肝细胞癌和癌旁肝组织中HCVRNA正,负链的检测

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了４２例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者肝癌及癌旁肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的正，负链，结果显示，肝组织中ＨＣＶＲＮＡ正，负链的检出率分别为５４．８％和３５．７％，ＨＣＶＲＮＡ的正链和负链在肝癌和癌旁肝组织中，同时阳性的患者分别占４５．２％和３１．０％，血清ＨＣＶＲＮＡ和抗ＨＣＶ阴性埂肝组织中ＨＣＶＲＮＡ的检出率仍有５１．３％，肝组织ＨＣＶＲＮＡ与乙型肝炎     

精细胞及血单个核细胞中丙型肝炎病毒RNA及其负链检测

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对８例慢性丙型肝炎患者的血浆、外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）、精液和精细胞中的正链和负链丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ进行检测，以了解ＨＣＶ在肝外细胞中是否存在，有否复制。结果血浆中正链ＨＣＶＲＮＡ均阳性，而负链ＨＣＶＲＮＡ全部阴性；ＰＢＭＣ中正链ＨＣＶＲＮＡ阳性者５例，其中２例检出负链ＨＣＶＲＮＡ。在３例留取精液的患者中１例精液和精细胞中检出正链ＨＣＶＲＮＡ。精细胞未次洗液ＨＣＶＲＡＮ阴性，精细胞负链ＨＣＶＲＮＡ阴性。上述结果提示：（１）血浆中可能仅有正链ＨＣＶＲＮＡ存在；（２）ＨＣＶ可在ＰＢＭＣ中存在，并可能在其中复制；（３）精液中有ＨＣＶ存在，因此通过性交传播丙型肝炎的可能性确实存在，但ＨＣＶ可能不在精细胞中复制     

HCC癌组织和癌旁组织中HCV RNA检测及半定量分析

ＨＣＶ相关ＨＣＣ癌组织能检出ＨＣＶ ＲＮＡ负链，但许多学者检测不到或对其检测方法的准确性产生怀疑。作者收集１３例ＨＣＶ相关ＨＣＣ标本，采用严格的负链检测方法和ＰＣＲ半定量方法系统地比较了ＨＣＣ癌组织和癌旁组织中ＨＣＶ总ＲＮＡ和负链的检出情况及其数量关系。ＨＣＣ癌组织和癌旁组织中，ＨＣＶ ＲＮＡ负链检出率分别为３０．８％和６９．２％，平均滴度分别为３．５和２９．２，两者平均相差８．４倍。癌组织中ＨＣ     

肝癌及癌旁组织中丙型肝炎病毒基因负链的研究

运用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）等方法检测了５例丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶ—ＲＮＡ）阳性患者的肝癌、癌旁组织和周围血清中ＨＣＶ—ＲＮＡ正链和负链，其中男４例，女１例。结果，正链检测：血清及癌旁组织全部阳性，癌组织中３例阳性。负链检测：血清中均阴性，癌组织３例阳性，癌旁组织５例均阳性。本组５例患者肝脏ＨＣＶ—ＲＮＡ负链阳性，推测ＨＣＶ以ＨＣＶ—ＲＮＡ负链作为模板在感染的肝脏组织中复制，ＨＣＶ持续存在于肝脏组织中对肝癌的发生起了一定的作用。     

RT－PCR检测HCV RNA假阳性结果分析

ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ假阳性结果分析宋燕斌，崔晓红，潘卫，王锦红，戚中田丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是新近认识的一种单股正链ＲＮＡ病毒，在感染者外周血中的含量低［１］，目前认为逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ是诊断ＨＣＶ感染的最敏...     

PCR法检测尿毒症病人血清HCV—RNA结果分析

应用ＰＣＲ技术检测尿毒症病人血清ＨＣＶ—ＲＮＡ１６５例，结果显示：ＥＩＡ检测病人血清抗ＨＣＶ阳性率为６３．０％；抗ＨＣＶ阳性病人ＨＣＶ—ＲＮＡＰＣＲ检出阳性率为６５．３％；抗ＨＣＶ阴性病人检出率为９．８％；ＰＣＲ总阳性检出率为７５．１％。提示：ＣＲＦ病人抗ＨＣＶ和ＨＣＶ—ＲＮＡ检出率与输血呈正相关。ＣＲＦ病人接受透析与输血次数愈多，感染ＨＣＶ的机会就愈大。在血清中单独出现抗ＨＣＶ或同时检出抗ＨＣＶ和ＨＣＶ—ＲＮＡ者，表明与早期输血感染ＨＣＶ者已产生抗ＨＣＶ，ＨＣＶ—ＲＮＡ阳性与近期输血再次感染者关系极为密切。用ＰＣＲ法直接检测病毒毒粒要早于ＥＩＡ检出抗ＨＣＶ的阳性结果，有利于早期诊断。     

维甲酸改变人肝癌细胞表面N—糖链的结构及其酶学机制

用３Ｈ－甘露糖标记７７２１人肝癌细胞表面糖蛋白的Ｎ－糖链，经提取和去唾液酸后，用ＣｏｎＡ和ＤＳＡ亲和柱顺序层析将３Ｈ－标记的Ｎ－糖链分成４个类型和天线数不同的组分来研究维甲酸（ＲＡ）对细胞表面Ｎ－糖链的影响。结果：１０ｕｍｏｌ／Ｌ ＲＡ处理细胞３￣５ｄ后，可使Ｃ２Ｃ２二天线复杂型Ｎ－糖链增加，而高甘露糖型及三、四天线，特别是带有Ｃ２，６分支结构的复杂型Ｎ－糖链减少。用ＬＣＡ亲和柱还证明二天线糖链中     

维甲酸改变人肝癌细胞表面N－糖链的结构及其酶学机制

用３Ｈ－甘露糖标记７７２１人肝癌细胞表面糖蛋白的Ｎ－糖链，经提取和去唾液酸后，用ＣｏｎＡ和ＤＳＡ亲和柱顺序层析将３Ｈ－标记的Ｎ－糖链分成４个类型和天线数不同的组分来研究维甲酸（ＲＡ）对细胞表面Ｎ－糖链的影响。结果：１０μｍｏｌ／ＬＲＡ处理细胞３～５ｄ后，可使Ｃ２Ｃ２二天线复杂型Ｎ－糖链增加，而高甘露糖型及三、四天线，特别是带有Ｃ２，６分支结构的复杂型Ｈ－糖链减少。用ＬＣＡ亲和柱还证明二天线糖链中的核心岩藻糖也减少。进一步发现上述改变的酶学机制是ＲＡ降低Ｎ－乙酰氨基萄葡糖转移酶Ｖ和α－１，６－核心岩藻糖转移酶的活力。结论：ＢＡ通过改变某些糖基转移酶活力而改变细胞表面糖链结构，这可能是ＲＡ使７７２１细胞诱导分化的机理之－。     

HBV侵入PBMC后对乙肝患者细胞免疫功能的影响

为探讨ＨＢＶ侵入ＰＢＭＣ后对乙型病毒性肝炎患者细胞免疫功能的影响，本文应用ＰＣＲ技术和生物素—链霉亲合素（ＢＳＡ）系统分别检测９７例乙肝患者的外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）内ＨＢＶ—ＤＮＡ和ＣＯ＋３、ＣＯ＋４、ＣＯ＋８、ＣＯ＋４／ＣＯ＋８及经ＰＨＡ诱导前后膜白介素—２受体（ｍＩＬ—２Ｒ）的表达水平。结果显示乙型病毒性肝炎患者Ｔ细胞亚群及ｍＩＬ—２Ｒ水平与正常对照相比较，均显著降低（Ｐ＜０．０１）。ＰＢＭＣ内ＨＢＶ—ＤＮＡ阳性组与阴性组相比较，ＣＯ＋３、ＣＯ＋４百分率降低、ＣＤ＋８百分率增高、ＣＯ＋４／ＣＯ＋８比值下降及ｍＩＬ—２Ｒ表达水平低下，二组差别有高度显著性（Ｐ＜０．０１）。说明乙型病毒性肝炎患者细胞免疫功能明显低下，ＨＢＶ感染ＰＢＭＣ后可引起乙肝患者的细胞免疫功能紊乱     

HCC癌组织和癌旁组织中HCVRNA检测及半定量分析

ＨＣＶ相关ＨＣＣ癌组织能检出ＨＣＶＲＮＡ负链，但许多学者检测不到或对其检测方法的准确性产生怀疑。作者收集１３例ＨＣＶ相关ＨＣＣ标本，采用严格的负链检测方法和ＰＣＲ半定量方法系统地比较了ＨＣＣ癌组织和癌旁组织中ＨＣＶ总ＲＮＡ和负链的检出情况及其数量关系。ＨＣＣ癌组织和癌旁组织中，ＨＣＶＲＮＡ负链检出率分别为３０．８％（４／１３）和６９．２％（９／１３），平均滴度分别为３．５和２９．２，两者平均相差８．４倍（０－１００倍）。癌组织中ＨＣＶＲＮＡ负链只有癌旁组织中ＨＣＶ总ＲＮＡ的１／９１．６。本研究结果提示，ＨＣＣ癌组织中的确能检出ＨＣＶＲＮＡ负链，但水平较低。这种可能存在的低水平ＨＣＶ复制对ＨＣＣ的影响可能不大。因而，临床观察和流行病学研究所揭示的ＨＣＶ与ＨＣＣ相关的基础可能存在于ＨＣＣ发生过程的早期，即启动或早期克隆扩增阶段。     

应用聚合酶链反应快速诊断巨细胞病毒感染

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测学龄前儿童尿标本中的巨细胞病毒（ＨＣＭＶ），并和常规细胞培养（ＣＣＣ）、早期抗原检测（ＤＥＡ）两法进行了比较。结果表明，１０５份尿标本中有４１份ＣＣＣ出现ＨＣＭＶ特征性细胞病变（ＣＰＥ），其中３８份标本ＰＣＲ检测为阳性，敏感性为９２．７％；其余６４份ＣＣＣ阴性，有６份ＰＣＲ检测阳性，特异性为９０．６％。与ＤＥＡ相比，ＰＣＲ检测的特异性和敏感性分别为９３．６％，９５．２％；提示ＰＣＲ检测临床标本中ＨＣＭＶ，不仅敏感特异，而且与ＣＣＣ，ＤＥＡ两法相比快速简便。     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B2重链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析

目的：分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３Ｂ２重链可变区（ＶＨ）基因并测定其序列。方法：用反转录ＰＣＲ扩增抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２ＶＨ基因，将其克隆入ＰＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧链终止法测定序列，将序列与ＧｅｎｅＢａｎｋ及已发表的抗体序列比较。结果：ＶＨ基因全长３５４ｂｐ，属鼠免疫球蛋白重链混杂亚类（ｓｕｂｇｒｏｕｐｍｉｓｃｅｌａｎｅｏｕｓ），由种系基因的ＶＨ，Ｄｓｐ２．５及ＭＵＳＪＨ４重排而来。该ＶＨ基因序列已被ＧｅｎｅＢａｎｋ收录（ａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏＡＦ０４５０２３）。结论：该ＶＨ基因为抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２功能性重链可变区基因。     

非霍奇金淋巴瘤Ig和TCRβ链基因重排与相关抗原的表达

用１４种抗人白细胞的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）与２种克隆抗体（ＰｃＡｂ）和人类免疫球蛋白（Ｉｇ）基因簇重链（ＩｇＨ）ＪＨ、Ｃｕ、轻链（ＩｇＬ）Ｃｘ、Ｃλ以及Ｔ细胞受体β链（ＴＣＲβ）基因作为探针，以ＡＢＣ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹交法对１１例非霍奇金恶性淋巴瘤（ＮＨＬ）的抗原表达与Ｉｇ基因簇、ＴＣＲβ基因重排作了研究。结果显示：抗原表达和基因重排具有非常明确的相关性（Ｐ＝０．００２）。从ＩｇＬ的ｘ链重排中     

原发性肝细胞癌组织的肿瘤标记物

应用免疫组化技术（ＰＡＰ法和ＡＢＣ法）以８种肿瘤标记物（ＡＡＴ，ＡＡＣＴ，ＡＦＰ，ＲＣＡ，ＷＧＡ，ＬＣＡ，ＳＢＡ，ＰＮＡ）标记７４例原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）和１０例正常肝组织。结果表明，ＡＡＴ，ＡＡＣＴ，ＡＦＰ，ＲＣＡ阳性率分别为６８．９％，６４．９％，５２．７％，８５．１％，有特异性，是诊断ＨＣＣ有意义的标记物。ＲＣＡ受体出现是ＨＣＣ重要标记，说明癌变后细胞内及细胞表面糖链结构发生变化。ＲＣＡ是否可作为运载生物弹头，作抗癌药物的载体导向治疗ＨＣＣ值得研究。提示多种标记物联合检测可提高阳性率，起到互补作用，大大提高对ＨＣＣ的识别。     

PCR检测HBV—DNA对探讨肝癌病因的意义

为探讨乙肝病毒复制标志物在原发性肝细胞癌发生中的病因学意义，我们应用多聚酶链瓜尖方法检测了启东，泰兴１４０例ＨＣＣ病例和２４７例对照的血清乙型肝炎病毒ＤＮＡ，并结合其它乙肝病毒指标，分析了ＨＢＶ－ＤＮＡ在ＨＣＣ发生中的病因学作用。结果显示：ＰＣＲ方法检测血清ＨＢＶ－ＤＮＡ的灵敏度和特异度均较高，在探讨ＨＣＣ的病因中具有重要的应用价值。     

应用RT—PCR检测丙肝病毒246例分析

用ＲＴ－ＰＣＲ（逆转录聚合酶链反应）扩增丙型肝炎病毒５’端非编码（５’ＮＣＲ）序列，２４６例肝炎患者中ＨＣＶ ＲＮＡ（丙型肝炎病毒核糖核酸）阳性者４５例，阳性率１８．３％（４５／２４６），凡阳性者用酶联免疫法测定－ＨＣＶ（抗丙型肝炎病毒抗体），其中２４例测到抗－ＨＣＶ，阳性重叠率５３．３％（２４／４５），和ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＣＶ ＲＮＡ，能在抗－ＨＣＶ转阳以前检出ＨＣＶ ＲＮＡ，更早地确诊丙型肝     

用PCR检测消化道巨细胞病毒感染

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测５１例消化道疾病患者活检或手术标本的人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）－ＤＮＡ，阳性率９．８０％；采用间接免疫荧光法随机检测其中４１例患者血清ＨＣＭＶ－ＩｇＭ。结果显示：消化道组织巨细胞病毒感染数低于血清ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性数（Ｐ〈０．０１）；血清ＨＣＭＶ－ＩｇＭ检测中，恶性肿瘤和结肠炎患者ＨＣＭＶ感染均较对照组为高（Ｐ〈０．０１和Ｐ〈０．０５）。提示ＰＣＲ是消化道巨细胞病毒     

器官移植术后受者人巨细胞病毒的PCR检测

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对３０例器官移植受者血，尿标本进行人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ检测。结果显示，１６例ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，阳性率５３．３％，提示ＰＣＲ是一种敏感特异，简便快速，能早期诊断ＨＣＭＶ感染的方法，适用于监视器官移植病人术后ＨＣＭＶ感染。     

应用聚合酶链反应快速诊断巨细胞病毒感染

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测学龄前儿童尿标本中的巨细胞病毒（ＨＣＭＶ），并和常规细胞培养（ＣＣＣ）、早期抗原检测（ＤＥＡ）两法进行了比较。结果表明，１０５份尿标本中有４１份ＣＣＣ出现ＨＣＭＶ特征性细胞病变（ＣＰＥ），其中３８份标本ＰＣＲ检测为阳性，敏感性为９２．７％，其余６４份ＣＣＣ阴性，有６份ＰＣＲ检测阳性，特异性为９０．６％，与ＤＥＡ相比，ＰＣＲ检测的特异性和敏感性分别为９３．６％，９５．     

肾综合征出血热病毒在体外培养的血管内皮细胞中增殖的研究

目的 研究肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒在血管内皮细胞（ＨＥＣ）内的增殖。方法 采用微量免疫酶斑法检测ＦＲＳ病毒（Ａ９、ＰＵＶ株）感染后ＨＥＣ的病毒繁殖动态，亲与病毒在Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞繁殖动态相互对比。结果 ＨＦＲＳ病毒感染ＨＥＣ后第一天即可检验到病毒释放，Ａ９株第３在达增殖高峰，ＰＵＶ株第７天达增殖高峰。结论 ＨＦＲＳ病毒可在原妈靶细胞ＨＥＣ内增殖但不同的病毒株繁殖速度不同，这种差异可能与其致