促红细胞生成素的神经保护作用

促红细胞生成素 (EPO)是一个调节血细胞生成的细胞因子 ,近来发现EPO在大脑中广泛存在 ,具有神经保护作用 ,其保护机制为抗神经细胞凋亡、抗氧化、抗炎症和维持脑血管结构和功能正常。EPO神经保护作用具有时间、剂量依赖性。     

Ⅱ.人类神经突生长的一种抑制蛋白

人们普遍认为成年的中枢神经不能再生[1,2]的原因,和胶质疤痕的空间阻碍作用、促神经生长因子的缺乏及髓鞘抑制因子的存在有关[3-5].这些抑制因子包括:蛋白多糖[6],髓鞘相关的糖蛋白[3,5]以及牛脑中被称为Nogo的两种蛋白[7-9].我们用牛的相关序列获得了人Nogo基因,并分离了其cDNA克隆.蛋白包含三个异构体,对神经突的生长有抑制作用,可能阻碍中枢神经的再生.     

促红细胞生成素的神经保护作用

EPO主要的生理功能是调节红细胞生成，而研究发现EPO系统在神经系统的广泛分布，提示其可能对中枢神经系统具有重要作用。EPO还对缺血缺氧神经系统具有保护作用并具有临床应用前景。EPO发挥神经保护作用主要通过活化特异性受体、激活下游的多种信号转导通路及通过多种可能的作用机制发挥缺氧神经保护作用。     

氨基甲酰促红细胞生成素对氧糖剥夺条件下神经干细胞保护作用的研究

目的 研究氨基甲酰促红细胞生成素（CEPO）对体外神经干细胞缺氧缺血性损伤的保护作用.方法 从孕14-16 d大鼠获得神经干细胞,经过培养并传代,对所获细胞的自我增殖、自我更新及多分化潜能进行检测.取第3代神经干细胞中添加CEPO,在氧糖剥夺（OGD）条件下培养2 h.通过TUNEL法计数神经干细胞凋亡率和MTT法检测神经干细胞的存活情况.采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测神经干细胞分泌IFN-γ的情况.应用流式细胞仪检测MHC-Ⅱ在神经干细胞中的表达.结果 在OGD环境中,细胞凋亡率达58.97%,存活率为39.46%,IFN-γ和MHC-Ⅱ类分子的表达分别为78.47 pg/ml和35.68%,加入CEPO后神经干细胞的凋亡率下降至30.15%,存活率升高至75.84%,IFN-γ（15.35 pg/ml）和MHC-Ⅱ类分子的表达均下降（9.77%）.结论 CEPO对神经干细胞缺氧缺血性损伤具有明显的保护作用,而且对炎症分子IFN-γ和免疫分子MHC-Ⅱ类分子的表达具有调节作用.     

红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液对神经干细胞促分化作用及对分化后细胞的保护作用

目的 观察红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液（EACM）对神经干细胞促分化作用及对分化后细胞的保护作用。 方法 原代培养神经干细胞和1型星形胶质细胞,收集红细胞生成素(EPO)刺激的星形胶质细胞上清液,用于神经干细胞分化实验的研究。对分化后的细胞进行免疫细胞化学染色,计算其分化为神经元的比率;同时利用FeSO₄和H₂O₂制造细胞损伤模型,用EACM继续培养48h,然后检测细胞活性和存活细胞数。 结果 EACM组神经干细胞分化明显,神经元比率较星形胶质细胞上清组和对照组均有明显增加。分化后的细胞中加入H₂O₂后,继续用EACM培养的实验组吸光度(A)值和细胞存活百分比均较对照组高。 结论 红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液对神经干细胞有促其向神经元分化的作用,并对分化后的细胞有保护作用。     

EPO对体外培养的神经干细胞增殖、分化和凋亡的影响

为探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对大鼠神经干细胞增殖、分化和凋亡的影响,本研究采用显微解剖、机械吹打和无血清悬浮培养方法分离培养大鼠神经干细胞,向培养基中添加不同剂量的EPO,通过计数干细胞克隆形成率、四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测法检测神经干细胞的增殖情况,用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色和激光扫描共聚焦显微镜检测细胞凋亡率;向有血清分化培养基中加入不同剂量的EPO,以神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibril-lary acidic protein,GFAP)免疫荧光染色检测神经干细胞的分化情况。结果显示:与对照组相比,加入>5U/mlEPO后神经干细胞克隆形成率和MTT检测OD值明显增高,而凋亡率显著下降,分化培养后NSE阳性细胞较对照组明显增多。结果提示:EPO可促进大鼠神经干细胞的增殖,抑制其凋亡,促进其向神经元方向分化。     

促红细胞生成素对压力超负荷小鼠心肌保护作用的相关分子机制

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对压力超负荷小鼠心肌保护作用的分子机制。方法采用主动脉弓缩窄术(TAC)的方法建立小鼠模型,小鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(TAC-PBS)和EPO2000U/Kg治疗组(TAC-EPO2000)。术后8周,测定各组小鼠心肌毛细血管密度及生存率,Western blot方法检测各组小鼠心肌组织p Akt/Akt、p-STAT3/STAT3、p-e NOS/e NOS、p-p38/p38、p-ERK/ERK-1、p-JNK/JNK的表达。结果 EPO治疗能显著提高TAC小鼠生存率(P0.05)。与TAC-PBS组比较,TAC-EPO2000心肌组织p-STAT3、p Akt和p-e NOS的表达水平显著增多(P0.05),p-p38的表达水平显著减少(P0.05),p-ERK/ERK-1,p-JNK/JNK则无明显差异(P0.05)。各组小鼠心肌毛细血管密度没有明显差异。结论 EPO对压力超负荷小鼠心肌保护作用可能与调控p-STAT3、p Akt、p-e NOS和p-p38的表达相关。     

神经干细胞移植联合氨基甲酰促红细胞生成素对脑瘫大鼠的作用及机制

目的研究神经干细胞（NSCs）移植联合氨基甲酰促红细胞生成素（CEPO）对新生脑瘫大鼠脑损伤的保护作用。方法从孕14～16天大鼠获得神经干细胞,经过培养并传代后备用。利用7日龄wistar大鼠制作脑瘫模型,给予CEPO腹腔注射和神经干细胞移植,对神经干细胞移植后的分化、凋亡情况,免疫分子在移植前后的改变,大鼠神经系统功能检测等各项指标进行评估,并与单-神经干细胞移植、CEPO腹腔注射效果进行比较。结果缺氧缺血脑损伤后,IFN-γ和IL-1β的浓度显著提高（P〈0．05）,MHC的含量增加,大鼠学习能力下降（P〈0．05）。联合应用CEPO和神经干细胞移植可使移植细胞存活率提高并向神经元分化,降低血中IFN-γ和IL-1β水平,调节MHC抗原的表达,进而明显改善大鼠的神经运动功能。结论应用CEPO可促进移植细胞存活,调节免疫分子的分泌,改善细胞存活的环境,对移植细胞具有明显的保护作用。     

促红细胞生成素体外诱导神经干细胞的分化

背景：近年来,神经干细胞被认为是治疗脊髓损伤的理想移植细胞,但其在宿主体内自然分化为神经元的比例较低,严重制约了其修复脊髓损伤的效果。 目的：分析促红细胞生成素体外诱导神经干细胞分化的作用。 方法：从新生 Wistar 大鼠海马组织中无菌条件下分离神经干细胞,进行体外分离、培养及免疫荧光鉴定。然后取第3代的神经干细胞,随机分为0.5,5,50 U/mL促红细胞生成素组和对照组,分别加入0.5,5,50,0 U/mL促红细胞生成素。 结果与结论：0.5,5,50 U/mL促红细胞生成素组神经元的转化率较对照组明显提高(P < 0.05),5,50 U/mL促红细胞生成素组神经元的转化率高于0.5 U/mL促红细胞生成素组(P < 0.05),但5,50 U/mL促红细胞生成素组中神经元数量接近(P > 0.05)。说明促红细胞生成素在体外能够有效地诱导神经干细胞向神经元的分化,并可明显提高其向神经元的转化率。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

促红细胞生成素体外培养鼠胚脑皮质神经干细胞的分化

背景：促红细胞生成素最早作为生长因子被认识,近些年来其对中枢神经系统保护作用的体内研究较多。 目的：观察促红细胞生成素对体外培养大鼠胚脑皮质神经干细胞凋亡及分化的影响。 方法：无菌条件下取孕14 d SD大鼠胚脑皮质,体外先悬浮增殖培养后贴壁诱导分化。巢蛋白免疫细胞荧光染色检测神经干细胞,以微管相关蛋白2、神经胶质原纤维酸性蛋白检测神经干细胞分化。取第3代神经干细胞向培养基中添加0.5,5,50,500 U/mL的促红细胞生成素,另设不添加促红细胞生成素的对照组。应用半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3检测神经干细胞凋亡,微管相关蛋白2检测神经干细胞向神经元方向的分化。 结果与结论：加入≥5 U/mL促红细胞生成素,神经球内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达显著下降(P < 0.01),分化培养后微管相关蛋白2阳性细胞较对照组明显升高(P < 0.01)。提示促红细胞生成素可降低体外培养鼠胚脑皮质神经干细胞的凋亡率,促进其神经干细胞向神经元方向分化。     

促红细胞生成素对小鼠诱导多能干细胞源性神经干细胞向功能性神经元样细胞分化的影响

目的:探讨促红细胞生成素体外对小鼠诱导多能干细胞(iPSCs)来源的神经干细胞神经分化的影响。方法:神经干细胞培养基培养诱导iPSCs分化为神经干细胞,设4个浓度加入含促红细胞生成素的培养基,免疫细胞化学荧光鉴定神经元标志物微管相关蛋白2(MAP-2)、神经干细胞标志物巢蛋白的表达。FM 1-43染色技术观察FM 1-43染色颗粒消失的情况。结果:iPSCs在条件培养液的诱导下形成神经干细胞克隆,15 U/ml促红细胞生成素处理后神经干细胞克隆球向神经元方向分化,呈MAP-2阳性细胞。新分化的神经元有大量FM 1-43绿色阳性颗粒。结论:iPSCs体外诱导可获得神经干细胞,促红细胞生成素浓度为15 U/ml时可促进iPSCs源性神经干细胞向功能性的神经元方向分化。     

重组人促红细胞生成素对脑缺血再灌注小鼠海马水通道蛋白-1表达的作用

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rHuEPO)对脑缺血再灌注小鼠水通道蛋白-1(aquaporin1,AQP1)表达的作用。方法 96只昆明小鼠随机分为假手术组(Sham)、rHuEPO治疗组、缺血再灌注组(I/R),每组32只,依据缺血后再灌注不同时间点再细分6h、24h、3d、7d四个小组。利用免疫组织化学方法检测各组小鼠海马组织AQP1的表达;利用Westernblot方法检测各组小鼠海马AQP1的表达。结果免疫组化和Westernblot结果发现,缺血再灌注组AQP1蛋白表达量明显高于假手术组(P<0.05),而rHuEPO治疗组AQP1蛋白表达量则明显少于缺血再灌注组(P<0.05)。结论 rHuEPO能够下调脑缺血再灌注小鼠AQP1的表达。     

NF-κB介导促红细胞生成素神经细胞保护作用的研究

目的：观察促红细胞生成素（EPO）对谷氨酸（Glu）诱导的大脑皮质神经元损伤的保护作用和核因子-κB（NF-κB）介导的细胞内信号转导机制。方法：采用1日龄Wistar大鼠皮层神经细胞体外原代培养技术,建立Glu兴奋性毒性神经细胞损伤模型。实验分为正常对照组、Glu组、EPO组和吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC,NF-κB活化阻断剂）组。倒置显微镜下观察细胞的形态学改变;MTT法测定细胞存活率;流式细胞术测定细胞凋亡率评价细胞损伤程度。结果：Glu处理后神经细胞形态明显受损,EPO组神经细胞形态趋于正常,PDTC组细胞形态与Glu组相似;与正常对照组相比,Glu组神经细胞存活率明显下降、凋亡率明显升高,差异均有统计学意义（P〈0.01）;而与Glu组相比,EPO组神经细胞存活率明显增高下降、凋亡率明显下降,差异均有统计学意义（P〈0.01）。与EPO组相比,PDTC组细胞存活率明显下降、凋亡率明显升高,差异均有统计学意义（P〈0.01）,这些变化与Glu组相似。结论：EPO对Glu诱导的大脑皮质神经元损伤的具有保护作用,其胞内信号转导机制涉及到NF-κB的活化。     

Jagged1蛋白抑制神经干细胞向神经元分化的实验

目的：研究Jagged1蛋白对神经干细胞分化的影响。方法：分离小鼠胚胎脑神经干细胞,用Jagged1蛋白、Jagged1蛋白 γ泌肽酶体外诱导神经干细胞分化,观察分化后神经元所占的比例。结果：分离的细胞能持续增殖,并能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞;在Jagged1蛋白的影响下,分化后神经元数量明显减少;γ泌肽酶抑制剂能阻断Jagged1蛋白的诱导作用。结论：培养的细胞为神经干细胞,并表达Notch受体;Jagged1蛋白能抑制干细胞向神经元分化,这种分化作用是通过Notch受体实现的。     

逆转EphB2的缺乏可以改善AD小鼠的认知功能

阿尔茨海默病(AD)中,Aβ寡聚物通过消弱神经元NMDA型谷氨酸受体的作用导致认知功能障碍,而NMDA型谷氨酸受体的功能受到受体赖氨酸激酶EphB2的调节。EphB2胞外有三个结构域:配体结合结构域(LB)、富含半胱氨酸结构域(CR)、Ⅲ型纤维连接蛋白重复结构域(FN)。实验证实Aβ寡聚物与EphB2的结合区域为FN,Aβ寡聚物结合到NMDA的FN区域后可促使蛋白酶体内EphB2的降解从而降低EphB2的水平。已知转基因hAPP小鼠模型和AD患者的大脑记忆相关区域均可检测到EphB2的耗竭。为确定EphB2的缺乏是否会干扰NMDA受体依赖功能,美国科学家通过导入慢病毒载体来改变小鼠大脑记忆中心位置神经元表达EphB2。通过短发夹RNA介导基因沉默技术的使齿状回EphB2表达降低可使非转基因小鼠     

G蛋白偶联受体激酶2活性和表达的调控及其在治疗恶性肿瘤中的作用

G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族,广泛分布于各种组织中,能够特异性的使活化的G蛋白偶联受体(GPCRs)发生磷酸化及脱敏,从而终止GPCRs介导的信号传导通路。GRK2不仅能够调节GPCRs和非GPCRs,其自身活性和表达也可受到多种因素的调节。GRK2具有多种不同的生理及病理作用,其涉及的许多信号通路与恶性肿瘤的发生发展密切相关。     

不同浓度重组人促红细胞生成素对神经干细胞体外培养增殖的影响

背景：重组人促红细胞生成素是一种糖蛋白,近年的研究表明其对神经细胞的许多功能活动均具有调节作用。 目的：观察不同浓度重组人促红细胞生成素对神经干细胞体外培养增殖的影响。 方法：提取新生SD大鼠神经干细胞,用含不同浓度(5,50,500 U/mL)重组人促红细胞生成素和20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养基进行培养,以不含重组人促红细胞生成素无血清培养基为对照组。细胞培养7 d后计算神经干细胞克隆形成率,培养10 d后计数NSE和GFAP免疫阳性细胞数。 结果与结论：添加重组人促红细胞生成素组细胞增殖较快,最终神经球的数量多于对照组,以50 U/mL重组人促红细胞生成素组作用显著;50 U/mL重组人促红细胞生成素组的生长速度显著快于对照组。50 U/mL重组人促红细胞生成素组中NSE和GFAP免疫阳性细胞明显多于对照组(P < 0.01)。结果表明重组人促红细胞生成素对神经干细胞体外培养增殖有促进作用,尤以适中浓度(50 U/mL) 作用更加明显。     

Olig2对胚胎干细胞向神经前体细胞分化过程中Nestin蛋白表达的影响

目的:探讨碱性螺旋-环-螺旋家族的少突胶质细胞转录因子2(Olig2)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)向神经前体细胞(NPCs)分化过程中巢蛋白(Nestin)表达的影响。方法:将mESCs分为正常组、空载体组和Olig2转染组,用含有RA、Purmorphamine、bF GF和PDGF-AA的培养基将其诱导分化为NPCs;分别在诱导分化的第11 d和14 d,用免疫细胞化学荧光染色和蛋白免疫印迹法检测其神经前体细胞特异性标记物巢蛋白(Nestin)的表达情况。结果:经Olig2-GV218慢病毒转染后的mE SCs,Olig2蛋白的表达较正常组和空载体组明显增强;诱导分化后11 d,三组细胞Nestin蛋白表达无明显区别;14 d时,正常组和空载体组仍能检测到较高的Nestin蛋白表达,而Olig2转染组Nestin蛋白的表达明显减弱。结论:mESCs向NPCs分化过程,过表达Olig2可降低Nestin蛋白的表达。     

H2O2对大鼠骨骼肌卫星细胞凋亡和线粒体膜电位的影响及EPO的保护作用

目的: 探讨过氧化氢(H2O2)对大鼠骨骼肌卫星细胞(SMSC)凋亡和线粒体膜电位(MMP)的影响以及促红细胞生成素(EPO)的保护作用。方法: 取体外培养的骨骼肌卫星细胞,随机分为正常对照组、H2O2组、H2O2+EPO组,采用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率和MMP的平均荧光强度,Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学变化。结果: H2O2组凋亡发生率最高,为(22.13±1.79)%,经10、20、40 kU/L浓度的EPO预处理后凋亡率分别为(16.47±2.53)%、(4.97±0.55)%、(2.93±0.47)%;H2O2干预组MMP最低,为9.70±0.09,经10、20、40 kU/L浓度的EPO预处理后MMP分别为12.67±0.32、27.90±0.66、44.53±0.93,对照组凋亡率为(1.93±0.57)%,MMP为51.37±0.64;在H2O2干预组和低剂量EPO预干预组,Hoechst 33258染色呈现明显的凋亡征象。结论: EPO可抑制H2O2诱导的细胞凋亡并稳定线粒体膜电位。