甲状旁腺激素受体1在大鼠颞下颌关节炎髁突软骨中的表达变化研究

目的 研究甲状旁腺激素受体1(parathyroid hormone receptor 1,PTH1R)在大鼠颞下颌关节骨关节炎（temporomandibular joint osteoarthritis,TMJOA）髁突软骨中的表达变化。方法 研究于2022年7月至2023年1月在潍坊医学院动物实验中心和潍坊市口腔生物医学重点实验室进行。选取8周龄健康雄性SD大鼠48只,将大鼠随机分为实验组和对照组,每组各24只。实验组大鼠用咬合升高法构建TMJOA动物模型,并于造模后的第2、4、6、8周分别处死6只大鼠,解剖分离双侧髁突;对照组大鼠仅进行相同时长的张口动作,其余操作与实验组相同。通过苏木精-伊红和番红O-固绿染色,观察大鼠髁突软骨的组织学变化,按照改良Mankin评分系统对大鼠髁突软骨及软骨下骨拍照并评分;再应用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和免疫组化染色,检测大鼠髁突软骨内PTH1R mRNA和蛋白的表达情况。结果 苏木精-伊红和番红O-固绿染色结果显示,所有时间点对照组髁突软骨的组织学形态具有一致性,而实验组颞下颌关节的...     

间接性TMJ损伤后髁突软骨中MMP-13表达及其意义

目的 通过观察羊颞下颌关节(temporomandibular joint,TMJ)间接创伤后不同时期髁突软骨中基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)的表达,探讨MMP-13在TMJ创伤后导致颞下颌关节骨关节病(temporomandibular joint osteoarthrosis,TMJOA)过程中的作用。方法 用自制撞击装置造成山羊双侧颞颌关节间接性创伤。分别于伤后1周、1个月、3个月、6个月取材,并以正常TMJ作为对照,用免疫荧光组织化学方法进行观察。结果 TMJ髁突软骨中MMP-13伤后1周即出现强的表达,以后逐渐减弱;荧光着色于软骨破坏区增生滑膜样组织及软骨肥大带较强,正常对照组基本呈阴性反应。结论 MMP-13参与了TMJ创伤所致TMJOA过程,并起了重要作用。     

Notch信号通路在颞下颌骨关节炎中的表达

目的 研究Notch信号通路相关分子在颞下颌骨关节炎(temporomandibular joint arthritis,TMJOA)中的表达情况,探索该通路在TMJOA发生发展中的作用及机制.方法 将72只昆明小鼠随机分为实验组、假手术组及正常组.实验组小鼠手术摘除右侧颞下颌关节盘,假手术组除不摘关节盘外其余操作同实验组,正常组不作处理.所有小鼠左侧颞下颌关节盘不作处理.术后1周、2周、4周每组处死8只小鼠,进行组织化学染色,根据骨关节炎的病理诊断标准评估TMJOA模型是否建立成功,选取成功的TMJOA软骨进行免疫组化染色检测Notch1(NICD1)、Jagged1、Hes1、Hes5的表达情况,并采用半定量方法评分.结果 实验组髁突Notch1(NICD1)、Jagged1、Hes5术后表达量明显增加,且与TMJOA进展呈正相关;Hes1表达明显降低,第4周时有所增加.结论 TMJOA模型中,Notch通路相关分子表达发生了明显变化,表明该通路在TMJOA发生发展中起着重要作用.     

程序性坏死在髁突软骨退变中的作用

目的:探究程序性坏死(Necroptosis)在髁突软骨退变中的作用.方法:48只SD大鼠随机分为对照(Con)组、雌激素补充(E2)组、单侧前牙反(UAC)组、单侧前牙反+雌激素补充(U+E2)组(n = 12),3周后处死、取材.HE、番红O-固绿染色评价软骨退变程度;免疫组化及Western blot检测髁突...     

兔关节盘、髁突及软骨下骨的年龄相关性改变组织学研究

目的:探究不同年龄段兔颞下颌关节(TMJ)关节盘、髁突和软骨下骨的生理特征的变化。方法 :选取1、4、12和32周龄健康雌性新西兰大白兔各3只,取材TMJ,经脱钙处理后进行5μm连续切片,苏木精-伊红染色。分别对关节盘大小、髁突前后径,以及关节盘所对应软骨下骨的形态结构和骨密度进行测量分析。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。结果:关节盘大小比较,4周组明显大于1周组(P=0.039),12周组明显大于4周组(P=0.007);髁突前后径在4周和12周组间(P=0.003)显著增加;软骨下骨的形态结构和骨密度在4~32周内(P<0.05)显著改变。结论:兔颞下颌关节关节盘和髁突在青春期前生长发育明显;髁突软骨下骨的形态结构和骨密度在4周时开始出现明显改变。虽然青少年期和成年期兔髁突大小没有统计学差异,但是两者软骨下骨的骨质密度差异明显。     

一侧下颌角受力对双侧关节盘及髁突软骨的影响

目的:利用三维有限元分析法,从生物力学角度探讨一侧下颌角受力瞬间双侧颞下颌关节(TMJ)关节盘及髁突软骨的相应变化及其与临床实际的关系。方法:建立下颌骨和TMJ共5个不同开口度(闭口位及1、2、3、4cm开口位)的三维有限元数字模型;于左侧下颌角下缘向上,施以与眶耳平面垂直的1000N压力。获取受力后双侧关节盘和髁突软骨产生的平均主应力的分布及其峰值大小。结果:(1)闭口位时,双侧关节盘和髁突软骨的平均主应力(EQV应力)峰值明显较小;(2)在不同开口位,关节盘EQV应力峰值多位于后带,髁突软骨则多位于前斜面;(3)关节盘EQV应力峰值始终是左侧大于右侧,而髁突软骨在闭口位及1、4cm开口位时左侧EQV应力峰值大于右侧,2、3cm开口位时则是右侧大于左侧;(4)双侧关节盘和髁突软骨的EQV应力峰值出现的部位基本对称。结论:(1)本组模型较精确地反映了实物,并且实验结果与临床实际相接近,解决了以往实验中遇到的一些问题,为TMJ的生物力学研究提供了新的途径。(2)稳定的咬合关系可以明显减小TMJ的间接损伤。(3)关节盘后带病变及髁突器质性病变可能由下颌骨一次性暴力创伤后造成的TMJ间接损伤引起;受力侧关节盘比对侧更易受损伤,而双侧髁突软骨都有受到严重损伤的可能。     

颞下颌关节软骨损伤治疗的进展

颞下颌关节(temporomandibular joint,TMJ)软骨损伤主要是指髁突和关节结节功能面的软骨损伤。病因复杂,表现为软骨内软骨细胞含量较低且增殖能力差,若治疗不当或治疗不及时,极易形成颞下颌关节病(temporomandibular disorder,TMD),最终出现不可扼制的逐步恶化,导致颞下颌关节骨关节病(temporomandibular joint osteoarthritis,TMJOA)的发生,以及关节功能的丧失。本文就其国内外研究现状及现有的治疗手段和疗效评价进行综述。1颞下颌关节软骨的解剖生理特点TMJ软骨主要分布于髁突和关节结节的表面,是继发性纤维软骨,组织学特点与其他…     

FAM20C在小鼠下颌髁突发育过程中的时空表达

目的 观察小鼠髁突发育过程的不同阶段,FAM20C在髁突软骨中的时空表达特点,试探究其在小鼠髁突发育过程中的可能作用机制。方法 苏木精-伊红(HE)染色和改良番红O-固绿染色观察胚胎17.5 d和出生后0、7、21 d 4组小鼠髁突软骨及软骨下骨的形态学变化。免疫组化染色观察相应时间点FAM20C在小鼠髁突软骨组织中的定位及表达。测量FAM20C阳性表达的平均光密度值,并进行单因素方差分析。结果 HE染色和改良番红O-固绿染色结果表明：随着软骨内骨化的进展,髁突软骨细胞层长度减少,软骨下骨体积增加,下颌髁突体积增大;免疫组化结果表明：4组小鼠髁突软骨组织中均有FAM20C阳性表达,FAM20C主要表达于髁突软骨增殖软骨细胞层和前肥大软骨细胞层,少量表达于肥大软骨细胞层及软骨下骨层,随着髁突发育,FAM20C表达逐渐减少。统计学结果显示,各时间点FAM20C阳性表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论 FAM20C参与小鼠下颌髁突发育,可能通过调节髁突软骨细胞的增殖和分化在髁突形成中发挥重要作用。     

高脂饮食对小鼠颞下颌关节骨关节炎的影响

目的:通过检测髁突软骨内IL-1β、TNF-α、VEGF的表达,探讨高脂饮食对小鼠颞下颌关节骨关节炎的影响。方法:48只小鼠随机分为正常饮食(ND)组、常规建模(MF+ND)组、高脂建模(MF+HFD)组、混合建模(MF+MD)组。采用前牙单侧反牙合法建立异常咬合模型,建模后的第2、4、6、8周处死小鼠取双侧颞下颌关节。通过HE和番红-O固绿染色进行病理观察及评分。免疫组织化学染色检测髁突软骨内IL-1β、TNF-α、VEGF的表达。结果:HE和番红-O固绿染色结果显示,建模组可见髁突软骨破坏,Mankin评分增高;而MF+HFD组破坏更加严重,Mankin评分更高;免疫组织化学染色结果显示,各建模组IL-1β、TNF-α和VEGF的阳性细胞数明显增加,并且MF+ND、MF+HFD和MF+MD三组IL-1β、TNF-α、VEGF阳性细胞表达比较均具有显著差异(P<0.05)。结论:长期的高脂饮食可以加重咬合异常所诱导的颞下颌关节骨关节炎小鼠的髁突软骨破坏,加重小鼠颞下颌关节骨关节炎的程度。     

生长期兔颞下颌关节盘前移位后髁突软骨胶原表达的变化

目的:建立生长期兔颞下颌关节不可复性关节盘前移位动物模型,检测髁突软骨内Ⅱ型胶原和X型胶原的表达,探讨青少年颞下颌关节盘不可复性前移位与髁突软骨内成骨的关系,及其与下颌骨发育不对称畸形之间存在相关性的机制.方法:取生长期新西兰大白兔40只,右侧颞下颌关节手术建立不可复性关节盘前移位模型,左侧行假手术作为对照.实验动物于建模后24 h、1、4、8、12周分组处死取材.通过免疫组织化学方法检测髁突软骨组织内Ⅱ型胶原和X型胶原在蛋白水平的表达,采用PASW statistics 18.0软件包对每组样本实验侧和对照侧进行配对t检验.结果:Ⅱ型胶原在盘移位后24h、1、4、8周时与对照侧均无显著差异,12周时较对照侧表达升高(P＜0.05).X型胶原在盘移位后24 h(P＜0.01)、1周(P＜0.01)、4周(P＜0.05)时较对照侧显著降低,8周、12周时实验侧与对照侧间无显著差异.结论:不可复性关节盘前移位对兔髁突软骨内成骨过程造成干扰,这种影响可能是单侧颞下颌关节盘前移位后患侧下颌支高度不足和下颌骨不对称畸形的重要原因.     

颞下颌关节骨关节病髁突软骨细胞雌激素受体β差异表达的研究

目的 探讨大鼠颞下颌关节骨关节病髁突软骨细胞雌激素受体β（ERβ）的差异表达。方法 25只SD大鼠随机分为实验组（15只）和对照组（10只）。实验组以去除左侧 部分关节盘的方法建立大鼠颞下颌关节骨关节病模型，术后3个月处死动物，取其髁突软骨细胞进行培养，采用免疫组化、逆转录聚合酶链反应、肽质量指纹谱（PMF）和Western blot等方法观察软骨细胞中ERβ蛋白和mRNA的表达。结果 PMF显示，ERβ是软骨细胞线粒体蛋白质组的成分，Western blot、逆转录聚合酶链反应和免疫组化结果显示，ERβ在实验组细胞和线粒体中表达水平较对照组降低（P<0.01）。结论 ERβ可能通过线粒体途径参与了颞下颌关节骨关节病的病理过程。     

Experimentally induced unilateral tooth loss: expression of type II collagen in temporomandibular joint cartilage.

PURPOSE: We sought to examine possible changes in pattern and concentration of type II collagen in the condylar cartilage and articular disc of the temporomandibular joint (TMJ) in response to unilateral extraction of mandibular teeth in a rabbit model as a means of elucidating the effects of unilateral mastication on the TMJ. METHODS: A total of 12 experimental rabbits were killed either 3 or 6 weeks after the extractions, and 3 additional rabbits without extractions were used as controls. TMJ blocks from both sides of each of the 15 animals were examined for type II collagen via an immunoperoxidase procedure. RESULTS: Anti-type II collagen antibody (Ab) binding was detected mainly in the hypertrophic chondroblast layer of the condylar cartilage of normal rabbits. At 3 weeks after unilateral extraction of teeth, anti-type II collagen Ab binding to the territorial matrix of the hypertrophic chondroblast layer of the condylar cartilage and to the disc was stronger than normal. The increase in Ab binding appeared more dramatic on the nonfunctional side than on the functional side of TMJ. Variations from the normal pattern of anti-type II collagen Ab binding in terms of distribution through the extracellular matrix and fibrillar appearance were also observed. CONCLUSION: The findings suggest that the condylar cartilage and disc adapt to the imbalance induced by unilateral extraction of teeth through chondrocyte repair responses involving collagen II expression that appear to differ between the functional and nonfunctional sides of the TMJ.     

rhIL-1Ra抑制大鼠颞下颌关节骨关节炎软骨破坏的研究

目的:探讨关节腔内注射重组人IL-1Ra对实验性大鼠颞下颌关节炎软骨关节修复的影响.方法:取SD大鼠24只,用关节腔内注射Ⅱ型胶原酶法建立双侧颞下颌关节骨关节炎模型,1周后,右侧(实验侧)关节腔内一次性注射重组人IL-1Ra5 μg(稀释于0.05 ml生理盐水),左侧(对照侧)注射等量生理盐水.建模后2周、4周各处死12只动物,取颞下颌关节标本进行HE染色、免疫组化染色及RT-PCR检测,用Mankin评分方法评估TMJ组织病理变化程度.另取1只SD大鼠用作空白对照,2周后处死.结果:2周时双侧颞下颌关节软骨均呈现不同程度的关节病损,实验侧和对照侧Mankin计分分别为1.33±0.52和2.00±6.63(P ＞0.05).4周时,实验侧改良和对照侧Mankin评分分别为3.00±0.63和6.50 ±0.84(P＜0.05).AD-AMTS-4、5的蛋白及mRNA表达也低于对照侧(P＜0.05).结论:颞下颌关节腔内注射重组人IL-1Ra能缓解骨关节炎导致的软骨病损,其治疗机制可能是通过抑制ADAMTS-4、5的表达来实现的.     

Clinical, radiographic and MRI findings of the temporomandibular joint in patients with different rheumatic diseases

The aim of this study was to investigate the condition of the temporomandibular joint (TMJ) in patients with different rheumatic diseases, and report correlations between the clinical, radiographic and magnetic resonance imaging (MRI) findings. The 67 patients were divided into four groups: 16 with rheumatoid arthritis (RA), 15 with mixed connective tissue disease (MCTD), 18 with ankylosing spondylitis (AS) and 18 with spondyloarthropathy (SPA). They were clinically examined, and panoramic tomography, lateral panoramic radiography and MRI of the TMJ were performed. MRI showed reduced articular cartilage in 25% (4/16) of RA, 0% (0/15) of MCTD, 17% (3/18) of AS and 17% (3/18) of SPA patients. Condylar changes included erosion, osteophytes and abnormal shape. Disc alterations included perforation, abnormal anterior position and decreased movement. These abnormalities were most frequent in RA patients, and least frequent in MCTD and SPA patients. Crepitation and reduced maximum opening of the mouth correlated with abnormalities of the disc and articular cartilage as shown by MRI. Severe condylar erosion in panoramic tomograms significantly correlated with MRI findings of condylar erosion (P<0.01), diminished thickness of condylar cartilage, abnormal condylar shape, and abnormal shape of the temporal surface of the TMJ (P< or =0.001). The presence of crepitation, limited mandibular movement and/or pain on movement of the jaw often indicated structural damage to the TMJ. Panoramic radiographs provide an alternative method to MRI but, to obtain a more detailed anatomic picture, MRI is recommended for patients with acute unexplained pain or as part of preoperative work up. A panoramic recording is not indicated when MRI is planned.     

实验性单侧前牙反牙合修复体对大鼠髁突软骨中甲状旁腺激素相关蛋白和PTH/PTHrP受体-1表达的影响

目的 探讨实验性单侧前牙反牙合修复体对大鼠髁突软骨中甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrP）及PTH/PTHrP 受体-1（PTH1R）表达的影响。方法 在6周龄SD大鼠左侧上、下切牙粘接金属不良修复体,使其呈反牙合关系,2、 4、8周后取颞下颌关节（TMJ）,苏木精-伊红（HE）染色观察组织形态学变化,免疫组织化学染色及实时定量聚合酶链反应检测PTHrP、PTH1R的表达情况。结果 8周时,实验组髁突软骨出现明显退行性变,PTHrP阳性细胞较对照组显著增多（P<0.01）, PTH1R阳性细胞明显减少（P<0.01）;实验组髁突软骨PTHrP mRNA的表达显著高于对照组（P<0.01）,而PTH1R mRNA表达明显降低（P<0.01）。结论 髁突软骨PTHrP的高表达因PTH1R的低表达不能有效发 挥作用,可能是髁突软骨骨关节病样变的重要分子机制之一。     

山羊颞下颌关节强直病理模型的建立

目的：建立山羊颞下颌关节强直病理模型,以进一步探讨颞下颌关节强直的病因。方法：取山羊9只,随机等分为3组。分别采用破坏关节表面软骨、破坏关节表面软骨＋去除关节盘、破坏关节表面软骨＋去除关节盘＋关节腔内植骨3种不同手段制作模型。术后3个月后观察颞下颌关节强直的形成情况。结果：关节软骨破坏＋去除关节盘组全部发生强直;保留关节盘者无一例发生强直;植骨组仅2只山羊发生关节黏连。强直者,光镜下表现为髁突与关节窝间类骨质形成;未强直者。光镜下表现为关节表面破坏。结论：去除关节盘＋关节软骨破坏形成的TMJ强直,具有可重复性、短期内发生以及良好的相似性,接近人类病变发生的过程．是一种较好的制作颞下颌关节强直模型方法。     

间接性TMJ损伤后髁突软骨增殖能力的改变

目的：探讨间接性颞下颌关节损伤在颞下颌关节骨关节病发生、发展过程中的作用。方法：用撞击装置撞击山羊右侧下颌角部，间接造成ＴＭＪ损伤，以对侧关节为对照，伤后２小时，１、３、６月处死动物，采用免疫组化方法观察髁突软骨细胞ＰＣＮＡ阳性细胞的分布及改变。结果：与对照侧相比，髁突软骨ＰＣＮＡ阳性细胞在伤后２小时无变化，伤后１月时增多而在伤后３月和６月时明显减少。结论：ＴＭＪ损伤导致ＴＭＪＯＡ的机理是由于损伤破坏了髁突面屏障，使胶原纤维裸露于关节腔内，引起关节局部内环境变化，使滑液中的异物在关节内压作用下进入软骨或骨髓，破坏和抑制了软骨的增殖能力，引起软骨组织进行性丧失，导致ＴＭＪＯＡ。     

Recombinant adeno-associated virus serotype 2 (rAAV2)—An efficient vector for gene delivery in condylar cartilage, glenoid fossa and TMJ disc in an experimental study in vivo

Objective

To elaborate whether rAAV2 can be used for future TMJ gene therapy, we examined the infection efficiencies of rAAV2 in vitro, and the transgene expression pattern mediated by rAAV2 in glenoid fossa, TMJ disc and condylar cartilage in vivo.

Materials and methods

Different dosages of rAAV2-eGFP (MOI: 5 × 10⁴, 1 × 10⁴, 5 × 10³) were applied to primary cultured condylar chondrocytes of rats. Infection efficiencies were analysed by FACSCalitur at different time points. Vastatin, a molecule not naturally expressed in TMJ, was used as a reporter for detection of rAAV2 mediated transgene expression in vivo. Thirty SD rats were injected with either rAAV2-sec-Vastatin (experimental group) or rAAV2-eGFP (control group) into both sides of TMJ. They were sacrificed at the indicated time (7, 14, 21, 30 and 60 days of injection) and the TMJ samples were collected for RT-PCR and immunostaining analysis.

Results

High dosage (MOI 5 × 10⁴) of rAAV2-eGFP can achieve desirable transduction efficiencies in vitro after 5 days. Transgene expression of rAAV-sec-Vastatin persisted for about 21 days in glenoid fossa, around 7 days in TMJ disc and at least 60 days in condylar cartilage in vivo. In condylar cartilage, transgene expression was found in the proliferative layer and chondroblast layer (day 7), chondrocyte layer (day 14), pre-hypertrophic and hypertrophic layer (day 21), hypertrophic layer and deep hypertrophic layer (day 30 and 60).

Conclusion

Recombinant AAV2 could be considered as a promising vector for gene therapy in TMJ which can mediate therapeutic gene expression in glenoid fossa, articular disc and condylar cartilage in vivo.     

医用臭氧对颞下颌关节骨关节炎大鼠髁突软骨作用研究

目的    分析于颞下颌关节腔内注射医用臭氧对颞下颌关节骨关节炎（temporomandibular joint osteoarthritis，TMJOA）大鼠髁突软骨的作用。方法    选取8 ~ 10周龄雄性SD大鼠22只，随机分为对照组6只、模型组6只、实验组10只。模型组和实验组大鼠建立TMJOA模型3周后，实验组大鼠颞下颌关节腔内注射质量浓度为30 μg/mL的医用臭氧，其他2组注射生理盐水，每周1次，共3次。行锥形束CT（cone beam computed tomography，CBCT）扫描后处死各组大鼠并进行取材，观察髁突和关节盘的变化；采用HE、甲苯胺蓝染色并分别通过改良Mankin′s评分和平均光密度值分析髁突软骨细胞和基质的变化情况；采用抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）染色观察破骨细胞数量及分布。结果    经CBCT检查和肉眼观察发现，模型组和实验组颞下颌关节髁突及关节盘呈现出不同程度的缺损，模型组缺损程度重于实验组。3组改良Mankin′s评分、平均光密度值和TRAP染色阳性细胞数比较，差异均有统计学意义（F值分别为93.462、44.498、113.918，均P < 0.05）。其中，模型组和实验组的改良Mankin′s评分、TRAP染色阳性细胞数均大于对照组，模型组这2个指标还高于实验组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）；模型组和实验组的平均光密度值低于对照组，模型组的平均光密度值低于实验组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。结论    于颞下颌关节腔内注射质量浓度为30 μg/mL的医用臭氧，可减轻TMJOA大鼠髁突软骨及软骨下骨的损伤。