达miR-195能促进T98G细胞的凋亡和下调细胞BCL-2的表达。结论过表达miR-195能显著促进T98G细胞凋亡,提示miR-195可能对胶质瘤的治疗起作用。     

BDNF-AS/miR-145-5p轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的探讨脑源性神经营养因子反义RNA(brain-derived neurotrophic factor-antisense, BDNF-AS)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响和可能机制。方法体外培养肾小管上皮细胞HK-2, 分别转染BDNF-AS小干扰RNA、miR-145-5p模拟物或共转染BDNF-AS小干扰RNA和miR-145-5p抑制剂, 之后采用30 mmol/L葡萄糖干预转染后的细胞24 h, 用RT-qPCR法检测细胞中BDNF-AS和miR-145-5p的表达, 用CCK-8法检测细胞增殖, 流式细胞术检测细胞凋亡, Western印迹法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达, 酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中IL-1β和IL-6的水平。用双荧光素酶报告基因实验验证BDNF-AS和miR-145-5p的调控关系。结果高糖处理促进了HK-2细胞中BDNF-AS的表达(P<0.05), 而抑制了miR-145-5p的表达(P<0.05)。干扰BDNF-AS或过表达miR-145-5p降低了高糖诱导的HK-2细胞抑制率、凋亡率及Bax蛋白、IL-1β和IL-6的表达(P<0.05), 促进了Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。干扰miR-145-5p逆转了干扰BDNF-AS对高糖诱导的HK-2细胞增殖、凋亡及IL-1β和IL-6表达的影响。BDNF-AS可靶向结合并负调控miR-145-5p。结论干扰BDNF-AS可能通过靶向负调控miR-145-5p促进高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖, 并抑制细胞凋亡及炎症因子表达。