DNA甲基化转移酶抑制剂和组蛋白脱乙酰化酶抑制剂的体外抗肿瘤作用

目的:通过在体外分别对DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)抑制剂5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza-C)和组蛋白脱乙酰化(histone seacetylase,HDAC)抑制剂苯丁酸钠(sodium phenylbutyrate,SPB)单独及联合用药于人大肠癌细胞LoVo和人肝癌细胞Hep3B的抗肿瘤作用的观察,探讨DNMT抑制剂和HDAC抑制剂联合用药的可能性.方法:使用MTT法测定5-aza-C 和SPB单独用药或联合用药的抗癌活性,用抑制浓度的分数之和(a sum of fractional inhibitory concentration ,SFIC)值及等效剂量分析方法(Isobologram)评价5-aza-C 和SPB联合用药的作用性质.结果:5-aza-C和SPB联用时,LoVo细胞及Hep3B细胞得到的SFIC值均小于1.0,等效剂量分析图的形状呈现凹型,都表明了5-aza-C和SPB联用时两者之间具有明显的增效作用.结论:DNMT抑制剂5aza-C和HDAC抑制剂SPB联合应用于抗肿瘤临床是很有前景的.     

组蛋白去乙酰化酶4在人肝癌细胞Bel7402中的表达及其意义

目的：研究组蛋白去乙酰化酶4（histone deacetyase4，HDAC4）在人肝癌细胞株Bel-7402中的表达，及其对Bel-7402细胞增殖和分化的调控作用。方法：培养Bel-7402细胞，以组蛋白去乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠（sodium phenylbutyrate，SPB）作用于Bel-7402，RT—PCR检测用药前后HDAC4 mRNA的表达水平，倒置相差显微镜观察细胞形态改变，MTT比色法观察SPB对Bel-7402生长的抑制作用，流式细胞术分析细胞周期，免疫组化法观察Bel-7402细胞P27蛋白的表达水平。结果：SPB处理后Bel-7402中HDAC4mRNA的表达水平降低（0．88±0．13，0．12±0．04，P〈0．05）；SPB处理后Bel-7402细胞生长受到明显抑制，且与SPB剂量和作用时间相关；同时细胞形态出现成纤维细胞样改变；细胞周期阻滞于G。期[（50．6±4．0）％，（78．8±3．6）％，P〈0．05）]；P27蛋白表达水平增强（23±11，61±7，P〈0．05）。结论：SPB降低HDAC4在人肝癌细胞中的表达，从而诱导部分人肝癌细胞分化，该作用与P27蛋白水平变化有关。     

脱乙酰化酶抑制剂与去甲基化制剂联合诱导U266细胞凋亡和p16基因重新表达

背景与目的：DNA甲基化调节基因表达与组蛋白脱乙酰化的作用密切相关,针对这两大途径用药,观察对肿瘤细胞的影响是有意义的,本文探讨脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠（sodium phenylbutyrate,SPB)联合去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR)处理人骨髓瘤细胞系U266诱导高甲基化失活的p16基因重新表达的可能性及其对细胞生长的影响。方法：通过透射电镜,DNA梯形条带及流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的变化;RT-PCR和Western blot检测p16表达水平。结果：单用5-Aza-CdR(1μmol/L）或SPB（1mmol/L)及两药联合诱导的细胞凋亡率分别是15.09%,89.19%和85.18%。单用5-Aza-CdR或SPB对细胞G1期无影响,单用SPB使G2/M期细胞比例增高,联合用药发生明显的G1期阻滞,且出现亚G1期峰达50%。单用PB不能诱导U266细胞p16的表达,单用5-Aza-CdR可诱导p16重新表达,两药联合明显增强p16表达水平。结论：PB与5-Aza-CdR协同可显著诱导U266细胞p16重新表达,细胞阻滞在G1期,并使细胞凋亡发生的时相不同于单独用药组。     

丹皮酚协同顺铂抗人宫颈鳞癌SiHa细胞及其机制

[目的]探讨丹皮酚（paeonol,Pae）和顺铂（CDDP）联合用药对人宫颈癌SiHa细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用。[方法]应用MTT法检测不同浓度的Pae或CDDP单独及联合用药对宫颈癌SiHa细胞增殖的抑制作用,同时观察Pae与CDDP的协同抗肿瘤作用。流式细胞仪测定Pae联合CDDP用药对SiHa细胞凋亡的诱导作用。[结果]各浓度Pae（9.375～300mg/L）和CDDP（0.625～10mg/L）对人宫颈癌SiHa细胞均有明显增殖抑制作用,且呈时间—剂量依赖效应关系。18.75、37.5、75mg/LPae分别与2.5、5、75mg/LCDDP联用时具有协同作用,且以75mg/LPae与5mg/LCDDP联用时协同作用最显著（CDI=0.544）。75mg/LPae组细胞凋亡率为8.26%±1.12%,5mg/LCDDP组细胞凋亡率为29.62%±2.48%,与75mg/LPae联合5mg/LCDDP组细胞凋亡率（52.49%±4.39%）比较均有显著性差异（P〈0.01）。[结论]Pae与CDDP联合应用具有显著的协同抗人宫颈癌SiHa细胞增殖作用,其机制可能与两者协同诱导SiHa细胞凋亡有关。     

曲古菌素A和硼替佐米诱导卵巢癌细胞凋亡的协同作用

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A与蛋白酶体抑制剂硼替佐米单独及联合应用对人卵巢癌细胞株SKOV3存活率和凋亡率的影响。初步探讨两种药物联合应用对诱导SKOV3细胞凋亡具有的协同作用。 方法曲古菌素A、硼替佐米单独或者联合应用于卵巢癌细胞后,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖活性,并计算细胞存活率,Annexin-V/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测相关蛋白表达水平。通过检测Caspases-3的活性及其底物多聚ADP核糖聚合酶（PARP）的表达水平进一步说明不同用药组诱导细胞凋亡的情况。 结果联合用药组诱导的细胞凋亡率和单独用药组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。几种凋亡相关蛋白Bcl-2、Mcl-1和Bcl-X_L, 在联合用药组的表达显著低于单独用药组。 在相同的时间点,联合用药组Caspase-3的活性和单独用药组比较,差异有统计学意义（P<0.001）。结论：低剂量的曲古菌素A和硼替佐米联合作用人卵巢癌细胞系能诱导凋亡,并且这种作用远远强于相同剂量单独用药引起的凋亡。这两种药物的联合应用可能成为人卵巢癌化疗中的新方案。     

新疆家蚕抗菌肽与化疗药物联用对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究新疆家蚕抗菌肽（cecropin-XJ,CE-XJ）与4种化疗药物联用对人食管癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响。方法：MTT法检测CE-XJ联合不同浓度的多柔比星（doxorubicin,ADM）、卡铂（carboplatin,CBP）、顺铂（cisplatin,DDP）和环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）对人食管癌Eca109细胞增殖的影响,流式细胞术分析CE-XJ与ADM、CBP、DDP、CTX联用对Eca109细胞凋亡、活性氧及线粒体膜电位的影响。结果：单独使用CE-XJ（1～50 μmol/L）可依剂量依赖方式显著抑制Eca109细胞的增殖（ P <0.05或 P <0.01）。CE-XJ分别与ADM、DDP、CTX联合用药, 与单独用药相比,Eca109细胞的增殖抑制明显加强、细胞凋亡率显著增加（均 P <0.05或 P <0.01）,细胞内活性氧水平显著增加（ P <0.05）,而线粒体膜电位显著降低（均 P <0.05）。但CE-XJ与CBP联用时出现拮抗现象,与单独用药相比,细胞增殖抑制变化不大,细胞凋亡率反而降低。结论：CE-XJ与化疗药物ADM、DDP和CTX联用对人食管癌Eca109细胞的增殖抑制和凋亡诱导有明显促进作用,其机制可能与细胞内活性氧和线粒体膜电位变化有关。但CE-XJ与CBP联用则起拮抗作用,其机制有待进一步探讨。     

药物诱导MDA-MB-435细胞表达ER α及其对内分泌治疗的敏感性

目的通过药物诱导雌激素受体（ER）阴性的乳腺癌细胞株MDA—MB-435恢复ER的表达,探讨其对内分泌治疗的敏感性。方法采用HDAC抑制剂古曲抑菌素（TSA）联合DNMT抑制剂5-AZA-CdR（AZA）作用于MDA-MB-435细胞;以RT-PCR方法检测细胞ERα及其下游基因产物孕激素受体（PR）、雌激素调节蛋白（pS2）的mRNA水平;以水溶性四氮唑盐-8（WST-8）方法检测诱导前后细胞增殖水平。将药物诱导后的MDA—MB-435细胞接种裸小鼠,观察其在体内增殖能力的改变。结果药物诱导后,MDA-MB-435细胞恢复ERα表达,ERα下游基因产物PR和psz的表达增加。2．5μmol／LAZA和100ng／ml TSA诱导MDA-MB-435细胞后,其ERα表达最强。诱导后的MDA—MB-435细胞在不同浓度的雌激素中表现出不同的增殖能力。与未经诱导的细胞相比,诱导后的MDA—MB-435细胞增殖能力下降（P〈0．01）;经诱导的细胞联合4-羟基三苯氧胺后,其增殖能力进一步下降（P〈0．01）;而单用4-羟基三苯氧胺不能抑制未经诱导的细胞的增殖（P〉0．05）。在裸鼠体内,诱导处理后的MDA—MB-435移植瘤较未经处理的细胞增殖能力下降（P〈0．01）。去除雌激素后,诱导后肿瘤细胞在体内增殖能力进一步受到抑制（P〈0．01）。结论通过TSA和AZA联合诱导作用,MDA-MB-435细胞株中沉默的ER恢复表达ERα。并且该ERα是具有功能的。经过诱导的细胞株在体内及体外对雌激素均恢复反应。联合应用HDAC抑制剂以及DNMTI抑制剂可以恢复乳腺癌细胞MDA—MB-435对内分泌治疗的敏感性,这为ER阴性的乳腺癌患者治疗开辟一条新的思路,具有重要的临床意义。     

联合用药对大剂量甲氨蝶呤化疗治疗儿童急性淋巴细胞白血病肾毒性及血药浓度的影响

目的 探讨联合用药对大剂量甲氨蝶呤（MTX）化疗肾毒性及MTX血药浓度的影响。方法 采用回顾性分析方法,收集2012年9月至2014年9月广西医科大学第一附属医院178例儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）患者共633例次大剂量MTX化疗的临床资料,根据化疗时用药情况分为两组,对照组为常规大剂量MTX化疗,联合用药组在此基础上联用了青霉素类、非甾体类抗炎药及质子泵抑制剂等,比较两组的急性肾损伤（AKI）发生率和MTX血药浓度。结果 有84例次大剂量MTX化疗时联合应用了哌拉西林、布洛芬和奥美拉唑等药物,联合用药组AKI总体发生率明显高于对照组（P<0.05）,表现在中度和重度AKI发生率明显增加（P<0.05）。联合用药组各时间点MTX血药浓度明显高于对照组（P<0.05）,MTX血药浓度降至安全范围所需天数明显长于对照组（P＜0.05）。结论 大剂量甲氨蝶呤化疗时联用哌拉西林、布洛芬和奥美拉唑等药物会使MTX排泄延缓,肾毒性发生风险增加,应避免联用。     

VX-680联合顺铂对人SK-HEP-1细胞株增殖影响机制探讨

目的：体外观察AuroraB激酶抑制剂VX-680与顺铂（cisplatin,DDP）联合对人肝癌细胞SK—HEP-1细胞株增殖的抑制作用及化疗敏感性,并且初步探讨其机制。方法：MTT法检测VX-680单独或联合DDP对人肝癌细胞SK—HEP-1增殖的抑制作用。流式细胞术（flowcytometry,FCM）分析单独用药及联合用药对SK—HEP-1细胞生长凋亡和周期的影响。蛋白质印迹法检测实验组中AuroraB、p53和Bcl-2蛋白的表达。结果：VX-680与DDP均能抑制SK—HEP-1细胞的生长,呈剂量依赖性,并且联合用药后的抑制率明显高于单用药组,P〈0．05。当VⅪ680为3．125μmol／L和DDP为0．125μg／mL联合时,产生协同作用,Q—1．36;FCM检测发现,联合用药组（17．4±0．3）％的细胞凋亡率明显高于对照组的（1．1±0．2）％,VX-680组为（5．97±0．5）％,DDP组为（7．53±0．7）％。细胞周期结果显示,联合用药组S期和Gl期细胞减少,而停滞在G2／M期细胞比例明显增加（68．3±1．2）％,明显高于单用药组DDP的（16．7±0．9）％和VX-680的（43．6±1．1）％及对照组的（23．5士0．8）％,P〈0．05;并且通过蛋白质印迹检测发现,在联合用药组中的AuroraB激酶表达减少,p53表达增加,Bcl-2表达减少。结论：VX-680能够通过促进细胞凋亡抑制SK—HEP-1细胞的增殖,有效提高SK—HEP-1对DDP的化疗敏感性,其机制与AuroraB的表达减少、p53表达增加及Bcl-2表达减少有关。     

mTOR抑制剂联合阿霉素在肝癌细胞株对化疗药物协同增敏中的作用研究

目的 初步探讨mTOR抑制剂Temsirolimus联合阿霉素对肝癌细胞的抗肿瘤作用机制及化疗增敏作用.方法 体外培养肝癌细胞,取增殖期细胞进行实验,用MTT法检测单用Temsirolimus、阿霉素以及两者联合应用时对肿瘤细胞生长的影响,用流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 在体外肝癌细胞株PLC/PRF/5、BEL7402、HuH7中,与单独用药相比,Temsirolimus联合阿霉素提高了细胞增殖抑制率及凋亡率.Temsirolimus联合阿霉素的抗肿瘤作用高于将阿霉素浓度增加1倍时的抗肿瘤作用.结论 联合应用mTOR抑制剂及阿霉素可以提高抗肿瘤作用,前者对化疗药物有一定的增敏效应,两者联合可以通过减少阿霉素的剂量来减轻不良反应,同时不降低药物效能,有临床应用的前景.     

Synergistic antineoplastic action of DNA methylation inhibitor 5-AZA-2'-deoxycytidine and histone deacetylase inhibitor depsipeptide on human breast carcinoma cells

During tumorigenesis, cancer-related genes can be silenced by aberrant DNA methylation and by changes in chromatin structure. It has been reported that 5-aza-2'-deoxycytidine, a potent inhibitor of DNA methylation, in combination with histone deacetylase inhibitors, can produce a synergistic reactivation of these genes. The aim of our study was to investigate the in vitro antineoplastic activity of 5-aza-2'-deoxycytidine in combination with depsipeptide, a potent histone deacetylase inhibitor, against MDA-MB-231 and MDA-MB-435 human breast carcinoma cell lines. We observed that the combination of 5-aza-2'-deoxycytidine and depsipeptide produced a synergistic antineoplastic effect against these tumor cells as compared to either agent administered alone. We also investigated the effect of this drug combination on the activation of maspin and gelsolin expression. These 2 genes whose function is to suppress tumor metastasis have been reported to be silenced by epigenetic events in breast cancer. Using semi-quantitative RT-PCR, we observed that 5-aza-2'-deoxycytidine in combination with depsipeptide produced a greater reactivation of both maspin and gelsolin as compared to each agent alone. The synergistic interaction between 5-aza-2'-deoxycytidine and depsipeptide on breast carcinoma cell lines provides a rationale to investigate this interesting drug combination in future clinical trials on patients with advanced breast cancer.     

组蛋白修饰对喉癌细胞系中RASSF1A基因表达的影响

目的：探讨喉癌细胞中RASSF1A基因表达水平与基因组蛋白修饰的关系。方法：应用染色质免疫沉淀技术（ChIP）和实时定量逆转录聚合酶链反应（Realtime-PCR）分析喉癌Hep-2细胞系在以下药物：5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-2＇-deoxyeytidine,5-Aza-dC,DNA甲基转移酶抑制剂,5-AZa-dC）;曲古抑菌素A（TriChostatinA,TSA,组蛋白去乙酰化酶抑制剂）作用前后RASSF1A基因启动子区域组蛋白H3-K9甲基化、H3-K4甲基化、H3-K9乙酰化和RASSF1A基因表达情况。结果：TSA能轻度降低RASSF1A基因启动子区域组蛋白H3-K9甲基化水平、轻度提高H3-K4甲基化水平、明显提高H3-K9乙酰化水平。5-Aza-dC明显降低启动子区域H3-K9甲基化程度、明显提高H3-K4甲基化水平、提高H3-K9乙酰化水平,联合给予5-Aza-dC和TSA起协同增效作用。H3-K9甲基化水平降低、H3-K4甲基化和H3-K9乙酰化水平提高可使RASSF1A基因表达上调。结论：喉癌细胞中RASSF1A肿瘤抑制基因表达下调与其启动子区H3-K9甲基化、H3-K4甲基化和H3-K9乙酰化相关。甲基化抑制剂及乙酰化制剂均可使表达下调的基因表达上调。     

EEN-B1及其启动子甲基化在外阴鳞状细胞癌中的表达及意义

目的：检测EEN—B1在外阴鳞癌组织及外阴鳞癌细胞株中的启动子甲基化及蛋白表达情况,探讨其启动子异常甲基化在外阴鳞癌发病过程中的作用。方法：采用重亚硫酸盐测序PCR（bisulfite genomic se—quencing PCR,BSP）联合TA克隆测序法,以正常外阴组织作对照,检测外阴鳞癌组织中EEN—B1启动子区CpG岛的甲基化状态,以甲基化酶抑制剂5-aza-2-deoxycitydine（5-aza—dC）作用于外阴鳞癌细胞A-431,检测作用前后甲基化率变化情况;Westernblot方法检测外阴鳞癌及对照组织中EEN—B1蛋白表达情况,检测5-aza—dC处理前后A-431中该蛋白表达情况。结果：在癌组织中EEN—B1启动子的甲基化率为54．66％,与对照组织的12．16％相比,差异具有统计学意义;而在外阴鳞癌组织中EEN—B1蛋白明显下调;经1×10 -7mol／L5-aza—dC处理72小时后,A-431细胞系中EEN—B1启动子的甲基化率由67．05％下降至26．82％（P〈0．05）,而该蛋白表达明显上调。结论：外阴鳞癌细胞株A-431及癌组织中EEN—B1基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化可能导致了外阴鳞癌组织及细胞系中EEN—B1基因的表达沉默。     

Combined DNA methyltransferase and histone deacetylase inhibition in the treatment of myeloid neoplasms

Optimal reexpression of most genes silenced through promoter methylation requires the sequential application of DNA methyltransferase inhibitors followed by histone deacetylase inhibitors in tumor cell cultures. Patients with myelodysplastic syndrome or acute myeloid leukemia (AML) were treated with the methyltransferase inhibitor 5-azacitidine (aza-CR) followed by the histone deacetylase inhibitor sodium phenylbutyrate. Major responses associated with cytogenetic complete response developed in patients receiving prolonged dosing schedules of aza-CR. Bisulfite sequencing of the p15 promoter in marrow DNA during the first cycle of treatment showed heterogeneous allelic demethylation in three responding patients, suggesting ongoing demethylation within the tumor clone, but no demethylation in two nonresponders. Six of six responding patients with pretreatment methylation of p15 or CDH-1 promoters reversed methylation during the first cycle of therapy (methylation-specific PCR), whereas none of six nonresponders showed any demethylation. Gene demethylation correlated with the area under the aza-CR plasma concentration-time curve. Administration of both drugs was associated with induction of acetylation of histones H3 and H4. This study provides the first demonstration that molecular mechanisms responsible for responses to DNA methyltransferase/histone deacetylase inhibitor combinations may include reversal of aberrant epigenetic gene silencing. The promising percentage of major hematologic responses justifies the testing of such combinations in prospective randomized trials.     

5 - 氮杂 - 2’ - 脱氧胞苷对食管鳞癌 ECa109 细胞增殖及 TIG1 基因表达与甲基化状态的影响

目的：探讨5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-aza-2＇-deoxy-cytidine,5-aza-CdR）对食管鳞癌细胞株ECa109增殖抑制作用,以及对ECa109中TIG1基因甲基化状态及其mRNA表达的影响.方法：实验组分别使用10、20、50、100μmol/L的5-aza-CdR处理ECa109细胞,对照组用不添加5-aza-CdR培养基培养;采用MTT法检测两组细胞生存率的变化;MSP检测TIG1基因的甲基化状态;RT-PCR法检测TIG1基因mRNA表达水平.结果：5-aza-CdR可以显著抑制ECa109的生长,实验组细胞生存率显著低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）.实验组同种药物浓度,作用时间延长,生存率显著降低,差异有统计学意义（P＜0.01）;同一作用时间,随着药物浓度增加,细胞生存率降低,差异有统计学意义（P＜0.01）.对照组ECa109细胞TIG1基因处于高甲基化状态,经过10μmol/L及20μmol/L的5-aza-CdR处理细胞株120h后,TIG1基因的甲基化部分解除.对照组ECa109细胞中无TIG1 mRNA表达,采用10μmol/L及20μmol/L浓度药物处理72、120、168h后细胞株中TIG1 mRNA恢复表达,且20μmol/L处理组细胞较10μmol/L组TIG1 mRNA表达增强.结论：5-aza-CdR可以抑制ECa109细胞生长,且具有剂量及时间依赖性;ECa109中TIG1基因甲基化阳性,其mRNA的表达缺失;经5-aza-CdR干预后可使TIG1基因发生去甲基化修饰,恢复表达,去甲基化修饰具有时间及剂量依赖效应.     

Euchromatic histone methyltransferase 2 inhibitor,BIX-01294, sensitizes human promyelocytic leukemia HL-60 and NB4 cells to growth inhibition and differentiation

The involvement of histone lysine methyltransferases (HMT) in carcinogenesis is not well understood. Here, we describe a dose-dependent growth and survival inhibitory effects of BIX-01294, a specific inhibitor of euchromatic HMT2, in promyelocytic leukemia HL-60 and NB4 cells. BIX-01294 combined with all-trans retinoic acid or together with histone deacetylase and DNA methyltransferase inhibitors enhanced cell differentiation to granulocytes and induced cell line-specific changes in the expression of cell cycle-, survival- and differentiation regulating genes and proteins in association with histone modification state. Our results suggest that targeting EHMT2 may be of therapeutical benefits in myeloid leukemia.     

A histone deacetylase inhibitor enhances expression of genes inhibiting Wnt pathway and augments activity of DNA demethylation reagent against nonsmall‐cell lung cancer

Development of new inhibitors targeting histone deacetylases (HDACs) with improved efficacy for solid tumor therapy is urgently needed. Here, we report the development of a novel HDAC inhibitor TMU‐35435 and verify it as a single agent and in combination treatment with DNA demethylation reagent 5‐aza‐2′‐deoxycytidine (5‐aza‐dC) in lung cancer preclinical models. TMU‐35435 exerted cancer‐specific cytotoxicity via mitochondria‐mediated apoptosis. Expression microarrays revealed a unique TMU‐35435‐induced gene networks enriched in biological processes, including “negative regulation of cell proliferation” and “Wnt receptor signaling pathway” compared to FDA‐approved HDAC inhibitor SAHA. TMU‐35435 inhibited tumor growth with good pharmacokinetic properties and safety features in lung orthotopic and subcutaneously implanted xenograft models. TMU‐35435 and 5‐aza‐dC showed synergistic antitumor effects through reactivation of tumor suppressor genes and those genes encoding negative regulators of Wnt signaling pathway in vitro and in vivo. Some genes showed additive inhibition of DNA methylation upon TMU‐35435 and 5‐aza‐dC combined treatment. Our findings suggested that TMU‐35435 is a potential HDAC inhibitor for lung cancer treatment as a single agent and in combination with 5‐aza‐dC.     

Potentiation of reactive oxygen species is a marker for synergistic cytotoxicity of MS-275 and 5-azacytidine in leukemic cells

Epigenetic modifiers are currently in clinical use for various tumor types. Recently, numerous studies supporting the combination of histone deacetylase inhibitors (HDACi) and DNA methyltransferase inhibitors have emerged, encouraging early clinical trials of these agents together. Here we show that MS-275, an HDACi, and 5-azacytidine, a methyltransferase inhibitor, display synergistic cytotoxicity and apoptosis in AML and ALL cells. Intracellular production of reactive oxygen species (ROS), such as superoxide and hydrogen peroxide, is a novel marker for this synergism in ALL cells. These data suggest that assessment of oxidative stress can serve as a marker of the concerted action of MS-275 and 5-azacytidine.     

SAHA对人卵巢癌SKOV3细胞转移潜能影响及其机制探讨

目的：观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸（suberoylan．1idehydroxamicacid,SAHA）体外对人卵巢癌SKOV3细胞转移潜能的影响,并探讨其可能机制。方法：体外应用SAHA作用于人卵巢癌SKOV3细胞,实验分为对照组、4μmol／LSAHA组、8／μmol／LSAHA组和12μmol／LSAHA组,划痕实验检测SKOV3细胞迁移能力,Tran—swell侵袭实验检测SKOV3细胞侵袭能力。蛋白质印迹法检测SKOV3细胞内组蛋白H4乙酰化水平,实时定量PCR方法检测SKOV3细胞uPA和uPAR基因ITIRNA表达。结果：经sAHA作用48h后,对照组以及4、8和12μmol／L组细胞Ac—H4表达量分别为0．10±0．04、0．21±0．05、0．40±0．05和0．72±0．04,Ac—H4表达量随sAHA剂量浓度增加而增加,P〈0．001;各组细胞划痕愈合率分别为（68．27±2．98）0A、（35．19±2．97）％、（18．82±2．96）％和（10．24±2．98）％,划痕愈合率随sAHA剂量浓度增加而降低,P〈0．001;各组细胞穿过Transwell滤膜的细胞数量分别为58．89±4．35、37．66±4．27、21．15±4．32和10．75±4．30,穿过Transwell滤膜的细胞数量随sAHA剂量浓度增加而减少,P〈0．001;各组细胞uPArnRNA表达分别为22．48±1．05、15．40±1．02、8．62±1．05和5．274±1．08,随着sAHA剂量浓度增加而降低,P〈O．001;各组细胞uPAR基因mRNA表达量分别为18．22±12、12．37±1．14、7．64±1．10和3．55±1．12,随SAHA剂量浓度增加而降低,P〈0．001。结论：SAHA可抑制人卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力,提高组蛋白乙酰化水平,降低uPA和uPAR基因表达可能是其作用机制。