环氧合酶2对血管内皮细胞增殖和凋亡的影响

环氧合酶(cyclooxygenase,COX)是以花生四烯酸为底物合成前列腺素的首要限速酶,COX-2作为其亚型之一,主要受细胞内外的各种刺激因素诱导表达.大量的研究表明,COX-2与血管的发生密切相关,它能够通过其衍生的各种前列腺素来影响血管内皮细胞的增殖与凋亡,并由此来参与各种慢性炎症性疾病和肿瘤的发生.弄清COX-2对血管内皮细胞增殖与凋亡的影响,及其相关的作用机制,有助于我们更好的认识其在疾病发生中的作用,从而避弊取利,为临床治疗提供更多更好的方案.     

舒林酸诱导人肝细胞癌凋亡及对环氧合酶-2和Bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨舒林酸在肝细胞癌化学预防和治疗中的应用价值。方法 采用人肝细胞癌细胞株SMMC7721，HepG2作为研究对象。体外药物敏感试验检测不同浓度和作用时间的舒林酸对细胞的增殖抑制效应；分别用Hoechst33258细胞核荧光染色和透射电镜观察舒林酸诱导的细胞凋亡的形态学改变，并计算相应的细胞凋亡指数（AI）；应用Western斑点印迹法观察不同浓度舒林酸作用后细胞内环氧合酶-2（COX-2）和凋亡抑制蛋白Bcl-2表达程度的变化。结果 舒林酸对人肝细胞癌细胞SMMC7721，HepG2具有显著的增殖抑制和凋亡诱作用，并且具有时间和剂量依赖性，舒林酸对不同类型细胞的杀伤率和凋亡诱导效应有显著差异。经舒林酸2mmol/L和4mmol/L作用24h后，细胞内COX-2和Bcl-2蛋白的表达比未经舒林酸作用的细胞表达明显减少。结论 舒林酸在体外对人肝细胞癌细胞株SMMC7721和HepG2具有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用。且与其抑制细胞内COX-2和Bcl-2蛋白的表达有关。     

环氧合酶-2及肝细胞凋亡在非酒精性脂肪性肝炎中的作用

目的探讨环氧合酶（COX）-2及肝细胞凋亡在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）发生中的作用。方法雄性SD大鼠30只，随机分为模型组、乙醇灌胃对照组和正常对照组，每组各10只。模型组给予高脂饮食（普通饲料基础上加10％猪油、2％胆固醇和5％蛋黄粉）。乙醇灌胃对照组在普通饲料中加乙醇灌胃喂养。正常对照组给予普通饲料。动物喂养12周后处死并取肝脏组织，用免疫组化法及逆转录（RT）-PCR法检测COX-2表达，TUNEL法观察肝细胞凋亡。结果模型组（0．97土0．32）和乙醇对照组（0．89±0．19）大鼠COX-2表达水平均明显高于正常对照组（0），差异有统计学意义（P〈0．01）。模型组（3．26±0．90）和乙醇对照组（3．33±0．78）的肝细胞凋亡指数明显高于正常对照组（0．80±0．65），差异亦有统计学意义（P〈0．01）。模型组与乙醇对照组之间COX-2表达和肝细胞凋亡指数差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论COX-2在NASH发生中发挥着重要作用，肝细胞凋亡是NASH发生的重要机制。     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的探讨选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对人肝癌HepG2细胞株的生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2表达的影响。方法采用MTT法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期、凋亡及凋亡相关蛋白bcl-2的表达。结果NS-398抑制HepG2的增殖活性，经20、40、80和160μmol／L的NS-398处理细胞48h后，其抑制率分别为6．72％、16．21％、20．86％和25．34％，呈剂量依赖效应关系；细胞经160bLmol／L的NS-398处理24h、48h和72h后，G。／G1期细胞由76．07±0．75％分别减少至62．27±0．74％、59．17±1．47％和53．03±1．60％（P〈0．05），S期细胞由11．40±0．79％分别增加至13．23±0．81％、16．20±1．95％和16．60±1．25％（P〈0．05），G2／M期细胞无明显变化；凋亡细胞增多，凋亡率分别为8．47％、16．3％和23．9％；细胞经160μmol／L的NS-398处理48h后bcl-2蛋白与对照组比，表达下调（P〈0．01）。结论NS-398对人肝癌细胞株HepG2有抑制增殖、诱导凋亡作用，细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调有关。     

联合抑制环氧合酶-2与5-脂氧合酶对胃癌细胞增殖凋亡的影响

目的:通过单独及联合应用选择性COX-2抑制剂尼美舒利和5-LOX抑制剂AA861处理胃癌细胞系AGS,比较各实验组的增殖凋亡率,探讨联合抑制COX-2和5-LOX两条通路对胃癌细胞系AGS增殖凋亡的影响.方法:AGS细胞在含100 mL/L小牛血清 100kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中培养,取对数生长期细胞做为实验组.以相差显微镜观察药物处理前后的细胞形态改变;设立AA861(25,50,100 μmol/L)组,尼美舒利(50,100,200 μmol/L)组,及AA861联合尼美舒利处理组(50 μmol/L AA861 100 μmol/L尼美舒利),用四氮唑蓝(MTT)法在24,48,72 h测量细胞吸光度,以此检测单用及联用AA861与尼美舒利对细胞生长增殖的影响;实验通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡率,以DNA-LADDER法观察凋亡.结果:相差显微镜观察,药物处理组细胞与对照组相比,形态发生明显改变.MTT显示,除尼美舒利200μmol/L的24,48 h处理组及AA861 25 μmol/L的24 h处理组外,尼美舒利和AA861基本呈时间、剂量依赖性抑制AGS细胞增殖.TUNEL染色法表明,尼美舒利或AA861处理组的细胞凋亡率随着剂量的增加而升高.药物处理48 h后,MTT法表明,细胞增殖在AA861组和尼美舒利组与两药联用组间相比差异显著(0.240±0.002 vs 0.207±0.001,P＜0.01;0.211±0.002 vs 0.207±0.001,P＜0.05);TUNEL染色法表明,单药组与两药联用组细胞凋亡率相比差异明显(AA861组:1 8.67%±0.03%,尼美舒利组:20.94%±0.48%vs两药联用组:23.76%±0.92%,P＜0.01);AO/EB染色法也同时表明,细胞凋亡单药组与两药联用组相比差异明显(AA861组:18.17%±0.28%、尼美舒利组:19.35%±0.74% vs两药联用组:23.78%±0.04%,P＜0.01).DNA琼脂糖凝胶电泳法显示,两药联合处理AGS细胞组与单药处理组比较,癌细胞增殖被抑制,凋亡明显增加.结论:COX-2抑制剂尼美舒利和5-LOX抑制剂AA861对胃癌AGS细胞的增殖抑制以及促凋亡作用基本呈时间浓度依赖性.联用尼美舒利和AA861抑制COX-2与5-LOX两条通路,与单独抑制其中一条通路比较,能更有效抑制胃癌细胞增殖,促进凋亡.     

诱导型环氧合酶-2与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化是由多种炎性因子介导的慢性炎症反应过程，环氧合酶的两种同工酶（COX-1和COX-2）及其产物前列腺素对动脉粥样硬化的发生、发展及斑块稳定性起着重要作用。COX-2与动脉粥样硬化密切相关，可能是一个动脉粥样硬化治疗的新靶点。选择性COX-2抑制剂可以改善动脉粥样硬化的进程和临床终点。     

香烟提取物对大鼠血管内皮细胞的损害

目的探究香烟提取物(CSE)对大鼠血管内皮细胞(VEC)的影响。方法利用原代培养的方法获得大鼠主动脉VEC(RVEC),采用不同浓度的CSE处理RVEC,分别用MTT和流式细胞仪来检测三组细胞的增殖和凋亡情况,并检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放情况。同时,采用双抗体夹心ELISA法检测细胞分泌的肿瘤坏死因子(TNF)-α、基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-2、MMP-3和MMP-10的情况。结果 MTT实验中,与0.05%组相比,0.5%浓度组的细胞生长显著变慢(P0.05),且这种抑制作用呈现剂量依赖性。LDH释放结果显示,与0.05%组相比,20%浓度的CSE处理可导致细胞LDH释放显著升高(P0.01),且随着CSE浓度的进一步升高,LDH释放逐渐增多。经过24 h后,CSE处理后的细胞凋亡逐渐增多,差异明显(P0.01)。而对于细胞分泌的TNF-α、MMP-1、MMP-2、MMP-3和MMP-10含量,CSE干预组均比对照组明显增加(P0.01)。结论CSE可以明显抑制RVEC的生长,加剧其凋亡,并促进细胞分泌TNF-α、MMP-1、MMP-2、MMP-3和MMP-10的能力。     

同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡的研究进展

近年的研究发现，血浆同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)水平升高是心肌梗死、脑梗死等心脑血管疾病以及外周阻塞性血管疾病的一个独立危险因素。动物实验发现，HCY可以通过损伤血管内皮细胞，启动粥样斑块和血栓形成。在粥样斑块内存在明显的内皮细胞凋亡。体外内皮细胞培养也显示HCY能诱导其凋亡，提示HCY可能通过内皮细胞凋亡而促进动脉粥样硬化。目前关于HCY引起内皮细胞凋亡的机制尚不明确，作者就HCY的代谢、HCY与内皮细胞凋亡的关系以及细胞凋亡的产生机制综述如下。     

细胞色素C氧化酶-2/前列腺素E2信号通路对老年慢性阻塞性肺疾病患者肺血管内皮细胞凋亡的作用

目的探讨细胞色素C氧化酶(Cox)-2/前列腺素E2(PG)E2信号通路对老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺血管内皮细胞凋亡的作用。方法该行肺叶切除术的老年患者20例,根据吸烟情况和COPD诊断标准分为非吸烟非COPD组(对照组)6例,吸烟非COPD组(非COPD组)7例,吸烟且COPD组(COPD组)7例,取癌旁正常肺组织为研究标本。TUNEL法检测肺血管内皮细胞凋亡情况;免疫组化染色观察细胞中Cox-2、PGE2蛋白分布情况;RT-PCR检测Cox-2、PGE-2 mRNA表达;Western印迹检测Cox-2、PGE2蛋白的表达。结果肺血管内皮细胞凋亡指数由高到低依次为COPD组、非COPD组、对照组;Cox-2、PGE2蛋白呈棕色或棕黄色表达于肺血管内皮细胞质并在对照组中表达丰富。非COPD组、COPD组肺组织中Cox-2、PGE2 mRNA表达量明显低于对照组,COPD组明显低于非COPD组(P<0.05)。非COPD组、COPD组肺组织中Cox-2、PGE2 mRNA蛋白表达量明显低于对照组,COPD组明显低于非COPD组(P<0.05)。结论 COPD患者Cox-2、PGE2表达下调,肺血管内皮细胞凋亡增加且与吸烟相关;Cox-2/PGE-2信号通路参与介导COPD患者肺血管内皮细胞凋亡,呈负向调节。     

脂脉宁对香烟提取物诱导血管内皮细胞-304的NF-KB及热休克蛋白-70表达影响

目的：观察含脂脉宁血清对香烟提取物（CSE）诱导血管内皮细胞（VEC）～304的核转录因子-xB（NF—xB）及热休克蛋白-70（HSP-70）表达的影响。方法：将VEc-304细胞分为4组：CSE组、实验1组（脂脉宁大剂量）、实验2组（脂脉宁小剂量）及空白对照组。采用免疫组化方法,观察各组VEC-304细胞NF—KB及HSP-70的表达。结果：CSE组细胞NF—KB[（288±25）：（185±14）]、HsP-70[（370±28）：（258±20）]的表达均较空白对照组明显升高[P〈O．05～O．01],而脂脉宁两组NF—KB[1组（193±17）,2组（211±14）]、HSP-70[1组（262±21）,2组（282±23）]表达明显低于CSE组[P〈O．05～0．01],且1组作用更明显（P〈0．05）。细胞DAB显色：CSE组细胞NF—xB蛋白、HsP-70蛋白显色呈棕黄或棕褐色,明显较空白对照组色深;实验1组和2组显色虽较空白对照组为深,但明显较CSE组色浅。结论：香烟提取物可诱导血管内皮细胞核转录因子-kB、热休克蛋白～70表达．脂脉宁则可使其表达下调。     

Prostacyclin prevents pulmonary endothelial cell apoptosis induced by cigarette smoke

RATIONALE: Impaired endothelial cell-dependent vasodilation, inflammation, apoptosis, and proliferation are manifestations of endothelial dysfunction in chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Prostacyclin (PGI(2)) is a major product of the cyclooxygenase pathway with potent vasodilatory and antimitogenic properties and may be relevant to endothelial dysfunction in COPD. OBJECTIVES: To determine if PGI(2) expression is altered in smoking-related lung disease and if it may be protective in COPD-associated endothelial dysfunction. METHODS: We evaluated, by immunohistochemistry, Western blotting, and polymerase chain reaction, human emphysema tissue compared with normal tissue for expression of prostacyclin synthase (PGI(2)S). We examined the effects of cigarette smoke extract (CSE) and aldehyde components on eicosanoid expression in primary human pulmonary microvascular endothelial cells. Finally, we used a murine model of lung-specific PGI(2)S overexpression and in vitro studies to determine if PGI(2) expression has protective effects on cigarette smoke-induced endothelial apoptosis. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: Human emphysema lung tissue exhibited lower PGI(2)S expression within the pulmonary endothelium than in normal lung. In vitro studies demonstrated that CSE, and in particular the alpha,beta unsaturated aldehyde acrolein, suppressed PGI(2)S gene expression, whereas CSE significantly induced the upstream mediators COX-2 and cytosolic phospholipase A2 in human pulmonary microvascular endothelial cells. Mice with lung-specific PGI(2)S overexpression exhibited less endothelial apoptosis after chronic smoke exposure. In vitro, iloprost exhibited protective effects on CSE-induced apoptosis. CONCLUSIONS: PGI(2) has protective effects in the pulmonary vasculature after acute and chronic cigarette smoke exposure. An imbalance in eicosanoid expression may be important to COPD-associated endothelial dysfunction.     

钙非依赖型磷脂酶A2对过氧化氢诱导胰岛微血管内皮细胞凋亡的影响

目的用过氧化氢（H2O2）诱导大鼠胰岛微血管内皮细胞（IMECs）凋亡,观察钙非依赖型磷脂酶A2（iPLA2）对其凋亡的影响。方法siRNA技术抑制IMECs iPLA2表达,DNA ladder法检测H2O2诱导后的DNA片段,Annexin V—FITC／PI双染色检测细胞凋亡率,DIOCs（3）染色检测细胞线粒体膜电位。结果（1）siRNA—iPLA2可明显抑制IMECs内iPLA2 mRNA的表达。（2）H2O2诱导后细胞DNA片段化程度随诱导时间的增加而增多,抑制iPLA2表达后细胞的梯状条带明显增亮。（3）干扰组和未干扰组、干扰阴性对照组相比凋亡率明显升高（P均〈0．01）。（4）与未干扰组比较,干扰组细胞线粒体膜电位明显下降（P〈O．01）。结论抑制iPLA2表达可促进H2O2诱导的IMECs凋亡。     

吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉内皮细胞凋亡的作用

目的观察吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉内皮细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法清洁型SD大鼠26只,随机分为健康对照组(9只)、高脂饮食组(17只),高脂饮食组喂养12周后再随机分为模型组(8只)和吡格列酮组(9只),4周后,检测各组血脂水平,通过免疫组织化学法检测主动脉Bcl-2、Bax的表达,TUNEL染色法观察主动脉内皮细胞凋亡情况,计算细胞凋亡指数。结果 (1)高脂饮食组喂养12周后,血脂明显升高;给药4周后,与模型组比较,吡格列酮组TG、TC水平明显降低(P=0.000);(2)与健康对照组相比,模型组主动脉Bax蛋白表达明显增高(P=0.003),Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值明显降低(P=0.000);与模型组相比,吡格列酮组主动脉Bax蛋白表达明显降低(P=0.000),Bcl-2蛋白表达(P=0.001)和Bcl-2/Bax比值明显升高(P=0.000),且吡格列酮组主动脉内皮细胞凋亡指数较模型组明显降低,差异有统计学意义(17.5633±7.0584比6.0475±2.2370,P=0.000)。结论吡格列酮可改善高脂血症大鼠血脂水平,调节凋亡蛋白表达,减少主动脉内皮细胞凋亡。     

吡格列酮对高糖诱导血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制

吡格列酮可抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡,其机制可能与抑制高糖诱导的酸性鞘磷酯酶活性升高,减少细胞内神经酰胺产生相关。     

Nimesulide诱导胃癌细胞凋亡的作用机制研究

目的　非甾体抗炎药诱导胃癌细胞凋亡的机制不清楚。通过研究选择性COX 2抑制剂Nimesulide对人胃癌细胞系SGC 790 1的COX 2mRNA表达和c myc、Bcl 2、caspase 3凋亡基因蛋白表达的影响 ,探索其诱导胃癌细胞凋亡的机制。方法　胃癌细胞的凋亡用电子显微镜、AnnexinV FITC染色、流式细胞仪技术测定。COX 2基因表达用RT PCR法测定。c myc、Bcl 2和caspase 3蛋白表达用免疫细胞化学技术测定。结果　Nimesulide在浓度为 50 μmol/L时作用 48、72h和浓度为 1 0 0和2 0 0 μmol/L 时作用 2 4、48、72h均可诱导胃癌细胞凋亡 ,凋亡率分别为 7.51 % ,9.86 % ;1 1 .58% ,1 2 .45 % ,1 6 .66 %和 1 2 .2 1 % ,1 5 .38% ,2 0 .2 8% ,呈浓度和时间依赖性。Nimesulide可降低COX 2mRNA表达和Bcl 2蛋白表达 ,增加c myc和caspase 3蛋白表达。 2 0 0 μmol/LNimesulide作用 72h ,Bcl 2 ,c myc和caspase 3蛋白表达阳性率分别为 (2 0 .2± 7.6) % ,(49.2± 1 5 .1 ) %和 (34 .6± 1 2 .9) % ,对照组为(44.6± 1 2 .1 ) % ,(2 4 .7± 9.5) %和 (1 4 .8± 6 .4) % ,三者对照比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 1。)结论　Nimesulide可诱导胃癌细胞SGC 790 1凋亡 ,其机制涉及Bcl 2表达下调、c myc表达上调及caspase 3激活。     

缺氧复氧损伤诱导内皮细胞凋亡及卡托普利的晚期干预作用

目的 探讨缺氧复氧对血管内皮细胞凋亡的影响及卡托普利延迟预处理机制.方法 建立人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤模型,用流氏细胞仪检测不同的缺氧和复氧时间以及卡托普利晚期预处理,应用缓激肽β2受体阻断剂、PKC阻断剂、一氧化氮合酶阻断剂和NF-κB阻断剂,分别与卡托普利共同孵育细胞,24 h后再对内皮细胞行缺氧复氧损伤,观察不同条件下内皮细胞DNA周期和Annexin V染色率及细胞凋亡情况的变化.结果 单纯缺氧和缺氧复氧均可引起血管内皮细胞凋亡,并且随着单纯缺氧和缺氧后复氧时间的延长,凋亡峰面积和Annexin V染色率逐渐增加.卡托普利晚期预处理后,细胞凋亡明显减少,并且在本实验特定的浓度中（10-2～10-4 mmol/L）,凋亡峰面积随卡托普利剂量的增加而逐渐增强.但给予上面4种阻断剂后,卡托普利的晚期预处理抗凋亡作用均部分消失.结论 单纯缺氧和缺氧复氧均可以导致细胞凋亡,且具有时间依赖性.卡托普利晚期预处理可以减轻内皮细胞凋亡,此作用具有剂量依赖性.这一过程涉及缓激肽β2受体、PKC途径、一氧化氮和核因子的转录等多种因素的参与.     

衰老血管内皮细胞增殖和凋亡与S1P2受体表达的关系

目的 研究衰老血管内皮细胞增殖和凋亡与S1P2受体表达的相关性.方法 采用RT-PCR检测年轻(Y)、中年(I)和衰老(S)内皮细胞的S1P2受体的表达;运用MTT法和流式细胞术(FCA)分别检测年轻(Y)、中年(I)和衰老(S)内皮细胞的增殖和凋亡.结果S1P2受体mRNA在衰老内皮细胞中的表达显著上调(P＜0.01);衰老内皮细胞的增殖能力显著下调(P＜0.01);衰老内皮细胞凋亡明显增加(P＜0.01).结论 衰老内皮细胞的S1P2受体表达上调与内皮细胞的增殖和凋亡改变相关联.