Kupffer细胞在肝脏疾病中的研究进展

目的 总结Kupffer细胞(KCs)与肝脏疾病的关系.方法 收集整理近年来关于KCs与肝脏疾病关系的相关文献并进行综述.结果 KCs是机体单核巨噬细胞系统的重要组成成分,在特定的环境下,活化的KCs通过呈递抗原、分泌细胞因子及趋化因子、吞噬作用等参与多种炎症反应、免疫耐受以及对肝细胞的侵害过程.KCs既可活化为M1型...     

Kupffer细胞在肝移植术后免疫耐受调控机制的研究进展

肝移植手术是目前治疗各种终末期肝病,延长患者生存时间的有效手段。Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs)位于肝血窦,是机体单核-巨噬细胞系统的重要组成部分,能够有效清除异物、病原体和凋亡细胞。在肝移植术后KCs可向感染灶迁移和聚集,并参与炎症反应及免疫耐受调节。KCs对肝移植术后减轻免疫排斥反应、诱导免疫耐受形成、增加移植成活率具有重要意义,现就KCs在肝移植术后免疫耐受调控机制的研究进展进行综述。     

烧伤并发内毒素血症早期肝损害与TNF-α mRNA表达的实验研究

目的观察 TNF-α mRNA 及其蛋白的组织分布和细胞定位,探讨烧伤并发内毒素血症早期肝损害的发生机理。方法选用20%Ⅲ度 TBSA 烧伤大鼠合并腹腔内毒素(LPS)注射造成烧伤复合内毒素血症肝损害模型,采用光镜,电镜及免疫组化原位杂交染色观察大鼠肝脏的形态功能变化、血清 TNF-α含量变化、肝组织 TNF-α和 TNF-α mRNA 的细胞定位及其分布。结果烧伤复合内毒素血症组,光镜下主要表现肝窦反应,枯否细胞(KCs)激活与增生以及肝细胞(HCs)变性坏死等;电镜下主要表现肝窦内血小板聚集、纤维素沉积与中性粒细胞(PMNs)扣押以及 KC_s、肝细胞退变溶解等。血清丙氨酸氨基转氯酶(ALT)显著升高(P<0.01)和白蛋白(ALB)轻度下降。组织TNF-α主要定位于肝窦内皮细胞(SECs)、KCs。TNF-α mRNA 主要定位于 KCs、PMNs、巨噬细胞(MPs)。而在单因素组主要特点为病变程度轻,肝功能损害不明显,血清 TNF-α峰值滞后以及组织TNF-α和 TNF-α mRNA 表达相对较弱等。结论 TNF-α是参与烧伤复合内毒素血症早期肝脏损害的重要细胞因子。     

烧伤并发内毒素血症早期肝损害与TNF—αmRNA表达的实验研究

目的 观察TNF－αmRNA及其蛋白的组织分布和细胞定位,探讨烧伤并发内毒素血症早期肝损害的发生机理。方法 选用20％Ⅲ度TBSA烧伤大鼠合并腹腔内毒素（LPS）注射造成烧伤复合内毒素血症肝损害模型,采用光镜,电镜及免疫组化原位杂交染色观察产肝脏的形态功能变化、血清TNF－α含量变化、肝组织TNF－α和TNF－α mRNA的细胞定位及其分布。结果 烧伤复合内毒素血症组,光镜下主要表现肝窦反应,枯否细胞（KCs)激活与增生以及肝细胞（HCs)变性坏死等;电镜下主要表现肝窦内血小板聚集、纤维素沉积与中性粒细胞（PMNs)扣押以及KCs、肝细胞退变溶解等。血清丙氨酸氨基转氨酶（ALT）显著升高（P＜0．01）和白蛋白（ALB）轻度下降。组织TNF－α主要定位于肝窦内皮细胞（SECs)、KCs。TNF－αmRNA主要定位于KCs、PMNs、巨噬细胞（MPs)。而在单因素组主要特点为病变程度轻,肝功能损害不明显,血清TNF－α峰值滞后以及组织TNF－α和TNF－αmRNA表达相对较弱等。结论 TNF－α是参与烧伤复合内毒素血症早期肝脏损害的重要细胞因子。     

脂质体介导NF-κB圈套寡核苷酸体外转染Kupffer细胞的实验研究

目的 研究核因子κB(NF-κB)圈套寡核苷酸(decoy oligodeoxyribonucleotide,ODN)体外借助阳离子脂质体转染大鼠Kupffer细胞(KCs)的效率,并观察其对KCs活化的抑制作用.方法 24只Wistar大鼠分为3组,每组8只.(1)对照组:分离培养正常大鼠KCs;(2)LPs组:KCs培养液中加入终浓度为1 ms/L的LPS作为刺激因素;(3)NF-κB圈套寡核苷酸组:先用阳离子脂质体(lipofectamine)将人工合成的NF-κB圈套寡核苷酸转染KCs(4μg/1×105个KCs),观察转染效果,再用1 mg/L LPS刺激,观察其对KCs活化的抑制作用,包括KCs的吞噬功能、NF-κB易位,以及膜表面分子CD4O mRNA的表达.结果 在LPS刺激下,KCs呈高度活化状态,吞噬功能增强,NF-κB向细胞核移位,细胞膜表面共刺激分子CD40 mRNA呈高表达状态,与对照组相比差异有统计学意义(t=4.01,P<0.01).在阳离子脂质体介导下,人工合成的NF-κB圈套ODN可以高效转染KCs,有效地抑制NF-κB活化,降低其下游基因的表达,与LPS组相比差异有统计学意义(t=4.89,P<0.01).结论 在脂质体介导下,NF-κB圈套寡核苷酸可以高效转染KCs,并有效抑制KCs的活化.     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在严重烧伤大鼠枯否细胞肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β产生中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在严重烧伤大鼠枯否细胞(KCs)促炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)产生中的作用。方法 健康成年的雄性SD大鼠32只,随机分为：假烫组;假烫 SB203580组;烧伤对照组;烧伤 SB203580组,每组8只。假烫或烧伤24h后分离出肝脏KCs,培养18h后加入50ng／ml的LPS进行刺激,18h后取上清液,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定TNF-α和IL-1β的含量,并收集KCs,实时逆转录聚合酶链反应检测KCs内TNF-α和IL-1β mRNA表达的改变,蛋白印迹(Western blot)法检测KCs中p38MAPK和JNK活性的变化。结果 烧伤大鼠分离出的KCs培养上清液中TNF-α和IL-1β含量、KCs中TNF-α和IL-1β mRNA的表达均较假烫组的明显增强,同时KCs中p38 MAPK活性和JNK活性升高,SB203580能显著抑制大鼠KCs上清液中TNF-α和IL-1β含量、KCs中TNF-α和IL-1β mRNA的表达和p38MAPK活性的升高,对JNK活性无影响。结论p38MAPK信号转导通路介导了严重烧伤大鼠KCs促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的产生。     

氯化钆阻断大鼠原位肝移植免疫耐受的分子机制

目的 观察氯化钆(GdCl3)阻断枯否细胞(KCs)功能对大鼠移植肝脏中KCs核因子(NF)-kB活性的影响,探讨NF-KB活性与FasL及细胞因子基因转录的关系.方法 肝移植术后1、2和4 h活杀动物,取肝脏分离KCs,分别用凝胶电迁移率改变分析法(EMSA)、Western blot蛋白印迹法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测KCs中NF-KB活性、Fas/FasL基因和蛋白质的表达及细胞因子白细胞介素(IL)-4和TNF-α基因转录.结果 GdCl3组KCs中NF-KB活性受到明显抑制,术后2、4 h FasL和细胞因子IL-4基因转录和蛋白的表达也明显减少(P<0.05),但术后2h TNF-α基因转录没有显著减少(P>0.05).结论 GdCl3可能阻断KCs中NF-kB活性,使KCs中FasL及IL-4的基因和蛋白表达减少,影响移植肝脏免疫耐受的形成.     

Kupffer细胞通过Toll样受体4信号通路调控组织因子及组织因子相关微粒表达诱导急性胰腺炎的发生

目的探讨Kupffer细胞(KCs)在受到脂多糖刺激时是否释放出组织因子膜微粒(TF-MP),判断Toll样受体4(TLR4)通路能否调控KCs表达组织因子(TF)诱导急性胰腺炎的发生。方法采用野生型C57/BL6小鼠(WT小鼠)和TLR4-/-小鼠建立急性胰腺炎模型后向腹腔内注射脂多糖10 mg/kg,分别于6、12、24 h处死两种小鼠各5只,观察胰腺组织病理损伤情况及其中TF表达情况,同时提取各小鼠KCs,检测KCs中的TF和TLR4的蛋白及m RNA表达量。剩余10只WT小鼠和10只TLR4~-/-小鼠用于观察生存情况。另外,提取WT小鼠和TLR4~-/-小鼠肝脏KCs,加入脂多糖300μg/L刺激,检测0、15、30、60、120 min时各时间点KCs中TF和TLR4的蛋白及m RNA表达量,同时测定其上清液中TF和TF-MP水平。结果 TLR4~-/-小鼠胰腺病理损伤程度较WT小鼠明显减轻,胰腺组织和肝脏组织中TF蛋白表达明显低于WT小鼠(P0.05)。建立急性胰腺炎模型后,TLR4-/-小鼠的生存率明显高于WT小鼠(P0.05)。无论是动物实验还是细胞实验,TLR4~-/-小鼠KCs中TLR4和TF m RNA及蛋白表达量均明显低于WT小鼠(P0.05);另外,TLR4~-/-小鼠KCs上清液中TF和TF-MP水平在30、60及120 min时均较WT小鼠明显降低(P0.05)。结论 KCs可能通过TLR4信号通路调控TF及TF-MP的表达而诱导急性胰腺炎的发生。     

枯否细胞NF-κB 激活对胆源性内毒素血症大鼠肝部分切除后肝细胞再生的影响

目的探讨胆源性内毒素血症(BE)大鼠肝部分切除(PH)后枯否细胞(KCs)核因子-κB(NF-κB))激活对肝细胞再生的影响.方法将Wistar大鼠分为4组(每组72只)N-PH组(正常大鼠70%PH组);BE-PH组(BE大鼠70%PH组);BE-PH 白细胞介素(IL)-10治疗组;BE-PH治疗对照组.检测70%PH后0、1、6、24、48、72h KCs NF-κB 激活、KCs肿瘤坏死因子α(TNFα)mRNA、IL-1βmRNA和IL-6 mRNA表达以及肝细胞溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)标记.结果 BE-PH组KCs NF-κB活性高于N-PH组(P<0.001),KCs TNFαmRNA、IL-1βmRNA及IL-6 mRNA表达亦明显高于N-PH组,而肝细胞BrdU高峰标记指数(38.82±9.79)低于N-PH组(64.37±13.69)(P<0.01);BE-PHIL-10组KCs NF-κB 活性低于BE-PH组(P<0.01),KCs TNFα、IL-1β及IL-6 mRNA表达减少,而肝细胞BrdU高峰标记指数高于BE-PH组(P<0.05).结论 BE-PH后KCs NF-κB 高水平激活导致KCs TNFαmRNA、IL-1βmRNA及IL-6 mRNA表达增高,从而抑制肝细胞再生,适当调控KCs NF-κB 活性能促进BE-PH后肝细胞再生.     

急性胆道感染所致多脏器损害发病机理的研究进展

目的 总结急性梗阻性胆管炎所致多器官损害发病机理的实验研究进展。方法 分析近10年来国内外有关急性梗阻性胆管炎所致多器官发病机理的文献报道。结果 已建立多种稳定、可靠的急性胆道感染动物模型、急性梗阻性管炎期间，枯否细胞（KCs)和吞噬与清除功能降低、肝细胞线粒体功能损害、KCs对肝细胞蛋白质合成功能的影响、肝脏损害对肺脏等远隔器官功能的影响及内毒素介导KCs激活并释放大量细胞因子是造成多器官损害的主要机理，结论 急性胆道感染造成多器官功能损害的病理生理机理十分复杂，其中KCs功能变化是造成多器官的重要原因。     

肾癌组织中VEGF表达、巨噬细胞浸润与血管形成的关系

目的　探讨肾细胞癌血管内皮生长因子(VEGF)的表达、巨噬细胞浸润和血管形成之间的关系以及与临床特征的关系。 方法　应用免疫组化SP法,分别检测40例肾细胞癌组织及癌旁正常肾组织中VEGF的表达、巨噬细胞的浸润及血管的形成。 结果　肾细胞癌中VEGF表达阳性率为67.5%(27/40例)、巨噬细胞浸润为72.5%(29/40例)、血管形成为75%(30/40例), 40例癌周正常组织中三者无表达或表达很弱。肾癌组织中VEGF表达、血管的形成与组织类型无关,而巨噬细胞浸润与组织类型 相关,尤其在透明细胞癌中有大量巨噬细胞浸润。VEGF的表达、巨噬细胞的浸润及血管的形成与病理分级及临床分期相关,即随 病理分级与临床分期的升高而增高。结论　VEGF表达、巨噬细胞的浸润及血管的形成,在肾细胞癌中均明显增加。肾细胞癌中 VEGF的表达、巨噬细胞的浸润及血管的形成密切相关。三者随肾细胞癌病理分级升高而增高,可能对预后判定有临床意义。     

SMAC类似物Birinapant对小鼠非酒精性脂肪性肝炎形成的影响及机制

目的:探讨SMAC类似物Birinapant对小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)形成的影响及分子机制。方法:将C57BL/6小鼠分为对照组,MCD组及Birinapant组。对照组普食喂养,MCD组用MCD饲料喂养,Birinapant组在MCD喂养的同时,每隔2周腹腔注射一次Birinapant(25 mg/μg),4周后处死,取肝组织、外周血,测量小鼠及肝组织大小和质量;检测小鼠肝组织病理改变;检测小鼠血清肝功能ALT和AST水平;提取肝脏Kupffer细胞(KCs),Western blot检测KCs中c IAP1、TRAF3、p-p65和p65的蛋白表达。结果:与对照组相比,MCD组小鼠及肝组织大小和质量显著降低,肝组织结构紊乱,肝细胞空泡样改变伴大量炎症细胞浸润,血清ALT和AST水平显著增高,KCs中c IAP1和p-p65的水平显著增高,TRAF3的表达受抑制。与MCD组相比,Birinapant组小鼠及肝脏体积和质量显著高于MCD组,肝组织结构纹理相对正常,肝细胞空泡样改变显著减少,浸润的炎症细胞显著减少,肝功能异常显著改善,KCs中c IAP1和p-p65的水平显著降低,TRAF3的表达显著增高。结论:SMAC类似物Birinapant可能通过抑制KCs c IAP1的表达和TRAF3的降解,通过抑制p-p65的活化,抑制炎症因子的表达,进而缓解MCD介导的小鼠NASH形成。     

核因子-κB圈套对Kupper细胞活化的抑制作用及其机制

目的探讨核因子-κB（NF-κB）圈套对大鼠Kupper细胞（KCs）活化的抑制作用及其机制。方法分离大鼠KCs并随机分为3组：正常对照组、内毒素（LPS）刺激组及NF-κB圈套组，后者KCs在LPS刺激前转染NF-κB圈套。除对照组外，两个实验组培养液中加入终浓度为1mg／L的LPS。于LPS刺激6h后，凝胶电迁移率改变分析法（EMSA）检测NF-κB蛋白结合活性，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测KCs膜表面CD80mRNA表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养上清肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-6表达情况。结果转染NF-出圈套可以高效抑制KCs激活。EMSA结果显示NF-κB活性仅为LPS组的0．53，RT—PCR结果显示KCs CD80 mRNA表达仅为LPS组的0．46，ELISA结果显示培养上清TNF-α表达量仅为LPS组的0、37，IL-6仅为LPS组的0．60。结论NF-κB圈套可以高效抑制NF—κB的转录活性，降低KCs膜表面共刺激分子和细胞因子的产生，为活体内应用NF—κB圈套提供了可靠的实验依据。     

脊髓损伤局部表达NgR的巨噬细胞的体外分离培养

目的 从脊髓损伤局部分离培养巨噬细胞,并鉴定其表达Nogo受体(Nogo receptors, NgR)情况.方法 胰酶消化大鼠损伤脊髓组织获取其脊髓损伤局部巨噬细胞,细胞贴壁后用添加5%胎牛血清的RPMI 1640培养,显微镜下观察巨噬细胞形态及生物学特点,免疫荧光化学方法鉴定其是否表达CD68及NgR.结果 原代培养的巨噬细胞贴壁生长,细胞形态呈圆形、椭圆形等,可存活约3周,表现为CD68抗原阳性,多数细胞NgR抗原阳性.结论 成功地从脊髓损伤局部分离出巨噬细胞,多数细胞表达NgR抗原.     

菲立磁标记胚胎干细胞移植肝损伤小鼠体内示踪研究

目的 观察菲立磁标记胚胎干细胞肝损伤模型移植后在体内迁徙、定居、增殖及与损伤肝脏整合.方法 将129/SvJ小鼠随机分为肝损伤和无肝脏损伤组,将最适菲立磁标记细胞数量经肝脏包膜下途径移植,通过对移植后第1、2、3周行肝脏MRI扫描观察移植细胞受体内定居增殖情况及受体肝内迁徙、定居情况.结果 菲立磁标记胚胎干细胞效率达到91.5%以上,体外有效引发MRI信号改变的最适移植细胞数量为1×105.肝脏MRI扫描,可观察到移植的标记细胞在受体肝内能定居并增殖,且与受体肝板有良好整合.结论 通过MRI活体示踪可以动态连续监测移植菲立磁标记胚胎干细胞体内的分布和增殖.     

骨髓间充质干细胞表达肿瘤坏死因子刺激蛋白-6对大鼠肝脏移植排斥反应的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)表达肿瘤坏死因子刺激蛋白-6(TSG-6)在大鼠原位肝移植排斥反应的作用.方法 Kupffer细胞(KCs)和BMSC分离培养,慢病毒载体(LV3-shTSG-6)感染下调TSG-6的表达,RT-PCR以及Western blot检测BMSC的TSG-6mRNA以及蛋白表达情况,KCs与BMSC共培养,检测上清液TNF-α、TSG-6含量;建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型,术后1d、3d、7d处死3只受体,检测血清AST、ALT、TBIL、γ-GGT、TNF-α、IL-6、IL-4含量,RT-PCR以及Western blot检测肝组织TSG-6mRNA以及蛋白表达情况,苏木精-伊红染色观察肝组织结构,各组剩余大鼠观察术后生存率.结果 BMSC慢病毒转染率＞70％;KCs和BMSC共培养,TSG-6-shRNA-BMSC+ KCs组各时间点分泌TSG-6明显低于BMSC+ KCs组和TSG-6-NC-BMSC+ KCs组(P＜0.05),BMSC+ KCs组和TSG-6-NC-BMSC+ KCs组分泌TNF-α于6h达高峰,12 h与6h比较明显降低(P＜0.05),但TSG-6-shRNA-BMSC+ KCs组12 h分泌TNF-α明显高于BMSC+ KCs组和TSG-6-NC-BMSC+ KCs组(P＜0.05);移植术后,TSG-6-shRNA-BMSC组ALT、AST、TBIL、γ-GGT、TNF-α、IL-6明显高于TSG-6-NC-BMSC组和BMSC组(P＜0.05),与PBS组比较差异无统计学意义;TSG-6-shRNA-BMSC组、TSG-6-NC-BMSC组和BMSC组IL-4明显高于PBS组(P＜0.05),而TSG-6-shRNA-BMSC组IL-4低于TSG-6-NC-BMSC组和BMSC组(P＜0.05);在肝脏病理中,TSG-6-shRNA-BMSC组与PBS组肝组织排斥反应程度明显较高,Banff评分Ⅱ～Ⅲ级;TSG-6-shRNA-BMSC组与PBS组大鼠肝移植术后存活时间分别为(16.6±4.6)d、(15.4±6.7)d,明显低于TSG-6-NC-BMSC组(69.6±28.1)d和BMSC组(69.2±28.2) d(P ＜0.05).结论 BMSC分泌表达TSG-6在一定程度上具有减轻肝移植急性排斥反应的作用.     

In vitro lipofectamine mediated NF-κB decoy oligodeoxynucleotides transfection of Kupffer cells

Objective To study the transfection effects of nuclear factor-KappaB(NF-κB)decoy oligodeoxynucleotides(ODN) to Kupffer cells (KCs) mediated by lipofectamine,and investigate it's suppression effects on KCs activation. Methods Twenty-four Wistar rats were divided into three groups (n=8).(1)Control group,in which the normal KCs were isolated.(2)LPS group,in which 1 ms/L LPs was added to the culture system.(3)NF-κB decoy ODN group,in which KCs were transduced with NF-κB decoy ODN (4μg×105KCs)prior to LPS stimulation.The transfection efficiency Was assayed,and the phagocytosis function,NF-κB(P65) translocation,CD40 mRNA expression of KCs were also detected respectively. Results Kupffer cells were obviously activated after LPS stimulation.the phagocytosis function was reinforced.the activity of NF-κB transloeated from cytoplasm into nucleus was obviosly increaced.The co-stimulatory molecules expression(CD40 mRNA)significantly increased compared with control group(t=4.01,P<0.01).NF-κB decoy oligodeoxynucleotides can efficiently transfected into KCs mediated by lipofectamine,which can obviously suppress KCs activation,and downregulate the expression of downstream gene(compared with LPS group,t=4.89,P<0.01). Condusion NF-κB decoy ODN can efficiently transfect into KCs and inhibit it's activation.     

In vitro lipofectamine mediated NF-κB decoy oligodeoxynucleotides transfection of Kupffer cells

Objective To study the transfection effects of nuclear factor-KappaB(NF-κB)decoy oligodeoxynucleotides(ODN) to Kupffer cells (KCs) mediated by lipofectamine,and investigate it's suppression effects on KCs activation. Methods Twenty-four Wistar rats were divided into three groups (n=8).(1)Control group,in which the normal KCs were isolated.(2)LPS group,in which 1 ms/L LPs was added to the culture system.(3)NF-κB decoy ODN group,in which KCs were transduced with NF-κB decoy ODN (4μg×105KCs)prior to LPS stimulation.The transfection efficiency Was assayed,and the phagocytosis function,NF-κB(P65) translocation,CD40 mRNA expression of KCs were also detected respectively. Results Kupffer cells were obviously activated after LPS stimulation.the phagocytosis function was reinforced.the activity of NF-κB transloeated from cytoplasm into nucleus was obviosly increaced.The co-stimulatory molecules expression(CD40 mRNA)significantly increased compared with control group(t=4.01,P<0.01).NF-κB decoy oligodeoxynucleotides can efficiently transfected into KCs mediated by lipofectamine,which can obviously suppress KCs activation,and downregulate the expression of downstream gene(compared with LPS group,t=4.89,P<0.01). Condusion NF-κB decoy ODN can efficiently transfect into KCs and inhibit it's activation.     

MCF-7与MDA-MB-231细胞逃避巨噬细胞杀伤能力的实验研究

目的:研究乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231逃避巨噬细胞杀伤能力的差异。方法:将巨噬细胞上清液分别加入MCF-7和MDA-MB-231细胞培养液中培养48 h,再加入CCK-8孵育,使用酶标仪检测吸光度值。结果:MDA-MB-231细胞存活率高于MCF-7细胞[(124.03±4.86)%vs(44.22±1.38)%],差异有统计学意义(P0.05)。结论:巨噬细胞对肿瘤细胞的作用与肿瘤细胞的分子分型有关,MDA-MB-231细胞株较MCF-7细胞株有更强逃避巨噬细胞杀伤的能力。