雌二醇及雌酮对人子宫内膜细胞GJIC及连接蛋白的影响

【目的】 探讨雌二醇(E2)及雌酮(E1)对体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)及连接蛋白(Cx)43?32表达的影响?【方法】 采用划痕染料标记示踪技术及激光共聚焦显微镜扫描技术(LSCM),观察E2及E1对原代培养的20例人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞GJIC的影响,采用激光共聚焦显微镜扫描技术,观察E2及E1对Cx 43?Cx 32表达的影响?【结果】 5 × 10-5 mol/L雌二醇作用48 h后间质细胞及腺上皮细胞GJIC功能没有明显变化(P > 0.05),2.5 × 10-5 mol/L雌酮作用间质及腺上皮细胞48 h后,细胞GJIC功能有所下降(P 0.05)?【结论】 E1抑制细胞GJIC功能,提示其在子宫内膜增殖性病变的阶段扮演重要角色;E1及E2均未影响子宫内膜细胞Cx43?Cx32的表达,提示Cx表达量不能完全反映GJIC功能?     

异位和正常子宫内膜间质细胞对上皮细胞间隙连接细胞间通讯的影响

目的 研究体外异位和正常子宫内膜间质细胞对内膜上皮细胞间隙连接细胞间通讯(gap junctional intercellular communication, GJIC)功能的不同影响.方法 取24例卵巢处子宫内膜异位灶以及10例正常子宫内膜,分离、纯化上皮细胞和间质细胞,建立体外上皮细胞单独培养、上皮细胞与间质细胞共培养模型.在激光共聚焦显微镜下采用荧光漂白后恢复技术分别检测各组上皮细胞的GJIC功能.结果 ①异位内膜上皮、间质细胞纯度分别为92%、95%,对照组内膜上皮、间质细胞纯度分别为95%、98%;②单独培养的异位内膜上皮细胞与单独培养的正常内膜上皮细胞的GJIC功能无显著性差异(P＞0.05);③与正常间质细胞共培养后,上皮细胞中GJIC功能明显上调,而与异位内膜间质细胞共培养的上皮细胞中GJIC功能未见明显变化.结论 异位间质细胞丧失了调节上皮细胞GJIC的能力,这种调节能力的异常可能与子宫内膜异位症发生有关.     

子宫内膜间隙连接通讯研究进展

目前 ,已有不少证据说明细胞间隙连接通讯参与调节细胞的生长、分化、稳态和变异 ,构成间隙连接通讯的最基本单位 -间隙连接蛋白的异常表达或缺失 ,与细胞的异常增生及癌肿的发生有较明显的关系 ,有关间隙连接功能的研究已成为生命科学领域的新热点。本文将对近几年来子宫内膜间隙连接通讯研究方面的进展作一综述 ,供同行在以后的研究中参考。1　间隙连接通讯的结构与功能　　相邻细胞之间的连接类型有 :间隙连接、桥粒、紧密连接 ,而间隙连接是相邻细胞的细胞膜之间形成的一种跨膜蛋白质连接通道 ,每一个间隙连接都由数个跨膜连接子 (ｃｏ…     

卵泡发育过程中的细胞间通讯

卵泡的良好发育对女性生殖至关重要。其发育是一个复杂的过程,从卵泡的形成到卵泡发育成熟并排卵的过程在很大程度上依赖于卵泡内的生殖细胞和体细胞这两种主要细胞类型之间的通讯合作。近年来,有越来越多的研究发现在卵泡中存在着一种旁分泌途径-间隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)。它由连接蛋白(connexin,Cx)介导,在参与卵泡的启动、窦卵泡腔的形成、卵母细胞的减数分裂等方面发挥着重要作用。故本文旨在通过细胞间通讯探索卵泡发育过程中细胞交互的机制,为提高女性生殖能力提供新思路。     

子宫内膜异位症中细胞间粘附分子的表达

子宫内膜异位症 (内异症 ) ,即子宫内膜出现在子宫腔外 ,国内统计 ,内异症的发病率呈逐年上升的趋势 ,已达到10 %左右。内异症多见于生育年龄的妇女 ,常引起腹痛、痛经和不孕。越来越多的学者认为 ,内异症是导致不孕的原因之一 ,已逐渐成为妇科的常见病、多发病。由于其分布的特殊性 ,多年来不少学者对此症进行了大量的研究 ,提出了一些学说 ,包括经输卵管移行学说、体腔上皮化生学说、良性转移学说、基因学说以及细胞免疫学说。子宫内膜异位症的发生与免疫系统失调的关系一直受到重视 ,成为研究的热点之一。内异症虽是良性疾病 ,但其发展过…     

全反式维甲酸上调异位子宫内膜间质细胞GJIC功能的机制

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人异位子宫内膜间质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)功能的调节作用及其机制.方法:取人子宫内膜异位症(EMs)患者的间质细胞,采用0.1,1,10 μmol/L ATRA于24,48,72,96和120 h分别进行处理,同时设置空白对照组.采用激光共聚焦显微镜检测异位内膜间质细胞的GJIC功能,并检测与GJIc功能密切相关的Cx43,Cx26和Cx32的基因及蛋白表达.结果:经ATRA处理后,1 μmol/L与10 μmol/L处理组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能明显增强;0.1 μmol/L处理组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能无明显变化.未经ATRA处理的异位内膜间质细胞中无Cx43,Cx26和Cx32的mRNA及蛋白表达;经1,10μmol/LATRA处理后,异位内膜间质细胞中检测到Cx43 mRNA和蛋白表达,但未见Cx26和Cx32的mRNA及蛋白表达.间质细胞的GJIC功能与去磷酸化Cx43蛋白的表达有关.结论:ATRA能选择性的诱导Cx43基因及其去磷酸化蛋白的表达,从而上调异位内膜间质细胞的GJIC功能;ATRA酸可能是治疗EMs的潜在药物.     

人子宫内膜细胞的纯化和培养

目的：本研究旨在建立一套子宫内膜细胞体外培养和贮存传代的方法，为进一步对其进行抗原组分研究奠定基础。方法：用胶原酶消化和铜网过筛法分离子宫内膜基质细胞和上皮细胞，进行单层培养。结果：子宫内膜上皮细胞和基质细胞分别经角蛋白单抗和波形蛋白单抗组化染色为阳性，腺细胞可持续培养4～6周，传代2～3次。结论：子宫内膜腺体细胞培养方法的建立为减少外科来源的子宫内膜抗原建立了基础。     

间隙连接细胞间通讯在造血调控中的作用

间隙连接是相邻细胞间允许细胞间离子,代谢产物和其他信号分子交换的通道。这些细胞间通道由独特的结构单位间隙连接蛋白(Cx)组成。在脊椎动物中,Cx由多基因家族编码而成至少20种成员,在造血组织中主要是Cx43[1]。Cx43在很多造血器官中均有表达,但主要表达在骨髓、胸腺、脾脏和其他淋巴组织。胸腺和骨髓上的基质细胞中Cx43蛋白组装成     

左旋炔诺孕酮,雌二醇对离体子宫内膜细胞增殖的影响

[目的]观察左旋炔诺孕酮(LNG),雌二醇(E2)在体外对子宫内膜上皮细胞及间质细胞的影响.[方法]对20例人子宫在位内膜离体组织进行体外分离培养,细胞汇合后消化,一部分用盖片法培养,用特异性抗体鉴定细胞纯度,一部分在相同的生长期加入不同浓度的LNG,E2,培养24,48,72 h,用MTT法测定LNG,E2对子宫内膜上皮细胞及间质细胞增殖活性的影响;用流式细胞仪及DNA切口末端标记法测定LNG,E2对子宫内膜上皮细胞及间质细胞的增殖及凋亡作用.[结果]LNG浓度为5×10-5mol/L时,抑制细胞生长速度,促进细胞的凋亡;随药物作用时间延长,抑制作用加强,凋亡率增加.E2浓度为5×10-5mol/L时,促进细胞的增殖.两种激素同时作用,抑制细胞生长速度,促进细胞的凋亡.[结论]特定浓度的LNG对子宫内膜细胞生长有抑制作用,并诱导子宫内膜细胞凋亡;特定浓度的E2对子宫内膜细胞生长有促进增殖作用.     

高糖对人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞间通讯的影响

[目的]研究高糖对人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞通讯活性(GJIC)的影响.[方法]将人晶状体上皮细胞(SRA01/04)培养于正常葡萄糖浓度(5.5 mmol/L),传代时将其接种于16个35 mm的培养皿中,实验分为4组(每组4个培养皿):正常糖浓度组(培养基葡萄糖含量是5.5 mmol/L)、高糖组(培养基葡萄糖含量是30 mmol/L)、佛波酯(TPA)组(阳性对照)及二甲基亚砜(DMSO)组(阴性对照).当细胞生长至90%融合时,用划痕荧光染料示踪技术(SL/DT)检测其缝隙连接细胞间通讯活性.[结果]在高糖培养的人晶状体上皮细胞划痕荧光黄向两侧传递的细胞列数为2.23±0.33,明显少于正常糖浓度培养的人晶状体上皮细胞(3.75±0.57,P＜0.01).TPA显著抑制晶状体上皮细胞的GJIC,与正常糖浓度组比较差异具有显著性(1.65±0.26vs3.75±0.57,P＜0.01).[结论]人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞间通讯活性在高糖中受到抑制,可能在糖尿病晶状体渗透水肿和离子代谢紊乱中发挥作用.     

木犀草素增强Cx32/Cx26组成的细胞缝隙连接功能

【目的】 体外观察木犀草素对转染并稳定表达缝隙连接蛋白32/ 26(Cx32/Cx26)的Hela细胞缝隙连接通讯功能(GJIC)和Cx26蛋白表达水平的影响。【方法】 用SRB法检测不同浓度木犀草素对Hela细胞的毒性;用细胞接种荧光示踪法观察不同浓度木犀草素对GJIC的影响;用western blotting 研究木犀草素在影响GJIC功能浓度范围内对Cx26表达的影响。【结果】 木犀草素在0 ~ 1 μmol/L浓度时对Hela细胞无毒性作用;木犀草素(0.01 ~ 1 μmol/L)能浓度依赖性地增强GJIC及Cx26蛋白表达量。【结论】木犀草素增强转染并稳定表达Cx32/Cx26的Hela细胞GJIC;这种增强作用可能与其增加Cx26蛋白表达水平有关。     

三七总皂甙对大鼠肝卵圆细胞增殖肝脏CX/GJIC的影响

目的研究三七总皂甙（Panax notoginoside，PNS）对大鼠肝卵圆细胞增殖模型肝脏缝隙连接蛋白（connexin，CX）表达及其介导的缝隙连接细胞间通讯（gap junction intercellular communication，GJIC）的影响。方法选择体重150g左右的雄性Wistar大鼠，随机分为对照组、模型组和PNS组。采用2-AAF／PH方法（2-acetylamin-ofluorene＋two thirds partial hepatectomy）建立肝卵圆细胞增殖模型，切开标记／染料示踪技术（incision loading／dye transfer，IL／DT）检测肝脏GJIC，免疫组织化学法检测CX32、43的表达和计数肝卵圆细胞，并观察PNS腹内注射后的表达变化。结果（1）对照组未见肝卵圆细胞，PNS组、模型组肝卵圆细胞增殖明显；PNS组与模型组相比，卵圆细胞增殖高峰低、持续时间长。（2）各组CX32和GJIC的表达：模型组与PNS组均低于对照组，表达峰呈先下调后逐渐恢复趋势，PNS组高于模型组。（3）各组CX43的表达：模型组与PNS组均高于对照组，表达峰呈先升高后逐渐恢复与肝卵圆细胞的增殖趋势一致，PNS组与模型组相比表达高峰滞后。结论2-AAF／PH是理想的肝卵圆细胞增殖模型；CX32和GJIC的下调可动员肝卵圆细胞，CX43可促进其增殖，CX／GJIC对肝卵圆细胞增殖有重要的调控作用；PNS可通过影响CX／GJIC的表达，调节肝卵圆细胞的增殖过程。     

黄芩素增强Cx32组成的细胞缝隙连接提高顺铂的细胞毒性

摘 要:【目的】 黄芩素在转染并稳定表达Cx32的HeLa细胞上,对顺铂细胞毒性的影响及其与GJ的关系?【方法】 SRB检测黄芩素对HeLa32细胞增殖性的影响,Parachute assay检测黄芩素对Cx32组成的GJ功能的影响?细胞集落实验用于检测黄芩素对顺铂细胞毒性的影响及其与Cx32组成的GJ的关系?Western blotting检测对Cx32蛋白的影响?【结果】 黄芩素24 h,100 μmol/L浓度以下不影响Hela32细胞增殖?黄芩素(0.0125 ~ 0.1 μmol/L)能浓度依赖性地增强Hela32细胞间的荧光传递?黄芩素(0.1 μmol/L)分别作用4 h,12 h,和24 h,细胞间荧光传递最强的作用时间是4 h?在生长融合细胞组(有GJ形成),黄芩素可以提高顺铂对HeLa32细胞的细胞毒性?在生长未融合细胞(无GJ形成),或用GJ抑制剂oleamide阻断GJ功能,黄芩素不改变顺铂对细胞的杀伤作用?多西环素调控HeLa32细胞Cx32的表达与GJ的形成?在生长融合细胞,不表达Cx32(无GJ形成),可以降低黄芩素增强顺铂细胞毒性的作用?在生长未融合细胞(无论Cx表达与否,均无GJ形成),改变Cx表达无此效应?黄芩素0.0125 ~ 0.1 μmol/L 作用细胞4 h,对Cx32蛋白表达没有影响?黄芩素0.1 μmol/L,作用细胞4 h,12 h,和24 h,对Cx32蛋白表达没有影响?【结论】黄芩素可增强HeLa32细胞GJ功能,提高顺铂的细胞毒性?黄芩素影响Cx32组成的GJ功能不伴有Cx32蛋白表达的增加?     

全反式维甲酸对胶质瘤细胞细胞间缝隙连接通讯的作用

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA）对胶质瘤细胞细胞间缝隙连接通讯（GJIC）的调节作用。方法：分别用1,10,100umol/L三种浓度的ATRA作用于培养的大鼠C6胶质瘤细胞,24,48及72h后,通过细胞间染料传输实验检测缝隙连接功能,以半定量RT－PCR检测ATRA作用下C6胶质瘤细胞Cx43基因的转录。结果：对照组C6胶质瘤细胞GJIC功能很低,经1,10,100umol/L三种浓度的ATRA作用后,增强了GJIC。这种增强作用在ATRA作用24h后即十分明显,在1,10umol/L两种浓度下,ATRA对GJIC的增强作用可以持续到ATRA作用72h后,而经100umol/L的ATRA作用48h后,GJIC功能的增强则不如低浓度ATRA作用下明显,结论：对于C6胶质瘤细胞,ATRA是有效的GJIC功能增强剂,此种增强作用可能是通过转录后途径实现的。     

全反式维甲酸对脑胶质瘤细胞缝隙连接细胞间通讯功能的影响

目的 观察大鼠脑胶质瘤C6细胞缝隙连接细胞间通讯（GJIC)功能，并研究全反式维甲酸(ATRA)对C6细胞GJIC功能的影响。方法 (1)全反式维甲酸(ATRA)上调(36胶质瘤细胞GJIC功能；(2)划痕荷载染料传输实(SLDT)检测C6细胞ATRA处理前、后的细胞GJIC功能强弱；(3)光学显微镜观察ATRA处理前、后的细胞形态学变化。结果 (1)C6细胞GJIC功能低下；(2)ATRA上调C6胶质瘤细胞GJIC功能；(3)上调C6胶质瘤细胞GJIC功能后细胞增殖受到抑制。结论 (1)ATRA是C6细胞GJIC功能上调剂之一；(2)GJIC功能强弱可影响肿瘤细胞增殖。     

电针对小鼠内脏和体表细胞连接通讯的不同作用

为探讨细胞连接通讯在针刺疗法中的作用，对10只小鼠右侧肝经下腹段进行了电针，测定了电针鼠和10只未电针的对照鼠肝和肝经表皮的细胞连接通讯，结果显示：电针明显促进肝细胞连接通讯，而对表皮细胞连接通讯则表现为抑制作用。说明对内脏和体表细胞连接通讯的不同作用可能是针刺对机体的有益调整作用的重量机制之一。     

大豆异黄酮对人子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响

目的 探讨植物雌激素-大豆异黄酮对人子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。方法 应用MTT比色方法研究大豆异黄酮对人子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。结果 低浓度(0．0005～0．05mg／L)时，随着剂量的增加表现出刺激子宫内膜增殖的作用。高浓度(0．05～5mg／L)时，随着剂量的增加大豆异黄酮刺激子宫内膜增殖的幅度下降。结论 大豆异黄酮能起到促进子宫内膜细胞增殖的作用，从而维持子宫内膜的内分泌功能。