聚合酶链反应快速检测胃粘膜幽门螺杆菌

本研究的目的是了解简单的PCR方法诊断幽门螺杆菌感染的价值。选用互补于幽门螵杆菌尿素酶A基因片段的一对引物，建立PCR方法扩增幽门螺杆菌DNA．扩增产物经琼脂糖电泳显示一条411bp区带。用PCR扩增41株HP分离菌均阳性，而空肠弯曲菌等8种肠道细菌均阴性．显示100%特异，系列稀释试验显示PCR能检测0．1pg的HP DNA；126例胃粘膜标本用PCR、尿素酶试验、培养和涂片检查，HP检出率分别为70．6%、56．3%、32．5%和56．3%，这些结果提示简单快速的PCR方法是检测FIP的有价值的方法。     

聚合酶链反应快速检测胃粘膜幽门螺杆菌

本研究的目的是了解简单的PCR方法诊断幽门螺杆菌感染的价值。选用互补于幽门螺杆菌尿素酶A基因片段的一对引物,建立PCR方法扩增幽门螺杆菌DNA,扩增产物经琼脂糖电泳显示一条411bp区带。用PCR扩增41株HP分离菌均阳性,而空肠弯曲菌等8种肠道细菌均阴性,显示100％特异,系列稀释试验显示PCR能检测0.1pg的HP DNA;126例胃粘膜标本用PCR、尿素酶试验、培养和涂片检查,HP检出率分别为70.6％、56.3％、32.5％和56.3％,这些结果提示简单快速的PCR方法是检测HP的有价值的方法。     

逆转录——聚合酶链反应快速检测血清HDVRNA

丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）是一种缺陷性共价闭环单股负链ＲＮＡ病毒,长约１７００个核苷酸,由于ＨＤＶＲＮＡＧ＋Ｃ含量高易形成二级结构以及易变异等原因使逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）成功率不高［１,２］。我们根据Ｃｈａｏ等［３］报道的ＨＤＶＲＮＡ序列建立了一种ＲＴＰＣＲ方法,并对４３份肝炎血清进行了检测,现报道如下。材料与方法一、血清标本３份ＨＤＶＲＮＡ阳性血清,由北京市肝炎研究所黄德庄教授赠送。２３例血清ＨＤＶ标志阳性患者均系在我院住院患者。其中ＨＤＡｇ阳性１０例,抗ＨＤＩｇＭ阳性１例,抗…     

聚合酶链反应检测衣原体

聚合酶链反应检测衣原体曹爱琴，陈雷，计雪文检测衣原体有直接涂片法及培养法，但前者阳性率低，后者则繁琐费时。我们建立了聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测衣原体的方法并对１００例患者和５０例体检者进行检测，同时与直接涂片法及免疫荧光法对比，现报告如下：材料与方法...     

聚合酶链反应快速诊断伤寒

聚合酶链反应快速诊断伤寒周伯平，谌取鼎，高志良，陈士竹，刘水腾，唐蔚目前对伤寒尚缺乏有效的早期诊断方法。我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）快速诊断伤寒，现将结果报告如下。材料与方法一、病例选择临床拟诊伤寒患者４ｌ例，均具有典型临床表现，为１９９３年３月～...     

聚合酶链反应（PCR）快速检测痰结核菌的研究

1 资料及方法 本组188例患者均为住院病人,男112例,女76例,年龄6～71岁,病程6周～12年。根据1978年全国结核病防治工作会议诊断标准,均属活动性肺结核,其中初治174例,复治14例,胸部X线示有明显空洞者46例,其中涂片阳性37例,涂片阴性9例。 用无菌广口玻璃瓶漱口后留晨痰3～5ml,分别做涂片和PCR检测。72例痰标本做了培养检查。PCR试剂盒由解放军第309医院结核病研究室及中国科学院科海生物工程公司提供。扩增仪为美国Lab-line2052     

聚合酶链反应-增强化学发光法快速检测结核杆菌的研究

目的　建立聚合酶链反应 -增强化学发光法 (polymerase chain reaction-enhanced chemilumine cence ,PCR-ECL)快速高灵敏度和高特异性检测结核杆菌的方法。方法 以结核分支杆菌、牛分支杆菌特异性抗原Pab基因的419bp片段为靶序列,PCR体系经优化,直接酶标法标记探针 ,增强化学发光检测(ECL)进行分子杂交。结果 PCR体系对结核分支杆菌、牛分支杆菌、卡介苗的扩增为阳性,PCR体系灵敏度为5fgDNA分子。ECL体系灵敏度为0.5pgDNA分子。采用模拟痰样,可检至10个以下结核杆菌。结论 建立了结核杆菌的PCR-ECL快速检测方法,整个过程可在一天半内完成。     

逆转录一聚合酶链反应快速检测血清HDV RNA

丁型肝炎病毒(HDV)是一种缺陷性共价闭环单股负链RNA病毒,长约1 700个核苷酸,由于HDV RNAG+C 含量高易形成二级结构以及易变异等原因使逆转录一聚合酶链反应(RTPCR)成功率不高[1,2].我们根据Chao等[3]报道的HDV RNA序列建立了一种RT-PCR方法,并对43份肝炎血清进行了检测,现报道如下.     

聚合酶链反应检测弓形虫的实验研究

目的建立敏感、特异、稳定的聚合酶链反应（ＰＣＲ）法,以检测弓形虫感染。方法建立ＰＣＲ法,确定最佳扩增条件;用ＰＣＲ法检测实验感染家兔血液中ＤＮＡ的动态变化,并与ＥＬＩＳＡ法检测ＣＡｇ进行比较。结果兔感染弓形虫后第２ｄ,ＰＣＲ开始出现阳性,阳性率为７６．９％（１０／１３）,总检出率达１００％。与ＥＬＩＳＡ法查ＣＡｇ进行平行检测,前者出现阳性时间早,且阳性率明显高于后者。该法敏感性高,可检测到１０ｆｇＤＮＡ含量;特异性强,对其它９种寄生虫和微生物ＤＮＡ均无交叉现象;稳定性好,对阳、阴性同一样品重复５次,结果一致。结论提示本法可用于临床诊断,在一定范围内替代病原学和免疫学检测。     

聚合酶链反应检测恶性疟原虫的研究

通过５ 对根据恶性疟原虫不同基因序列设计的引物筛选及７ 种从滤纸干血滴中快速制备疟原虫ＤＮＡ模板的方法的比较,以建立一种敏感、特异、简便、快速的聚合酶链反应（ＰＣＲ） 检测恶性疟原虫的方法。结果表明,根据恶性疟原虫中度重复基因序列ｐＢＲＫ１１４ 设计的引物,可从恶性疟原虫ＤＮＡ 中扩增出２０６ ｂｐ 大小的ＤＮＡ片段,而间日疟原虫、人白细胞ＤＮＡ均无此扩增带出现,并至少可检测出原虫血症为５ ×１０－ ７ 的感染水平,且适用于我国不同地理株恶性疟原虫的检测;滤纸干血滴样本经生理盐水溶血煮沸法处理的ＰＣＲ 扩增效果最为理想,且简易、经济、重复性好;在云南疟疾流行区采集的３６０ 份血样中,ＰＣＲ 法与镜检法符合率为９７ ．５％ 。本研究建立的ＰＣＲ 检测恶性疟原虫方法具有敏感、特异、简易和快速的特点,便于现场推广应用。     

聚合酶链反应检测恶性疟原虫的研究

根据编码恶性疟原虫红细胞结合抗原（ＥＢＡ－１７５）的部分ＤＮＡ片段而设计合成寡核苷酸引物并进行多聚酶链反应（ＰＣＲ）以检测体外培养的恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析，可见扩增出了特异的４９２ｂｐ大小的ＤＮＡ片段，而对间日疟原虫（Ｐ．ｖ．）、食蟹猴疟原虫（Ｐ．ｃ．）、约氏鼠疟原虫（Ｐ．ｙ．）、伯氏鼠疟原虫（Ｐ．ｂ．）及正常人血白细胞ＤＮＡ不能扩增出此片段。本法可检原虫密度下限为２０μｌ血中仅含１０个原虫，具有高敏感性和特异性。     

聚合酶链反应检测腹泻病病原

聚合酶链反应(PCR)是一种高效的DNA体外合成技术,它能将所检测的DNA序列或片段合成数百万倍,据此可以确定含有该特异DNA片段的病原存在。引起腹泻的病原细菌、病毒、寄生虫、霉菌等。其中大多数都已能用该方法检测。以下简要介绍其操作步骤。     

聚合酶链反应检测隐孢子虫

微小隐孢子虫 (Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｒｖｕｍ ,Ｃｐ)是引起人类腹泻的重要原因之一[1 3] ,获得性免疫缺陷综合征(ＡＩＤＳ)患者也常易感染。现有微小隐孢子虫病的诊断方法中 ,粪便涂片染色查找卵囊可因粪中卵囊太少、染色剂放置过久、操作方法不熟练或因非特异性嗜酸性颗粒出现而漏诊、误诊。免疫学试验欠敏感 ,体外培养周期太长 ,且难以控制。应用核酸杂交技术检测微小隐孢子虫灵敏、特异 ,但耗时、烦琐、技术要求高和价格昂贵 ,不适宜于临床应用。近年报道聚合酶链反应 (ＰＣＲ)对检测微小隐孢子虫具有高度特异性和灵敏性…     

聚合酶链反应检测HGV RNA

庚型肝炎病毒(HGV)呈全球性分布。在志愿供血员中 HGV 感染率约为1.7%,职业供血员中为12.9%,在一些不明原因肝病患者中约为9%。HGV 感染可表现为急性、慢性或暴发性肝炎。目前采用聚合酶链反应检测 HGV RNA 是诊断 HGV 感染的主要手段。我们在 HGV5′端非翻译区(5′UTR)设计引物。建立了检测 HGV RNA 的逆转录-套式-聚合酶链反应(RT-Nested-PCR),并用于 HGV感染的诊断。材料与方法一、标本来源     

应用聚合酶链反应检测结核杆菌

应用聚合酶链反应(PCR)进行体外基因扩增,可使极微量的特定核苷酸片段在短时间内扩增至100万倍,而用于临床检测,该法具有快速简便、特异性和敏感性高等优点。作者先用2条人工合成寡核苷酸作引物,引入耐热的DNA 聚合酶(Jag DNA 聚合酶),经30个扩增周期,形成针对结核杆菌复合物所特有蛋白质(MPB64蛋白质),它由240个碱基对组成的基因DNA 密码序列。把扩增产物浇注在2%琼脂糖凝胶板上,再用寡核苷酸探针的Souther 核酸杂交法进一步证实.同时作者还采用一组包括真核细     

聚合酶链反应快速诊断结核性脑膜炎

选择可疑结核性脑膜炎(TBM)患者34例(根据临床特征分为很可能 TBM 患者20例,较可能 TBM患者7例和可能 TBM 患者7例)、非 TBM 对照组51例(包括化脓性脑膜炎14例,无菌性脑膜炎3例、其他神经功能紊乱者34例),采用聚合酶链反应(PCR),常规细菌学和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑脊液的方法诊断 TBM,并进行比较.结果很可能 TBM 患者20例中 PCR 阳性者15例(75%),抗体 ELISA 阳性者11例(55%);较可能 TBM 患者7例中则分别为4例(57%)和2例,可能 TBM 患者7例中分别为3例(43%)和2例;     

聚合酶链反应快速诊断结核性脑膜炎

聚合酶链反应快速诊断结核性脑膜炎唐小平，罗惠娟，黄已实，卢群馨近年来，国外陆续报道用聚合酶链反应（ＰＣＲ）诊断结核性脑膜炎（结脑），显示出独特的优点。我们应用ＰＣＲ技术检测了５０例结脑患者的脑脊液（ＣＳＦ）标本，并与其它方法的检测结果进行比较，现将结...     

聚合酶链反应快速诊断结核性脑膜炎

聚合酶链反应快速诊断结核性脑膜炎李连青，朱庆义，贺润花，张遗珠，杨瑞馥，李银太，郭兆彪近年来应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测各种临床标本中结核菌具有快速、敏感、特异之优点，临床标本不需经过培养，直接用ＰＣＲ扩增试验，当天可出结果，具有早期诊断价值［Ｌａ...     

应用聚合酶链反应快速诊断结核病

传统的结核菌涂片镜检敏感性较低,而培养法耗时又长。近年发展起来的聚合酶链反应(PCR)即体外基因扩增技术,能在短时间内将选择性结核菌 DNA 片段扩增百万倍以上,从而大大提高诊断的敏感性。本文比较传统诊断方法和 PCR 技术检测结核菌的结果。方法对经培养分离鉴定出的211株分支杆菌菌株及177份不同来源的临床标本(包括痰、支气管灌洗物、肺活检组织、尿、粪等)进行PCR.设计、合成与编码结核菌 MPB70抗原基因序列具有同源性的两条寡核苷酸 TB-1A 和 TB-1B 作为引物。应用耐热的 Taq DNA 聚合酶对结核菌靶 DNA 进行扩增;经30～40个 PCR 循环(DNA 变性→退火→引物延伸)后,其扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色后在紫外线下观察带谱。结果所检测的211株分支杆菌菌株中,101株经 PCR 证实为复合结核菌(人型、牛型和BCG 牛型结核菌),与培养结果一致;其余110