寨卡病毒感染人神经胶质瘤细胞所诱导的细胞因子表达水平的变化

目的研究寨卡病毒(ZIKV)感染人神经胶质瘤细胞(U251)所导致的细胞因子分泌的变化,探讨ZIKV影响神经系统功能紊乱的机制。方法建立ZIKV感染U251细胞模型,收获感染后第1、3、5、7天细胞培养上清液,采用悬浮芯片系统(Bio-Plex~? 200)Luminex多重检测技术同时定量检测细胞因子IL-4、IL-5、IL-6、TNF-α和IL-12P70的浓度。结果细胞因子IL-4的浓度水平低于检测范围(0.001 pg/mL);病毒感染组分泌IL-5、IL-6、TNF-α和IL-12P70(169.9±12.1、7 747.9±949.2、29.0±0.5和93.3±2.0 pg/mL)的浓度水平均高于对照组(分别为124.6±8.6、2 652.2±386.0、25.5±0.8和85.4±1.8 pg/mL),且随着病毒感染时间的增加而分泌增加;在所有检测的细胞因子中,最显著表达的细胞因子是IL-6。结论 ZIKV感染U251细胞可分泌浓度水平相对较高的促炎性细胞因子,促炎细胞因子可能是影响神经发育的关键因素。     

寨卡病毒感染

寨卡病毒（Zika virus,ZIKV）是一种新发现的病毒,该病毒最早于1947年通过黄热病监测网络偶然在乌干达维多利亚湖畔寨卡丛林的恒河猴身上发现,随后于1952年在乌干达和坦桑尼亚人群中发现［1］。2014年2月份开始,美洲共有18个国家和地区确认存在寨卡病毒的传播,包括巴西、巴巴多斯、哥伦比亚、厄瓜多尔、萨尔瓦多、法属圭亚那、危地马拉、圭亚那、海地、洪都拉斯、马提尼克岛、墨西哥、巴拿马、巴拉圭、波多黎各、圣马丁、苏里南和委内瑞拉,传播范围还有继续扩大趋势。     

中国大陆首例输入性寨卡病毒感染病例风险评估

目的 通过风险评估确定首例输入性病例疫情综合防控效果,评估寨卡病毒病发生输入和本地传播的风险,为制定进一步的应对策略提供科学依据。方法 采用专家会商法对现场流行病学资料、实验室检测资料、疫情处置资料以及相关政策、文献进行综合评估,研判疫情趋势并提出风险管理建议。结果 中国大陆首例寨卡病毒感染病例系输入性病例,有委内瑞拉旅行史,经诊治已病愈出院。风险评估认为该病例不会引起继发传播,但本地发生输入性病例风险仍然存在。结论 仍需密切关注国际疫情态势,动态开展风险评估,加强入境口岸检验检疫、医疗、疾控等部门的联防联控,提升病例的早发现、早隔离能力,做好疫区来往人员的防护告知、口岸检疫和健康监测。     

氟对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响

目的探讨氟对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响。方法用不同浓度(20、40、60 mg/L)的氟化钠(Na F)染毒SH-SY5Y细胞24 h,采用透射电子显微镜观察细胞内自噬体超微结构;吖啶橙染色观察细胞内自噬囊泡的生成;Western blotting技术检测自噬延伸相关蛋白Atg5和LC3-II与自噬降解相关蛋白P62的表达水平。结果透射电子显微镜下可观察到细胞内自噬体结构,且随NaF剂量的增加自噬体数量明显减少;吖啶橙染色可见,与对照组相比,40和60 mg/L NaF染毒组自噬囊泡数量逐渐减少,尤以60 mg/L NaF染毒组减少最为明显;Western blotting检测发现,与对照组相比,Atg5和LC3-II的表达水平呈剂量依赖性降低,而P62的表达水平呈剂量依赖性升高,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论氟可抑制SH-SY5Y细胞的自噬水平。     

PBDE-47对人神经母细胞瘤细胞凋亡和线粒体膜电位及细胞色素C蛋白表达的影响

目的探讨PBDE-47对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞线粒体膜电位和细胞色素C(Cyt C)蛋白表达的影响及其与细胞凋亡的关系。方法将处于对数生长期的SH-SY5Y细胞分别加入终浓度为0(溶剂对照组)、1、5、10μmol/L的PBDE-47暴露24 h。采用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化,采用Western blot技术检测胞浆与线粒体细胞色素C蛋白表达的水平。结果与溶剂对照组相比,10μmol/L PBDE-47染毒组SH-SY5Y细胞凋亡率和5、10μmol/L PBDE-47染毒组胞浆内细胞色素C蛋白表达水平均明显升高,10μmol/L PBDE-47染毒组线粒体膜电位和各浓度PBDE-47染毒组线粒体内细胞色素C蛋白表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。且随着PBDE-47染毒浓度的升高,SH-SY5Y细胞凋亡率和胞浆内细胞色素C蛋白表达水平呈升高趋势,线粒体内细胞色素C蛋白表达水平呈下降趋势。结论 PBDE-47可通过引起线粒体膜通透性转运孔开放和细胞色素C的释放介导SH-SY5Y细胞凋亡,从而对SH-SY5Y细胞产生损伤。     

荧光免疫层析技术检测寨卡病毒IgG抗体

目的建立和开发一种高特异性、高灵敏度的寨卡病毒IgG抗体的检测方法。方法本研究对寨卡病毒E蛋白核酸序列优化,减低其交叉反应,经过大肠杆菌诱导表达,亲和层析纯化获得特异性蛋白。将获得的寨卡病毒E蛋白抗原喷于检测区捕获样品中的目标抗体,将羊抗小鼠IgG喷于控制区进行质量控制;将鼠抗体人IgG单克隆抗体标记荧光纳米颗粒(激发谱峰365 nm;发射光谱峰610 nm)作为标记抗体;建立荧光免疫层析试剂,配合荧光免疫检测仪YG10,检测人血清中的寨卡病毒IgG抗体,并对该检测方法进行性能验证。结果寨卡病毒E蛋白经大肠杆菌表达,菌液经过收集并超声后,上清和沉淀分别进行SDS-PAGE鉴定,多存在于沉淀中;纯化后的蛋白经SDS-PAGE鉴定,均呈现较单一的蛋白条带,纯度达到90%以上。建立的荧光层析试剂检测50份正常人血清,荧光免疫检测仪YG1分别扫描读取T、C信号值,读取T/C值,计算平均值(AVERAGE)和标准差(STDEVP),3倍标准差加上平均值作为阳性判断值,即:T/C≥3SD+AVG为阳性;与对比试剂ZIKV IgG酶联免疫试剂盒(Dia.Pro.)同时检测3份寨卡阳性标本均为阳性反应;10份正常人血清均为阴性反应;批内重复性CV≤20%,批间重复性CV≤15%;与相似的蚊媒病毒基孔肯雅病毒、登革病毒、黄热病毒、日本脑炎病毒均无交叉反应。结论该荧光层析试剂具有较好的灵敏性和特异性,可作为人血清、血浆、全血样本中寨卡病毒IgG抗体的快速筛查。     

寨卡病毒感染者13例病毒核酸检测结果分析

目的 分析广东省江门市13例寨卡病毒感染者生物样品病毒核酸结果。方法 采用描述性方法对2016年2-4月江门市报告的寨卡病毒感染者进行流行病学分析。采用荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）方法检测研究对象的血液、尿液和唾液寨卡病毒核酸。结果 2016年2-4月江门市共确诊10例寨卡病毒病病例和发现3例寨卡病毒隐性感染者,均自委内瑞拉输入。13例感染者中,男性6例,女性7例;最小年龄5岁,最大年龄46岁,中位数是19岁, ≤ 14岁儿童占46.15%（6/13）。寨卡病毒核酸阳性检出持续时间,血液最短0 d,最长4 d,中位数0 d;尿液最短2 d,最长32 d,中位数5.5 d;唾液最短0 d,最长10 d,中位数3.5 d;尿液样品比血液样品病毒核酸阳性持续时间长（P<0.01）;唾液样品比血液样品病毒核酸阳性持续时间长（P<0.05）。结论 寨卡病毒感染者血液、尿液和唾液3种生物样品病毒核酸阳性持续时间不一致。     

寨卡病毒疫情及研究进展

自2015年5月以来,寨卡病毒疫情引起全球的高度关注。寨卡病毒是一种黄病毒,存在非洲型和亚洲型两个亚型。主要通过伊蚊传播,也可通过血液、母婴和性传播。潜伏期3~12天,临床主要表现斑丘疹、发热、关节/肌肉酸痛等。寨卡病毒最早发现于1947年。2015年5月起,在巴西等美洲国家出现大规模暴发流行,并不断蔓延至全球59个国家。研究表明,巴西密集出现的新生儿小头症病例和其他神经系统病变可能与寨卡病毒存在密切关系,寨卡病毒全基团序列已公布,并有多个突变位点。目前尚无有效疫苗预防寨卡病毒感染,主要预防措施为防蚊控蚊和提高个人防护意识。     

CT影像学特征在鉴别儿童腹膜后节细胞神经母细胞瘤和神经母细胞瘤中的应用价值分析

目的 探讨分析CT影像学特征在鉴别儿童腹膜后节细胞神经母细胞瘤（GNB）与神经母细胞瘤（NB）的临床应用价值。方法 回顾性分析我院2022年4月至2023年4月经病理检查确诊的47例GNB患儿和56例NB患儿的临床资料。对两组患儿进行CT扫描鉴别,比较两组CT平扫及增强扫描影像学特征。结果 NB患儿肿瘤病灶最大直径高于GNB患儿（P <0.05）。NB患儿肿瘤形态不规则、边界模糊、跨越中线生长、周围血管包埋、瘤周和瘤内血管影像显示、淋巴结转移和浸润及脏器转移比例高于GNB患儿（P <0.05）。结论 CT影像学特征可较好地鉴别儿童腹膜后GNB和NB, GNB多呈现为边界清晰且形态规则,与周围血管关系以推移为主,很少发生远端转移,恶性程度较低,而NB则多表现为边界模糊、形态不规则肿块,跨越中线生长,特征为局部浸润、血管包埋、脏器和淋巴结转移,恶性程度较高。     

CT影像组学在儿童纵隔神经母细胞瘤与节细胞神经母细胞瘤鉴别诊断中的价值

目的:探讨CT影像组学对儿童纵隔神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)与节细胞神经母细胞瘤(ganglioneu-roblastoma,GNB)的鉴别价值.方法:回顾性分析南京医科大学附属儿童医院2014年1月至2019年7月经病理证实为纵隔NB(13例)和GNB(17例)患儿的临床及影像资料.所有患儿均于术...     

寨卡病毒病流行病学概述

寨卡病毒病是一种由寨卡病毒引起的,主要通过伊蚊传播的新发急性病毒性传染病,尚无疫苗和特异性治疗药物。为了加强对寨卡病毒病流行病学特征的了解,本文通过Medline数据库检索寨卡病毒病相关信息,结合相关政府部门、国际卫生组织报告等资料对寨卡病毒病流行病学特征进行综述。目前,该病主要在美洲地区流行,呈快速蔓延之势,34个国家存在病毒本地传播,多个国家报告输入病例。该病临床表现通常较轻,死亡罕见,部分病例可出现神经系统综合征,婴儿出生缺陷等较严重的后果,引起国际社会广泛关注,中国存在因输入病例引发的疫情局部扩散的风险。但该病是一种可防可控的传染病,只要各项策略和措施落实到位,就能够有效控制疫情扩散。     

Immunization with phage virus-like particles displaying Zika virus potential B-cell epitopes neutralizes Zika virus infection of monkey kidney cells

Zika virus (ZIKV) is a mosquito-borne flavivirus that has re-emerged and is associated with many debilitating clinical manifestations. Research is currently being conducted to develop a prophylactic vaccine against the virus; however, there has not been any licensed ZIKV vaccine. Recent studies have identified potential B-cell epitopes (amino acids 241–259, 294–315, 317–327, 346–361, 377–388 and 421–437) on the envelope protein of ZIKV, which could be explored to develop peptide vaccines against ZIKV infection. Nevertheless, the immunogenicity of these epitopes has never been assessed. Here, we displayed these epitopes on highly immunogenic bacteriophage virus-like particles (VLPs; MS2, PP7 and Qβ) platforms and assessed their immunogenicity in mice. Mice immunized with a mixture of VLPs displaying ZIKV envelope B-cell epitopes elicited anti-ZIKV antibodies. Although, immunized mice were not protected against a high challenge dose of ZIKV, sera – albeit at low titers – from immunized mice neutralized (in vitro) a low dose of ZIKV. Taken together, these results show that these epitopes are B-cell epitopes and they are immunogenic when displayed on a Qβ VLP platform. Furthermore, the results also show that immunization with VLPs displaying a single B-cell epitope minimally reduces ZIKV infection whereas immunization with a mixture of VLPs displaying a combination of the B-cell epitopes neutralizes ZIKV infection. Thus, immunization with a mixture of VLPs displaying multiple ZIKV B-cell epitopes is a good strategy to enhance ZIKV neutralization.     

中国大陆第三例输入性寨卡病毒病病例调查分析

目的 对中国大陆第三例输入性寨卡病毒病病例进行调查分析,为防控寨卡病毒病提供工作经验和参考依据。方法 对中国大陆第三例输入性寨卡病毒病病例的临床表现、实验室检测、诊疗和流行病学调查进行描述性分析。结果 2016年2月19日,经中国CDC有关专家复核和专家会诊,我国义乌市确诊1例从斐济、萨摩亚旅游归来的输入性寨卡病毒病病例,病例曾在萨摩亚有蚊虫叮咬史。病例2月14日发病,15日出疹,16日出现结膜炎,16日收住入院,17日体温正常,19日皮疹消失,20日结膜炎消失。血液中寨卡病毒核酸检测阳性持续仅3 d,血液核酸检测阴性4 d后尿液仍可检测到核酸阳性。结论 该病例寨卡病毒病症状典型,早期可采集病例血液进行寨卡病毒核酸检测,体温正常后应采集尿液进行寨卡病毒核酸检测。     

中国大陆首例输入性寨卡病毒病病例调查分析

目的 分析2016年2月9日中国大陆首例确诊寨卡病毒病病例的流行病学特征,为防控寨卡病毒病提供参考依据。方法 对中国大陆首例确诊寨卡病毒病病例进行流行病学调查并临床观察病例同行者与接触者。采集病例血清、尿液等标本,应用荧光定量RT-PCR进行核酸检测。结果 该病例确诊为寨卡病毒病,于第18病日解除隔离、痊愈出院。病例第10病日血清标本和第11~13病日尿液标本检测均为寨卡病毒核酸阳性。该病例系江西省赣县籍外派工作回国人员,发病前在寨卡病毒流行地区有蚊虫叮咬史,同行者与接触者医学观察期内均未出现寨卡病毒病症状。结论 该病例为中国大陆首例寨卡病毒感染确诊病例,系境外输入性病例,感染来源与在寨卡疫源地委内瑞拉蚊虫叮咬有关。     

Propagation of Brazilian Zika virus strains in static and suspension cultures using Vero and BHK cells

The recent spread of Zika virus (ZIKV) in the Americas and the Pacific has reached alarming levels in more than 60 countries. However, relatively little is known about the disease on a virological and epidemiological level and its consequences for humans. Accordingly, a large demand for in vitro derived Brazilian ZIKV material to support in vitro and in vivo studies has arisen. However, a prompt supply of ZIKV and ZIKV antigens cannot be guaranteed as the production of this virus typically using Vero or C6/36 cell lines remains challenging.Here we present a production platform based on BHK-21 suspension (BHK-21_SUS) cells to propagate Brazilian ZIKV at larger quantities in perfusion bioreactors. Scouting experiments performed in tissue culture flasks using adherent BHK-21 and Vero cells have demonstrated similar permissivity and virus yields for four different Brazilian ZIKV isolates. The cell-specific yield of infectious virus particles varied between respective virus strains (1–48 PFU/cell), and the ZIKV isolate from the Brazilian state Pernambuco (ZIKV^PE) showed to be a best performing isolate for both cell lines. However, infection studies of BHK-21_SUS cells with ZIKV^PE in shake flasks resulted in poor virus replication, with a maximum titer of 8.9 × 10³ PFU/mL. Additional RT-qPCR measurements of intracellular and extracellular viral RNA levels revealed high viral copy numbers within the cell, but poor virus release. Subsequent cultivation in a perfusion bioreactor using an alternating tangential flow filtration system (ATF) under controlled process conditions enabled cell concentrations of about 1.2 × 10⁷ cells/mL, and virus titers of 3.9 × 10⁷ PFU/mL. However, while the total number of infectious virus particles was increased, the cell-specific yield (3.3 PFU/cell) remained lower than determined in adherent cell lines. Nevertheless, the established perfusion process allows to provide large amounts of ZIKV material for research and is a first step towards process development for manufacturing inactivated or live-attenuated ZIKV vaccines.     

寨卡病毒NS1单克隆抗体制备及其在临床诊断中的应用

目的 用寨卡病毒非结构蛋白NS1免疫小鼠并制备鼠源单克隆抗体,建立捕获ELISA方法检测寨卡病毒NS1蛋白.方法 合成NS1基因序列构建真核表达载体pcDNA3.1-NS1,转染HEK293细胞收集上清,经Ni+柱亲和层析法纯化NS1蛋白.以纯化的NS1重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取脾脏进行细胞融合,筛选阳性细...     

寨卡病毒非结构蛋白1的真核表达纯化和免疫反应性鉴定

目的 在HEK293F细胞中表达寨卡病毒(Zika Virus,ZKV)的非结构蛋白1(Nonstructural Protein 1,NS1),并分离纯化得到重组ZKNS1以及验证其免疫反应性。方法 根据GenBank中的ZKNS1序列合成基因,在基因上下游分别引入信号肽和组氨酸标签,通过NotI和XbaI双酶切将基因克隆至pcDNA31(+)载体;将重组载体转染HEK293F细胞,重组蛋白用镍亲和柱层析纯化;免疫印迹法(Western blot)鉴定重组ZKNS1与寨卡病毒阳性人血清的免疫反应性。结果 成功构建了ZKNS1的真核表达载体pcDNA31(+)-ZKNS1;在HEK293F细胞中重组ZKNS1以分泌形式表达于细胞培养上清中,经纯化后获得了纯度较高的分子量约为46kDa的重组蛋白;Western blot结果显示重组ZKNS1与寨卡病毒阳性人血清能发生特异性结合。结论 成功构建ZKNS1的真核表达载体,获得了免疫反应性较高的纯化的重组ZKNS1,为进一步建立ELISA检测方法及制备单克隆抗体奠定了基础。