红斑、丘疹及鳞屑性皮肤病

20131750银屑病患者皮损间充质干细胞细胞因子的分泌水平/闫鑫(山西医科大学),刘瑞风,侯瑞霞…//中国皮肤性病学杂志.-2013,27(6).-553~556分离患者皮损与健康人皮肤皮损间充质干细胞(MSCs),流式细胞术及多向分化法进行细胞鉴定;ELISA法检测第3代皮肤MSCs培养上清液白细胞介素-8和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的分泌水平。结果:两组MSCs的细胞形态、表面标志和多向分化能力相似,细胞标记CD29,D90及CD105均呈高表达,而     

人表皮干细胞的体外培养与MSCs对其诱导的初步研究

目的：探讨人表皮干细胞体外分离培养的理想方法，初步研究骨髓间充质干细胞（MSCs）上清对其生长的影响。方法：采用中性蛋白酶-胰蛋白酶两步法收获表皮细胞，Ⅳ型胶原快速粘附分选表皮干细胞，用无血清培养基进行体外培养，采用SABC—FITC进行培养细胞鉴定。结果：胎儿皮肤和人包皮皮肤均可成功分离到表皮干细胞集落，且增殖能力强，细胞表达Bl整合素和角蛋白CK19。MSCs上清形成的条件培养基的诱导下，收集的表皮细胞形成花环样克隆，并形成成纤维样细胞。结论：用酶消化法、胶原快速粘附和无血清培养法是较理想的体外分离培养表皮干细胞的方法，MSCs可以诱导表皮细胞的定向分化。     

白介素8及其受体CXCR2在银屑病角质形成细胞中的表达

目的 观察白介素8（IL－8）及基受体CXCR2在银屑病角质形成细胞中的表达及在银屑病的临床及病理表现中的作用。方法 培养银屑病患者皮损处角质形成细胞，通过微孔小室实验检测其上清液的趋化功能，通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中IL－8的表达，通过流式细胞仪分析银屑病患者皮损处角质形成细胞的趋化因子受体CXCR2的表达。结果 银屑病患者皮损处角质形成细胞分泌上清液对中性粒细胞的趋化能力明显强于正常对照组，其分泌的IL－8水平也高于正常人，皮损处角质形成细胞CXCR2的表达也明显强于正常对照组。结论 银屑病患者皮损局部表面出的角质形成细胞高度增殖与角质形成细胞高分泌、高表达具有促增殖作用的IL－8及其受体CXCR2有关，同时皮损局部大量的炎性细胞的浸润部分可能是由于角质形成细胞高分泌具有趋化能力的IL－8，它们可能在银屑病的发生、发展中起着重要作用。     

钙离子对HaCaT细胞体外增殖及白细胞介素6表达、分泌的影响

目的探讨不同钙离子(Ca~(2+))浓度对人永生化角质形成细胞株HaCaT(human immortal keratinocyte colony HaCaT cells)细胞体外增殖及表达、分泌白细胞介素6(IL-6)的影响。方法用加入不同浓度Ca~(2+)的洛斯维(roswell park memorial institute,RPMI)1640培养液(Ca~(2+)终浓度分别为0.3mmol/L,0.5mmol/L,1mmol/L)与RPMI1640培养液(对照组)分别培养HaCaT细胞。培养HaCaT细胞24h,48h时,MTT法检测细胞增殖情况;q PCR法检测IL-6 mRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中IL-6的分泌量;免疫细胞化学法观察细胞中IL-6的表达。结果 MTT结果显示,在设定浓度下Ca~(2+)对HaCaT细胞的增殖作用随其浓度增加而增高;与对照组相比,各浓度组培养24h,48h时,HaCaT细胞增殖率分别为9.65%±0.57%,29.47%±0.73%,52.18%±1.13%(P均0.01);10.23%±0.51%,34.17%±1.14%,57.96%±0.21%(P均0.01)。各浓度组培养HaCaT细胞24h,48h时,IL-6 mRNA表达量随Ca~(2+)浓度增加而升高(P0.01);IL-6蛋白分泌量随Ca~(2+)浓度增加而升高(P0.01);免疫细胞化学结果显示,IL-6平均光密度随Ca~(2+)浓度增加而升高(P0.01)。结论在设定浓度下,Ca~(2+)可促进HaCaT细胞的体外增殖,并可在mRNA和蛋白水平促进IL-6的表达和分泌,这可能是银屑病皮损处钙浓度增高导致角质形成细胞增殖和炎症反应加重的原因。     

银屑病患者骨髓CD34+细胞定向分化的T细胞对角质形成细胞增殖的影响

目的:探讨家族史阳性的银屑病患者骨髓CD34 细胞体外定向分化的T细胞对表皮角质形成细胞(KC)增殖调控蛋白表达的影响.方法:将银屑病患者骨髓CD34 细胞体外定向分化的T细胞经链球菌超抗原活化后与KC共培养,分别采用免疫组化法及ELISA法检测KC C-myc、bcl-xL、p53及Ki67蛋白表达及培养上清白介素(IL)-8、干扰素(IFN)-γ水平.结果:①受银屑病患者CD34 细胞定向分化T细胞作用的KC C-mye及Ki67蛋白表达与自然增殖组及正常人CD34 细胞定向分化的T细胞作用组相比显著增强(P＜0.05),而bcl-xL及p53蛋白表达3组间的差异无统计学意义(P＞0.05);②受正常人CD34 细胞定向分化T细胞作用的Kc C-myc、bcl-xL、p53及Ki67蛋白表达与自然增殖组比较差异亦无统计学意义(P＞0.05);③银屑病CD34 细胞定向分化的T细胞作用组培养上清IL-8及IFN-γ水平显著高于正常对照组(P＜0.01).结论:银屑病患者骨髓造血细胞定向分化的T细胞可影响KC增殖状态,显示类似银屑病外周血T细胞的活性特点.     

银屑病患者皮损间充质干细胞生物学特性研究

目的:比较银屑病患者皮损与健康人皮肤间充质干细胞(MSCs)生物学特性的差异。方法:分离和培养银屑病组(15例)与健康对照组(15例)皮肤MSCs,比较二者生长速度、基因表达差异及细胞因子分泌水平。结果:与健康对照组相比,银屑病组皮损MSCs的生长速度明显缓慢(P0.05)。2组基因测序结果示共鉴定出1 539个差异表达的mRNA,其中130个在银屑病组皮损MSCs中表达上调,1 409个表达下调,且JAK-STAT信号通路上有17个基因在银屑病组皮损MSCs中表达下调。2组细胞因子分泌水平比较,在增殖相关的细胞因子中,银屑病组表皮生长因子(EGF)和干细胞因子(SCF)表达均明显高于健康对照组(P0.05),而碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达明显减少(P0.05);在炎症相关细胞因子中,银屑病组白细胞介素(IL)-11浓度显著高于健康对照组(P0.05),而IL-3、IL-6、IL-8和肝细胞生长因子(HGF)浓度均明显低于健康对照组(P0.05)。结论:银屑病患者皮损MSCs生物学特性有异常,可能是导致患者皮损局部微环境异常的原因及银屑病的发病机制之一。     

Lyn抑制剂Bafetinib对恶性黑素瘤细胞株UACC62增殖和凋亡的影响

目的：明确Lyn抑制剂Bafetinib对恶性黑素瘤细胞株UACC62增殖和凋亡的影响。方法：体外培养UACC62细胞，用不同浓度的Bafetinib处理，应用CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力，观察Bafetinib的效应以及是否具有剂量依赖性，并选择出合适的浓度进一步实验。Western blot检测Lyn、凋亡相关蛋白（Bax、Beclin、Bcl-2）及信号转导通路蛋白的表达。结果：Bafetinib能够抑制黑素瘤细胞UACC62的活力，并呈一定的剂量依赖性；Bafetinib处理组细胞的OD值为1.05±0.08，低于对照组的2.04±0.07 ( P＜0.05)；Bafetinib处理组细胞克隆数为49±8.53，低于对照组的288±7．68( P＜0.05)。Bafetinib处理组细胞中P-ERK、Beclin1、Bax、Bcl-2、Lyn蛋白的表达量分别是对照组的0.30，3.25, 2.23，0.53, 0.29倍( P＜0.05)。结论：Lyn抑制剂Bafetinib能够抑制恶性黑素瘤细胞UACC62的增殖，并通过ERK信号通路诱导细胞凋亡。     

银屑病患者骨髓基质细胞白介素-8、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子分泌水平的实验研究

目的:通过比较银屑病患者与正常对照组骨髓基质细胞分泌白介素(IL)-8和粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平的差异,揭示银屑病患者骨髓造血微环境的异常.方法:采用密度梯度离心法分离患者与对照组骨髓单一核细胞,通过贴壁法培养骨髓基质细胞.收集传至3代后又培养72 h的骨髓基质细胞及培养上清,用流式细胞仪鉴定细胞表面标志物,并用ELISA法检测上清液中IL-8和GM-CSF的水平.结果:90%以上分离培养的细胞表面高表达CD29,而CD34、CD45及人白细胞抗原(HLA)-DR表达阴性,即骨髓基质细胞纯度在90%以上;患者组骨髓基质细胞分泌lL-8显著低于对照组(P<0.05),而GM-CSF的分泌水平两组间无统计学差异(P>0.05).结论:银屑病患者骨髓基质细胞分泌的IL-8存在异常,表明患者骨髓造血微环境可能存在异常.     

不同中波紫外线照射对角质形成细胞干细胞因子/kit表达及黑素细胞迁移的影响

目的探讨不同中波紫外线照射对角质形成细胞干细胞因子／kit表达及黑素细胞迁移的影响。方法不同剂量的311nm窄谱中波紫外线（NB—UVB）及308nm单频准分子光（MEL）照射培养的HaCaT角质形成细胞株，ELISA方法测定培养上清液中干细胞因子含量，培养上清液作为条件化培养基培养A375黑素瘤细胞，RT—PCR测定A375细胞c—kitmRNA的表达，微孔滤膜法测定A375细胞迁移功能的变化。结果不同剂量的NB—UVB和MEL照射HaCaT细胞均可使干细胞因子分泌增加，其分泌量与照射剂量呈剂量依赖关系。用所收集的条件化培养基处理A375细胞，后者干细胞生长因子受体kit mRNA的表达显著上调，迁移功能亦显著增加。相同剂量的NB—UVB和MEL照射，对角质形成细胞干细胞因子／kit表达及黑素细胞迁移的影响无显著差异。结论NB—UVB和MEL两种波长紫外线照射均可通过同时上调角质形成细胞干细胞因子和黑素细胞kit的表达，增加黑素细胞的迁移。     

他克莫司影响朗格汉斯细胞迁移机制的研究

目的探讨他克莫司影响朗格汉斯细胞迁移能力的原因。方法用不同浓度的他克莫司处理人角质形成细胞株HaCaT，24h后收集上清液，通过ELISA法检测上清液中的单核细胞化学吸引蛋白质1(monocyte chemoattractant protein 1，MCP—1)浓度，并通过RT—PCR法检测细胞中MCP—1 mRNA水平。结果经质量浓度为625～5000ng／mL他克莫司处理过的HaCaT株，其分泌至上清液中的MCP-1水平明显受到抑制，细胞中MCP-1 mRNA的水平低于正常对照组。结论他克莫司通过抑制角质形成细胞中MCP-1的分泌、表达，进而影响了朗格汉斯细胞前体及朗格汉斯细胞趋化至皮损处。阻止或减弱了某些免疫反应。     

抗BP180NC16A IgG亚型检测方法的建立以及在大疱性类天疱疮中的意义

【摘要】 目的 建立抗BP180NC16A IgG亚型的检测方法,并探讨其在大疱性类天疱疮（BP）中的意义。方法 原核表达GST-NC16A融合蛋白,并采用亲和层析法纯化。优化ELISA关键环节,建立抗BP180NC16A IgG各亚型的ELISA检测方法,并对10例未经治疗的BP、5例妊娠疱疹、1例成人线状IgA大疱性皮病、2例天疱疮患者血清分别进行检测。结果 通过方阵测定法确定GST-NC16A融合蛋白的包被浓度为500 μg/L,包被条件为4 ℃ 12 h,血清稀释倍数为1 ∶ 100,酶标二抗为1 ∶ 2000,孵育条件为37 ℃ 1 h,底物反应条件37 ℃ 20 min。10例大疱性类天疱疮患者10例IgG1阳性,9例IgG2阳性,5例IgG3阳性,9例IgG4阳性。2例寻常型天疱疮、1例成人线状IgA大疱性皮病均阴性。5例妊娠疱疹所有亚型均阳性,以IgG1和IgG3亚型为主。结论 抗BP180NC16A ELISA检测法特异性强、重复性好,是检测BP和妊娠疱疹患者抗BP180NC16A抗体亚型的半定量方法。     

喜树碱对HaCaT细胞低氧诱导因子1α表达的影响

目的 观察喜树碱对低氧（2% O2）培养下HaCaT细胞低氧诱导因子1α（HIF-1α）表达的影响,探讨外用喜树碱治疗银屑病可能的作用机制。 方法 将HaCaT细胞分为实验组和溶媒组（对照组）,实验组为喜树碱 + DMEM培养液,终浓度分别为12.5、25、50、100、200 nmol/L;溶媒组为含二甲基亚砜（DMSO）的DMEM培养液。不同浓度的喜树碱作用于HaCaT细胞12、24、48、72 h,CCK8法检测细胞增殖;用以上浓度处理低氧诱导12 h的HaCaT细胞,Western印迹检测细胞HIF-1α蛋白的表达。将HaCaT细胞分为常氧组和低氧组,每组内再分喜树碱干预组（100 nmol/L）和非干预组（溶媒对照组）,培养12 h后实时荧光定量PCR检测HIF-1α mRNA的相对表达。统计分析采用SPSS16.0软件进行Levene′s test、单因素方差分析、Dunnett-t检验和析因分析。结果 不同浓度喜树碱作用12、24、48、72 h后对HaCaT细胞的增殖有抑制作用,呈浓度和时间依赖关系;200 nmol/L喜树碱作用12 h,100、200 nmol/L喜树碱作用24 h细胞增殖抑制率分别为（17.66 ± 6.46）%、（33.11 ± 4.63）%、（56.31 ± 1.69）%,与同时段溶媒对照组间差异有统计学意义（均P < 0.05）。低氧诱导12 h,25、50、100、200 nmol/L 喜树碱处理后HIF-1α蛋白表达分别为0.348 ± 0.065、0.261 ± 0.112、0.115 ± 0.043、0.045 ± 0.024,与溶媒组（1.445 ± 0.329）比较,差异有统计学意义（均P < 0.05）。喜树碱干预（100 nmol/L）与非干预的HIF-1α mRNA表达（△Ct值）分别为：常氧组-5.575 ± 0.29、-5.451 ± 0.21;低氧组-6.543 ± 0.57、-6.203 ± 0.31;低氧较常氧条件下HaCaT细胞HIF-1α mRNA的表达下调,差异有统计学意义（F = 29.856,P < 0.05）;喜树碱干预和非干预组间HaCaT细胞HIF-1α mRNA的表达在常氧和低氧条件下差异无统计学意义（F = 1.667,P > 0.05）。结论 100 nmol/L喜树碱可抑制HaCaT细胞HIF-1α蛋白表达,对HIF-1α mRNA的表达水平无明显影响。     

nicastrin基因沉默的HaCaT细胞基因表达谱分析

【摘要】 目的 通过沉默人永生化角质形成细胞HaCaT细胞中nicastrin（NCSTN）基因的表达,研究其下游细胞增殖及分化相关信号通路的改变。方法 将HaCaT细胞分为干扰组、阴性对照组和空白对照组：干扰组转染特异性NCSTN-siRNA,阴性对照组转染阴性对照siRNA,空白对照组转染等量转染试剂。实时PCR及Western印迹检测各组NCSTN mRNA和蛋白表达验证转染效率。运用Agilent人类全基因组表达谱芯片技术研究干扰组HaCaT细胞基因表达谱与阴性对照组之间的差异,以表达上调或者下调倍数 ≥ 2.0且P ≤ 0.05为标准,将差异基因用GO分析进行富集,筛选出表达差异显著且与角质形成细胞增生分化相关的基因,用实时PCR验证结果。结果 干扰组HaCaT细胞NCSTN mRNA及蛋白相对表达量分别为0.287 ± 0.090、0.443 ± 0.085,明显低于阴性对照组（0.969 ± 0.127、1.047 ± 0.114）以及空白对照组（1.000 ± 0.151、1.000 ± 0.111）,差异均有统计学意义（F值分别为30.787、31.139,P值均为0.001）。表达谱芯片显示,与阴性对照组相比,干扰组表达下调基因605条,上调基因444条。GO分析显示,干扰后差异表达基因富集到上皮发育、上皮细胞分化、角质形成细胞分化、角化4种生物学过程。对表达差异显著且与角质形成细胞增生分化相关的Sprouty相关蛋白2基因、表皮生长因子7基因、胰岛素样生长因子结合蛋白5基因、人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2基因和骨形成发生蛋白6基因通过实时PCR验证,验证结果与芯片结果显示的差异趋势一致。结论 NCSTN基因功能缺失有可能通过调节其下游细胞增殖及分化相关信号通路的表达,影响角质形成细胞的正常增殖和分化。     

沉默ATAD3A对黑素瘤A375细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制研究

【摘要】 目的 探讨沉默三磷酸腺苷酶家族蛋白3A（ATAD3A）对黑素瘤A375细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法 2019年8 - 12月在重庆市渝北区人民医院收集经病理确诊的3例黑素瘤患者的黑素瘤组织及癌旁组织 ，应用Western印迹检测ATAD3A在上述组织中的表达。分别采用沉默ATAD3A慢病毒和空载慢病毒感染黑素瘤A375细胞系，构建沉默ATAD3A（shATAD3A）实验组和空载对照（shCtrl）组，经实时荧光定量聚合酶链反应（qRT?PCR）和Western印迹验证干扰效率。采用CCK?8实验、克隆形成实验比较两组细胞的增殖能力和克隆形成能力，采用Transwell细胞侵袭实验、划痕实验比较两组细胞的侵袭、迁移能力，采用Western印迹检测两组细胞自我更新相关蛋白（NANOG、SOX2、OCT4）和侵袭、迁移相关蛋白［基质金属蛋白酶2（MMP2）、波形蛋白、SLUG］的表达水平。两组间各指标的比较采用独立样本t检验。结果 Western印迹显示，相对于癌旁组织，ATAD3A在3例黑素瘤组织中高表达（t = 10.825，P < 0.001）。qRT?PCR和Western印迹显示，shATAD3A组A375细胞ATAD3A mRNA为0.230 ± 0.073，shCtrl组为1.000 ± 0.244，两组比较，t = 9.461，P < 0.001，蛋白表达水平分别为0.279 ± 0.267和0.867 ± 0.115，t = 8.595，P = 0.002， 表明成功构建沉默ATAD3A的黑素瘤A375细胞系。克隆形成实验和CCK?8实验显示，shATAD3A组克隆形成率低于shCtrl组（22.667% ± 2.510%比43.667% ± 5.030%，t = 6.464，P = 0.003），且细胞增殖活性自第2天开始直至第4天均显著低于shCtrl组。划痕实验及Transwell细胞侵袭实验显示，与shCtrl组相比，shATAD3A组划痕愈合减慢，划痕愈合率自第12 h开始（32.920% ± 4.642%比49.302% ± 1.448%，t = 5.835，P = 0.004）至24 h明显降低，通过Transwell小室下室的侵袭细胞数减少（68.330 ± 13.050比234.330 ± 19.139，t = 12.411，P < 0.001）。Western印迹显示，shATAD3A组细胞NANOG、SOX2、OCT4、MMP2、波形蛋白、SLUG的表达水平均显著下降（P < 0.05或0.001）。结论 ATAD3A在黑素瘤组织中高表达，沉默ATAD3A能抑制黑素瘤A375细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

角蛋白置换肽配体对银屑病患者外周血T细胞的抑制作用

目的 筛选下调银屑病患者T细胞功能的置换肽配体。方法 分离和纯化寻常型银屑病患者和健康人外周血T细胞，通过MTT法和ELISA法分别检测T细胞增殖情况和IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10等细胞因子的变化，筛选得到抑制银屑病患者外周血T细胞功能的APL。结果 APL 119R和355L可显著下调银屑病患者T细胞的增殖，分别与谷胱甘肽巯基转移酶和空白对照比较，在10 μg/mL和100 μg/mL浓度下，P < 0.05；而对健康人T细胞无明显作用。同时二者可显著下调银屑病患者外周血T细胞的IFN-γ和IL-2，上调IL-4和IL-10的分泌表达，分别与相对应的野生型表位比较，在10 μg/mL和100 μg/mL浓度下，P < 0.05。结论 APL 119R和355L具有体外下调银屑病患者外周血T细胞增殖和增强Th2极化的作用。     

Rab23对鳞状细胞癌Sa3细胞增殖的抑制作用及相关机制

目的 观察Rab23分子对鳞状细胞癌（简称鳞癌）细胞Sa3增殖的影响及机制。 方法 将鳞状细胞癌Sa3细胞分为4组：正常对照组［转染绿色荧光蛋白（eGFP）］、Rab23过表达组（转染eGFP标记的Rab23过表达质粒）、Rab23沉默组（转染Rab23 shRNA质粒）、Rab23空载体组（转染空载体）。平板克隆形成实验、流式细胞仪检测Rab23过表达和沉默对Sa3细胞增殖能力的影响。Western印迹检测Rab23过表达和沉默对Sa3细胞Erk/p-Erk表达水平的变化。两组间均数比较采用t检验,多组间均数比较采用单因素方差分析,多组资料两两比较使用Bonferroni′s多重比较分析。 结果 通过构建质粒、慢病毒感染,获得Rab23过表达和Rab23沉默的稳定Sa3细胞株。平板克隆形成实验结果显示,Rab23过表达组克隆形成率为2.3% ± 0.2%,与正常对照组（3.6% ± 0.3%）相比,Sa3细胞增殖能力降低（P < 0.05）,而Rab23沉默组克隆形成率（4.1% ± 0.2%）较空载体组（1.8% ± 0.0%）增殖能力明显提高（P < 0.01）。细胞周期检测显示,Rab23过表达可引起Sa3细胞G1期阻滞,Rab23过表达组增殖指数（0.581 ± 0.035）较正常对照组（0.698 ± 0.018）降低（P < 0.05）,而Rab23沉默组增殖指数（0.567 ± 0.015）较空载体组（0.444 ± 0.014）明显提高（P < 0.01）。Western 印迹结果显示,与正常对照组相比,Rab23过表达组和Rab23沉默组Sa3细胞Erk表达水平无变化,但Rab23过表达组磷酸化Erk表达水平较正常对照组降低,Rab23沉默组磷酸化Erk表达水平较空载体组升高。 结论 Rab23对鳞癌Sa3细胞增殖起抑制作用,这种抑制作用可能与Erk通路有关。     

微RNA-125a靶向白细胞介素23受体信号通路抑制HaCaT细胞增殖机制的初步研究

目的 探讨微RNA(miR)-125a抑制角质形成细胞增殖的相关机制.方法 用白细胞介素(IL)-23干预处理人永生化角质形成细胞(HaCaT)24h后,分为miR-125a组和miR-NC组,分别转染miR-125a过表达质粒和过表达对照质粒.采用细胞计数试剂盒(CCK8)法检测两组转染后0、24、48、72 h H...     

胸腺基质淋巴细胞生成素在不同皮肤病中的作用机制研究

【摘要】 胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）是一种与白细胞介素7（IL-7）类似的细胞因子,可以促进多种细胞的分化和增殖,并使其分泌Th2细胞因子,在机体免疫系统中发挥重要作用。近年来发现在许多皮肤病中TSLP的表达水平异常,在部分皮肤病中其水平高低还与疾病严重程度相关,提示TSLP可能是治疗多种皮肤病的潜在靶点。本文综述近年来TSLP在多种皮肤病（包括炎症性疾病、免疫性疾病、遗传性疾病和肿瘤性疾病）发生发展中的研究进展,为临床相关疾病的诊治提供依据和思路。     

进行期寻常性银屑病患者皮损面积严重度指数与骨代谢的相关性研究

目的：研究进行期寻常性银屑病患者皮损面积严重度指数（PASI）与骨代谢相关指标抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）、血Ca、骨碱性磷酸酶（BAP）、碱性磷酸酶（ALP）的相关性。方法对88例寻常性银屑病进行期患者进行PASI评分并分组,PASI评分≤10分为A组,10～20分为B组,≥20分为C组。采用双能X线吸收法分别检测患者腰椎、股骨颈、左前臂3个部位的骨密度（BMD）;在相同条件下检测患者血液中ALP和钙的浓度;ELSIA法检测患者血清中TRACP-5b及BAP的浓度,并进行统计学分析。结果反映骨形成指标的ALP、骨吸收指标的TRACP-5b和血Ca浓度A组和C组差异有统计学意义（P＜0.05）,成骨细胞活性标志物BAP 3组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。C组腰椎BMD分别与A、B两组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,A组股骨颈BMD与B、C两组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,而左前臂BMD 3组比较无差异（P＞0.05）。C组腰椎、股骨颈峰值骨量（T值）与A、B两组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,3组左前臂T值组间比较无差异（P＞0.05）。结论寻常性银屑病进行期患者存在骨代谢异常及骨量流失,且与PASI评分成正比。     

微小RNA-181b-5p对皮肤黑素瘤细胞株增殖和侵袭的作用及机制研究

【摘要】 目的 探讨微小RNA（miRNA）-181b-5p是否通过靶向普列克底物蛋白（PLEK）抑制皮肤黑素瘤（CM）细胞的增殖及侵袭能力。方法 生物信息学分析CM核心基因;双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-181b-5p和PLEK的靶向结合。采用RNA oligo和siRNA分别调控A375细胞miRNA-181b-5p和PLEK的表达,具体分组为：模拟物阴性对照组、miRNA-181b-5p模拟物组、抑制剂阴性对照组、miRNA-181b-5p抑制剂组、PLEK siRNA组、siRNA阴性对照组、miRNA-181b-5p抑制剂和对照siRNA共转染组以及miRNA-181b-5p抑制剂和PLEK siRNA3共转染组。上述各组用相应试剂处理细胞48 h后,采用qPCR检测A375细胞中miRNA-181b-5p和PLEK mRNA的表达,Western印迹检测PLEK蛋白的表达,Transwell小室侵袭实验检测A375细胞的侵袭能力;继续培养24 ~ 96 h后,CCK8实验检测A375细胞增殖能力。结果 PLEK为CM的核心基因,CM原位癌组织较癌旁组织高表达PLEK（P = 0.031）,转移组织较原位癌组织高表达PLEK（P = 0.001）。与人表皮黑素细胞HEMa-LP相比,A375细胞高表达PLEK mRNA（3.884 ± 0.156比0.997 ± 0.010,t = 18.48,P < 0.001）及PLEK蛋白（2.840 ± 0.301比1.029 ± 0.094,t = 5.47,P = 0.005）,低表达miRNA-181b-5p（0.333 ± 0.042比0.967 ± 0.069,t = 7.83,P = 0.001）。双荧光素酶报告基因实验显示,miRNA-181b-5p和PLEK靶向结合。与模拟物阴性对照相比,miRNA-181b-5p模拟物转染后A375细胞的存活率显著降低（48 h,t = 7.96,P = 0.015;72 h,t = 7.50,P = 0.002;96 h,t = 7.96,P = 0.001）,侵袭能力也显著降低（t = 5.07,P = 0.007）;相反miRNA-181b-5p 抑制剂组A375细胞存活率高于抑制剂阴性对照组（24 h,t =5.38,P = 0.013;48 h,t = 5.36,P = 0.013;72 h,t =7.63,P = 0.005;96 h,t =5.99,P = 0.004）,侵袭能力也高于抑制剂阴性对照组（t = 7.24,P = 0.002）;与对照siRNA组相比,PLEK siRNA转染后A375细胞的增殖能力降低（48、72、96 h时,P值分别为0.015、0.011、0.001）,侵袭能力也降低（t = 4.93,P = 0.008）;与miRNA-181b-5p 抑制剂和对照 siRNA共转染组相比,miRNA-181b-5p 抑制剂和PLEK siRNA共转染组A375细胞的增殖率明显降低（24、48、72、96 h时,P值分别为0.042、0.042、0.037、0.017）,侵袭能力也明显降低（t = 8.52,P = 0.001）。结论 miRNA-181b-5p抑制A375细胞增殖和侵袭能力,其机制涉及靶向下调PLEK的表达。