miR-195-5p通过靶向ROCK1抑制肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化

目的探讨miR-195-5p对肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。方法通过转染miR-195-5p mimics或inhibitors分别过表达或抑制肾癌细胞中miR-195-5p的表达,转染靶向Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)的小干扰RNA敲低肾癌细胞中ROCK1的表达量,利用细胞划痕实验和Transwell小室实验分别检测肾癌细胞的迁移和侵袭能力。通过双荧光素酶报告实验验证miR-195-5p对ROCK1的靶向调控作用,利用免疫印迹试验检测ROCK1及上皮-间质转化相关蛋白的表达水平。结果过表达miR-195-5p可显著抑制肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化,而抑制miR-195-5p的表达可明显促进肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化(P<0.05)。miR-195-5p可通过靶向ROCK1调控其在肾癌细胞中表达。敲低ROCK1后可部分抵消miR-195-5p inhibitors对肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。结论miR-195-5p可通过靶向ROCK1抑制肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化。     

Notch信号通路与上皮-间质转化关系研究进展

Notch信号通路在进化中高度保守,广泛参与细胞的增殖、分化及凋亡过程,在肿瘤的发生、浸润及转移过程中发挥着重要作用.上皮-间质转化(EMT)是肿瘤细胞发生转移前重要的细胞表象变化.EMT后肿瘤细胞侵袭、转移能力显著增强.多种影响EMT过程的细胞因子与Notch信号通路紧密联系.就该方面进展作一简要综述.     

Notch信号通路与上皮-间质转化关系研究进展

Notch信号通路在进化中高度保守,广泛参与细胞的增殖、分化及凋亡过程,在肿瘤的发生、浸润及转移过程中发挥着重要作用。上皮-间质转化(EMT)是肿瘤细胞发生转移前重要的细胞表象变化。EMT后肿瘤细胞侵袭、转移能力显著增强。多种影响EMT过程的细胞因子与Notch信号通路紧密联系。就该方面进展作一简要综述。     

抑制乙肝病毒X蛋白表达对肝癌细胞上皮-间质转化和凋亡的影响

目的 探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)对肝癌细胞转移能力的影响及其机制.方法 采用siRNA干扰技术抑制MHCC97H细胞的HBx表达.通过Transwell小室和裸鼠肺转移模型实验比较HBx抑制前后MHCC97H细胞转移能力的变化.应用Western blotting技术检测肝癌细胞上皮间质转化(EMT)和凋亡相关基因的表达变化.结果 将HBx-siRNA导人MHCC97H细胞可以抑制HBx的表达及其转移能力,可下调EMT相关分子Twist和N-cadherin的表达,并上调E-cad-herin表达而抑制EMT,同时还可通过Twist-P53途径诱发细胞的凋亡.结论 抑制HBx表达可以通过改变上皮-间质转化和诱发凋亡而减弱高侵袭肝癌细胞MHCC7H的转移能力.

Abstract：

Objective To investigate the effects and possible mechanism of action of inhibiting hepatitis B virus X protein (HBx) expression on liver cancer metastasis. Methods The suppression of HBx expression in MHCC97H cells was performed by siRNA interference technique, and the effects of HBx suppression on the metastasis of MHCC97H cells were detected by Matrigel invasion assays and in a lung-metastasis mouse model. The expression levels of related epithelial-mesenchymal transition (EMT) and apoptosis proteins were examined by Western blotting. Results Introduction of HBx-siRNA into MHCC97H cells inhibited the expression of HBx and the ability to metastasize,downregulated the expression of Twist and N-cadherin, and upregulated E-cadherin expression. These changes resulted in inhibiting EMT of MHCC97H cells. Meanwhile, apoptosis involved in the Twist-P53 pathway was also found. Conclusions Inhibiting expression of HBx can decrease the metastatic a-bility of MHCC97H cells by changing EMT and inducing apoptosis.     

基于Sestrin2通过mTOR信号通路调节胰腺癌上皮-间质转化过程的实验研究

目的 探讨Sestrin 2在胰腺癌上皮-间质转化(EMT)过程中的作用.方法 对胰腺癌细胞PANC-1和CFPAC-1进行Sestrin 2表达干预,通过划痕试验、Transwell试验、RT-PCR、Western blotting和动物实验检测不同Sestrin 2表达水平下胰腺癌EMT过程的变化.同时,分析Se...     

Smad4在TGF-β诱导人胆管癌细胞上皮-间质转化中的作用

目的 探讨Smad4在TGF-β诱导人胆管癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法 用转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)处理RBE人胆管癌细胞系24h后,观察其形态变化,采用Western Blotting检测TGF-β1处理0h、12h、24h、48h后RBE细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达.通过RNA干扰技术建立稳定干扰Smad4表达的细胞系,在无TGF-β1处理或TGF-β1处理24h后,观察Smad4干扰组与野生型组和空载体组细胞的形态差异,Western Blotting检测各组N-cadherin和E-cadherin的表达水平.结果 TGF-β1诱导RBE细胞的形态由上皮样向间质样转变,促进 N-cadherin表达增加和E-cadherin表达降低.在无TGF-β1处理时,Smad4干扰组细胞比野生型组和空载体组细胞的形态更趋于上皮样,E-cadherin表达水平也显著高于野生型组和空载体组(P＜0.05).在TGF-β1处理24h后,Smad4干扰组细胞形态的间质样变化程度、N-cadherin表达量明显低于野生型组和空载体组(P＜0.05);野生型组和空载体组细胞E-cadherin的表达缺失,而Smad4干扰组细胞仍表达较高水平的E-cadherin,两者间差异显著(P＜0.05).结论 TGF-β依赖Smad4介导人胆管癌细胞发生上皮-间质转化.     

肿瘤起始细胞及上皮-间质转化在肿瘤转移及耐药中的作用

目的总结肿瘤起始细胞(tumor initiating Cells,TICs)和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及其在肿瘤转移和耐药中的研究现状。方法检索近年来国内外有关TICs和EMT及其与肿瘤转移和耐药关系的文献并做综述。结果 TICs是肿瘤细胞中一小群具有自我更新、高度增殖及多向分化能力的细胞,表达多种表面标志物,如CD133、CD44等,在肿瘤的侵袭、转移和耐药中起着重要的作用。EMT是肿瘤上皮细胞失去极性转变为间质细胞的一种现象,常见于胚胎发育及组织修复,能够促进肿瘤的侵袭、转移以及逃避宿主的免疫反应,EMT可能是TICs所致肿瘤转移和复发的根源。靶向TICs或EMT的治疗可能有效预防肿瘤的复发及改善患者的预后。结论 EMT是TICs致肿瘤转移及耐药的重要机理,对于TICs和EMT的研究可用于探索更有效的针对肿瘤的靶向治疗策略。     

肿瘤坏死因子-α诱导膀胱癌细胞上皮间质转化

目的 观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人膀胱癌细胞的上皮间质转化(EMT)及分子机制.方法 5 μg/L TNF-α处理BLX细胞,凝胶迁移实验(EMSA)观察NF-κB活性,Westem blot和免疫荧光检测波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达及定位,体外侵袭转移实验观察细胞侵袭转移能力.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测EMT相关转录因子的表达.结果 TNF-α激活核转录因子-κB(NF-κB),促使细胞由多边形向纺锤形转换,E-cadherin表达下调(0.37±0.08比0.75±0.15,P＜0.05)且细胞膜定位消失,Vimentin表达上调(0.46 ±0.12比0.00±0.00,P＜0.05),细胞转移和侵袭能力提高(182.00±17.58比134.00 ±9.00;119.00±7.21比85.33±10.11,P＜0.05).TNF-α诱导Twist和Slug转录因子表达上调(0.91 ±0.03比0.36±0.07;0.78±0.11比0.22±0.10,P＜0.01).结论 TNF-α激活NF-κB诱导膀胱癌细胞发生EMT,可能在膀胱癌侵袭转移中发挥作用.     

MAPK13调控胆管癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化进程的机制研究

目的 本研究旨在分析丝裂原活化蛋白激酶13(MAPK13)在胆管癌组织及细胞中的表达水平并探讨其在胆管癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)中的作用。方法 通过微阵列分析筛选胆管癌组织中差异表达的mRNA,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白印迹及免疫组化染色验证MAPK13在肿瘤组织和细胞中的表达情况。进一步通过细胞转染构建MAPK13敲低(si-MAPK13)后,通过细胞活力实验检测胆管癌细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭性。最后,通过裸鼠成瘤实验检测MAPK13对体内成瘤及相关蛋白表达的影响。结果 本研究通过微阵列分析发现MAPK13在肿瘤组织中的表达存在显著差异,进一步通过qRT-PCR、蛋白印迹和免疫组化染色分析发现,与癌旁组织比较,MAPK13在mRNA和蛋白质水平的表达情况在肿瘤组织及细胞中均显著升高且差异具有统计学意义(t=27.92,6.90;均P<0.01)。进一步细胞活力检测表明,抑制MAPK13的表达后细胞增殖数量明显减少(F=32.13,P<0.01)。Transwell实验则显示细胞迁移和侵...     

MiR-134通过靶向调节KRAS抑制786-0肾透明细胞癌细胞上皮间质转化过程

目的探索miR-134在肾癌组织中的表达并研究其对肾透明细胞癌细胞786-0上皮间质转化的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-134在20对肾癌组织和786-0细胞中的表达情况;miR-134模拟物转染786-0后,划痕实验和Transwell实验分别检测肾癌细胞迁移和侵袭能力的改变情况,Western blot检测细胞中靶蛋白KRAS及其相关信号通路蛋白表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-134与KRAS 3′-UTR结合情况。结果 MiR-134在20对肾癌组织和786-0细胞中明显低表达(P0.01);miR-134模拟物转染后能够抑制肿瘤细胞侵袭(P0.01)和迁移的能力(P0.05),显著降低肿瘤细胞中KRAS蛋白的水平(P0.05)并抑制RAS/MAPK/ERK通路中关键蛋白p-ERK的表达(P0.05);双荧光素酶报告基因显示miR-134能与KRAS 3′-UTR结合,显著降低荧光值(P0.05)。结论 MiR-134在肾透明细胞癌中显著低表达,能通过靶向抑制KRAS表达调控下游RAS/MAPK/ERK通路活性,阻滞786-0细胞上皮间质转化过程,抑制肿瘤细胞的侵袭和转移。     

上皮-间质转化在肝癌非手术治疗后促进残癌侵袭、转移的研究进展

上皮-间质转化(EMT)以上皮表型的缺失伴随上皮间质特性的获得为主要特征。上皮-间质转化现象与肝癌非手术治疗后残癌的侵袭、转移能力增加关系密切。本文对近年来有关EMT在各种肝癌非手术治疗后,促进残癌侵袭、转移的研究进展进行综述。     

microRNA-21通过上皮间质转化促进胆管癌细胞侵袭转移的研究

目的探讨microRNA-21（miR-21）对胆管癌RBE细胞侵袭转移能力的影响及其内在机制。 方法miR-21及其抑制基因片段（miR-21i）通过慢病毒载体感染胆管癌RBE细胞,RT-PCR用于检测RBE细胞中miR-21表达;Transwell体外侵袭实验和细胞划痕试验用于检测RBE细胞侵袭及转移能力;Western blotting用于检测PTEN蛋白和上皮间质转化（EMT）特征性蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达情况。 结果miR-21过表达促进RBE细胞侵袭和转移,miR-21低表达抑制RBE细胞的侵袭和转移。miR-21过表达能够降低PTEN蛋白和E-cadherin蛋白,增强N-cadherin和Vimentin蛋白的表达;转染miR-21i抑制基因组（miR-21i）组则有相反的效果,而转染空白基因组（对照组）相应蛋白表达无明显变化。 结论miR-21起到癌基因的作用,可增强胆管癌细胞侵袭和转移能力,其机制是通过调节抑癌基因PTEN及改变EMT相关蛋白的变化。这些发现为胆管癌侵袭转移的分子机制提供新的科学依据。     

抑制残癌细胞上皮间质转化能降低肝动脉结扎增强的肝癌转移潜能

目的 探讨抑制残癌细胞上皮-间质转化对肝动脉断流后肝癌增强的转移潜能的影响.方法 采用MHCC97肝癌细胞系和52只BALB/c-nu/nu裸鼠,建立转移性人肝癌裸鼠原位移植并肝动脉结扎(hepatic artery ligation,HAL)模型.另12只荷瘤裸鼠行假手术设为对照.分别观察肝动脉结扎+阻滞剂LY294002以及肝动脉结扎+不同剂量干扰素α(intererin-α,IFN-α)对移植瘤生长和肺转移率的影响.体外将肝癌细胞MHCC97置于缺氧环境中培养.Western blot检测细胞和移植瘤内HIF-1 α、E-cadherin、N-cadherin、Twist表达.结果 肝动脉结扎虽然减小肝癌移植瘤体积(2002.97 ±331.28) mm3 vs.(3921.23 ±786.21) mm3,t =4.052,P＜0.01),但增加荷瘤裸鼠肺转移率( 10/12 vs.4/12,P＜0.05).联合阻滞剂LY294002治疗不能进一步抑制肝癌生长,但显著减少裸鼠肺转移(1/6 vs.10/12 vs.100％,P＜0.05).中等以上剂量的IFN-α(7.5×106 U/kg)显著降低肝动脉结扎诱导的肺转移率(0/6 vs.2/6 vs.100％,P＜0.01,P＜0.05).对移植瘤和细胞样本的分析证实阻滞剂LY294002或中等以上剂量的IFN-α均抑制缺氧肝癌细胞内N-cadherin和Twist上调,增加E-cadherin表达.结论 阻断肝癌细胞上皮-间质转化能够抑制缺氧诱导的肝癌侵袭、转移.     

微小RNA-101通过USP22抑制人肝癌MHCC97H细胞的上皮-间质转化功能

目的 研究微小核糖核酸（miR）-101对人肝细胞癌（肝癌）MHCC97H细胞的上皮-间质转化功能的影响及其相关机制。 方法 MHCC97H肝癌细胞株分别转染miR-101 mimics和negative control mimic,分别作为M101组、NCM组,并设立未转染对照（control）组,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组细胞miR-101含量。Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力。Western-blot法检测3组细胞vimentin、α-catenin、E-cadherin和USP22表达水平。双荧光素酶实验检测miR-101与USP22的关系。 结果 M101组miR-101的表达水平明显上调,表达水平约为control组的761倍（P < 0.05）。M101组迁移细胞数量明显低于control组的[（15.7±1.6）个比（94.1±1.8）个,P < 0.05]。M101组侵袭细胞数量明显低于control组的[（9.1±0.4）个比（51.6±0.9）个,P < 0.05]。M101组细胞vimentin蛋白表达量明显降低,α-catenin及E-cadherin蛋白表达量明显升高,USP22蛋白表达量明显降低。双荧光素酶检验结果显示USP22为miR-101的下游靶基因。 结论 miR-101可能通过降低下游靶基因USP22水平影响EMT相关蛋白表达,抑制MHCC97H肝癌细胞的上皮-间质转化功能。     

生长抑素受体-2基因逆转上皮-间充质转化抑制肝癌细胞侵袭转移机制的研究

目的 观察生长抑素受体-2(SSTR2)基因对肝癌细胞株MHCC-97H侵袭转移及上皮-间充质转化(EMT)特性的影响.方法 构建慢病毒3FLAG-puromycin-LV及SSTR2-LV,转染肝癌细胞株MHCC-97H,噻唑蓝(MTT)、免疫荧光检测转染效率.采用Transwell侵袭实验和迁移实验分别检测未转染细胞(空白对照组)、转染3FLAG-puromycin-LV细胞(阴性对照组)和转染SSTR2-LV细胞(实验组)侵袭转移能力的强弱.镜下观察转染前后细胞形态的变化,免疫荧光检测转染前后细胞上皮表型蛋白和间质表型蛋白的定位和表达,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染后细胞SSTR2的表达,Westem blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达.结果 SSTR2-LV可以有效转染肝癌细胞株MHCC-97H,稳定表达SSTtR2的mRNA和蛋白.转染SSTR2-LV的肝癌细胞株MHCC-97H较空白对照组和阴性对照组侵袭迁移能力明显受到抑制(P＜0.05).镜下观察肝癌细胞株MHCC-97H转染SSTR2-LV后,由成纤维细胞样、排列分散,转变为细胞排列紧密如铺路石.免疫荧光染色结果可见肝癌细胞株MHCC-97H转染后细胞膜表达的E-cadherin荧光由胞质转移至细胞周边浓聚,而Vimentin的荧光强度较前下降.采用Western blot进行蛋白定量分析,转染后MHCC-97H细胞上皮表型标志性蛋白E-cadherin、β-连环蛋白(β-catenin)表达量增高,间质表型标志性蛋白N-cadherin、Vimentin表达量减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 转染再表达SSTR2MHCC-97H细胞可以增加上皮表型蛋白表达,减少间质表型蛋白,从而逆转肝癌细胞EMT,导致肿瘤细胞侵袭能力减弱.     

HMGA2通过Wnt/β-catenin信号通路促进结直肠癌上皮间质转化的研究

目的：研究高迁移率蛋白A2(HMGA2)通过Wnt/β-catenin信号通路促进结直肠癌上皮间质转化（EMT）的影响。方法：采用Real-time PCR法和Western blot法测定正常人结直肠上皮细胞和人结直肠癌HCT116细胞中HMGA2表达水平；将HCT166细胞转染GV144-HMGA2质粒过表达HMGA2后，测定过表达HMGA2对HCT166细胞活力、凋亡及迁移的影响；转染GV144-HMGA2质粒6 h后，加入重组转化生长因子（TGF）-β1蛋白继续培养48 h，测定EMT标志物和细胞周期蛋白（cyclin）D1表达水平。HCT166细胞中分别加入Wnt/β-catenin信号通路的激活剂（Li Cl）和抑制剂（XAV93920），并加入TGF-β1和过表达的HMGA2，检测EMT标志物和cyclin D1表达水平。结果：HCT166细胞中HMGA2表达水平显著高于FHC细胞（P<0.05）；过表达HMGA2可以显著增加HCT166的细胞活力和迁移，降低细胞凋亡（P<0.05）;HMGA2可以显著降低E-caderin表达水平，降低TGF-β1诱导的cy...     

微小RNA-155-5p靶向尾型同源盒基因1抑制人胰腺癌细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化

目的观察尾型同源盒基因1(CDX1)对胰腺癌(PC)细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化(EMT)的作用, 探讨微小RNA-155-5p(miR-155-5p)/CDX1轴调控PC细胞迁移、侵袭和EMT的分子机制。方法选取2020年1月至2023年1月在临沂市人民医院肝胆外科行PC切除术的30例PC患者的癌组织为研究对象, 采用免疫组织化学染色、免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测PC癌和癌旁组织CDX1的表达水平。通过细胞计数试剂(CCK-8)、划痕实验、Matrigel侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力;采用免疫印迹和RT-qPCR检测EMT相关基因E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平, 采用荧光素酶报告基因实验检测miR-155-5p与CDX1启动子区的结合情况。组间差异采用t检验或方差分析(ANOVA)。结果 PC组织中CDX1蛋白和RNA表达水平(7.15±1.72、9.17±2.83)明显高于癌旁组织(1.00±0.28、1.00±0.38), 差异有统计学意义(t=11.290、13...     

来那度胺通过抑制VEGF蛋白表达抑制人肝癌细胞LM3的迁移和侵袭

目的 研究来那度胺对人肝癌细胞LM3细胞迁移和侵袭能力的影响.方法 采用不同浓度的来那度胺(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理人肝癌细胞LM3,通过检测对LM3细胞活性变化和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达量变化筛选最适实验药物浓度.通过划痕实验以及Transwell侵袭实验检测来那度胺对LM3细胞迁...     

盐诱导激酶2通过调控转化生长因子-β/上皮-间充质转化通路抑制三阴性乳腺癌迁移和侵袭的机制

目的分析和验证盐诱导激酶2 (SIK2)在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达并探究其对TNBC细胞迁移侵袭能力的影响及机制。方法利用Ualcan在线分析工具探索SIK2在TNBC中表达情况, 结合8对TNBC组织标本运用荧光定量PCR技术进行验证。构建SIK2重组过表达质粒(GV703-SIK2)并包装重组慢病毒。分别感染TNBC细胞株MDA-MB-231和HCC1937, 经嘌呤霉素筛选构建SIK2稳定过表达细胞株和阴性对照细胞株。用蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后TNBC细胞株中SIK2表达水平, 通过划痕实验和Transwell小室实验观察SIK2过表达对TNBC细胞迁移侵袭能力的影响;采用Western blot分析SIK2过表达后对上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子SNAI1蛋白(Snail)、锌指转录因子SNAI2(Slug)、磷酸化SMAD家族成员2(p-SMAD2)蛋白、磷酸化SMAD家族成员3(p-SMAD3)蛋白表达水平的影响。组间比较采用t检验。结果 SIK2 mRNA在TNBC组织中表达明显低于其配...     

miR-let-7b-5p靶向调控LIMD2对胃癌细胞间质-上皮转化的影响

目的：探究微小RNA(mi R)-let-7b-5p靶向调控含LIM域2蛋白（LIMD2）对胃癌（GC）细胞间质-上皮转化（MET）的影响。方法：采用q RT-PCR检测GES-1、SCG-7901、MGC-803、BGC-823细胞中mi R-let-7b-5p相对表达水平；构建绿色荧光蛋白（GFP）和mi R-let-7b-5p稳定过表达细胞株，q RT-PCR法检测mi R-let-7b-5p过表达效率；生物信息学和双荧光素酶实验预测并验证mi R-let-7b-5p与LIMD2靶向关系；构建pcDNA5-LIMD2过表达载体，将细胞分为NC组、mi R-let-7b-5p组、mi R-let-7b-5p-pcDNA5组和mi R-let-7b-5p-LIMD2组，Western Blot检测各组细胞中LIMD2、Vimentin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达；Transwell法检测mi R-let-7b-5p对MGC-803细胞侵袭能力的影响。结果 ：与GES-1相比，SCG-7901、MGC-803、BGC-823细胞中mi R-let-7b-5p相对...