全反式维甲酸对骨髓基质细胞黏附功能及JWA基因表达变化的影响

目的探讨全反式维甲酸对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSC)黏附功能及JWA基因表达的影响.方法全反式维甲酸(all trans retinoic acid, atRA)作用BMSC后,流式细胞仪检测BMSC细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)和血管黏附分子-1(vascular adhesion molecule-1, VCAM-1)的表达,检测共培养条件下BMSC细胞对Jurkat细胞的黏附率及Jurkat细胞生长曲线变化,RT-PCR方法检测BMSC JWA mRNA表达变化.结果 atRA作用后,BMSC表面ICAM-1、VCAM-1蛋白表达增加,BMSC对Jurkat细胞的黏附能力增强,并可促进Jurkat细胞增殖,BMSC内JWA-mRNA表达增强.结论 atRA可增强骨髓基质细胞黏附功能,并上调JWA基因表达.     

大黄素对AGZY-83A细胞内Ki-67抗原表达的影响

目的通过研究Ki-67抗原的表达探讨大黄素对人肺腺癌AGZY-83A细胞体外生长的抑制作用。方法采用免疫组化方法观察Ki-67在不同浓度大黄素作用后的AGZY-83A中的表达。结果Ki-67在细胞中的表达随大黄素浓度的增加明显降低。结论大黄素能有效抑制肺腺癌细胞AGZY-83A的增殖,并具有量效的关系,其可能机制是干扰了肿瘤细胞周期的进程。     

ox-LDL对PLGF作用内皮细胞释放NO和内皮细胞黏附分子的影响

目的：探讨氧化型低密度脂蛋白对胎盘生长因子-1作用人脐静脉内皮细胞释放一氧化氮和内皮细胞黏附分子的影响。方法：在ox-LDL（25μg／mL）条件下,应用不同浓度的PLGF-1（20、40、80ng／mL）孵育ECV-304,对照组为内皮细胞未受损时,相同浓度梯度的PLGF-1孵育ECV-304,3h、6h、12h、24h后应用ELISA法检测内皮细胞黏附分子-可溶性细胞间黏附因子-1、可溶性血管内皮细胞黏附因子-1的表达,硝酸盐还原酶法检测NO的表达。结果：正常生理条件下,PLGF诱导NO和内皮细胞黏附分子的表达,且呈时间（当t=6h达到最理想的分泌量）、浓度依赖关系。在氧化损伤条件下,PLGF诱导NO的表达下降,而内皮细胞黏附分子的表达则增高,以VCAM-1表达增多更为明显。结论：氧化损伤是动脉粥样硬化的独立危险因素,而PLGF诱导内皮的活化,上调内皮黏附分子的表达,可进一步促使疾病的恶化。故认为抑制PLGF的生物活性可达到控制炎症反应的作用。     

脱氢表雄酮对血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响

目的脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)是成人体内最为丰富的来源于肾上腺的甾体激素,文中探讨DHEA对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)所致血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响。方法以培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入ox-LDL或在试验体系中加入不同浓度的DHEA,测定人单核细胞系U937与HUVEC的黏附,检测内皮细胞条件培养基中一氧化氮(nitric oxide,NO)及单个核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)的含量,应用流式细胞仪检测内皮细胞表面黏附分子细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascularcell adhesion molecule-1,VCAM-1)及E-选择素的表达。将内皮细胞条件培养基作用于U937细胞,应用RT-PCR检测U937细胞CCR2、LFA-1以及VLA-4 mRNA的表达。结果 DHEA可明显抑制单核U937细胞与内皮细胞之间的相互黏附,明显促进内皮细胞NO合成,抑制MCP-1分泌,降低内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1的表达,且经DHEA作用后的内皮细胞条件培养基可明显抑制单核U937细胞CCR2、淋巴细胞功能相关抗原(lymphocyte function-associated antigen,LFA)-1以及非常晚期抗原(very late antigen,VLA)-4 mRNA的表达。结论 DHEA可通过抑制内皮细胞分泌趋化因子、下调内皮细胞表面黏附分子的表达,抑制内皮细胞对单核细胞的趋化及相互黏附,据此认为DHEA可能对血管内皮细胞具有保护作用。     

CD_(138)与头颈部肿瘤转移

CD138(Syndecan-1)是一种细胞黏附分子,具有促进细胞增殖、细胞-基质及细胞-细胞黏附等多种功能,CD138分子的表达在控制恶性肿瘤细胞生长和转移过程中具有重要作用,其在多种恶性肿瘤中的表达明显缺失,可作为判断肿瘤预后的指标,本文主要阐述CD138的分子生物学特性及其与头颈肿瘤转移的相关性研究进展。     

具有羟基磷灰石结合活性的拟TGF-β多肽分子的实验研究

目的：基于ECM蛋白和某些细胞因子结构功能的研究，设计合成了具有双功能多肽分子P18，通过此途径改善HA类骨修复材料及种植体HA涂层的生物活性。方法：运用固相多肽合成技术合成了具有双功能基团多肽分子P18，对于其生物活性以及与HA结合的特性进行了初步研究。结果：该分子和HA具有较高的亲和力，在生理条件下不同被洗脱，能够影响凝胶系统体外矿化作用，同时P18具有TGF－β样活性，能够抑制水貂肺上皮细胞的增殖，低浓度促进UMR－106细胞的增殖，但是高浓度作用减弱，该分子增加UMR－106细胞株碱性磷酸酶活性并能缩短ALP活性达到峰值的时间，并能够促进骨钙蛋白和I型胶原的表达。结论：所合成的多肽分子具有所设计的双功能，可以作为HA类骨损伤修复材料以及种植体涂层的生物活性添加成分。     

循环外泌体介导的lncRNA HOXA11-AS通过上调SOX4促进血管内皮细胞增殖

目的：探索循环外泌体对内皮细胞增殖能力的影响及其可能机制。方法：收集支架内再狭窄患者（n =199）及对照组患者（n =32）血浆并提取外泌体,用患者血浆外泌体干预经雷帕霉素诱导的内皮细胞增殖抑制模型,MTT法测各组细胞的增殖能力,Western blot检测细胞中PCNA、Ki67的表达情况。基因芯片检测两组外泌体中差异的非编码RNA,qRT-PCR检测lncRNA HOXA11-AS表达情况。结果：与对照组比,雷帕霉素组细胞增殖能力减弱;PCNA、Ki67 表达减少（P ＜0.05）;相比于雷帕霉素组,对照组外泌体干预后内皮细胞增殖能力增强;PCNA、Ki67表达增加（P ＜0.05）。芯片结果显示lncRNA HOXA11-AS在ISR外泌体中表达减少（P ＜0.05）。pHOXA11-AS可以促进内皮细胞的增殖能力,增加细胞中PCNA、Ki67、SOX4的表达（P ＜0.05）。结论：血浆外泌体中的lncRNA HOXA11-AS可能是通过上调内皮细胞中SOX4的表达,增加内皮细胞的增殖能力。     

新型纳米仿生骨植入材料的生物相容性的初步研究

【目的】研究新型纳米仿生骨植入材料的生物相容性。【方法】采用骨髓基质细胞体外培养技术,通过MTT法检测细胞相对增殖度,对材料的细胞毒性进行分级评价,并采用直接接触培养法,观察细胞在材料上的黏附与散布。【结果】材料的细胞毒性分级在0～1之间,骨髓基质细胞可紧密附着于材料表面,黏附生长,并有突起向材料的连通微孔内伸展。【结论】新型纳米仿生骨植入材料对骨髓基质细胞无毒性作用,符合医用生物材料的安全要求。     

新型纳米仿生骨植入材料的生物相容性的初步研究

  【目的】 研究新型纳米仿生骨植入材料的生物相容性? 【方法】 采用骨髓基质细胞体外培养技术,通过MTT法检测细胞相对增殖度,对材料的细胞毒性进行分级评价,并采用直接接触培养法,观察细胞在材料上的黏附与散布? 【结果】 材料的细胞毒性分级在0～1之间,骨髓基质细胞可紧密附着于材料表面,黏附生长,并有突起向材料的连通微孔内伸展?【结论】 新型纳米仿生骨植入材料对骨髓基质细胞无毒性作用,符合医用生物材料的安全要求?     

非小细胞肺癌诱导型-氧化氮合酶表达及其与肿瘤细胞增殖关系的研究

目的：探讨非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达及其与肿瘤细胞增殖的关系。方法：采用免疫组织化学SP法对64例非小细胞肺癌术后石蜡固定标本及12例正常肺组织标本中iNOS及Ki-67抗原的表达情况进行检测，观察iNOS的表达结果与NSCLC临床病理特征及细胞增殖活性之间的关系。结果：NSCLC中的iNOS表达阳性率为81．25％，正常肺组织中无iNOS表达，iNOS的表达程度与NSCLC的病理类型、分化程度、PTNM分期、肿瘤直径、吸烟与否无关，与淋巴结转移情况呈正相关；Ki-67抗原在正常肺组织中呈低表达，在NSCLC中呈高表达，其表达强度与NSCLC的病理类型、吸烟与否无关，与分化程度、PTNM分期、肿瘤直径、淋巴结转移情况呈正相关；NSCLC癌组织iNOS表达水平与Ki-67抗原表达强度呈正相关关系。结论：NSCLC中iNOS高表达与其生长、淋巴结转移有密切关系，检测其表达情况可预示病情进展；Ki-67抗原的表达强度能够很好的反映癌细胞的增殖活性，可作为判断恶性程度、转移的客观指标；癌细胞中iNOS诱导产生的NO对肺癌细胞的增殖有促进作用。     

携载VEGF基因的聚四氟乙烯血管材料对内皮细胞生长的促进作用

目的:研究聚四氟乙烯(PTFE)血管材料携载血管内皮生长因子(VEGF)基因并促进内皮细胞生长的可行性. 方法:将pCDI-hVEGF121/pCDI质粒溶液处理过的PTFE人工血管修剪成圆片,置于生理盐水中并于0.5, 1, 2, 4, 8, 16,24, 48和72 h测定溶液的吸光度,计算出溶液的DNA浓度,绘出体外释放曲线. 分离和培养人脐静脉内皮细胞,将内皮细胞种植到携带基因质粒的PTFE材料表面,在6, 24, 72和120 h检测细胞增殖情况并用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的表达量. 结果:体外释放曲线提示在0.5～4 h的这段时间内,质粒释放较快,随后进入缓慢增长期,直至72 h仍有质粒的释放. 在24, 72和120 h时间点,VEGF质粒组PTFE材料上的内皮细胞数和增长倍率都明显高于空质粒组材料(P<0.05),在6, 24, 72和120 h时间点,VEGF质粒组培养液的VEGF蛋白水平和增长倍率也明显高于空质粒组(P<0.01). 结论:证实了PTFE材料携带VEGF基因转染内皮细胞并具有促进其生长的可能性.     

Urocortin ameliorates diabetic nephropathy in obese db /db mice

Background and purpose: Hyperglycaemia induces overproduction of mitochondrial reactive oxygen species (ROS) in endothelial cells, which is believed to be a major molecular mechanism underlying complications of diabetes, including diabetic nephropathy. Impairment of endothelium-dependent vasodilatation is found in type 2 diabetes. Urocortin is a 40 amino-acid peptide related to the corticotrophin-releasing factor (CRF) family, which suppresses production of ROS in endothelial cells and sustains endothelium-dependent relaxations of rat coronary artery. However, it is not clear if urocortin has any effect on diabetic nephropathy. Experimental approach: Possible mechanisms underlying the effects of urocortin on diabetic nephropathy were investigated in db/db mice and cultured rat mesangial cells. Key results: Urocortin decreased body weight, plasma levels of advanced glycation end-prod ucts, blood urea nitrogen and creatinine levels. However, food intake, plasma insulin and glucose levels remained unaffected. Superoxide dismutase activity was increased markedly, whereas malonaldehyde levels in kidney homogenate and sorbitol concentrations in red blood cells were decreased significantly in urocortin-treated mice. Urocortin significantly decreased glomerular extracellular matrix expansion and accumulation in kidney. Moreover, urocortin inhibited the overexpression of transforming growth factor-beta 1 and connective tissue growth factor in rat mesangial cells induced by 25 mM glucose. All the effects of urocortin, except sorbitol accumulation, were abolished by the non-selective CRF receptor blocker, astressin. Conclusion and implications: Urocortin could significantly ameliorate diabetic nephropathy and this effect was mediated via the     

血小板影响内皮细胞在心血管植入物表面生长增殖的实验研究

目的探索血小板对内皮细胞在心血管植入物表面生长增殖的影响。方法利用生物材料钛（Ti）和低温各向同性热解碳（LTIC）分别制成试片作为A、B组,钛片表面涂层肝素（Hep）-血管内皮细胞生长因子（VEGF）-内皮祖细胞抗体（CD34）-胶原（Col）作为C组。采用乳酸脱氢酶（LDH）试验法测定试片表面黏附血小板的量,GMP-140试验测定试片表面血小板被激活的量;试片表面黏附的血小板作扫描电镜（SEM）观察,记录其形貌。取3只动物犬左右股动脉分别置入A组及C组试片,另3只犬左右股动脉内分别置入B组及C组试片,3个月后取出试片,SEM观察其表面内皮细胞生长情况。结果 C组黏附血小板的量和激活血小板的量均少于A组与B组（均P〈0.05）,A、B组黏附的血小板形貌有明显变形并有伪足。3个月后动物体内取出的试片SEM观察,A、B组表面未见到内皮细胞生长,C组表面有排列整齐成熟的内皮细胞。结论内皮细胞必须在无血凝的条件下生长,减少血小板的黏附与激活以及构建具有抗凝作用的细胞外基质是内皮细胞在心血管植入物表面生长增殖的关键。     

表面修饰对纳米晶胶原基骨细胞相容性的影响

目的:探索纤维蛋白(fibrin,FB)修饰的纳米晶胶原基骨(nanoHydroxyapatite/collagen,nHAC)支架材料上成骨诱导的骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)黏附、增殖及分化的情况。方法:实验分为两组:实验组,纤维蛋白修饰的纳米晶胶原基骨(FB-nHAC);对照组,单纯的纳米晶胶原基骨(nHAC)。将SD大鼠骨髓间充质干细胞定向诱导为成骨细胞,种植于支架材料上,体外复合培养。通过检测支架材料的细胞黏附率、不同时间点(3,7,10,14 d)支架材料中细胞数、碱性磷酸酶表达量以及扫描电镜观察细胞在支架材料上的生长状况,比较分析不同支架材料与细胞生物相容性差异。结果:大鼠MSCs经诱导培养14 d后,I型胶原免疫荧光染色为阳性;实验组支架材料的细胞黏附率显著高于对照组(P<0.05);且相同时间点实验组支架材料中的细胞数及碱性磷酸酶表达量也明显高于对照组(P<0.05);电镜观察发现两组材料上均有细胞生长,但实验组的细胞生长状况明显好于对照组。结论:表面修饰纤维蛋白后的nHAC支架材料具有更好的细胞黏附、增殖及促成骨分化能力。     

TIMP-3对内皮细胞增殖抑制作用的研究

目的：探讨TIMP-3对内皮细胞增殖的抑制作用及特点。方法：采用形态学观察、MTT法、[^3H]-TdR掺入法流式细胞仪分析等技术方法观测不同浓度TIMP-3作用下人脐静脉内皮细胞增殖活性的变化。结果：①不同浓度（10～100ng／ml）的TIMP-3处理HUVEC细胞不同时间（1～7天）后，生长均有显著抑制作用且呈现明显的剂量和时效依赖关系。②经TIMP-3处理后，HUVEC细胞增殖活性降低，主要表现为有丝分裂计数降低，细胞的生长抑制率及移行抑制率增加。③细胞生长减慢，TIMP-3能有效抑制G1、S期的细胞；抑制细胞从G2期进入M期；同时促进细胞的凋亡等。结论：TIMP-3具有抑制内皮细胞增殖、迁移、促进细胞凋亡，进而抑制血管生成的作用。     

龈下优势菌在种植钛与两种冠修复合金表面粘附的电子显微镜观察

目的扫描电子显微镜观察并计数龈下优势菌在厌氧环境下,在种植体及冠修复材料表面的粘附情况。方法将金铂合金与镍铬合金分别粘结在种植纯钛板上,与4种龈下优势菌[牙龈卟啉单胞菌(Pg)、伴放线放线杆菌(Aa)、中间普氏菌(Pi)及具核梭杆菌(Fn)]共同厌氧孵育。采用菌落形成单位(CFU)计数法量化测定培养试件表面的细菌粘附量,扫描电子显微镜观察两组试件表面细菌粘附的情况。结果4种厌氧菌在金铂合金试件表面的粘附量均明显多于镍铬合金(P值均<0．05);4种厌氧菌在同一试件表面的粘附量以Aa最多,Fn、Pg次之,Pi最少。结论金铂合金对细菌的增殖及粘附无抑制作用;4种厌氧菌粘附能力为Aa>Fn>Pg>Pi。     

碱性成纤维细胞生长因子对小鼠骨髓内皮细胞增殖的促进作用

目的以内皮细胞培养基(Endo-M)培养小鼠骨髓内皮细胞,观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对骨髓内皮细胞增殖的影响。方法用Endo-M培养小鼠骨髓内皮细胞,通过Wright’s Giemsa染色计数内皮细胞集落,免疫荧光法观察内皮细胞表型;加入不同浓度的bFGF,通过集落形成率、MTT法和流式细胞仪检测内皮细胞生长周期,观察bFGF对内皮细胞体外扩增的影响。结果Endo-M诱导的骨髓细胞可以生成内皮细胞,vWF检测阳性。加入不同浓度的bFGF,集落计数及MTT法均证实了bFGF对内皮细胞的增殖具有明显的促进作用,比较实验组(bFGF组)和对照组细胞的生长曲线,两者有明显差异(P<0.05)。结论bFGF对内皮细胞的增殖具有促进作用。     

NF-κB特异性抑制剂PDTC对鼠黑素瘤B16细胞增殖及VEGF表达的影响

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对鼠黑素瘤B16细胞增殖及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:不同浓度的PDTC作用于B16细胞不同时间后,MTT法测定其对B16细胞增殖的抑制率,ELISA检测PDTC作用下B16细胞VEGF的表达情况。结果:经PDTC处理的实验组,肿瘤细胞增殖活性明显受到抑制(P0.01);与对照组相比,PDTC作用后B16细胞VEGF表达降低(P0.01)。结论:PDTC具有显著抑制鼠黑素瘤B16细胞生长及VEGF表达的作用,是一种有潜力的抑制黑素瘤增殖的药物。     

VIP促进人脐静脉血管内皮细胞增殖及合成VEGF的初步研究

目的 通过观察血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)促进人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein vessel endothelial cells,HUVECs)的增殖以及刺激VEGF的合成情况,探讨VIP在创伤组织修复过程中的生物学效应.方法 体外培养HUVECs细胞系,分为有血清培养组和无血清培养组,这两组分别加入VIP和PBS进行干预,应用MTT法测定HUVECs的增殖情况,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血管内皮细胞生长因子(VEGF165)在HUVECs的合成.结果 VIP能促进血管内皮细胞的增殖,且两组都有VEGF生成,但VIP组VEGF的量显著高于PBS组.结论 VIP能促进HUVECs的增殖以及增强血管内皮细胞内VEGF的合成和分泌,在创伤组织修复过程中可能发挥促新生血管形成的作用.     

抗VEGF抗体对骨肉瘤OS-732细胞血管生成及其肿瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的：探讨阻断血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF)的血管生成作用对骨肉瘤OS-732细胞及血管内皮细胞增殖、凋亡的影响。方法：应用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型,通过解剖显微镜血管计数,光镜HE染色,原位末端标记及PC-NA免疫组化检测观察VEGF抗体对骨肉瘤血管生成及肿瘤增殖,凋亡状态的影响。结果：VEGF抗体组肿瘤区血管数目及瘤细胞数显著低于PBS对照组,肿瘤细胞凋亡指数显著高于PBS对照组,增殖指数两组差异不明显,同时VEGF抗体组凋亡的微血管内皮细胞增多,增殖期微血管内皮细胞少见。结论：VEGF抗体能显著抑制骨肉瘤OS-732血管生成,抑制内皮细胞增殖,促进内皮细胞凋亡,可能是VEGF抗体发挥抗血管生成作用的途径之一,并可能通过抑制血管形成而促进肿瘤细胞凋亡,最终达到抑制瘤细胞生长的作用。