应用噬菌体裂解法快速鉴定结核分支杆菌

目的 研究噬菌体裂解试验对结核分支杆菌快速鉴定的意义。方法 应用结核分支杆菌噬菌斑技术快速检测结核分支杆菌、非结核分支杆菌和非分支杆菌及肺结核患者痰标本。结果 结核分支杆菌H37Rv、牛分支杆菌和非洲分支杆菌噬菌体裂解试验均为阳性,10株常见非结核分支杆菌和7株非分支杆菌均为阴性;30株结核分支杆菌临床分离株本法检测结果全部阳性;20份涂阳培阳肺结核患者痰标本,本法阳性19份（95％）;21份涂阴培阳痰标本,本法阳性15份（71％）;19份涂阴培阴痰标本,5份阳性（26％）。结论 噬菌体裂解试验可以快速鉴定结核分支杆菌,用其检测痰标本中的结核分支杆菌具有很高的特异性和较高的敏感性。     

噬菌体生物扩增法与其它方法在结核菌检测中的比较

目的通过三种方法的比较,研究噬菌体生物扩增法在结核菌检测中的意义和可行性。方法同一份标本分别做抗酸杆菌涂片法、BACTEC MGIT 960培养法和噬菌体生物扩增法。结果检测的243例标本中,噬菌体生物扩增法阳性104例,抗酸杆菌涂片法阳性44例,BACTEC MGIT 960培养法95例阳性。结论噬菌体生物扩增法检测结核菌阳性率远高于涂片法,略高于BACTEC MGIT 960培养法。噬菌体生物扩增法可以快速鉴定结核分枝杆菌,用其检测标本中的结核分枝杆菌具有很高的特异性和较高的敏感性。     

噬菌体裂解法与涂片法对肺结核的诊断价值比较

目的比较噬菌体裂解法与涂片法对肺结核的诊断价值。方法对168份临床诊断为肺结核患者的痰标本同时应用噬菌体裂解法和涂片法检测,对照分析结果。结果168份痰标本,噬菌体裂解法检出阳性率58.9%(99/168),显著高于涂片法萋-奈氏染色的38.1%(64/168)及金胺0染色的41.1%(69/168),(P<0.01),噬菌体裂解法对涂片阴性的标本的检出率高达39.4%(39/99)。结论噬菌体裂解法与涂片法相比,具有较高的敏感性和特异性,是一种崭新的结核分支杆菌快速快速检测方法。     

聚合酶链反应－冷单链构象多态性快速检测结核分支杆菌rpoB基因突变

目的评估ｒｐｏＢ基因突变检测在结核分支杆菌利福平耐药性测定中的应用价值。方法采用聚合酶链反应－冷单链构象多态性（ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ）方法对８７株结核分支杆菌临床分离株及有药敏结果的２２份相应肺结核患者痰标本进行分析。结果ＰＣＲ扩增ｒｐｏＢ基因的敏感性为１００ｐｇＤＮＡ及５０００个菌体，属于分支杆菌特异。所有分离菌的ｒｐｏＢ基因ＰＣＲ扩增均为阳性。采用套式ＰＣＲ可使扩增敏感性提高１００倍。与传统药敏试验方法相比，ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ对８７株结核分支杆菌临床分离菌利福平耐药性的检测敏感性和特异性分别为８９．６％及１００％。２２份涂阳培阳痰标本中套式ＰＣＲ扩增阳性的６份均为高度利福平耐药，其ＳＳＣＰ结果也与相应分离株的药物敏感性试验相符。结论ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ检测结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变快速、简便、易行，适用于结核分支杆菌分离株利福平耐药性的快速测定。如进一步提高引物增特异性及敏感性，该技术可望用于临床标本直接检测     

BACTEC法检测分支杆菌的临床应用分析

本文对１９９３年４月～１９９４年５月间３００份临床标本的检测结果进行分析。结果：分支杆菌检测阳性率２５．０％，培养阳性平均报告时间为８．４天，两周内报告阳性的病例占８１．４％；污染率为４．０％。在检出的７５株分支杆菌中结核分支杆菌占６８株（９０．７％），非结核分支杆菌７株（９．３％），平均报告时间为４．２天。药敏试验采用最低抑菌浓度法，其平均报告时间为４．６天，本文结果表明ＢＡＣＴＥＣ法快速检测分支杆菌与常规法相比具有初代分离率高、快速、简便、易于操作及质控等特点，是目前分支杆菌快速培养、鉴定和药敏试验的优选方法。     

PCR—SSCP方法用于痰标本中结核分支杆菌rpoB基因突变检测

本文用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法直接检测痰标本中结核分支杆菌ｒｐｏ基在变，评价此方法用于结核分支杆菌利福平耐性试验的意义，以期建立一种直接检测分支杆菌耐利福平的快速方法。本文用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法分析了３０例结核病人和２０例非结核性肺部疾病病人痰标本。３０份肺结核病人的痰用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测痰中结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变：２１份痰ＰＣＲ扩增阳性，其中１３份ＳＳＣＰ图谱与参考株Ｈ３７ＲｖＳＳＣＰ图谱有     

BACTEC法检测分支杆菌的临床应用分析

本文对１９９３年４月１－１９９４年５月间３００份临床标本的检测结果进行分析。结果：分支杆菌检测阳性率２５．０％，增减阳性平均报告时间为８．４天，两周内报告阳性的病例占８１．４％；污染率为４．０％。在检出的７５株分支杆菌中结核分支杆菌占６８株，非结核分支杆菌７株，平均报告时间为４．２天。     

荧光探针杂交技术检测临床标本内结核人支杆菌的价值

目的：评价聚合酶链反应（PCR）荧光探针杂交技术（TaqMan技术）检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法：应用细菌学方法（涂片镜检和培养）及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本，53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果：细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36．1％，TaqMan法阳性率为61．7％，高于细菌学检测法，经统计学处理，两者有显著性差异（P＜0．05），用TaqMan法检测临床标本特异性为96．2％，结论：TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化，在单一管内完成，具有简便，快速、防污染，敏感性及特异性较高等优点，是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

单克隆抗体ELISA双抗体夹心法检测支气管肺泡灌洗液结核杆菌抗原

利用抗结核分支杆菌ＭｃＡｂ和抗结核分支杆菌ＨＲＰ－ＭｃＡｂ经双抗体夹ＥＬＩＳＡ法，对１２８份支气管肺泡灌洗液标本进行了检测，结果：痰菌阴性肺结核病人ＢＡＬ标本中结核分支杆菌抗原水平明显高于非结核肺部疾病，对菌阴肺结核检出的敏感性为８４．１％，特异性为８２．４％，此法降低了利用多克隆抗体检测ＢＡＬ标本易出现的假阳性率，认为此法可作为结核病的辅助诊断方法。     

单克隆抗体ELISA双抗体夹心法检测支气管肺泡灌洗液结核杆菌抗原

利用抗结核分支杆菌ＭｃＡｂ和抗结核分支杆菌ＨＲＰ－ＭｃＡｂ经双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法，对１２８份支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬ）标本进行了检测。结果：痰菌阴性肺结核病人ＢＡＬ标本中结核分支杆菌抗原水平明显高于非结核肺部疾病组。对菌阴肺结核检出的敏感性为８４．１％，特异性为８２．４％，此法降低了利用多克隆抗体检测ＢＡＬ标本易出现的假阳性率。认为此法可作为结核病的辅助诊断方法。     

BACTEC MGIT-960临床应用与结果分析

目的探讨BACTEC MGIT-960全自动分枝杆菌检测技术在结核病中的应用价值。方法用BACTEC MGIT-960对不同种类的标本进行分离培养及药敏试验．并与改良罗氏培养基法对比。结果BACTEC MGIT-960全自动分枝杆菌检测技术初代分离阳性时问平均为8．9天．药敏平均时间为7．1天。2152份各类标本总阳性率为29．23％．其中痰标本阳性率为31．22％。617株结核分枝杆菌的总耐药率为52．19％，其中初始耐药率为41．77％，获得性耐药率为74．24％，耐多药率(MDR)为17．02％。结论BACTEC MGIT-960全自动分枝杆菌检测技术是目前一种比较理想的快速检测结核菌的方法。     

噬菌体生物扩增法检测痰结核分枝杆菌的临床研究

目的评价噬菌体生物扩增(PhaB)法检测痰中结核分枝杆菌的应用价值。方法分别应用PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法和BACTECMGIT960快速培养法检测2005年8月至10月沈阳市胸科医院53例疑诊肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌,并对检测结果进行比较。结果PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法、BACTECMGIT960快速培养法检出阳性标本数分别为24,11,17和22份;以培养结果为评价标准,PhaB法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为86.4%,83.9%,79.2%和89.7%;集菌涂片法和PhaB法联合检测的敏感性为90.9%,特异性为83.9%,阳性、阴性预测值分别为80.0%和92.9%。结论PhaB法检测痰中结核菌操作简便,具有较高的敏感性和特异性,可作为临床结核分枝杆菌的快速检测方法;PhaB法联合集菌涂片法进行检测可进一步提高敏感性,减少漏诊率。     

结核分枝杆菌和牛分枝杆菌TaqMan荧光PCR检测的建立

目的对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别建立荧光PCR快速检测方法。结核分枝杆菌荧光PCR对H37Rv标准菌株、结核分枝杆菌临床分离株的检测结果呈典型阳性反应，牛分枝杆菌荧光PCR对牛分枝杆菌标准菌株、BCG菌株的检测结果呈典型阳性反应，对其它分枝杆菌菌株以及常见微生物样品为阴性反应。两种荧光PCR对对应阳性重组质粒模板的检测灵敏度可达单个基因拷贝，对结核分枝杆菌或BCG标准菌株的检测灵敏度可达单个菌细胞。对临床样品的检测结果显示，荧光PCR对模拟感染奶样、血样的检测灵敏度可达单个菌细胞。所建立的方法，全过程包括血样、奶样、痰液等临床样品的前处理、核酸提取和荧光PCR检测，可在5～6h内完成。采用上述荧光PCR方法从临床采集的疑似病人痰液中检出多份结核分枝杆菌阳性样品。     

TaqMan聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌DNA及其临？…

目的 探讨ＴａｑＭａｎ聚合酶链反应（ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ）技术在肺结构诊断中的价值。方法 对１６８例活动性肺结核、５７例肺癌患者的痰和外周血及３４－例健康对照外周血,同时应用ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ、ＰＣＲ检测,并与痰涂片法、ＢＡＣＴＥＣ法及改良罗氏培养法结果进行比较。结果 ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ检测痰和外周血总的阳性率分别为５３．０％和６１．３％,显著高于ＰＣＲ、痰涂片法、ＢＡＴＣＴＥＣ法及改良罗氏培     

噬菌体生物扩增法快速测定结核分枝杆菌利福平耐药性

目的　建立快速测定结核分枝杆菌利福平耐药性的噬菌体生物扩增法 ,并探讨其在结核分枝杆菌利福平耐药性测定中的应用价值。方法　应用噬菌体生物扩增法测定 5 2 4株结核分枝杆菌利福平耐药性 ,并与绝对浓度法结果进行比较 ,对不符合的菌株采用BactecMGIT 96 0测定其最低抑菌浓度 (MIC)。结果　噬菌体法测定 5 2 4株结核分枝杆菌临床分离株利福平敏感 30 1株、耐药 2 2 3株 ,绝对浓度法敏感 313株、耐药 2 11株 ;两法测定均为敏感 2 88株、均为耐药 198株。在 38株噬菌体法与绝对浓度法测定结果不符的菌株中 ,35株噬菌体法与MIC测定结果相符合。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准 ,则噬菌体法测定利福平耐药性的敏感性为 93 8%、特异性为 92 0 %、阳性预测值为88 8%、阴性预测值为 95 7%、准确性为 92 7%。结论　噬菌体生物扩增法测定利福平耐药性只需 2天时间 ,操作简便 ,不需特殊仪器设备 ,可作为结核分枝杆菌利福平耐药性的快速筛选方法。     

结核分支杆菌利用福平药物敏感性的直接快速检测

探讨利用分子生物 学方法直接快速检测临床标本结核分支杆菌利福平（ＲＦＰ）药物敏感性的可行性。方法自行设计针对ｒｐｏＢ基因特异扩增的引物（扩增产物为１８３ｂｐ片段）,运用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染色法,检测４５株结核分支杆菌临床分离株,对其中部分菌株进行ｒｐｏＢ基因ＤＮＡ序列分析,运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染色法对７０份结核病患痰标本进行直接快速检测,并与药敏试验结果做对照分     

Comparison of MB-Check, BACTEC, and egg-based media for recovery of mycobacteria]

The rate of recovery and time to the detection of mycobacteria from clinical specimens were measured for biphasic and radiometric liquid-based culture systems and egg-based media (3% Ogawa and Ogawa K). From the 245 sputum specimens processed, a total of 86 (35.1%) mycobacterial isolates were detected. Of these, 81 (94.2%) and 80 (93.0%) isolates were detected with the MB-Check and BACTEC systems, respectively, and 65 (75.6%) isolates were detected with the 3% Ogawa egg method. The difference in the percentages of positive cultures between the two systems based on liquid media and the 3% Ogawa egg method was significant (P < 0.01). This difference was even greater among smear-negative specimens. The detection time was shorter with the liquid-based systems. The mean times to the detection of the Mycobacterium tuberculosis complex were 19.1 days with the MB-Check system, 13.4 days with the BACTEC system, and 21.7 days with the 3% Ogawa egg method. These results indicate that both the MB-Check and the BACTEC systems, based on liquid media, are efficient for the recovery of mycobacteria.     

BACTEC MGIT960系统快速培养分枝杆菌的效果评价

目的与传统罗氏培养法相比较,评价BACTECMGr／960快速培养系统在基层结控实验室的应用效果及前景。方法采用改良罗氏培养基、BACTECMGIT960液体培养基对521份临床痰标本进行平行接种培养,比较两者的阳性率、培阳时间、污染率。结果传统罗氏培养法的阳性率为47．1％（81／172）,BACTECMGIT960系统的阳性率为68．0％（117／172）;传统罗氏培养法最早培阳时间为12d,平均26d,BACTECMGr1960快培系统最早培阳时间为4d,平均12d;传统罗氏培养法污染率为2．5％（13／521）,BACTECMGr1960快培系统的污染率为3．5％（18／521）;结论BACTECMGIT960系统可以提高分枝杆菌的培养阳性率和明显缩短培养时间,污染率与传统罗氏培养相较无显著性差异,是一种快速,有效的检测方法,对基层结控机构早期发现肺结核病人和疗效观察将发挥重要作用。     

Cross-contamination of Mycobacterium tuberculosis culture in clinical laboratories

For many years, it has been thought that positive culture of M. tuberculosis is a definitive diagnostic evidence of tuberculosis and cross-contamination of M. tuberculosis culture in clinical laboratories is rare. However recently introduced RFLP analysis has enabled us to identify a strain of M. tuberculosis, and many cases of the cross-contamination in clinical laboratories confirmed by RFLP analysis have been reported. In this report, we present the first case of the cross-contamination confirmed by RFLP in Japan. In our case, 5 patients without any personal link to each other were suspected based on clinical findings to have cross-contaminated results of M. tuberculosis culture. All their specimens were processed on the same day, and were smear negative and culture positive with only a small number of colonies (less than 8 colonies). The sputum from the suspected source of contamination processed on the same day was strongly positive for AFB smear and heavily culture positive. The RFLP patterns of these 6 patients were identical, so it was concluded that the positive cultures of the sputum from the 5 patients who were not expected to be culture positive on clinical findings were caused by the cross-contamination in our hospital laboratory. We review all the charts of patients with M. tuberculosis culture positive results in the same year of this case, but we didn't find no other cases suspected of the cross-contamination. Then we reviewed the literature of M. tuberculosis culture cross-contamination. The patterns of the cross-contamination are divided into two. One is associated with malfunction of a sampling needle in the BACTEC 460 system and the other associated with the initial processing of the specimens, mostly involving reagents such as NaOH solution. Cross-contaminated specimens are usually smear negative with only a few colonies (less than 5), and processed just after the source specimen of the contamination in most reported cases, but not in all. In almost half of them the cross-contamination results had significant influence on the clinical management. The frequency of the cross-contamination is estimated around 1% of the patients with M. tuberculosis culture positive results. For early detection of the cross-contamination, not only clinicians but also laboratory staffs have important role and close cooperation between them is mandatory. To prevent the contamination, it is advisable to process smear positive and probable culture positive specimens separately from others, and not to use a large same container of reagents for processing of different specimens.