三叶因子3在甲状腺乳头状癌TPC-1细胞上皮间质转化中的作用及机制

目的 探讨三叶因子3（TFF3）基因沉默对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞迁移、侵袭、克隆形成能力以及对上皮间质转化（EMT）的影响及机制。 方法 免疫组织化学技术检测甲状腺乳头状癌组织芯片中Snail与TFF3的表达。划痕实验、侵袭实验和克隆形成实验分别检测TFF3基因对TPC-1细胞迁移、侵袭和克隆能力的影响;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）、免疫印迹法和免疫细胞化学染色检测上皮间质转化标志物及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路相关蛋白的变化。 结果 31例甲状腺乳头状癌组织中,Snail蛋白于癌细胞胞质表达,31例癌旁组织阴性表达;Snail蛋白与TFF3表达呈正相关(r=0.8450,P<0.05)。TFF3基因沉默后,人TPC-1细胞的细胞迁移、侵袭和克隆形成能力均明显降低(P<0.01);TPC-1细胞上皮间质转化标志物及MAPK通路相关蛋白细胞外调节蛋白激酶（ERK）1/2和p-ERK1/2也显著降低(P<0.05)。 结论 沉默TFF3可能通过MAPK通路相关蛋白ERK1/2抑制上皮间质转化,降低TPC-1细胞迁移、侵袭和增殖能力。     

三叶因子3对甲状腺乳头状癌细胞周期的影响及机制

目的 探讨三叶因子3 (TFF3)基因沉默对人甲状腺乳头状癌TPC-1和BCPAP细胞增殖及细胞周期的影响及相关分子机制。 方法 包装TFF3 shRNA 慢病毒载体,病毒感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株;生长曲线和集落形成实验检测沉默TFF3后细胞增殖状况;流式细胞术检测TFF3基因对TPC-1和BCPAP细胞周期的影响;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测P27、P21和cyclin D1、周期蛋白依赖性激酶（CDK）4 mRNA的表达情况;免疫印迹法(Western blotting)、免疫细胞化学染色检测周期相关蛋白P27、P21、cyclin D1、CDK4和蛋白激酶B（Akt）、pAkt的蛋白表达水平。 结果 成功包装TFF3 shRNA 慢病毒载体,病毒液感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株;生长曲线和集落形成实验结果显示,沉默TFF3后,细胞增殖能力减弱;流式细胞术结果显示,与对照组相比,TFF3基因沉默组G₁期的细胞比例明显增高(*P<0.05),S和G2期的细胞比例明显下降（*P<0.05);TFF3沉默组TPC-1和BCPAP细胞中的P27、P21 mRNA和蛋白明显上调（*P<0.05),而cyclin D1,CDK4 mRNA和蛋白表达降低（*P<0.05);4株细胞Akt蛋白含量无明显差异,但沉默TFF3组磷酸化蛋白激酶B（pAkt）表达减弱;免疫细胞化学染色显示,cyclinD1阳性蛋白位于癌细胞胞核,P27、P21蛋白表达于胞质和胞核,且沉默TFF3后在细胞核中阳性信号增强,细胞质中阳性表达降低。 结论 沉默TFF3可明显延长甲状腺癌细胞周期,抑制细胞的增殖,可能与抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路相关蛋白的表达有关。     

三叶因子3在甲状腺乳头状癌TPC 1细胞株黏附中的作用机制

目的:探讨沉默三叶因子3(TFF3)表达对甲状腺乳头状癌(PTC)TPC-1细胞黏附作用的影响。方法:稳定敲低TFF3表达的TPC-1细胞株(shRNA-TFF3组)、转染空载体的TPC-1细胞株(shRNAC组)、TPC-1细胞(TPC-1组)分别进行同质黏附实验、异质黏附实验;qPCR检测TFF3mRNA及WNT/β-catenin信号通路关键分子β-catenin mRNA水平,免疫印迹和免疫细胞化学检测β-catenin、E-cadherin、ALCAM、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平。结果:细胞同质黏附实验显示shRNA-TFF3组黏附细胞数显著高于shRNAC组和TPC-1组。细胞异质实验显示shRNA-TFF3组黏附细胞数显著低于shRNAC组和TPC-1组,shRNAC组和TPC-1组同质和异质黏附数差异无统计学意义。qPCR结果显示shRNA-TFF3组TFF3mRNA、β-catenin mRNA水平显著低于shRNAC组和TPC-1组,shRNAC组和TPC-1组TFF3 mRNA、β-catenin mRNA水平差异无统计学意义。免疫细胞化学与免疫印迹结果显示沉默TFF3后ALCAM、MMP-9、MMP-2、β-catenin蛋白表达水平显著降低;E-cadherin蛋白表达水平显著升高,shRNAC组和TPC-1组差异无统计学意义。结论:敲低TFF3可能通过WNT/β-catenin信号通路影响PTC细胞TPC-1的黏附能力。     

RNA干扰TFF3基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨RNA干扰TFF3基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响。方法取60例卵巢癌患者的肿瘤标本,以相对应的癌旁正常卵巢组织标本作为对照组,免疫组织化学方法和real-time PCR法分别检测TFF3蛋白与mRNA的表达。构建针对人TFF3的shRNA表达载体,稳定转染卵巢癌SKOV3细胞株后,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。结果卵巢癌组织TFF3蛋白的阳性率和平均光密度值、TFF3mRNA的相对表达水平明显高于癌旁正常卵巢组织。沉默TFF3基因后,卵巢癌SKOV3细胞株增殖与侵袭能力显著降低(P0.01)。结论 TFF3在卵巢癌组织过表达,沉默TFF3基因可以降低SKOV3细胞的体外增殖及侵袭能力。     

三叶因子3/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/核因子-κB在人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖和凋亡中的作用

目的 探讨三叶因子3（TFF3）对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法 构建TFF3基因过表达和敲低表达的慢病毒表达载体,包装293T细胞,产生慢病毒颗粒,病毒液转染TPC-1细胞,构建稳定增强TFF3表达的TFF3-TPC-1细胞系以及增强对照组细胞系ConTFF3-TPC-1;构建抑制TFF3表达的shRNA-TFF3-TPC-1细胞系以及沉默对照组细胞系shCon-TPC-1;利用Western blotting实验与Real-time PCR验证TFF3过表达和沉默效率;生长曲线和集落形成实验检测4组细胞增殖状况;流式细胞术检测4组细胞凋亡情况;Western blotting和免疫细胞化学染色检测凋亡相关蛋白和磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）、核因子-κB (NF-κB)通路蛋白表达水平。结果 1. 成功构建TFF3过表达和抑制表达稳转细胞系TFF3-TPC-1及细胞系shRNA-TFF3-TPC-1;2. TFF3-TPC-1细胞增殖能力和集落形成能力明显高于ConTFF3-TPC-1组（P＜0.05或P＜0.01）,shRNA-TFF3-TPC-1细胞增殖能力和集落形成能力明显低于shCon-TPC-1组（P＜0.01）;3. TFF3-TPC-1细胞凋亡率低于ConTFF3-TPC-1（0.75%±0.08% vs 5.62%±0.3%,P＜0.01）,shRNA-TFF3-TPC-1凋亡率高于shCon TPC-1（22.2%±1.2 % vs 5.34%±0.4%,P＜0.01）; 4. 沉默TFF3基因后,Bax、细胞色素C（Cyt-C）、cleaved-Caspase-9、cleaved-Caspase-3表达升高,Bcl-2、通路蛋白Akt、p-Akt、NF-κB-P65表达降低（P＜0.05或 P＜0.01）。结论 TFF3可能通过影响PI3K/Akt/NF-κB信号通路调节TPC-1细胞的增殖和凋亡。     

miR-124靶向调节STAT3基因对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-124及STAT3在甲状腺乳头状癌组织中的表达,以及抑制或过表达miR-124对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 Real-time PCR法检测17例患者甲状腺乳头状癌组织及对应的癌旁组织中miR-124的表达,Western bolt法检测STAT3蛋白的表达。将miR-124 inhibitors及miR-124 mimics转染至甲状腺乳头状癌Kl细胞株,Western blot方法检测转染后STAT3蛋白的表达变化,CCK-8方法和克隆形成实验检测转染后Kl细胞的增殖和侵袭情况。结果 miR-124在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显低于癌旁组织,STAT3蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P0.01)。转染miR-124 inhibitors的K1细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著升高,细胞内STAT3蛋白表达亦明显升高(P0.01);转染miR-124 mimics的K1细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著降低,细胞内STAT3蛋白表达亦明显降低(P0.01)。结论 miR-124抑制甲状腺乳头状癌Kl细胞的增殖和侵袭可能与下调STAT3的表达相关。     

三叶因子3在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的 探讨甲状腺乳头状癌（PTC）患者血清与组织中三叶因子3(TFF3)的表达水平及意义。方法 收集甲状腺肿瘤患者153例,其中乳头状癌组66例、腺瘤组51例、乳头状增生组36例,正常组153例（来源于每例标本的正常甲状腺组织）。16例正常人血清标本作为ELISA检测的
正常组。采用免疫组织化学SP法和原位杂交技术检测甲状腺手术标本中TFF3蛋白和mRNA的表达;ELISA检测血清TFF3浓度。结果 1. TFF3蛋白和mRNA均表达于细胞质,呈棕黄色颗粒。66例乳头状癌TFF3表达阳性率92.42％;36例乳头状增生阳性率47.22%;51例腺瘤阳性率31.37％;正
常组阳性率25.40%;各组TFF3 mRNA阳性率略低于其蛋白,且与蛋白表达呈正相关（P.<0.0001）;甲状腺癌组积分吸光度显著高于其他3组（P<0.01）; 2. 甲状腺乳头状癌中TFF3及mRNA高表达率与TNM分期和淋巴结转移有关（P<0.01）; 3. 甲状腺癌组血清TFF3浓度明显高于乳头
状增生组、腺瘤组和健康对照组（P<0.001）。血清TFF3浓度在甲状腺癌组织阳性组明显高于阴性组（P<0.05）。结论 甲状腺乳头状癌高表达 TFF3蛋白及mRNA,检测血清TFF3浓度可能成为诊断甲状腺乳头状癌的筛选指标。     

下调YAP1基因对子宫内膜癌顺铂耐药细胞的影响及机制探究

目的 观察下调YAP1基因对子宫内膜癌顺铂耐药细胞的影响。方法 子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP分为Ishikawa/DDP-siRNA-YAP1组（转染siRNA-YAP1的细胞）、阴性对照组（转染siRNA-NC的细胞）和空白对照组（未经转染的细胞），MTT法及癌细胞单克隆形成数目检测细胞增殖，Transwell小室检测侵袭，划痕检测迁移，AnnexinV-FITC/PI双染法检测凋亡，免疫荧光检测自噬现象，Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和自噬相关蛋白LC3β、p62。结果 24 h、48 h、72 h,Ishikawa/DDP-siRNA-YAP1组OD值明显低于阴性对照组和空白对照组（P<0.05），细胞克隆数明显少于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）；细胞迁移率明显低于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）；细胞侵袭数明显少于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）；免疫荧光结果显示与阴性对照组和空白对照组比较，Ishikawa/DDP-siRNA-YAP1组绿色、红色以及黄色光点明显减少，即自噬小体堆积明...     

LncRNA(HOTAIR)/miR-206/TAGLN2信号轴调控甲状腺乳头状癌细胞的侵袭

目的 探讨lncRNA(HOTAIR)/miR-206/TAGLN2信号轴调控人甲状腺乳头状癌(PTC)细胞系TPC-1侵袭的分子机制。方法 收集兰州大学第一医院甲状腺乳头状癌组织和癌旁组织,用RT-qPCR和Western blot检测PTC组织和癌旁组织中HOTAIR、miR-206和TAGLN2的表达;构建miR-206过表达和HOTAIR低表达的TPC-1细胞。RT-qPCR和Western blot检测mRNA和蛋白的表达,Transwell小室法实验检测TPC-1细胞系的侵袭能力。结果 与癌旁组织相比PTC组织中HOTAIR表达量增加2.48倍,miR-206-5p表达量降低至0.6,TAGLN2及其蛋白表达量增加(P<0.05);过表达miR-206后,TPC-1细胞中TAGLN2的蛋白表达量减少(P<0.05),且TPC-1细胞的侵袭能力受到了抑制。敲低HOTAIR后,TPC-1细胞中miR-206表达增加,TAGLN2表达降低,同时TPC-1细胞的侵袭能力也明显降低(P<0.05)。结论 在甲状腺乳头状癌中,降低HOTAIR的表达水平,可促成miR-...     

KLF4 在弥漫性大B 细胞淋巴瘤组织中的表达及其作用机制研究

目的:探讨KLF4在弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中的表达及其对弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法:选择弥漫性大B细胞淋巴瘤石蜡组织标本60例和淋巴结反应增生患者的淋巴结石蜡组织标本60例,免疫组化法测定组织中KLF4表达。Western blot和RT-PCR测定弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系ly1细胞和人B淋巴母细胞系HMy2.CIR细胞中KLF4蛋白、mRNA水平。ly1细胞分为空白对照组(不转染病毒)、阴性对照组(转染阴性对照病毒)和过表达KLF4组(转染过表达KLF4病毒),Western blot和RT-PCR测定ly1细胞中KLF4蛋白、mRNA水平,CCK-8测定转染后ly1细胞增殖情况,Transwell小室法测定转染后ly1细胞侵袭和迁移能力,Western blot法测定转染后三组ly1细胞Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K蛋白水平。结果:弥漫性大B细胞淋巴瘤组织B细胞中KLF4阳性表达率(30.0%)低于对照组织B细胞(100.0%)(P0.05)。ly1细胞中KLF4蛋白和mRNA水平低于HMy2.CIR细胞(P0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,过表达KLF4组ly1细胞中KLF4蛋白和mRNA水平升高(P0.05),A值降低(P0.05),侵袭和迁移细胞数降低(P0.05),p-Akt、p-PI3K蛋白水平降低(P0.05),空白对照组和阴性对照组ly1细胞中各指标比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中KLF4水平降低,过表达KLF4可能通过PI3K/Akt信号通路抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖和侵袭迁移。     

miRNA-145对结肠癌细胞体外增殖、侵袭、凋亡的影响

目的:探讨miRNA-145对结肠癌细胞体外增殖、侵袭、凋亡的影响。方法:采用脂质体转染法转染miRNA-145拟似物、阻遏物和阴性对照物至HCT116细胞,采用荧光实时定量PCR法检测细胞内miRNA-145表达,采用MTT法检测细胞增殖活性,采用Transwell小室法检测HCT116细胞侵袭,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测转染后HCT116细胞凋亡情况。结果:转染后24 h、48 h、72 h时拟似物转染组细胞增殖活性显著低于空白对照组、阴性对照组和阻遏物转染组(P0. 05),空白对照组和阴性对照组细胞增殖活性差异无统计学意义(P0. 05),阻遏物转染组细胞增殖活性显著高于空白对照组、阴性对照组和拟似物转染组(P0. 05)。转染24 h、48 h、72 h时拟似物转染组miRNA-145表达显著高于空白对照组、阴性对照组和阻遏物转染组,阻遏物转染组miRNA-145表达显著低于拟似物转染组、空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P0. 05);空白对照组和阴性对照组miRNA-145表达水平差异均无统计学意义(P0. 05)。Transwell小室法检测结果显示,拟似物转染组穿膜细胞数显著少于空白对照组、阴性对照组和阻遏物转染组,阻遏物转染组穿膜细胞数显著多于空白对照组、阴性对照组和拟似物转染组,差异均有统计学意义(P0. 05);空白对照组和阴性对照组穿膜细胞数相比较差异均无统计学意义(P0. 05)。Annexin V-FITC/PI双染法检查结果显示,拟似物转染组细胞凋亡率显著高于空白对照组、阴性对照组和阻遏物转染组,阻遏物转染组细胞凋亡率显著低于空白对照组、阴性对照组和拟似物转染组,差异均有统计学意义(P0. 05);空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率相比较差异无统计学意义(P0. 05)。结论:miRNA-145表达异常是影响HCT116细胞增殖、侵袭、凋亡重要因素,为新的基因靶点的药物开发提供了思路。     

小干扰RNA沉默垂体瘤转化基因1对人胶质瘤U251细胞增殖侵袭的影响

目的 探讨小干扰RNA沉默垂体瘤转化基因l (PTTG1)对人胶质瘤U251细胞增殖侵袭的影响及可能机制。方法 设计靶向沉默PTTG1的siRNA,将U251细胞随机分为PTTG1基因沉默组、阴性对照组和空白组,PTTG1基因沉默组U251细胞转染PTTG1-siRNA,阴性对照组细胞转染无关序列,空白组细胞不转染任何序列。转染后继续培养48 h,采用real-time PCR与Western blot方法鉴定转染结果,MTT方法和transwell实验分别检测细胞的增殖能力与侵袭能力,Western blot方法检测U251细胞中p-Akt、基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)的表达。结果 PTTG1基因沉默组U251细胞中PTTG1 mRNA和蛋白表达显著低于阴性对照组和空白组（P<0.01）,结果提示转染成功。与空白对照组及阴性对照组比较,PTTG1基因沉默组U251细胞活力显著降低,侵袭能力显著降低,p-Akt、MMP-2/9的表达显著降低（P<0.01）。结论 沉默PTTG1基因可以抑制U251细胞的增殖和侵袭,PTTG1有望成为胶质瘤靶向治疗的新靶点。     

β-catenin在食管癌侵袭转移过程中的作用

目的探讨β-catenin在食管癌侵袭转移过程中的作用。方法转染有效的β-catenin基因siRNA干扰片段于食管癌Eca-109细胞中,下调β-catenin表达:CCK-8增殖实验检测沉默该基因对食管癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室实验检测对其侵袭、迁移能力的影响;Western blot法检测β-catenin表达下调后WISP2、TCF4及E-cadherin蛋白表达。结果 CCK-8增殖实验结果显示,干扰组(siRNA干扰片段有效转染的下调β-catenin组)细胞增殖能力明显低于空白对照组(未处理组)及阴性对照组(转染无意义片段组)(P0.05),而空白对照组与阴性对照组之间差异无统计学意义(P0.05)。Transwell小室实验结果显示,干扰组迁移、侵袭能力均低于空白对照组及阴性对照组(P0.05)。Western blot结果显示,WISP2、E-cadherin蛋白在干扰组中的表达量高于空白对照组及阴性对照组(P0.05);TCF4蛋白在干扰组中的表达量低于空白对照组及阴性对照组(P0.05)。结论在食管癌细胞中,下调β-catenin后,Wnt信号通路的相关因子也出现明显改变,推测沉默食管癌中Wnt信号通路β-catenin因子,E-cadherin表达增加,抑制上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT),阻碍食管癌细胞增殖,通过减少TCF4表达,促进下游靶基因WISP2表达,从而抑制肿瘤细胞侵袭、转移;β-catenin基因有望成为靶向治疗食管癌的候选基因。     

长链非编码RNA HOTAIR对甲状腺癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响及机制的研究

目的 探讨长链非编码RNA HOTAIR对甲状腺癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响及可能机制.方法 体外培养甲状腺癌TPC-1细胞,转染lncRNA HOTAIR干扰序列,应用实时定量PCR检测lncRNA HOTAIR和miR-20b的表达,生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA HOTAIR和miR-20b的靶向关系,MTT法检测各组TPC-1细胞增殖能力,Transwell实验检测各组TPC-1细胞的侵袭能力.结果 转染lncRNA HOTAIR干扰序列能够降低TPC-1细胞lncRNA HOTAIR的表达后,上调miR-20b的表达(P＜0.05);沉默lncRNA HOTAIR表达后,TPC-1细胞的增殖与侵袭能力下降(P＜0.05);生物信息学分析及双荧光素酶实验结果显示,lncRNA HOTAIR可以靶向调控miR-20b.结论 沉默lncRNA HOTAIR可以抑制甲状腺癌细胞TPC-1的增殖和侵袭,其机制可能与靶向调控miR-20b表达有关.     

膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨膜联蛋白A5(ANXA5)低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响。方法将细胞分为干扰组、阴性对照组、转染试剂对照组和空白对照组,采用脂质体转染法将siRNA转染干扰组HeLa细胞,在转染72h后采用RT-PCR和Western blotting检测各组ANXA5的表达以鉴定抑制效率;细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组HeLa细胞的侵袭能力;RT-PCR和Western blotting分别检测ANXA5低表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA及蛋白表达的影响。结果干扰组ANXA5蛋白及mRNA的表达均明显低于阴性对照组(P0.05);其表达均被显著抑制,干扰组细胞的迁移及侵袭能力比阴性对照组明显增强(P0.05),E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组(P0.05);干扰组MMP-9mRNA及蛋白的表达均显著高于阴性对照组(P0.05)。结论靶向ANXA5的siRNA可有效抑制ANXA5的表达,且ANXA5低表达可能通过影响E-cadherin和MMP-9的表达来促进HeLa细胞的迁移和侵袭能力。     

LncRNA LUCAT1介导的miR-199b-5p/MAPKAPK3轴在甲状腺乳头状癌发展中的调控作用及机制

目的 探究lncRNA LUCAT1对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和EMT的影响,并进一步探究miR-199b-5p/MAPKAPK3轴在其中发挥的作用。方法 RT-qPCR检测甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中LUCAT1、miR-199b-5p和MAPKAPK3表达;生物信息学预测miR-199b-5p与LUCAT1或MAPKAPK3的潜在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证miR-199b-5p与LUCAT1或MAPKAPK3结合。将TPC-1细胞分为sh-NC组、sh-LUCAT1组、sh-LUCAT1+inhibitor NC组、sh-LUCAT1+miR-199b-5p inhibitor组和sh-LUCAT1+miR-199b-5p inhibitor+sh-MAPKAPK3组;Western blot检测各组细胞MAPKAPK3蛋白表达水平;CCK-8实验检测各组细胞增殖活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;Western blot方法检测各组细胞EMT相关蛋白表达水平。结果 甲状腺乳头状癌组织中LUCA...     

高表达miR-20b对甲状腺癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响及可能机制

目的 探究高表达miR-20b对甲状腺癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响及其可能机制.方法 将TPC-1细胞分为空白对照组、miR-NC组(转染阴性对照miR-NC)和miR-20b模拟物组(转染miR-20b mimics),实时定量PCR和Western blot检测各组细胞miR-20b和CCND1的表达,双荧光素...     

卵巢癌中SMS1对细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨沉默神经鞘磷脂合成酶1(sphingomyelin synthase 1, SMS1)对卵巢癌细胞HO8910增殖、侵袭和迁移的影响。方法体外培养卵巢癌HO8910细胞株,设计siRNA-SMS1序列,转染细胞,分为阴性对照组(negative control, NC)、空白对照组(blank control, BC)、siRNA组;利用qRT-PCR技术检测各组细胞SMS1 mRNA相对表达量。MTT法检测HO8910细胞增殖情况、划痕实验检测转染后HO8910细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。薄层层析法检测HO8910细胞中SMS1活性、Cer水平。酸性神经鞘磷脂(sphingomyelin, SM)酶试剂盒、卵磷脂(phosphatidylcholine, PC)试剂盒分别检测HO8910细胞中SM、PC水平。结果卵巢癌细胞中SMS1 mRMA及蛋白相对表达量比正常卵巢细胞显著升高(P0.05);转染48 h后,siRNA组细胞中SMS1 mRMA及蛋白相对表达量、SMS1酶活性比NC组与BC组均显著降低(P0.05);siRNA-SMS1组A570比BC组与NC组显著降低(P0.05);迁移指数、侵袭细胞数较BC组与NC组显著降低(P0.05);与NC、BC组相比,siRNA组HO8910细胞中SM水平显著降低(P0.05),Cer水平显著升高(P0.05)。结论 SMS1基因沉默可抑制卵巢癌HO8910细胞增殖、迁移及侵袭能力,可能与下调细胞中SM水平、上调Cer水平有关。     

LncRNA TUG1靶向miR-141-3p影响甲状腺癌细胞的增殖和侵袭

目的 检测LncRNA TUG1在甲状腺癌细胞中的表达,初步探讨LncRNA TUG1对甲状腺癌细胞增殖和侵袭的影响及机制。方法 采用qRT-PCR法检测甲状腺癌B-CPAP、TPC-1细胞株中LncRNA TUG1和miR-141-3p的表达水平,应用生物信息学预测lncRNA TUG1和miR-141-3p的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验进行验证。将lncRNA TUG1干扰序列转染TPC-1细胞,应用qRT-PCR法检测lncRNA TUG1和miR-141-3p的表达,MTT法检测各组TPC-1细胞增殖能力,Transwell实验检测各组TPC-1细胞的侵袭能力。结果 与正常甲状腺上皮细胞相比,BCPAP、TPC-1中LncRNA TUG1表达水平明显升高（P<0.05）,miR-141-3p表达水平明显下降（P<0.05）,生物信息学分析及双荧光素酶实验结果显示,lncRNA TUG1可以靶向调控miR-141-3p。转染TUG1干扰序列能够降低TPC-1细胞lncRNA TUG1的表达,上调miR-141-3p的表达（P<0.05）;沉默lncRNA T...     

FABP-5基因沉默对肝癌Bel-7402细胞生物学特性及人参川穹嗪敏感性的影响

目的探讨通过siRNA干扰技术沉默表皮脂肪酸结合蛋白-5(FABP-5)基因表达对人肝癌Bel-7402细胞生物学特性及人参川穹嗪敏感性的影响。方法以人肝癌Bel-7402细胞为研究对象,根据FABP-5mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,瞬时转染Bel-7402细胞。将人肝癌Bel-7402细胞分为FABP-5siRNA组、阴性对照组、空白对照组。用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测FABP-5基因的表达;CCK8法测定细胞体外增殖能力;流式细胞技术检测各组细胞周期和凋亡的变化情况;细胞侵袭小室法检测各组细胞的体外侵袭力;MTT法观察FABP-5基因沉默后Bel-7402细胞对人参川穹嗪的敏感性。结果 RT-PCR和Western blot显示,FABP-5 siRNA组较阴性对照组和空白对照组的FABP-5 mRNA和蛋白表达都明显下降;FABP-5 siRNA组细胞的生长速度明显减慢,细胞周期阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少;与阴性对照组和空白对照组相比,FABP-5 siRNA组细胞的凋亡率明显升高(P0.01),增殖、侵袭能力显著下降(P0.05);FABP-5 siRNA组细胞对人参川穹嗪的敏感性显著增强(P0.05)。结论特异性沉默FABP-5基因表达能够降低肝癌细胞的侵袭能力,抑制细胞的增殖,将细胞周期阻滞于G_0/G_1期,使其凋亡显著增加。