聚合酶链反应检测再生障碍性贫血清中乙型和丙型肝炎病毒

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了３７例非肝炎相关再生障碍性贫血（ＮＨＡＡ）和１８例肝炎相关再生障碍性贫血（ＡＨＨ）血清中的乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶ ＤＮＡ）、丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶ ＲＮＡ）。结果显示：ＮＨＡＡ的ＨＢＶ ＤＮＡ检出率为１３．５％（５／３７），ＨＡＡ为２２．２％（４／１８），两比较Ｐ＞０．０５。ＮＨＡＡ的ＨＣＶ ＲＮＡ检出率为２．７％（１／３７），ＨＡＡ为３８．９％（７／１８     

聚合酶链反应检测再生障碍性贫血血清中乙型和丙型肝炎病毒

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了３７例非肝炎相关再生障碍性贫血（ＮＨＡＡ）和１８例肝炎相关再生障碍性贫血（ＨＡＡ）血清中的乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）、丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ）。结果显示：ＮＨＡＡ的ＨＢＶＤＮＡ检出率为１３．５％（５／３７），ＨＡＡ为２２．２％（４／１８），两者比较Ｐ＞０．０５。ＮＨＡＡ的ＨＣＶＲＮＡ检出率为２．７％（１／３７），ＨＡＡ为３８．９％（７／１８），两者比较Ｐ＜０．０１。丙型肝炎相关再生障碍性贫血的预后较差。提示：ＨＣＶ感染与ＨＡＡ关系密切。     

丙型肝炎病毒RNA非结构区套式聚合酶链反应

目的探讨不同引物对ＨＣＶＲＮＡ检出率的影响，立敏感的ＮＳ５区基因扩增技术。方法选择不同引物，采用非结构５（ＮＳ５）区套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）及联合式［ＨＣ非编码区（５′ＮＣＲ）与ＮＳ５联合］ＰＣＲ技术检测１０例抗ＨＣＶ阳性献血员及３７例输血后丙型肝患者的血清ＨＣＶＲＮＡ。结果１０例抗ＨＣＶ阳性献血员应用联合式ＰＣＲ，以ＮＳ５－３＋ＮＳ５－４、ＳＦ２＋ＮＳ５－４、Ｋ１＋ＮＳ５－４、ＮＳ５－１＋ＮＳ５－４引物及套式ＮＳ５－１＋ＮＳ５－４引物扩增时，其ＲＮＡ检出率分别为５／１０、６／１０、７／１０、８／１０和９／１０；而３７例输血后丙型肝炎患者中３５例ＲＮＡ阳性，检出率为９５％，其中１８例１ｂ型和１９例２ａ型样品的检出率分别为１００％和８９％。结论ＨＣＶＮＳ５区的ＲＮＡ检出率与引物的选择有关     

HCV基因型与HCV感染者ALT的关系

为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）与ＨＣＶ感染者血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）的关系，本文应用ＨＣＶＮＳ５区逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对７９例抗－ＨＣＶ阳性者进行ＨＣＶＲＮＡ检测，同时用限制性内功酶法对ＨＣＶ进行基因分型。检出ＨＣＶＲＮＡ阳性者６９例，其中ＨＣＶⅡ型３０例，Ⅲ型２７例，Ⅱ／Ⅲ混合型１２例，ＨＣＶ不同的基因型在ＡＬＴ正常组和异常组中的分布有显著性差异（Ｐ＜０．０１），Ⅱ型和Ⅱ／Ⅲ混合型主要分布于ＡＬＴ异常组中，Ⅲ型主要分布于ＡＬＴ正常组中。提示Ⅱ型和Ⅱ／Ⅲ混合型很可能是导致ＡＬＴ异常的主要型别，应引起足够重视。     

血液病患者输血与庚型肝炎病毒感染的研究

目的：了解血液病患者输血后的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染情况。方法：对６３例血液病患者采用ＲＴＰＣＲ方法检测ＨＧＶＲＮＡ、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，应用ＥＬＩＳＡ方法检测抗ＨＧＶ、ＨＢｓＡｇ。结果：ＨＧＶＲＮＡ阳性率为７．９％，抗ＨＧＶ阳性率６．３％；ＨＣＶＲＮＡ阳性率为４６．０％。ＨＧＶ感染通常伴有ＨＣＶ感染及丙氨酸转氨酶升高。ＨＧＶ感染与输血量有关，与血液病种类无关。结论：血液病输血可引起ＨＣＶ、ＨＧＶ的传播     

TthDNA聚合酶在丙型肝炎病毒RNA检测中的应用

用ＴｔｈＤＮＡ聚合酶行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增丙型肝炎病毒（ＨＶＣ）５’端非编码序列，对２６２例肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ测定，结果ＨＣＶＲＮＡ阳性者５３例，阳性率２０．２％。凡阳性者用酶联免疫吸附法测其抗ＨＣＶＩｇＧ，其中３０例测到抗ＨＣＶ，阳性重叠率５６％（３０／５３）；ＨＣＶＲＮＡ阳性中的１５例同时用成髓细胞瘤病毒酶行传统逆转录。套式聚合酶链反应检测对照，１４例阳性，符合率达９３．３％（１４／１５）。ＴｔｈＤＮＡ聚合酶用于ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ５’端非编码序列片段具有敏感性高、特异性强、稳定性好的优点。     

不同血清学标志血清中HBV DNA和HCV RNA的分析研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测４８１例乙肝血清学五项指标至少一项阳性血清中ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ，结果显示ＨＢＶＤＮＡ的检出率为９１．５％，ＨＣＶＲＮＡ的检出率为１５．４％，并提示（１）当乙肝患者血清中抗ＨＢｅ阳性甚至抗ＨＢｓ阳性时，仍有相当部分的ＨＢＶ存在且仍在复制；（２）ＨＢＶ和ＨＣＶ感染可相互增加其易感性；ＨＢｓＡｇ阳性与否与抗ＨＣＶ可能有一定关系；（３）ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ具有较高的敏感性。     

5‘—非编码区型特异性引物检测HCV基因型

我们探索建立一种ＨＶＣ基因分型方法,用５’非编码区（５’ＮＣＲ）１,２,３,１ｂ型特异引物,应用逆转录套式ＰＣＲ,对ＨＣＶＲＮＡ阳性血汪有进行分型,对６５份ＨＣＶＲＮＡ阳性血清的分型率为９０．８％（５９／６５）。５９例中混合感染７例,１型５０例,其中１ｂ亚型４６例,３型２例。从而认为：所用的型特异性引物可成功的对ＨＣＶ基因分型,分型结果证实南京市ＨＣＶ流行优势株为１ｂ亚型。     

江苏徐州地区丙型肝炎病毒基因型研究

为了解本地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型分布情况，用限制性片段长度多态性分析法（ＲＦＬＰ），对１０７便丙型肝炎患者中血清ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性的９０例进行基因型分析。分型结果表明，ＨＣＶ－Ⅱ（１ｂ）占７８．９％，ＨＣＶ－Ⅲ（２ａ）型占１８．９％，ＨＣＶ－Ⅱ／Ⅲ混合型占２．２％，提示：（１）本地区ＨＣＶ流行株基因主要为Ⅱ型，同时存在Ⅲ型与Ⅱ／Ⅲ混合型。徐州地区ＨＣＶ基因型分布符合我国ＨＣＶ基因型分布的特     

第三代酶免疫试验检测丙型肝炎病毒抗体的意义

本文应用Ａｂｂｏｔｔ公司第三代酶免疫试验（ＥＩＡ－３），与Ａｂｂｏｔｔ公司和国产第二代酶免疫试验（ＥＩＡ－２），对比检测了９６例肝炎病人和献血员标本的抗－ＨＣＶ，发现Ａｂｂｏｔｔ公司和国产ＥＩＡ－２的相对漏检率分别为１７．３％和２０．７％，而献血员中有漏检１０．８％。对部分漏检标本应用多聚酶链试验（ＰＣＲ）检测了ＨＣＶ－ＲＮＡ，发现与ＨＣＶ感染有关。这些是造成某些临床误诊及输血后肝炎的重要原因之一     

血透患者检测抗HCV IgM的临床意义

为探讨丙型肝炎ＩｇＭ抗体测定在血液透析患者中的临床意义,采秀间接ＥＬＩＳＡ法检测抗ＨＣＶ ＩｇＭ。同时采用ＥＬＩＳＡ测抗ＨＣＶ ＩｇＧ,ＲＴ－ＰＣＲ法测ＨＣＶ ＲＮＡ,并进行比较。结果示６２例血液透析病人中,抗ＨＣＶ ＩｇＭ阳性２７例（４３．６％）,抗ＨＣＶ ＩｇＧ阳性２９例（４６．８％）,ＨＣＶ ＲＮＡ阳性３４例（５４．８％）,任一项阳性３７例（５９．７％）;抗ＨＣＶ ＩｇＭ与ＨＣＶ ＲＮＡ检测     

输血后肝炎的临床研究

利用血清学ＥＬＩＳＡ法和ＰＣＲ技术对１６９名输血后肝炎（ＰＴＨ）患者的病原学进行了研究。结果表明，ＰＴＨ主要致病原为ＨＣＶ（９８．２２％），其中部分患者（１４．０２％）同时合并有ＨＢＶ感染，３例ＰＴＨ病因尚不明确，有待进一步研究。ＨＣＶ所致ＰＴＨ患者抗ＨＣＶ检出时间为ＰＴＨ症状出现后７ｄ～１年，平均为５４．６２ｄ。ＨＣＶＲＮＡ在感染早期（６～２０ｄ，平均８．７２ｄ），即可检出。对８４名ＰＴＨ患者１．５～３年内抗ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ动态观察的结果表明，抗ＨＣＶ可较长时间持续存在，而ＨＣＶ病毒血症可有３种表现形式：一过性病毒血症、持续性病毒症和间歇性病毒血症。本研究证实，认真开展献血者抗ＨＣＶ筛查对于减少或防止ＰＴＨ发生十分重要；另外，医务人员应严格掌握输血指征，严禁无指征输血。     

干扰素治疗丙型肝炎的临床及抗病毒效应研究

１５例急性、５２例慢性丙肝在干扰素治疗２４周后，血清ＡＬＴ复常率为８０％与７５％，ＨＣＶ ＲＮＡ阴转率为８０％与６９．２％，停药后追踪２４周，持续ＡＬＴ正常并ＨＣＶ－ＲＮＡ阴转（称为完全反应、ＣＲ）者有５３．３％与４２．３％，均明显高于急、慢性对照组的疗效（治疗结束时ＡＬＴ复常率急性对照组为３６．４％，慢性对照组为０。ＨＣＶ－ＲＮＡ阴转为２／１１及３／２０，停药后全部对照组均无１例呈ＣＲ者），统计     

荧光定量PCR与RT-PCR技术检测HCV-RNA的比较观察

目的 比较荧光定量ＰＣＲ与ＲＴ－ＰＣＲ（定性）检测不同检材中的ＨＣＶ－ＲＮＡ,评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值。方法 采用荧光定量ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ（定性）技术同时检测了７１例血液透析患者的血清,血浆,淋巴细胞、尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果 血清、淋巴细胞,尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４６．３８％,８０．００％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－Ｐ     

TthDNA聚合酶在丙型肝炎病毒RNA检测中的应用

用ＴｔｈＤＮＡ聚合酶行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增丙型肝炎病毒（ＨＶＣ）５′端非编码序列，对２６２例肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ测定，结果ＨＣＶＲＮＡ阳性者５３例，阳性率２０．２％，凡阳性者用酶联免疫吸附法测其抗ＨＣＶＩｇＧ，其中３０例测到抗ＨＣＶ，阳性重叠率５６％（３０／５３）；ＨＣＶ ＲＮＡ阳性中的１５例同时用成髓细胞瘤病毒酶行传统逆转录－套式聚合酶链反应检测对照，１４例阳性，符合率     

PCR检测HBV-DNA不同试剂和方法的比较

本文对目前部分市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂进行了灵敏度和检测率的测定，并在检测ＨＢＶ低水平感染中，用ＰＣＲ和斑点杂交作了比较。结果不同公司试剂盒的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度从０．１ｆｇ到１ｐｇ不等，同一公司不同批号的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度也从１００ｆｇ到１００ａｇ不同，差达１０３～１０４倍。ＰＣＲ和斑点杂交在三组不同乙肝标志组中的阳性检测率为ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｅ（－）组：ＰＣＲ７０％，斑点杂交４６．４％；ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｓ（＋）组：ＰＣＲ３５．７％，斑点杂交２．９％；ＨＢｓＡｇ（－）抗ＨＢｅ（＋）抗ＨＢｓ（＋）／ＨＢｃ（＋）组：ＰＣＲ１６．６％，斑点杂交３．３％。三组检测率均Ｐ＜０．０１。因此，目前市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂必须标化，ＰＣＲ更适合于检测ＨＢＶ低水平的感染     

荧光信号引物PCR定量测定血清HCV—RNA的实验室评价

目的对Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ荧光标记ＨＣＶ定量ＰＣＲ方法进行实验室考核。方法２８例抗ＨＣＶ（＋）、定性ＰＣＲ（＋）的血清标本，用于重复性测定；２０例健康人血清用于正常值测定；５例定性ＰＣＲ（＋）和５例定性ＰＣＲ（－）标本用于Ａｍｐｌｉｓｅｍｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ两种方法的比较。结果孔间变异系数（ＣＶ）为 ２０．６％，操作者间ＣＶ为 ４３．８％，批内 ＣＶ为 ６１．９％，批间ＣＶ为８５．１％。２０例健康人血清测定值均小于最小检测浓度，即１０２拷贝／ｍｌ。用Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ两种方法对５ 例定性ＰＣＲ（－）标本测定，Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ均为阴性；对５ Ｎ定性ＰＣＲ（＋）标本测定，Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ均为阳性，ＨＣＶ－ＲＮＡ的浓度为 ２． ５ × １０５拷贝 ／ｍｌ～ １． ７ ×１０６拷贝 ／ｍｌ， ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ方法有 ２例未能检出。结论 Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ ＨＣＶ定量 ＰＣＲ方法特异性和灵敏度均好，可用于临床疾病的研究和抗病毒药物疗效的评估。由于批内、批间变异系数较大，试验与操作均应严格规范。     

用通用引物建立的RT-PCR诊断肠道病毒性脑炎及脑膜炎

目的　用通用引物建立逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），达到广谱、特异及快速诊断肠道病毒（ＥＶ）性脑炎及脑膜炎。方法　用针对ＥＶ基因组５’端非编码区保守区的１对通用引物建立的ＲＴ－ＰＣＲ检测多种ＥＶ标准血清型，同时检测病毒性脑膜炎和脑炎患儿的脑脊液。结果　此种ＲＴ－ＰＣＲ可检测４２种ＥＶ的标准血清型，所用毒株在１０－１ＴＣＩＤ５０时仍可见到１９４ｂｐ的阳性条带。检测了３２例病毒性脑膜炎和脑炎患儿的脑脊液中ＥＶ－ＲＮＡ，１８例为阳性（５６．３％）。ＥＶ－ＲＮＡ阳性患儿的昏迷、瘫痪、抽搐、ＣＳＦ－蛋白质及低密度灶数（ＣＴ）分别为４（２２．２％）、８（４４．４％）、１２（６６．７％）、４６２ｍｇ／Ｌ（ｘ）及４（２２．２％）；ＥＶ－ＲＮＡ阴性患儿的昏迷、瘫痪、抽搐、ＣＳＦ－蛋白质、及低密度灶数（ＣＴ）分别为１０（７１．４％）、６（４２．９％）、１２（８５．７％）、３８６ｍｇ／Ｌ（ｘ）及４（２８．８％），仅昏迷发生率有极显著差异（Ｐ＜０．０１）。结论　用通用引物建立的ＲＴ－ＰＣＲ诊断ＥＶ性脑膜炎和脑炎，具有广谱性、特异性、敏感性及简洁、快速的特点，诊断ＥＶ性脑膜炎和脑炎主要依靠病原学检查。     

正常人右胸头胸导联心电图特征

目的评价一种新的右胸导联心电图：头胸（ＨＣ）导联心电图的应用价值。方法对６４例正常人描记同时间、同部位的Ｗｉｌｓｏｎ导联（Ｖ３Ｒ～Ｖ７Ｒ）和ＨＣ导联（Ｈｖ３Ｒ～Ｈｖ７Ｒ）图形。结果两种导联方法心电图均无ＳＴ段抬高；ＨＶ５Ｒ～ＨＶ７Ｒ直立Ｐ波多于Ｖ５Ｒ～ｖ７Ｒ（Ｐ均（０．０５）；病理Ｑ波（Ｑ≥１／４Ｒ，ｔ＞０．０４秒）或Ｑｒ型波在Ｖ４Ｒ为６％，Ｖ５Ｒ为５６％，Ｖ６Ｒ为６２％，Ｖ７Ｒ为６５％，Ｔ波直立者仅１２％，然而ＨＣ导联均为Ｒ型或石型，Ｔ波直立者达８８％。Ｑ波出现率在Ｖ５Ｒ和ＨＶ５Ｒ、Ｖ６Ｒ和ＨＶ６Ｒ、Ｖ７Ｒ和ＨＶ７Ｒ间呈显著差异（Ｐ均＜０．００１），直立Ｔ波出现率在Ｖ３Ｒ～Ｖ７Ｒ和ＨＶ３Ｒ～ＨＶ７Ｒ间亦有明显差异（Ｐ波＜０．０１）。根据图形特征，ＨＣ导联右胸图形可分为３型：（１）ＨＶ３Ｒ～ＨＶ７Ｒ呈Ｒ型伴Ｔ波直立者占５５％；（２）ＨＶ３Ｒ～ＨＶ５Ｒ为ｒＳ型，ＨＶ６Ｒ和ＨＶ７ＲＲ型伴Ｔ彼直立者占３３％；（３）ＨＶ３Ｒ～ＨＶ７Ｒ均呈ｒＳ型伴Ｔ波平坦者占１２％。结论由于ＨＣ导联右胸心电图在健康人群中表现为正常的Ｐ－ＱＲＳ－Ｔ波群，故有益于右室疾病的诊断。     

逆转录－套式PCR检测血清中丙肝病毒RNA

利用与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组５＇非编码区保守序列同源的套式引物，建立了检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，由于在引物设计中选择了最保守的区域且避开了与黄病毒属的同源序列，保证了ＰＣＲ检测的灵敏度和特异性。经逆转录和两轮ＰＣＲ扩增，可检出１×１０－３ｕｌ血清中的ＨＣＶＲＮＡ。研究了影响ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ检测的各种因素，并对ＲＮＡ分离及ＲＴ－ＰＣＲ反应体系进行了优化，在此基础上研制了ＨＣＶ的ＰＣＲ检测试剂盒。