circ＿0001658靶向miR-1231对肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨circ＿0001658是否靶向miR-1231影响肝癌Huh-7细胞的增殖和凋亡。方法:肝癌组织中circ＿0001658和miR-1231表达采用qRT-PCR进行测定。利用CCK-8法检测si-circ＿0001658组、miR-1231组、si-circ＿0001658+anti-miR-1231组、si-NC组、miR-NC组、si-circ＿0001658+anti-miR-NC组细胞活性,克隆形成、流式细胞术检测细胞克隆形成、凋亡,Western blotting检测cleaved-caspase 3和cleaved-caspase9表达。双荧光素酶报告实验检测circ＿0001658和miR-1231的靶向结合。结果:与癌旁组织相比,肝癌组织中circ＿0001658表达量升高,miR-1231表达量降低。干扰circ＿0001658或过表达miR-1231降低Huh-7细胞活性、克隆形成数,增加凋亡率、cleaved-caspase 3和cleaved-caspase 9蛋白表达量。circ＿0001658靶向调控miR-1231的表达,下调miR-1231...     

miR-1246在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-1246（miR-1246）在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨其在肝癌发生发展中的作用和意义。方法应用实时定量PCR（qRT-PCR）方法检测miR-1246在肝癌以及癌旁组织的表达;对人肝癌细胞株（BEL7402、SMMC7721）转染miR-1246 抑制剂后,采用MTT法观察肝癌细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果 miR-1246 在肝癌组织中表达显著高于癌旁组织[（65.39±8.77）vs（10.23±2.58）,P=0.002]。MTT和凋亡实验结果显示,与阴性对照组相比,转染miR-1246抑制剂后,BEL7402细胞增殖能力下降,凋亡增加（P均＜0.05）;SMMC7721细胞也出现增殖能力下降,凋亡增加（P均＜0.05）。结论 miR-1246 在肝癌组织中高表达,并且与肝癌细胞的增殖及凋亡有关,其表达的上调可能与肝癌的发生发展有关。     

miR-520a-3p对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨miR-520a-3p在肾癌细胞系中的表达水平及其对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.方法 通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-520a-3p在正常肾小管上皮细胞HK2和肾癌细胞系786-O、A498、OS-RC-2及ACHN中的表达水平.选取miR-520a-3p表达水平最低的肾癌细胞系786-O...     

Lupeol对肝癌SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响

【摘要】〓目的〓探讨羽扁豆醇(lupeol)对人肝癌SMMC-7721细胞生长和凋亡的作用及机制。方法〓采用MTT法检测lupeol对肝癌细胞 SMMC-7721和正常肝细胞L-02的增殖抑制作用,流式细胞法检测细胞凋亡情况,Western blot检测TRAIL受体及抗凋亡蛋白表达变化,比色法分析caspase-8、-9、-3酶活性改变。结果〓lupeol对SMMC-7721细胞具有明显的增殖抑制作用(IC50=40 μmol/L),而对正常肝细胞L-02无细胞毒作用;lupeol在30、40、50 μmol/L浓度范围诱导SMMC-7721细胞48小时的凋亡率分别为5.5%、12.6%、28%;抗凋亡蛋白c-FLIPL表达下调,caspase-8及caspase-3活性增强均呈剂量依赖性。结论〓Lupeol通过下调c-FLIPL表达激活caspase通路诱导肝癌细胞凋亡,对肝癌细胞增殖发挥抑制作用。     

circ＿0005230通过靶向miR-548c-3p影响胆管癌细胞增殖和凋亡的机制

目的：探讨环状RNA(circ RNA)circ＿0005230对miR-548c-3p的靶向调控和对胆管癌细胞增殖和凋亡的作用与机制。方法：实时定量PCR(q PCR)检测胆管癌组织中circ＿0005230和miR-548c-3p表达。将人胆管癌细胞RBE分为si-NC组、si-circ＿0005230组、pc DNA-NC组、pc DNA-circ＿0005230组、miR-NC组、miR-548c-3p组、si-circ＿0005230+anti-miR-NC组、si-circ＿0005230+anti-miR-548c-3p组,分别通过Lipofectamine 2000转染si-NC、si-circ＿0005230、pc DNA-NC、pc DNA-circ＿0005230、miR-NC、miR-548c-3p mimic、si-circ＿0005230和anti-miR-NC、si-circ＿0005230和miR-548c-3p inhibitor。以CCK-8法、克隆形成实验、免疫印迹实验（Western blot）和流式细胞术分别进行细胞的增殖、克隆形成、细胞周期蛋...     

lncRNA SCAMP1靶向miR-197-3p对肝癌SNU-449细胞增殖和侵袭的影响

目的：研究lncRNA SCAMP1靶向miR-197-3p对肝癌SNU-449细胞增殖和侵袭的影响。方法：q RT-PCR方法测定肝癌组织及细胞内SCAMP1表达变化。肝癌SNU-449细胞分成Control组、si-NC组（转染si RNA control）、si-SCAMP1组（转染SCAMP1 si RNA）组,CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化,克隆形成实验测定各组细胞克隆能力的变化,Transwell小室检测各组细胞迁移和侵袭能力的变化,Western blot检测各组细胞中N-cadherin、E-cadherin蛋白表达水平的变化。在线靶基因软件预测SCAMP1的靶基因可能是miR-197-3p,经双荧光素酶报告系统鉴定两者之间的靶向关系。在肝癌SNU-449细胞中分别把SCAMP1 siRNA、miR-197-3p inhibitor共转染,利用上述方法检测细胞增殖、克隆、侵袭、迁移能力。结果：肝癌组织中SCAMP1表达水平高于癌旁组织,肝癌细胞内SCAMP1表达水平高于正常肝细胞,差异均有统计学意义（P<0.05）。与Control组、si-NC组比较,si...     

siRNA靶向沉默TET2基因对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:通过siRNA靶向沉默TET2(ten-eleven translocation 2)基因,以研究TET2基因对于人肝癌细胞增殖和凋亡的影响并初步探讨其可能机制。方法:RT-PCR和Western印迹法检测人肝癌细胞株和正常人肝星状细胞LO2中TET2表达情况。siRNA转染入Bel-7404和SMMC-7721肝癌细胞内,并设置阴性对照组(NC组)。靶向沉默TET2基因后,CCK-8法检测肝癌细胞增殖能力,FITC AnnexinⅤ-Apoptosis Detection KitⅠ检测肝癌细胞的凋亡;Western印迹法检测下游信号通路中Caspase-3和Caspase-8蛋白表达。结果:与正常人肝星状细胞LO2相比,TET2基因在人肝癌细胞中高表达。siRNA转染入SMMC-7721和Bel-7404细胞后,TET2基因的表达显著降低。与NC组相比,转染48 h后肝癌细胞的增殖水平显著降低(P<0.05)。肝癌细胞的凋亡水平率显著升高,下游信号通路中,Capase-3蛋白和Capase-8蛋白的表达量显著上调。结论:siRNA靶向沉默TET2基因可通过促进肝癌细胞凋亡的发生抑制其增殖。     

circPLOD2调节miR-217/ANLN轴对结肠癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的：探讨circ PLOD2对结肠癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响以及对mi R-217/ANLN轴的调节机制。方法：将HT-29细胞分为NC组、si-NC组、si-circ PLOD2组、si-circ PLOD2+anti-mi R-NC组、si-circ PLOD2+anti-mi R-217组。q RT-PCR检测细胞中circ PLOD2、mi R-217、ANLN m RNA的表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及PD-L1的表达;ELISA检测免疫逃逸相关因子TNF-α、IL-2、IFN-γ的水平;双荧光素酶报告基因实验验证circ PLOD2、mi R-217、ANLN三者的靶向关系。结果：与si-NC组相比,si-circ PLOD2组HT-29细胞中circ PLOD2、ANLN水平、细胞增殖活性、Bcl-2、PD-L1表达降低（P<0.05）,mi R-217水平、细胞凋亡率、Bax表达以及TNF-α、IL-2、IFN-γ水平升高（P<0.05）,且双荧光素酶基因报告实...     

体外模拟气腹环境对胃癌细胞增殖凋亡的影响

目的通过体外模拟气腹环境,观察二氧化碳(CO2)和氦气(He)在不同压力下对胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡的影响。方法实验分为对照组、CO2组和He组,其中CO2组和He组又按照压力不同分为0、5、10、15mmHg组(作用时间均为4h)。细胞在密闭培养箱内经不同压力CO2或He作用4h后用血气分析仪检测培养液pH值;MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪观察细胞凋亡指数变化;AnnexinV-FITC/PI双标染色、流式细胞仪测定凋亡细胞比例。结果处理结束后即刻检测,CO2组细胞培养液呈弱酸性,He组细胞培养液呈弱碱性。MTT法检测细胞增殖变化,CO2组0、5、10mmHg组OD值与对照组比较无明显差异(P>0.05),15mmHg组OD值与对照组比较在前3天无明显差异(P>0.05),在4~7天OD值明显低于对照组(P<0.01)。而在He组,不同压力组细胞增殖活性与对照组比较无明显差异(P>0.05)。在CO2环境下,0、5mmHg组细胞凋亡指数与对照组比较无明显差异(P>0.05),而10、15mmHg组明显大于正常对照组(P<0.01)。0、5mmHg组细胞凋亡比例与对照组比较无显著差异(P>0.05...     

microRNA-126靶向PIK3R2调控肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡

【摘要】 目的 研究microRNA-126(miR-126)对肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响以及对靶基因PIK3R2表达的影响。方法 通过慢病毒转染肝癌细胞株SMMC-7721使其过表达miR-126,利用CCK-8法检测细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡;采用实时定量PCR和蛋白印迹检测细胞PIK3R2表达水平的变化,并通过荧光素酶实验验证miR-126与PIK3R2基因的直接调控关系。结果 与对照组相比,转染miR-126组的SMMC-7721细胞的增殖能力减弱,凋亡增加。过表达miR-126后,SMMC-7721细胞PIK3R2的蛋白表达下调(P=0.0135)。荧光素酶报告基因实验显示,miR-126能明显抑制PIK3R2-3’UTR的荧光素酶活性(P=0.0016)。结论〓过表达miR-126可能通过靶向降低PIK3R2基因的蛋白表达,抑制肝癌细胞的迁移。     

miR-139-5p对人肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)-139-5p在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖、侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 采用生物信息学方法,从GEO数据库中下载GSE36915数据集,进行差异miRNA分析,结合TCGA-LICH数据集中的生存数据,筛选与预后显著相关的miRNA。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-139-5p在肝癌及其癌旁组织中的表达。利用CCK-8实验、Transwell实验观察miR-139-5p对人肝癌细胞SK-Hep-1和SMMC-7721的表型变化。采用高通量测序检测过表达miR-139-5p的SK-Hep-1细胞中基因表达的变化,确定miR-139-5p调控的潜在的信号通路和靶基因,并采用免疫印迹实验和报告基因实验进行验证。结果 通过对GSE36915数据集进行分析,共鉴定到50个显著差异表达的miRNA。结合TCGA-LICH数据集中的生存数据,发现在差异最显著的20个miRNA中,miR-15b-3p、miR-1180-3p、miR-139-5p、miR-139-3p与预后显著相关,最终确定miR-139-5p为进一步研究对象。mi...     

环状RNA circKDM4B调控肝癌细胞增殖及侵袭迁移的实验研究

目的 探索环状RNA circKDM4B对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭迁移的影响,明确其在肝癌进展中所发挥的调控作用。方法 采用核糖核酸酶R（RNase R）消化实验和荧光原位杂交实验（FISH）验证circKDM4B的环状结构稳定性及其在细胞中的定位;利用小干扰RNA（siRNA）敲减肝癌细胞circKDM4B的表达,并通过qRT-PCR实验验证敲减效率;采用细胞计数方法（CCK-8）实验、EdU增殖实验检测circKDM4B对肝癌细胞增殖的影响,流式细胞技术检测其对肝癌细胞凋亡的影响;同时应用划痕实验、Transwell实验检测circKDM4B对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果 相较于线性KDM4B mRNA,circKDM4B对RNase R耐受性更加稳定,FISH结果显示circKDM4B主要定位于肝癌细胞质中;在转染了circKDM4B siRNA后,circKDM4B在肝癌细胞表达下调,而亲本基因KDM4B不受影响。CCK-8和EdU增殖实验结果显示,敲减circKDM4B可抑制肝癌细胞的增殖;流式细胞实验显示敲减circKDM4B可明显促进肝癌细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验表明敲减circKDM4B后肝癌细胞的侵袭和迁移能力明显减弱。结论 circKDM4B稳定表达于肝癌细胞质中,并具有促进肝癌细胞增殖、侵袭迁移、抑制肝癌细胞凋亡的能力,这提示circKDM4B有望成为新的肝癌治疗靶点。     

姜黄素抑制肾癌ACHN细胞增殖及促凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对人肾癌ACHN细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素诱导ACHN细胞株凋亡的作用机制。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌ACHN细胞24 h后,应用MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;RT-PCR检测姜黄素对ACHN细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65 mRNA表达的影响;Western blot方法检测其对细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65I、κB蛋白表达的影响。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞24 h后,Bcl-2、NF-κBP65 mRNA水平下降,Bax mRNA水平升高(P0.05),Bcl-2、NF-κBP65蛋白表达量下降,BaxI、κB蛋白表达量升高(P0.05)。结论姜黄素通过上调IκB,下调NF-κB活性,调控凋亡基因Bcl-2/Bax的表达,抑制人肾癌ACHN细胞的增殖,诱导人肾癌ACHN细胞的凋亡。     

三氧化二砷抑制肝癌细胞侵袭转移的实验研究

目的了解三氧化二砷（As2O3）对肝癌HepG2细胞体外黏附、侵袭和迁移的抑制作用。方法采用MTT法观察As2O3对HepG2细胞黏附能力的影响,以Transwell检测As2O3对HepG2细胞迁移、侵袭能力的影响。结果As2O3作用后30、60、90、120min时的细胞黏附率较对照组均明显下降,不同时间组与对照组之间差异均有显著性（P〈0.05）;As2O3作用后游走及侵袭穿膜细胞数也较对照组明显下降（P〈0.01）。结论As2O3可明显抑制HepG2细胞细胞黏附、迁移和侵袭的能力。     

表柔比星+5-氟尿嘧啶、奥沙利铂对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的观察表柔比星、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶(5-FU)三种药物联合对人肝癌细胞株HepG2生长的影响,并探讨其可能发生的机制。方法设立空白对照组、表柔比星组、5-FU+奥沙利铂组、表柔比星+奥沙利铂+5-FU组。经MTT实验方法确认各药物48 h的IC50做为联合用药的浓度分别为表柔比星(3.44μmol/L)、5-FU(1.76 mmol/L)、奥沙利铂(6.89mmol/L),实时荧光定量PCR实验方法测定各组间Bcl-2基因、Bax基因表达的变化,Western blot实验方法测定各组间Bcl-2蛋白、Bax蛋白表达的变化。结果各用药组均够抑制HepG2细胞增殖、诱导细胞凋亡、增加Bax mRNA及Bax蛋白的表达,同时降低Bcl-2mRNA及Bcl-2蛋白的表达,且表柔比星+奥沙利铂+5-FU组的作用优于表柔比星组、奥沙利铂+5-FU组,差异有统计学意义(P0.01)。结论表柔比星+奥沙利铂+5-FU组能够明显抑制HepG2细胞的增殖,其联合作用可能通过促进Bax基因的表达,抑制Bcl-2基因的表达,从而加速肿瘤细胞的凋亡。     

5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞增殖与侵袭的影响及作用机制

目的 观察5-氮杂胞苷（5-Aza-CdR）对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖及侵袭的影响,并探讨其可能的机制。方法 常规方法培养SMMC-7721细胞,加入不同浓度的5-氮杂胞苷,以CCK-8法测定终浓度为0、5、10、25、50 umol/L的5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞作用24、48、72 h后增殖的影响,并计算细胞生长抑制率;Transwell小室侵袭实验检测各不同浓度5-氮杂胞苷处理SMMC-7721细胞后24 h后的细胞侵袭能力特点;Western blotting法检测Caspase-3、MMP-2的表达。结果 5-氮杂胞苷能显著抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖,并呈时间浓度依赖性（P＜0.05）;与对照组相比,随5-氮杂胞苷浓度增加Caspase-3明显增加,MMP-2蛋白表达量明显增加。结论 5-氮杂胞苷对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖有明显抑制作用,且表现为时间浓度依赖性,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达量,诱导细胞凋亡,及对细胞的直接毒性作用有关。5-氮杂胞苷能增强人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的侵袭能力,其机制可能与上调MMP-2蛋白表达量有关。     

Ku80高表达对肝癌SMMC7721细胞凋亡的影响

目的 观察Ku80高表达对SMMC7721肝癌细胞凋亡的影响。方法 将Ku80基因转染到SMMC7721细胞;流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果 筛选获得稳定高表达Ku80的克隆细胞;流式检测显示,Ku80高表达克隆的凋亡率(9.44±1.52)％和(9.26±1.72)％与对照组(1.81±0.15)％和(1.83±0.25％)比较轻度增高,差异有统计学意义(P ＜0.05);TUNEL实验显示,Ku80高表达克隆形成裸鼠皮下瘤的凋亡率(9.3±2.0)％和(10.0±2.1)％与对照组(3.5±1.0)％和(3.6±1.1)％比较轻度增高,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot检测显示,Ku80高表达克隆cleaved PARP-1、active Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达与对照组比较明显增高,bcl-2的表达减低,而bax无变化。结论 体内外实验均证实Ku80高表达可引起SMMC7721细胞凋亡轻度增加。     

miR-542-3p对肝癌细胞恶性生物学行为的影响及机制探讨

目的 探讨microRNA-542-3p(miR-542-3p)在人肝癌细胞系及组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响.方法 采用RT-PCR检测miR-542-3p在肝癌细胞系(HCCLM3、Hep3B、Huh7、SMMC-7721、MHCC-97H、MHCC-97L)以及人正常肝细胞LO2中的表达;...